Acteoside: ricerca sull'attività antiossidante e antiipertensiva

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Attività antiossidanti e antipertensive di acteoside e suoi analoghi

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,* e Miao-Lin HU1,*

Astratto. Atteosidi(Act), un glicoside feniletanoide, è un composto attivo in diverse piante e medicinali a base di erbe tradizionali. Agire insieme al suo isomero strutturale,isoacteoside(Isoact) e un analogo, 6-O-acety-lattoside (6-O-acetilatto), sono stati utilizzati nello studio per studiare ilantiossidante, l'enzima di conversione dell'angiotensina (ACE) e le attività inibitorie dell'emolisiin vitroe attività antipertensiva contro ratti spontaneamente ipertesi (SHR)in vivo. Abbiamo mostrato che Act, Isoact e 6-O-acetylact ha efficacemente eliminato i radicali 1,1-difenil-2-picryl-idrazil (con IC50 rispettivamente a 11,4, 9,48 e 9,55 μM) e i radicali superossido (con IC50 a 66,0, 38,5 , e 39,1 μM, rispettivamente). Come Isoact e 6-O-acetylact aveva simili attività di scavenging dei radicali, solo Act e Isoact sono stati utilizzati per gli studi seguenti. Sia Act che Isoact hanno inibito l'attività della xantina ossidasi con IC50 rispettivamente a 53,3 e 62,2 μM. Sia Act che Isoact hanno anche inibito in modo significativo l'attività dell'ACE e l'emolisi indotta dal 2,2'-azo-bis(2-amidinopropane)dicloridrato, ma gli effetti di Act erano più forti di Isoact. Abbiamo quindi somministrato per via orale una singola dose di Act o Isoact (10 mg/Kg di peso corporeo) all'SHR e abbiamo misurato le variazioni della pressione arteriosa sistolica (SBP) e della pressione diastolica (DBP) nelle 24 ore. Act, ma non Isoact, ha mostrato attività antipertensiva nell'abbassare la PAS e la PAD. I risultati suggeriscono la potenziale utilità della legge come prodotto alimentare salutare perantiossidanteprotezione e regolazione della pressione sanguigna.

Parole chiave: Atteosidi; Attività antipertensiva; Enzima di conversione dell'angiotensina (ACE); antiossidante; Emolisi.

ingrediente attivo acteoside in cistanche

Introduzione

Atteosidi(Act), un glicoside feniletanoide contenente acido caffeico, 3',4'-diidrossi feniletanolo, glucosio e ramnosio, è stato isolato per la prima volta da fiori diSiringa Vul- garis(Birkofer et al., 1968), e insieme all'isomero strutturale diisoacteoside(Isoact) e la derivata di6-O-acetilatteoside(6-O-acetilatto), è stato trovato in molte piante e medicinali a base di erbe, comeListrum purpurascens(Wong et al., 2001),Callicarpa dicotoma(Koo et al., 2006; Lee et al., 2006),Cistanche deserticoeBoschniakia rossa(Wu et al., 2006),Scrofularia ningpoenis(Huang et al., 2008),Rehmannia glutinoso(Li et al., 2006). È stato riportato che l'atto mostra attività antimetastatica sulle cellule di melanoma B16 nei modelli di topi C57BL/6 (Ohno et al., 2002). Agire, Isoagire e 6-O-acetylact ha recentemente dimostrato di inibire l'espressione attivata da IL-1 - di CAM intercellulare-1 e CAM vascolare-1 nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (Chen et al., 2009). Act protegge anche le cellule endoteliali polmonari bovine dallo stress ossidativo indotto dai radicali idrossilici (Chiou et al., 2004) e inibisce la produzione di ossido nitrico e TNF bloccando l'attivazione di AP-1 nei macrofagi stimolati da lipopolisaccaridi (Rao et al. , 2009). Act e Isoact esibiscono attività neuroprotettivein vitro(Koo et al., 2005). Koo et al. (2006) hanno riportato che Act e i suoi agliconi eliminano efficacemente 1,1-difenil-2-picryl-idrazyl (DPPH) e ossido nitricoin vitro. Tuttavia, pochi studi hanno confrontato fianco a fianco ilin vitro antiossidanteattività di Act e dei suoi composti strutturalmente correlati come Isoact e 6-O- acetilatto.

