Disfunzione autonomica e disabilità nella sindrome da stanchezza cronica

Astratto:

Sfondo: encefalomielite mialgica/Sindrome dell'affaticamento cronico(ME/CFS) è unmalattia complessa acquisita con pazienti che soffrono dei sintomi cardinali difatica, e post-sforzomalessere (PEM), deterioramento cognitivo, dolore e disfunzione autonoma. ME/CFS èinnescato da un'infezione nella maggior parte dei pazienti. Prime prove per un potenziale ruolo del naturaleautoanticorpi regolatori (AAB) contro i recettori beta-adrenergici (AdR) e muscarinici dell'acetilcolina (MAChR) nei pazienti ME/CFS deriva da alcuni studi.

Metodi: qui, abbiamo analizzato le correlazionidi gravità dei sintomi con livelli da AAB ad AdR vasoregolatore, AChR ed endotelina-1 di tipo Ae recettore B (ETA/B) e dell'angiotensina II tipo 1 (AT1) in una coorte di Berlino di pazienti con ME/CFS(n = 116) di ELISA. La gravità della malattia, i sintomi e la disfunzione autonomica sono stati valutati daquestionari.

Risultati: abbiamo riscontrato che i livelli della maggior parte degli AAB erano significativamente correlati con i sintomi chiavedifaticae dolore muscolare nei pazienti con insorgenza innescata da infezione. La gravità del cognitivocompromissione correlata con AT1-R- ed ETA-R-AAB e gravità dei sintomi gastrointestinali conalpha1/2-AdR-AAB. Al contrario, i pazienti con ME/CFS non innescati da infezioni hanno mostrato menoe altre correlazioni.

Conclusione: correlazioni di AAB specifico contro i recettori accoppiati a proteine ​​G(GPCR) con sintomi forniscono prove del ruolo di questi AAB o delle rispettive vie recettorialipatomeccanismo della malattia.

Parole chiave:recettori adrenergici; autoanticorpi; encefalomielite mialgica;Sindrome dell'affaticamento cronico; autoimmunità; vasoregolazione; Recettore accoppiato alla proteina G,cistance