Diverse classi di agenti farmacologici sono state utilizzate nel trattamento dell'ipertensione (Mark e Davis, 2000). Una classe di farmaci antipertensivi, noti come inibitori dell'enzima di conversione dell'angiotensina I (ACE) (cioè inibitori della peptidasi), ha una bassa incidenza di effetti collaterali avversi e sono la classe preferita di antipertensivi

agenti durante il trattamento di pazienti con malattie secondarie concomitanti (Fotherby e Panayiotou, 1999). L'ACE (peptidil-dipeptide idrolasi EC 3.4.15.1) è un'esopeptidasi contenente Zn che libera un dipeptide, che rimuove un dipeptide dal C-terminale dell'angiotensina I per formare l'angiotensina II, un composto molto ipertensivo. Parecchiantiossidantepeptidi (glutatione ridotto e peptidi correlati alla carnosina) esibiscono attività ACE inibitori (Hou et al., 2003). Il primo ACE-inibitore attivo per via orale, clinicamente disponibile, captopril, è stato sviluppato per i trattamenti ipertensivi (Ondetti et al., 1977; Borer, 2007). È stato riportato che l'atto esercita effetti rilassanti mediati dall'ossido nitrico sugli anelli aortici intatti dall'endotelio di ratti SD (Wong et al., 2001). Ahmad et al. (1995) hanno riportato che Act induce una diminuzione dose-dipendente della pressione arteriosa sistolica (SBP) e diastolica (DBP) a seguito della sua iniezione endovenosa in ratti Wistar anestetizzati normotesi. Tuttavia, non è chiaro se Act somministrato per via orale e/o i relativi isomeri siano antipertensiviin vivo. Nel presente studio, abbiamo studiato ilin vitro antiossidantecapacità e attività ACE inibitorie nonché ilin vivoattività antipertensiva di Act, Isoact e/o 6-O-acetilatto utilizzando i ratti ipertesi spontanei (SHR). Questi studi dovrebbero fornire dati utili per lo sviluppo di Act come prodotto alimentare salutare.

Materiali e metodi

Materiali

2,2'-azo-bis(2-amidinopropano)dicloridrato (AAPH), ACE (unità I, polmone di coniglio), idrossitoluene butilato (BHT), DPPH, N-(3-[{{7 }}furil]acriloil)-Phe-Gly-Gly (FAPGG), NADH, fenazina metosolfato (PMS), xantina e xantina ossidasi sono stati acquistati da Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Captopril è stato acquistato da Calbiochem Co. (CA, USA). Agire, Isoagire e 6-O-acetilatto (Figura 1) sono stati acquistati da Equal Corp. (purezze > 98 percento, Shanghai, Cina). Altre sostanze chimiche e reagenti provenivano da Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA).

Scavenging attività di Atto, Isoact, e 6-O- acetilatto contro dPPH radicali di spettrofotometria

Un volume (0,3 ml) di Act, Isoact e 6-O-acetilatto (le concentrazioni finali erano da 1,56 a 50 µM), BHT e acido ascorbico (le concentrazioni finali erano da 2,4 a 6{13}} µM) sono stati aggiunti a 0,1 mL di tampone Tris-HCl 1 M (pH 7,9 ) e quindi miscelato con 0,6 mL di 100 µM DPPH in metanolo fino a una concentrazione finale di 60 µM per 20 minuti sotto protezione dalla luce a temperatura ambiente (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). La diminuzione dell'assorbanza a 517 nm è stata misurata ed espressa come ΔA517 nm. L'acqua deionizzata è stata utilizzata come esperimento in bianco. L'attività di scavenging del radicale DPPH (percentuale) è stata calcolata con l'equazione: (ΔA517blank − ΔA517campione) ÷ ΔA517blank × 100. IC50 sta per la concentrazione di semiinibizione.

inibitorio attività di Atto e Isoact contro xantina ossidasi

L'attività della xantina ossidasi è stata misurata determinando la formazione di acido urico a 295 nm utilizzando la xantina come substrato (Kalckar, 1947). Le diverse quantità di Act e Isoact (le concentrazioni finali erano 25, 50 e 75 μM) sono state premiscelate con 50 μL di xantina ossidasi 1 mU/mL a 4 gradi per 1 ora, quindi i 300 μL di xantina 1 mM erano aggiunti. Le variazioni di assorbanza a 295 nm sono state registrate in 2 min ed espresse come ΔA295 nm/min. L'attività inibitoria della xantina ossidasi (percentuale) è stata calcolata come segue: (ΔA295 nm/min nero − ΔA295 nm/min campione) ÷ ΔA295 nm/min nero × 100. È stata utilizzata acqua deionizzata invece della soluzione campione come esperimento in bianco. IC50 sta per la concentrazione di semiinibizione.

Scavenging attività di Atto, Isoact, e 6-O- acetilatto contro superossido radicali di spettrofotometria

Il radicale superossido è stato generato dal sistema PMS-NA-DH (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Tutti i campioni da 0,2 ml, contenenti quantità diverse di Act, Isoact e 6-O-acetilato (la concentrazione finale era 15,6, 31,3, 62,5, 125 e 250 µM), sono stati aggiunti in sequenza a 0,2 ml di 630 µM di nitroblue tetrazolio, 0,2 ml di 33 µM PMS e 0,2 ml di 156 µM NADH in tampone fosfato 100 mM (pH 7,4). L'acqua deionizzata è stata utilizzata al posto della soluzione campione come esperimento in bianco. L'acido ascorbico (la concentrazione finale era 6, 9, 12 e 24 µM) è stato utilizzato come controllo positivo. I cambiamenti di assorbanza a 560 nm sono stati registrati durante 2 min ed espressi come ΔA560 nm/min. L'attività di scavenging dei radicali superossido (percentuale) è stata calcolata come segue: (ΔA560 nm/min nero − ΔA560 nm/min campione) ÷ ΔA560 nm/min nero × 100. IC50 sta per concentrazione di semi-inibizione.

determinazione di Asso inibitorio attività di Atto e Isoact di HPLC

Ogni 50 µL di Act (0.2, 0.4, 0.5 e 2.0 µmole) e Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0 e 2.0 µmole) sono stati premiscelati con 15 µL di ACE 1U/mL per 5 minuti, quindi sono stati aggiunti 200 µL di FAPGG 0,5 mM e fatti reagire a temperatura ambiente per 10 minuti (Anzenbacherova et al., 2001). Gli 800 µL di metanolo sono stati aggiunti per fermare la reazione. L'esperimento in bianco era solo FAPGG. Nell'esperimento di controllo, ACE ha reagito con FAPGG nelle stesse condizioni. La separazione cromatografica di FAPGG e FAP è stata effettuata sul sistema cromatografico Hitachi (Giappone) con un ciclo di 10 µL. L'analisi HPLC è stata eseguita su una colonna Biosil Aqua-ODS-W 5 µ (Biotic Chemical Co., Ltd., Taiwan, 250 × 4,6 mm id), dimensione delle particelle 5 µm. La miscela reagita è stata separata isocraticamente con una fase mobile costituita da nonilammina 0,02 M (regolata a pH 2,4 con acido fosforico) e acetonitrile in un rapporto di 67,5:32,5 (V/V) (Anzenbacherova et al., 2001). La portata era di 1 ml/min; il volume di iniezione era di 10 µl; il rivelatore è stato impostato a 345 nm. Le inibizioni ACE (percentuali) di Act e Isoact sono state calcolate come segue: [(Area di FAPGGblank - Area di FAPGGcontrol) - (Area di FAPGGblank - Area di FAPGGsample) ÷ (Area di FAPGGblank - Area di FAPGGcontrol) × 100.

inibitorio attività di Atto e Isoact contro Mediato da AAPH emolisi

L'ossidazione della catena dei radicali liberi dei globuli rossi di ratto (RBC) attraverso l'emolisi mediata da AAPH (Miki et al., 1987). Il sangue di ratto è stato posto in provette eparinizzate e centrifugato a 1000 ×gper 10 min. Dopo essere stato lavato tre volte con NaCl 0,15 M, l'RBC impaccato è stato ottenuto mediante centrifugazione a 1000 ×gper 10 min. Le diverse quantità di Act e Isoact (le concentrazioni finali erano 2, 5 e 10 µM) sono state miscelate con 25 µL di sospensione di globuli rossi al 20% (V/V, in PBS 10 mM) e 25 µL di soluzione AAPH 500 mM a 37 gradi per 0 , 1, 1,5, 2, 2,5, 3 e 3,5 h agitando delicatamente. Ciascuna miscela è stata centrifugata a 1000 ×gper 10 minuti e il supernatante è stato misurato a 536 nm. L'acqua deionizzata è stata utilizzata al posto della soluzione AAPH o della soluzione campione, rispettivamente, come gruppo bianco o come gruppo di controllo. L'inibizione dell'emolisi (percentuale) di Act e Isoact a 3 h o a 3,5 h è stata calcolata come segue: (ΔA536 nmcontrol - ΔA536 nmsample) ÷ ΔA536 nmcontrol × 100.