Per maggiori informazioni:wallence.suen@wecistanche.com

1. Introduzione

L'encefalomielite mialgica/sindrome da affaticamento cronico (ME/CFS) è una malattia acquisitamalattia complessa con sintomi cardinali di affaticamento, malessere post-esercizio (PEM), cognitivodisfunzione e dolore [1]. La prevalenza stimata è fino al 0.{1}} percent , con picchi inadolescenza e mezza età [2,3]. La ME/CFS è scatenata da un'infezione nella maggioranzadei pazienti [4]. Sebbene la patogenesi sia ancora sconosciuta, ci sono ampie prove didisregolazione immunitaria e autonomica [5]. Vi sono prove crescenti che la disfunzione vascolare e l'ipoperfusione svolgono un ruoloruolo importante nella ME/CFS. Era una diminuzione dell'apporto di ossigeno nei muscoli durante l'eserciziomostrato in diversi studi su pazienti con ME/CFS [6,7]. In linea con questo, cambiamenti metabolicinella ME/CFS indicano ipossia e ischemia [8]. Diversi studi hanno mostrato una diminuzioneflusso sanguigno cerebrale su sfida ortostatica [9,10]. Quindi, ipoperfusione, che èaggravato dallo sforzo, può causare affaticamento dei muscoli mentali e scheletrici che sono segni distintividi ME/CFS [11]. Per la regolazione del flusso sanguigno, recettori accoppiati a proteine ​​G (GPCR) per vasoattivoormoni, come catecolamine, acetilcolina, angiotensina II ed endotelina 1, svolgono un ruoloruolo importante [12]. Gli autoanticorpi regolatori (AAB) che prendono di mira GPCR sono coinvolti nelpatogenesi di molte malattie. Gli AAB anti-GPCR si legano ai rispettivi recettori,che possono avere effetti sia agonisti che antagonisti [13]. Tra i primi AAB aI GPCR descritti erano quelli per il recettore adrenergico beta1 (AdR) nella cardiomiopatia dilatativae al recettore di tipo 1 dell'angiotensina II (AT1-R), mediando la vasocostrizione come fattori di rischio perrigetto di trapianto renale [14,15]. AAB contro GPCR è stato trovato in molti reumaticianche malattie [16]. Questo AAB appartiene a una rete di regolamentazione, che è disregolatamolte malattie [17]. Ci sono prove che AdR e recettori muscarinici dell'acetilcolina (M-AChR)-AABsvolgono un ruolo anche nella ME/CFS. Tanaka et al. sono stati i primi a descrivere M-AChR-AAB elevati inME/CFS e loro associazione con debolezza muscolare e deterioramento neurocognitivo [18]. In uno studio precedente, abbiamo riscontrato un AAB elevato rispetto a beta2-AdR e M3/M4-AChRin un sottogruppo di pazienti ME/CFS [19]. Bynk et al. hanno potuto verificare questi risultati darilevamento di AAB elevati rispetto a beta1/2-AdR e M3/M4-AChR nel siero ma non inliquido cerebrospinale di pazienti con ME/CFS [20]. Livelli di Beta1/2-AdR-AAB nel sangue correlaticon alterazioni strutturali del cervello legate alla modulazione del dolore [21]. Recentemente, abbiamo trovatobeta agonistico2-AdR-AAB nei controlli sani e nei pazienti ME/CFS, stimolando ilbeta2-AdR su cellule immunitarie e linee cellulari reporter. È importante sottolineare che questa funzione agonistica eraattenuato in ME/CFS [22]. Quando si esegue l'immunoadsorbimento per rimuovere l'AAB dacircolazione, abbiamo osservato un miglioramento clinico a breve termine nella maggior parte dei pazienti [23,24]. PerPazienti con ME/CFS in trattamento con rituximab, abbiamo documentato un declino sostenuto del pretrattamentoelevati livelli di beta2-AdR-AAB nei pazienti che hanno risposto al trattamento con rituximab [19]. Lo scopo di questo studio era di indagare le correlazioni tra i livelli di legame AAB aGPCR vasoregolatore e gravità dei sintomi clinici nella ME/CFS. Come risposte AABsono frequentemente attivati ​​da infezioni, abbiamo distinto tra pazienti con e senzal'infezione ha innescato l'insorgenza della ME/CFS. In uno studio recente, abbiamo riscontrato una maggiore prevalenza dile varianti a singolo nucleotide autoimmuni associate in CTLA4 e PTPN22 in ME/CFSsolo pazienti con insorgenza di malattie infettive [25]. Catecolamine che si legano ad alfa1/2-AdRsulle cellule muscolari lisce vascolari provocano vasocostrizione, mentre mediano la vasodilatazionetramite beta2-AdR. Angiotensina II che si lega al tipo AT1-R ed endotelina-1 all'endotelina-1I recettori A e B (ETA/BR) attivano entrambi importanti vie vasocostrittive. Questei ligandi sono aumentati dallo sforzo fisico [12]. I recettori attivati ​​dalla proteasi (PAR) giocano aruolo nella vasoregolazione durante l'infiammazione. È stata dimostrata l'attivazione di PAR-1 da parte della trombinaindurre costrizione vascolare [26,27]. PAR-2 attivato dalla tripsina può mediare l'infiammazioneadesione cellulare all'endotelio [28]. L'acetilcolina può mediare la vasodilatazione tramite M3-Rilascio di ossido nitrico dipendente da AChR [29]. L'espressione M4-AChR è stata descritta insistema microvascolare cerebrale [30]. Ci aspettavamo che se i livelli di AAB vasoregolatori giocassero aruolo nel patomeccanismo della ME/CFS, dovrebbero essere correlati alla gravità della chiavesintomi e disabilità.