Antipertensivo effetti di Atto e Isoact Su SHr

Gli effetti di Act, Isoact e captopril somministrati per via orale mediante sondino (2.0 × 80 mm) sulla SBP ridotta e sulla DBP ridotta sono stati determinati secondo il metodo dei rapporti precedenti (Lin et al., 2006; Lin et al., 2008; Han et al., 2011). Tutte le procedure sperimentali sugli animali hanno seguito le linee guida pubblicate (National Science Council, 1994). Gli SHR maschi (8 settimane di età, National Laboratory Animal Center, Taipei) sono stati alloggiati individualmente in gabbie d'acciaio mantenute a 24 gradi con un ciclo luce-buio di 12-h e hanno avuto libero accesso a un cibo standard per topi/ratti ( Prolab RMH2500, 5P14 Diet, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) e acqua. Gli SHR sono stati suddivisi in modo casuale in trattamenti di controllo e campioni per le determinazioni di SBP e DBP (sei ratti per gruppo). Per un esperimento antipertensivo a breve termine, una volta sono stati somministrati per via orale 0,5 ml di 10 mg di Act o Isoact/Kg di SHR o 5 mg di captopril/Kg di SHR e la pressione sanguigna della coda è stata misurata a 2, 4, 6 e 24 h dopo una singola somministrazione orale. L'acqua distillata da 0,5 ml è stata utilizzata per un esperimento in bianco. Un misuratore di pressione sanguigna indiretto (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokyo, Giappone) è stato utilizzato per misurare la PAS e la PAD quattro volte a ciascuna determinazione per ciascun trattamento.

dati analisi

I valori sono presentati come medie ± SD e analizzati utilizzando ANOVA unidirezionale, seguito dal test di Tukey post hoc per confronti di medie multiple. Gli studentit-è stato eseguito il test, confrontando solo due gruppi di dati (ad esempio tra Act e Isoact alla stessa concentrazione). Un valore p < 0.05="" è="" considerato="" statisticamente="" significativo.="" l'analisi="" statistica="" è="" stata="" eseguita="" utilizzando="" spss="" per="" windows,="" versione="" 10="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

acteosidein cistanche per migliorare la memoria

Risultati

Scavenging attività di PPH e superossido radicali

Agire, Isoagire e 6-O-acetilatto esibito attività di scavenging DPPH dose-dipendenti a pH 7,9 (Figura 2). I valori IC50 erano 11,4, 9,48 e 9,55 µM, rispettivamente, per Act, Isoact e 6-O-acetilatto. I valori IC50 dei controlli positivi di acido ascorbico e BHT erano rispettivamente di 13,1 e 18,5 µM.

Inibizione di xantina ossidasi attività

Act e Isoact hanno dimostrato di esibire un'inibizione dose-dipendente della xantina ossidasi (Figura 3). L'IC50 è stato calcolato rispettivamente in 53,3 e 62,2 µM per Act e Isoact.

Inibizione di superossido dismutasi attività

Poiché sia ​​Act che Isoact hanno inibito l'attività della xantina ossidasi, abbiamo utilizzato il sistema PMS-NADH per generare radicali superossido (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Atto,

Isoact e 6-O-acetilatto esibito attività di scavenging dei radicali superossido dose-dipendenti (Figura 4). I valori IC50 erano rispettivamente 66,0, 38,5 e 39,1 µM per Act, Isoact e 6-O-acetilatto. I valori IC50 del controllo positivo dell'acido ascorbico erano 9,0 µM. Dai risultati delle Figure 2 e 4, era chiaro che Isoact e 6-O-acetilato aveva simili attività di scavenging dei radicali contro DPPH e radicali superossido, e quindi solo Act e Isoact sono stati selezionati per ulteriori screening dell'attività biologica.

Asso inibitorio attività di Atto e Isoact

Nel test preliminare, abbiamo riscontrato che Act e Isoact interferivano con l'assorbanza del substrato ACE FAPGG e del suo prodotto idrolizzato FAP a 345 nm come utilizzato per il test spettrofotometrico continuo (Holmquist et al., 1979). Pertanto, la separazione associata al rilevamento di Act o Isoact e FAPGG mediante HPLC è stata utilizzata per monitorare le attività inibitorie dell'ACE. Le Figure da 5A a 5D sono tipici cromatogrammi HPLC da 10 µl di miscele di reazione di un test in bianco (solo FAPGG, Figura 5A); test di controllo (ACE ha reagito con FAPGG per produrre FAP, Figura 5B); 0.5 µmole di Act (312,5 µg), ACE e FAPGG (Figura 5C); e 0,5 µmole di Isoact (312,5 µg), ACE e FAPGG (Figura 5D). L'area di FAPGG nella Figura 5B era la più bassa e quella nella Figura 5A la più alta di quattro tipici cromatogrammi HPLC. Le aree di FAPGG nelle Figure 5C e 5D dipendono dalle attività inibitorie dell'ACE di diverse concentrazioni di Act e Isoact. Le inibizioni ACE calcolate di Act e Isoact sono mostrate nella Figura 5E. L'atto ha mostrato attività inibitorie ACE più elevate rispetto a Isoact e l'IC50 del primo è stato calcolato in 472 µM per area nei cromatogrammi HPLC.