2. Materiali e metodi

2.1. Pazienti

Un totale di 116 pazienti sono stati diagnosticati in ambulatorio per immunodeficienzepresso l'Istituto di Immunologia Medica del Charité Universitätsmedizin Berlino traottobre 2016 e maggio 2017. La diagnosi di ME/CFS in tutti i pazienti era basata sul 2003Criteri di consenso canadesi ed esclusione di altre malattie mediche o neurologiche chepuò causare affaticamento da una valutazione clinica e di laboratorio completa [1]. Tutti i pazientiha ricevuto un esame cardiopolmonare prima del rinvio. In caso di sospetto reumatico,malattie gastrointestinali o neurologiche, i pazienti sono stati indirizzati a specialisti prima deldiagnosi è stata data ME/CFS. Lo studio è stato approvato dal Comitato Etico diCaritàé Universitätsmedizin Berlin (EA4/090/10) secondo la Dichiarazione del 1964di Helsinki e suoi successivi emendamenti. Tutti i pazienti hanno dato consenso informato.

2.2. Determinazione dei livelli di autoanticorpi e dati ematici di laboratorio

CellTrend GmbH, Luckenwalde, Germania, ha analizzato i livelli sierici di AAB controalfa1-, alfa2-, beta1-, beta2-, beta3-AdR, M{5}} e M4-AChR ; AT1-R, ETA-R e ETB-R;PAR1/2. Campioni di sangue intero di ciascun soggetto sono stati lasciati coagulare a temperatura ambientee poi centrifugato a 2000× g per 15 min in una centrifuga refrigerata. Il siero erapurificato e conservato a−35 ◦C. L'AAB è stato misurato in campioni di siero utilizzando un sandwichKit ELISA (CellTrend GmbH, Luckenwalde, Germania). Il microtitolo 96-pozzetto di polistirenele piastre sono state rivestite con proteine ​​recettoriali a lunghezza intera. Per mantenere il conformazionaleepitopi del recettore, a ogni tampone è stato aggiunto cloruro di calcio 1 mM. Duplicarecampioni di una diluizione di siero 1:100 sono stati incubati a 4◦C per 2 ore. Dopo aver lavato i passaggi, i piattisono stati incubati per 60 minuti con una diluizione 1:20,000 di capra marcata con perossidasi di rafanoanti-IgG umane utilizzate per il rilevamento. Per ottenere una curva standard, le piastre eranoincubato con il siero del test di un paziente con indice GPCR AAB-positivo. Gli ELISA eranoconvalidato secondo la "Guidance for Industry: Bioanalytical method validation" della FDA.La concentrazione delle sottoclassi sieriche di IgG, IgA, IgM, IgE e IgG è stata determinata aCaritàé laboratorio di diagnostica Labor Berlin GmbH.

2.3. Questionari per il punteggio dei sintomi

La presenza e la gravità dei sintomi nei pazienti con ME/CFS sono state valutate sulla basesui criteri di consenso canadesi del 2003 [1,31]. Sintomi cardinali di affaticamento, dolore muscolare,sintomi immunitari (media dei 3 sintomi di linfonodi dolorosi, mal di gola e simil-influenzalesintomi) e deterioramento cognitivo (media dei 3 sintomi di disturbo della memoria,capacità di concentrazione e stanchezza mentale) sono stati valutati tra 1 (nessun sintomo) e10 (sintomi più gravi) dai pazienti. I sintomi della disfunzione autonomica eranovalutato dal Composite Autonomic Symptom Score 31 (COMPASS 31) [32]. Inoltre,la disabilità è stata esaminata utilizzando il punteggio Bell incentrato sul livello di restrizione nel quotidianofunzionante [33] e fatica usando Chalder Fatigue Score [34]. Attività fisiche di tutti i giornila vita è stata valutata tramite lo Short Form Health Survey 36 (SF-36) [35]. 