inibitorio attività di Atto e Isoact contro Mediato da AAPH emolisi

Le attività inibitorie di Act e Isoact contro l'emolisi mediata da AAPH a concentrazioni di 2, 5 e 10 µM sono state valutate in 3,5 ore (Miki et al., 1987). I risultati della Figura 6A dimostrano che l'emolisi nei globuli rossi di ratto è aumentata notevolmente (espressa come ΔA536 nm) dopo 3-h o 3.{11}}h reazioni in presenza di radicali AAPH (come gruppi di controllo, simbolo del ciclo bianco ). È stata osservata poca o nessuna emolisi in assenza di radicali AAPH durante la reazione di 3.{13}} h (come gruppi vuoti, simbolo del ciclo nero). Pertanto, l'inibizione dell'emolisi di Act e Isoact a 3 h o a 3,5 h è stata calcolata come segue: (ΔA536 nmcontrol − ΔA536 nmsample) ÷ ΔA536 nmcontrol × 100. Figura 6B

mostra che sia Act che Isoact a 2, 5 e 10 µM hanno mostrato un'inibizione dipendente dalla concentrazione sull'emolisi indotta da AAPH, con gli effetti inibitori di Act significativamente più forti di quelli di Isoact a ciascuna concentrazione utilizzata.

Antipertensivo effetti di Atto e Isoact Su SHr

Gli SHR hanno ricevuto una singola somministrazione orale di Act e Isoact (10 mg/Kg SHR) e le variazioni di SBP e DBP sono state registrate nell'arco di 24 ore. In precedenza abbiamo segnalato che la pressione sanguigna (SBP e DBP) di SHR era variabile durante 24- h (Lin et al., 2006; Han et al., 2011). Pertanto, è stato utilizzato un confronto a un tempo fisso (come 2, 4, 6, 8 e 24 h) tra bianco e campione anziché prima e dopo la somministrazione orale stessa. È stato riscontrato che Act, ma non Isoact, riduceva efficacemente SBP e DBP di SHR rispetto al gruppo in bianco (acqua distillata). La PAS è stata significativamente ridotta nel gruppo Act a 2, 4 e 6 ore rispettivamente di 18,8, 16,5 e 14,9 mmHg, ma la riduzione della PAS (3,3 mmHg) a 24 ore dopo il trattamento con Act non è stata costante.

artisticamente significativo (Figura 7A). Come mostrato nella Figura 7B, la DBP è stata ridotta nel gruppo Act a 2, 4 e 6 ore (rispettivamente di 8,5, 7,6 e 12.0 mmHg), sebbene solo il risultato ottenuto a 6 ore fosse statisticamente significativo (P< 0.05).="" è="" stato="" notato="" che="" act="" e="" captopril="" (come="" controllo="" positivo)="" hanno="" avuto="" effetti="" simili="" sulla="" sbp="" nelle="" fasi="" iniziali="" (2,="" 4="" e="" 6="" ore)="" dopo="" la="" somministrazione="">

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DISCUSSIONE

Le specie attive dell'ossigeno e le reazioni mediate dai radicali liberi sono coinvolte in processi degenerativi o patologici come l'invecchiamento, il cancro, la malattia coronarica e il morbo di Alzheimer (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith et al., 1996). Diversi rapporti si sono concentrati sullo screening delantiossidanteattività dalle risorse naturali. Nel presente studio, abbiamo prima confrontato ilantiossidanteattività di Act, Isoact e 6-O-acetilato. Act e Isoact sono isomeri strutturali in cui il costituente della parte dell'acido caffeico è legato al gruppo idrossile C-4 del glucosio nel primo e al gruppo idrossile C-6 del glucosio nel secondo. Mentre i costituenti del ramnosio e del 3',4'- diidrossi fenil etanolo, rispettivamente, sono legati ai gruppi idrossilici C-3 e C{7}} della porzione di glucosio nella stessa molecola Act e Isoact, { {8}}O-acetylact è un derivato dell'Atto in cui l'acido acetico è legato al gruppo idrossile C-6 nella parte del glucosio (Figura 1). Koo et al. (2006) hanno riportato che Act e i suoi agliconi esibivano attività di scavenging di DPPH e l'ordine di queste attività (espresso come IC50) era Act (1,28 µM) > acido caffeico (2,22 µM) > 3',4'-diidrossi fenil etanolo ( 7,72 µM) > -tocoferolo (15,1 µM). Nel presente rapporto (Figura 2), l'ordine delle attività di scavenging DPPH (espresso come IC50) è 6-O-acetilato (9,55 µM) ≈ Isoact (9,48 µM) > Act (11,4 µM). Questi valori erano paragonabili o migliori di quelli dell'acido ascorbico (IC50 di 13,1 µM) e del BHT (IC50 di 18,5 µM) per lo scavenging dei radicali DPPH. L'IC50 più alto di Act nel presente rapporto potrebbe derivare dalla concentrazione finale di 60 µM DPPH invece dei 30 µM utilizzati da Koo et al. riportato (2006). Poiché l'analisi del radicale DPPH appartiene alla reazione di trasferimento di elettroni (Huang et al., 2005), si ipotizza che il derivato nel gruppo idrossile C-6 della frazione glucosio, come il gruppo acetile in {{21 }}O- la parte di acetilato e acido caffeico in Isoact, possono fornire più facilmente una reazione di trasferimento di elettroni rispetto a quelle del gruppo idrossile libero C-6 nella parte di glucosio di Act per il test di scavenging DPPH.

Agire, 6-OÈ stato riportato che -acetilato e Isoact possiedono attività di scavenging del superossido in vitro utilizzando il sistema xantina/xantina ossidasi per generare radicali superossido (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999). Tuttavia, il nostro presente studio ha indicato che Act ha mostrato attività inibitorie della xantina ossidasi (Figura 3). Pertanto, il radicale superossido è stato generato utilizzando il sistema PMS-NADH nel presente rapporto (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008) invece del sistema xantina/xantina ossidasi. Infatti, utilizzando il sistema xantina/xantina ossidasi per generare radicali superossido, Wang et al. (1996) hanno ottenuto un IC50 di 63 µM Act contro i radicali superossido, e questo valore è vicino a quello per l'inibizione dell'attività della xantina ossidasi da parte di Act, come riportato nel presente studio (53,3 µM). È stato riportato che l'acido caffeico esibiva attività inibitorie della xantina ossidasi (Chiang et al., 1994). Si può ipotizzare che le attività di scavenging del superossido che utilizzano il sistema di generazione di xantina/xantina ossidasi di alcuni fitochimici con strutture associate agli acidi caffeici, come Act o Isoact (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999), potrebbero aver stato contribuito, almeno in parte, alle inibizioni della xantina ossidasi. È interessante notare che Wang et al. (1996) hanno scoperto che Act (0,5 e 2,5 mM) non inibisce l'attività della xantina ossidasi che è stata determinata da un elettrodo di ossigeno per il consumo di ossigeno durante l'ossidazione della xantina. Pertanto, è importante tenere a mente che metodi diversi per analizzare l'attività di scavenging del superossido possono produrre dati contraddittori.

Li et al. (1993) hanno riportato una misura simile di inibizione di Act e Isoact contro l'emolisi mediata da AAPH nei globuli rossi dei topi. Tuttavia, abbiamo mostrato qui che Act ha mostrato un'attività inibitoria molto più elevata contro l'emolisi indotta da AAPH nei globuli rossi dei ratti rispetto a Isoact (Figura 6). Non è chiaro se tale incoerenza possa essere dovuta alla differenza nelle specie di roditori.

Kang et al. (2003) hanno riportato che Act esibiva attività inibitorie dell'ACE e l'IC50 era 373,3 µg/mL che è stato calcolato essere 598 µM usando Hip-His-Leu come substrati. Nel presente rapporto, la legge ha mostrato attività inibitorie ACE più elevate rispetto a Isoact e l'IC50 del primo è stato calcolato in 472 µM per area nei cromatogrammi HPLC (Figura 5). È stato riportato che l'atto esercita effetti rilassanti mediati dall'ossido nitrico sugli anelli aortici intatti dall'endotelio di ratti SD (Wong et al., 2001). Sebbene Act abbia dimostrato di essere antiipertensivo nei ratti Wistar,

lo studio ha impiegato l'iniezione endovenosa di Act in un ratto anestetizzato per escludere il fattore di adsorbimento (Ahmad et al., 1995). In questo documento, abbiamo amministrato Act oralmente agli SHR e determinato i cambiamenti nella pressione sanguigna. Abbiamo scoperto che il fatto di somministrazione orale, ma non di Isoact, mostrava effetti antipertensivi abbassando SBP e DBP nell'arco di 24 ore dopo una singola somministrazione (Figura 7). Agire a una dose di 10 mg/kg di peso corporeo ha avuto un effetto vicino a quello del captopril alla dose di 5 mg/kg SHR nell'abbassare la PAS ed è stato migliore del captopril nell'abbassare la PAS.

In conclusione, Act esibitoantiossidanteattività, attività ACE inibitori ed effetti antipertensivi sugli SHR. I risultati qui presentati andranno a beneficio dello sforzo di sviluppare medicinali a base di erbe o prodotti correlati utilizzando la legge, che è stata trovata in molte piante e medicinali a base di erbe, per la protezione antiossidante e gli effetti terapeutici in futuro.