2.4. Analisi statistica

Le analisi dei dati statistici sono state eseguite utilizzando IBM SPSS Statistics 22.0 (New York, NY,USA), GraphPad Prism 6.0 (San Diego, CA, USA) e R 4.0 (R Foundation for StatisticalInformatica, Vienna, Austria.Tutti i datisono stati presentati come mediana e intervallo interquartile (IQR), media e deviazione standard(SD) o frequenza (n) e percentuale, se del caso. Confronti di quantitativoi parametri tra due gruppi sono stati eseguiti utilizzando il Mann-Whitney non parametricotest. I parametri categoriali sono stati confrontati tra i sottogruppi applicando quelli di Pearsonχ2-test. L'analisi di correlazione è stata eseguita utilizzando il coefficiente di Spearman non parametrico.A causa di molteplici test, è stata applicata la correzione Benjamini-Hochberg (BH), mirando acontrollare un tasso di false scoperte del 5%. Aggiustatop-values ​​< 0.05 è stato considerato come fornitoevidenza di un risultato statisticamente significativo.

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3. Risultati

3.1. Caratteristiche di coorte

Abbiamo analizzato una coorte di 116 pazienti ME/CFS per la correlazione dei livelli di AAB congravità dei sintomi. Le caratteristiche del paziente sono mostrate nella tabella1. L'età media era43 anni(IQR: 31–50) e la precedente durata mediana della malattia al momento dell'analisiera di quattro anni (IQR: 2–9). Un totale di 83 dei 116 pazienti (72%) erano donne e 86 (74%)riportato un inizio di malattia innescato da infezione. Pazienti con esordio scatenato dall'infezioneerano più giovani di una differenza mediana di dieci anni (p = 0.005) e ha riportato una malattia più brevedurata (p = 0.022). Non ci sono state differenze nella gravità dei sintomi, nella scala della disabilità di Bell,SF-36 funzione fisica e COMPASS 31-disfunzione autonomica valutata (Tabella1) né dentroLivelli AAB (Tabella2) tra questi gruppi.

3.2. Correlazione di AAB con IgG totali ed età

Come abbiamo già osservato in uno studio precedente [19], la maggior parte dei livelli AAB ha mostrato acorrelazione positiva con le sottoclassi IgG e IgG totali, prevalentemente con IgG1 e IgG3(Tabella S1). Poiché il GPCR AAB appartiene a una rete di regolamentazione di AAB, il loro livello puòdipendono dai livelli di IgG totali. Inoltre, per alcuni abbiamo osservato una correlazione inversa con l'etàAAB (Tabella S1), nonché tra età e IgG totali (intera coorte: r =−0.2526; p = 0.007, n = 114). Pertanto, abbiamo calcolato i rapporti AAB/IgG per correggere l'effetto dell'età (Tabella2 e tabella S2).

3.3. Correlazione di AAB con i punteggi clinici dei sintomi

I livelli di vari AAB erano correlati alla gravità dei sintomi (Tabella S3).Inoltre, noiosservato una correlazione positiva di alfa1/2-AdR, M4-AChR ed ETA-R con la malattiadurata (Tabella S2). Ridurre al minimo l'effetto dell'età utilizzando i rapporti AAB/IgG per la correlazionele analisi hanno portato, in generale, a stime di correlazione più elevate (r) e più correlazioni raggiunte alivello di significatività (Tabella S4). Abbiamo analizzato le coorti di pazienti in base al tipo di malattiaesordio. Poiché il 74% dei pazienti ha riportato un esordio infettivo, questo gruppo era molto più numeroso diil gruppo di esordio non infettivo. Correlazioni della gravità dei sintomi con i rapporti AAB/IgGstratificati in base all'insorgenza della malattia sono mostrati come valori del coefficiente di correlazione di Spearmanin figura1, e sono mostrate le correlazioni dei sintomi clinici con i livelli assoluti di AABFigura S1. La maggior parte delle correlazioni è stata trovata solo nei pazienti con insorgenza innescata da infezione,mentre meno e altre correlazioni sono state trovate in quelli con esordio non innescato da infezione(Tabelle S3 e S4)