Cistancheacteosideper antiossidanti e antietà

1Dipartimento di Scienze e Biotecnologie alimentari, Università Nazionale Chung Hsing, Taichung, Taiwan

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Taiwan

3School of Pharmacy, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

4Graduate Institute of Biomedical Materials and Engineering, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

5Centro di ricerca sulla medicina erboristica tradizionale, Taipei Medical University Hospital, Taipei, Taiwan

6Graduate Institute of pharmacognosy, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

(Ricevuto il 12 marzo 2012; Accettato il 20 aprile 2012)

LETTERATURA CITATA

Ahmad, M., GH Rizwani, K. Aftab, VU Ahmad, AH Gilani e SP Ahmad. 1995.Atteosidi: un nuovo farmaco antipertensivo. Fitother. ris. 9: 525-527.

Ames, BN 1983. Cancerogeni dietetici e antitumorali: radicali dell'ossigeno e malattie degenerative. Scienza 221:1256-1264.

Anzenbacherova, E., P. Anzenbacher, K. Macek e J. Kvetina. 2001. Determinazione degli inibitori dell'enzima (angiotensina convertasi) sulla base della reazione enzimatica seguita da HPLC.J. farmaceutico. Biomed. Anale. 24: 1151-1156.

Birkofer, L., C. Kaiser e U. Thomas. 1968.Atteosidie neoacteoside: Zuckerester aus Syringa vulgaris. Naturforsc-hung 23B: 1051-1058.

Borer, JS 2007. Inibizione dell'enzima di conversione dell'angiotensina: un progresso fondamentale nel trattamento delle malattie cardiovascolari. Euro. Cuore J. Suppl. 9(Suppl. E): E2-E9.

Chen, CH, TY Song, YC Liang e ML Hu. 2009.Atteosidie 6-l'O-acetilatteoside sottoregola le molecole di adesione cellulare indotte da IL-1 attraverso l'inibizione di ERK e JNK nelle cellule endoteliali vascolari umane. J. Agric. Cibo

Chimica. 57: 8852-8859.

Chiang, HC, YJ Lo e FJ Lu. 1994. Inibitori della xantina ossidasi da foglie di Alsophila spinulosa (Hook) Tryon. J. Inibizione enzimatica. 8: 61-71.

Chiou, WF, LC Lin e CF Chen. 2004.Atteosidiprotegge le cellule endoteliali dallo stress ossidativo indotto dai radicali liberi. J. Pharm. Farmaco. 56: 743-748.

Fotherby, MD e B. Panayiotou. 1999. Terapia antipertensiva nella prevenzione dell'ictus: cosa, quando e per chi? Farmaci 58: 663-674.

Gao, JJ, K. Igalashi e M. Nukina. 1999. Attività di scavenging radicale dei glicosidi fenilpropanoidi in Caryopteris incana. Biosci. Biotecnologie. Biochimica. 63: 983-988.

Accidenti, KF 1990. IlantiossidanteIpotesi di malattie cardiovascolari: epidemiologia e meccanismi. Biochimica. soc. Trans. 18: 1041-1045.428 Studi botanici, vol. 53, 2012

Han, CH, JC Liu, KH Chen, YS Lin, CT Chen, CT Fan, HL Lee, DZ Liu e WC Hou. 2011. Attività antipertensive dell'aglio trasformato su ratti spontaneamente ipertesi e umani ipertesi. Bot. Perno. 52: 277-283.

Holmquist, B., P. Bunning e JF Riordan. 1979. Un test spettrofotometrico continuo per l'enzima di conversione dell'angiotensina. Anale. Biochimica. 95: 540-548.

Hou, WC, HJ Chen e YH Lin. 2003. Peptidi antiossidanti con attività inibitoria dell'enzima di conversione dell'angiotensina e applicazioni per la purificazione dell'enzima di conversione dell'angiotensina. J. Agric. Chimica alimentare. 51: 1706-1709.

Huang, D., B. Ou e RL Prior. 2005. La chimica dietroantiossidantetest di capacità. J. Agric. Chimica alimentare. 53: 1841-1856.

Huang, CG, YJ Shang, J. Zhang, JR Zhang, WJ Li e BH Jiao. 2008. Effetti ipouricemici dei glicosidi fenilpropanoidiacteosidedi Scrophularia ningpoenis sui livelli sierici di acido urico in topi pretrattati con ossonato di potassio. Amer. J.

Mento. Med. 36: 149-157.

Lee, KY, EJ Jeong, HS Lee e YC Kim. 2006.Atteosididi Callicarpa dichotoma attenua i disturbi della memoria indotti dalla scopolamina. Biol. Farma. Toro. 29: 71-74.

Li, J., P. Wang, R. Zheng, Z. Liu e Z. Jia. 1993. Protezione dei glicosidi fenilpropanoidi da Pedicularis contro l'emolisi ossidativa in vitro. Pianta Med. 59: 315-317.

Li, H., GX Chou, ZT Wang e ZB Hu. 2006. HPLC determinazione diacteosidein Radix Rehmaniae. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31: 822-824.

Lin, SY, CC Wang, YL Lu, WC Wu e WC Hou. 2008.Antiossidante, l'ammina ossidasi sensibile all'antisemicarbazide e le attività anti-ipertensive della geraniina isolata da Phyllanthus urinaria. Chimica alimentare. Tossico. 46: 2485-2492.

Liu, DZ, YS Lin e WC Hou. 2004. Esibizione di monoidrossamati di acido aspartico e acido glutammicoantiossidantee attività inibitorie dell'enzima di conversione dell'angiotensina. J. Agric.Food Chem. 52: 2386-2390.

Kalckar, HM 1947. Spettrofotometria differenziale di composti purinici mediante un enzima specifico. J. Biol. Chimica167: 429-443.

Kang, DG, YS Lee, HJ Kim, YM Lee e HS Lee. 2003. Glicosidi fenilpropanoidi inibitori dell'enzima di conversione dell'angiotensina da Clerodenron trichotomum. J. Etnofarmaco. 89: 151-154.

Koo, KA, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee e YC Kim. 2005. Attività neuroprotettive in vitro dei glicosidi feniletanoidi da Callicarpa dichotoma. Planta Med.71: 778-780.

Koo, KA, SH Kim, TH Oh e YC Kim. 2006.Atteosidie i suoi agliconi proteggono le colture primarie di cellule corticali di ratto dall'eccitotossicità indotta dal glutammato. Scienziato della vita 79:709-716.

Lin, CL, SY Lin, YH Lin e WC Hou. 2006. Effetti della proteina di immagazzinamento dei tuberi dell'igname (Dioscorea alata cv. Tainong No.1) e dei suoi idrolizzati peptici su ratti spontaneamente ipertesi. J. Sci. Agroalimentare 86: 1489-1494.

Mark, KS e TP Davis. 2000. Ictus: sviluppo, prevenzione e trattamento con inibitori della peptidasi. Peptidi 21:1965-1973.

Miki, M., H. Tamai, M. Mino, Y. Yamamoto ed E. Niki. 1987. Ossidazione a catena dei radicali liberi dei globuli rossi di ratto mediante ossigeno molecolare e sua inibizione da parte del -tocoferolo. Arch Biochimica. Biofis. 258: 373-380.

Consiglio Nazionale delle Scienze. 1994. Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio. Consiglio nazionale delle scienze, Taiwan.

Ohno, T., M. Inoue, Y. Ogihara e I. Saracoglu. 2002. L'attività antimetastatica diacteoside, un glicoside feniletanoide.Biol. Farma. Toro. 25: 666-668.

Vendetti, MA, B. Rubin, DW Cushman. 1977. Progettazione di inibitori specifici dell'enzima di conversione dell'angiotensina: una nuova classe di agenti antipertensivi attivi per via orale. Scienza 196: 441-444.

Rao, YK, SH Fang, SC Hsieh, TH Yeh e YM Tzeng. 2009. I costituenti di Anisomeles India e le loro attività antinfiammatorie. J. Etnofarmaco. 121: 292-296.

Smith, MA, G. Perry, PL Richey, LM Sayre, VE Anderson, MF Beal e N. Kowal 1996. Danno ossidativo nell'Alzheimer. Natura 382: 120-121. Wang, P., J. Kang, R. Zheng, Z. Yang, J. Lu, J. Gao e Z. Jia.

1996. Effetti di scavenging del glicoside fenilpropanoide di Pedicularis sull'anione superossido e sul radicale idrossile mediante il metodo di spin trapping. Biochimica. Farmaco. 51: 687- 691.

Wong, IYF, Y. Huang, ZD He, CW Lau e ZY Chen. 2001. Effetti rilassanti di Ligstrum purpurascens estratto e purificatoacteosidenegli anelli aortici di ratto. Pianta Med. 67:317-321.

Wu, YT, LC Lin, JS Sung e TH Tsai. 2006. Determinazione diacteosidein Cistanche deserticola e Boschniakia rossica e la sua farmacocinetica in ratti che si muovono liberamente mediante LC-MS/MS. J. Cromatogr. B 844: 89-95.