Figura 1.Correlazioni tra gravità dei sintomi e rapporti AAB/IgG. Analisi di correlazione dei rapporti AAB/IgG conla gravità di (A) fatica, dolore muscolare, punteggi dei sintomi cognitivi e immunitari, funzionamento fisico (SF-36) e Bellpunteggio di disabilità e (B) con sottodomini COMPASS 31. I coefficienti di correlazione di Spearman (r) sono mostrati per i pazienti coninsorgenza innescata dall'infezione (barre nere) e pazienti senza insorgenza innescata dall'infezione (barre grigie). Correlazioni significative a priorialla correzione BH sono contrassegnati da asterischi (*p < 0.05,="" **="">p < 0.01),="" correlations="" that="" remained="" signifificant="" after="" bh-correction="">sono indicati da barre a strisce bianche e nere.Nei pazienti con insorgenza innescata da infezione (n = 86), la gravità della fatica è correlata positivamentecon la maggior parte dei rapporti AAB/IgG, compresi quelli contro alpha1/2-AdR, beta1/2/3-AdR,M3/4-AChR, AT1-R, ETA-R e ETB-R, ma non PAR-1/2 (figura1A, barre nere). Musla severità del dolore ha mostrato correlazioni simili con l'affaticamento, ad eccezione di beta3-AdR-AAB/IgG.

La funzione fisica SF-36 ha mostrato un modello di correlazione simile afaticae muscolidolore con correlazioni negative significative (a causa di punteggi più bassi che indicano più gravecompromissione) con alfa2-AdR-, beta1/2-AdR- e M{5}}ACh-AAB/IgG. Al contrario, illa gravità dei sintomi cognitivi era correlata positivamente con AT1-R- ed ETA-R-AAB/IgGsolo. La gravità del punteggio di disabilità Bell ha mostrato una correlazione negativa simile conAT1-R- ed ETA-R- e con alpha1/2-AdR-AAB/IgG. Per il punteggio immunitario, solo unè stata trovata una correlazione inversa con PAR1. Il Chalder Fatigue Score non era correlatoAAB/IgG (non mostrato). I grafici a dispersione per correlazioni significative sono mostrati nelle figure S2–S5.Nessuna di queste correlazioni significative di affaticamento e dolore muscolare è stata trovatapazienti senza insorgenza innescata da infezione (Figura1A, barre grigie). Correlazioni trala maggior parte dei punteggi della funzione fisica AAB/IgG e SF-36 erano addirittura opposti a quelli dei pazienticon esordio scatenato dall'infezione. Tuttavia, la correlazione stima (r) tra AT1-RAAB/IgG e sintomi cognitivi e tra AT1-R- ed ETA-R-AAB/IgG eIl punteggio di Bell era simile a quello dei pazienti con esordio innescato dall'infezione. Come questo sottogruppoera molto più piccolo (n = 30), questo potrebbe spiegare una mancanza di significato. Inoltre, abbiamo trovato acorrelazione negativa significativa di ETB-R-AAB/IgG e il punteggio di Bell solo in questo gruppo.Sono stati trovati anche modelli di correlazione interessanti per AAB/IgG e per i tre dominidella funzione ortostatica, gastrointestinale e pupillomotoria valutata dal COMPASS 31questionario (fig1B). Nei pazienti con esordio scatenato da infezioni, il tratto gastrointestinalei sintomi erano correlati positivamente con alfa1/2-AdR- e i sintomi pupillomotoricon rapporti alfa1-, beta2/3-AdR- e M{4}}AChR-AAB/IgG. Al contrario, la non infezioneil gruppo con esordio attivato ha mostrato forti correlazioni di alfa1/2-AdR- e beta1/2/3-AdRAAB/IgG con sintomi ortostatici e correlazione inversa di PAR2-AAB/IgG consintomi secretomotori, che sono assenti nell'altro sottogruppo. Non abbiamo osservatouna di queste correlazioni con le IgG totali (non mostrate). Pazienti senza infezione innescatal'esordio aveva una durata della malattia significativamente più lunga prima di queste analisi (Tabella1). Come noiosservato rapporti più elevati alfa1/2-AdR, M4-AChR ed ETA-R-AAB/IgG da associarecon una maggiore durata della malattia (Tabella S2), ciò può avere un impatto sulle correlazioni dialpha1/2-AdR/IgG con sintomi ortostatici.Nei pazienti con insorgenza innescata dall'infezione, la maggior parte del rapporto AAB/IgG correla conaffaticamento, dolore muscolare e sintomi cognitivi, nonché punteggio Bell con ETA-R-AAB/IgG,è rimasto significativo dopo la correzione BH (Tabella3 e figura1). Inoltre, l'associazionedei sintomi pupillomotori con M4-AChR-AAB/IgG sono rimasti significativi. Dopo BHcorrezione, nessuna delle correlazioni osservate nei pazienti senza insorgenza innescata dall'infezionerimasto significativo.

4. Discussione

Vi è una crescente evidenza di un ruolo della disfunzione vascolare nella ME/CFS che mostraassociazioni con sintomi chiave [11]. In questo studio, abbiamo trovato diverse correla notevolizioni di AAB vasoregolatore con sintomi clinici nella ME/CFS. La dipendenza trail gradiente biologico misurato di AAB e la gravità dei sintomi suggeriscono una causaleconnessione patomeccanica.A causa di una correlazione tra AAB regolativo naturale e IgG totali [19] e la dipendenza diLivelli di IgG sull'età [36], i rapporti AAB/IgG sono stati utilizzati nelle nostre analisi per correggerel'influenza dell'età. Usando i rapporti AAB/IgG invece dei livelli assoluti di AAB sono stati rivelatipiù forti e più correlazioni, e altro ancorap-i valori hanno raggiunto un livello di significatività.In linea con la nostra ipotesi di un ruolo dell'AAB vasoattivo nella ME/CFS, lo abbiamo trovatolivelli di alpha1/2- e beta1/2/3-AdR-, M3/4-AChR- e AT1-R-, ETA/BR-AAB/IgGi rapporti sono tutti significativamente correlati con la gravità della fatica e, ad eccezione dibeta3-AdR-AAB/IgG, con dolore muscolare. Lo stesso AAB alpha2-AdR-, beta1/2-AdR- eM4-AChR- (ma non AT1-R-, ETA/BR-) correlato con la funzione fisica SF-36. Tanakaet al. già descritto i livelli di M-AChR-AAB (senza dati sul sottotipo M) inME/CFS da associare a debolezza muscolare [18]. Bynk et al. non poteva mostrare unassociazione di AAB con beta1/2-AdR e M3/M4-AChR con vari fattori sanitariquestionari, ma la loro coorte era piuttosto piccola e i sintomi chiave includevano affaticamento,dolore muscolare, sintomi cognitivi e autonomi non sono stati valutati separatamente [20]. Noitrovato AAB elevato rispetto a beta2-AdR, nonché M3 e M{2}}AChR, in pazienti ME/CFSnel nostro precedente studio [19]. 

In questo studio, la gravità dei sintomi non è stata determinata.Nei pazienti con sindrome da tachicardia posturale (POTS), uno studio ha riportato un aumentolivelli di AAB contro alfa1-AdR e M4-AChR da correlare con la gravità dei sintomi [37], mentre un altro ha dimostrato livelli elevati di AAB rispetto a beta1-AdR- e beta2-AdR acorrelare con la gravità dei sintomi [38]. Abbiamo osservato un modello distinto per il deterioramento cognitivo, che era associatocon ETA-R e AT1-R-AAB. Di interesse, ETA/BR-, AT1-R- e altri alpha1/2-AdRAnche AAB/IgG era correlato alla gravità del punteggio di disabilità di Bell, catturando lo sforzosintomi indotti e capacità di lavorare. ETA-R-, AT1-R- e alpha1/2-AdR si attivano tutti fortevie vasocostrittrici stimolate dallo sforzo fisico [12]. Livelli avanzati di AT1-RGli AAB sono un fattore di rischio consolidato per il rigetto del trapianto renale [14]. Nell'ipertensione,elevati AT1-R-AAB e alfa1-AdR-AAB sono stati descritti suggerendo uneffetto sui loro recettori [39]. Inoltre, le AT1-R-AAB erano associate all'invecchiamento vascolaree rigidità arteriosa [40,41]. Il ruolo di ETA-R-AAB è stato descritto nel settore autoimmuneipertensione arteriosa polmonare sia nel lupus eritematoso sistemico che nello scle sistemicorosi [42,43]. Il nostro concetto di maggiore ETA-R e AT1-R AAB/IgG per correlare con cognitivocompromissione dovuta alla vasocostrizione è in linea con i recenti studi di van Campen et al.,mostrando sia l'ipoperfusione cerebrale che un declino della funzione cognitiva nella ME/CFSsollecitazione ortostatica [9,10]. Sono stati trovati modelli di correlazione interessanti per i rapporti AAB/IgG e gastrointestinalie anche la funzione pupillomotoria nel gruppo con esordio innescato dall'infezione. La gastronomiasintomi testinali correlati con alfa1/2-AdR-ABB/IgG. Questa constatazione è in linea conuno studio che mostra che la motilità colorettale è mediata da alfa1-AdR [44]. Pupillomotoresintomi correlati con alfa1-AdR-, beta2/3-AdR- e M{5}}AChR-ABB/IgG. Su BHcorrezione, l'associazione dei sintomi pupillomotori con M4-AChR-ABB/IgG è rimastasignificativo. L'espressione di M4-AChR è stata descritta nel sistema microvascolare cerebrale eendotelio corneale [30,45]. 

Sorprendentemente, non abbiamo trovato correlazioni significative di AAB/IgG contro AdR, AChR eAT1-R/ET-R con affaticamento, dolore muscolare e di AdR- e AChR-ABB/IgG con SF-36 fisicofunzione cal in pazienti senza un inizio di malattia innescato da infezione. Tuttavia, similestime per le correlazioni dei rapporti AAB/IgG con AT1-R/ETA-R e alpha1/2-AdR con cogsono stati trovati nition e Bell Score, che non erano significativi, probabilmente correlati al triplominor numero di pazienti in questo gruppo. Solo in pazienti con esordio di malattie non infettivecorrelazioni significative dei sintomi di intolleranza ortostatica con tutte le AdR-AAB/IgGsono stati visti. Inoltre, una correlazione inversa di PAR2-AAB/IgG con sintomi secretomotoriè stato trovato. È stato dimostrato che PAR2 attivato dalla tripsina media la secrezione salivare [46]. GPCR AAB sono diversi dagli autoanticorpi classici che frequentemente si attivano, completanoe può mediare infiammazione e distruzione [47]. Nessun effetto citotossico o complementoFinora è stata segnalata l'attivazione di GPCR AAB. GPCR AAB si legano in modo specificoai loro recettori corrispondenti, che possono avere conseguenze funzionali. Entrambi stimolantisono stati descritti effetti antagonisti agonisti e inibitori [13,15,48]. Considerandouna funzione agonistica, diverse associazioni di AAB con i sintomi che abbiamo trovato sonoplausibile. Livelli elevati di AT1-R/ETA-R AAB agonistico potrebbero spiegare l'associazionecon più disfunzione cognitiva a causa del loro effetto sulla vasocostrizione descrittain molte altre malattie [49]. In modo simile, potrebbe spiegare una maggiore attività PAR2meno sintomi secretomotori e maggiore attività alfa1-AdR più gastrointestinalesintomi [44]. La correlazione inversa del punteggio immunitario con PAR1-AAB/IgG potrebbe esserespiegato da livelli più bassi di PAR1-AAB, con conseguente minore costrizione vascolare [26,27]. Ilassociazioni di livelli elevati di alfa e beta-AdR-AAB con affaticamento più gravee il dolore muscolare nella ME/CFS post-infettiva potrebbe indicare un'iperattività del vasocostrittorealfa-AdR-AAB o una funzione alterata del vasodilatatore beta2-AdR-AAB. In precedenza, noitrovato un'alterazione della funzione beta agonistica2-AdR-AAB nella linea cellulare immunitaria e reportertest in pazienti ME/CFS con livelli AAB più elevati [22]. AAB contro beta1-AdR eranodimostrato di compromettere la vasorilassamento sia beta1-AdR- e beta3-AdR-mediato nei ratti [50]. La disfunzione di AdR può svolgere un ruolo specifico durante lo sforzo con un maggiore rilascio diepinefrina e norepinefrina, con conseguente aumento della vasocostrizione e ipoperfusionecon affaticamento consecutivo e dolore muscolare. È probabile che siano presenti meccanismi autoimmuniME/CFS post-infettiva [25]. Poiché tutti questi AAB sono regolatori naturali, disfunzione AABpuò evolvere durante l'infezione per attivazione di astanti e conseguente ipermutazione somaticain AAB con un antigene più forte o alterato che si lega al GPCR o nella diffusione dell'epitopo.

Insieme arispetto ad AdR un tale scenario sarebbe in linea con i pazienti che riferiscono frequentemente che aninfezione in una situazione stressante, presumibilmente accompagnata da un'attivazione indotta da stressdi AdR, ha innescato l'insorgenza della malattia.I modelli più discrepanti che abbiamo osservato tra i sottogruppi di pazienti sono icorrelazioni di tutti gli AdR-AAB con disfunzione ortostatica nella malattia non innescata da infezionema con affaticamento, dolore muscolare e SF-36 nella ME/CFS post-infettiva. Dal momento che AAB assolutoi livelli, così come i rapporti AAB/IgG, non differivano tra i due sottogruppi di pazienti, questoimplica che non solo il livello AAB ma piuttosto la funzione dell'AAB o deli recettori sono diversi in questi sottogruppi di pazienti. Per seguire ulteriormente questa ipotesi, inpazienti con esordio non innescato da infezione, la funzione delle risposte AdR-AAB potrebbe non esserloessere alterato, ma le correlazioni qui potrebbero riflettere una risposta adattativa. Ad esempio, i pazienticon malattie del tessuto connettivo, come la sindrome di Ehlers Danlos (EDS), sono più elevaterischio di sviluppare la ME/CFS. Qui la vascolarizzazione è più elastica, portando a una sistolica inferioree pressione sanguigna diastolica, tachicardia e spesso POTS. I pazienti hanno un autonomodisfunzione con problemi gastrointestinali e funzione vescicale disturbata. Làè la prova che i pazienti con EDS hanno intensificato la vasocostrizione a causa dell'adrenergicoiperreattività [51]. Si è tentati di ipotizzare che in questi pazienti, elevatoAdR-AAB stanno riflettendo questa iperattività compensatoria del sistema adrenergico. In lineacon questo concetto, in pazienti con POTS, livelli elevati di AAB contro alfa1-AdR eM4-AChR correlato alla gravità dei sintomi [37]. Una limitazione di questo studio è che diverse correlazioni non erano più evidenti dopocorrezione per test multipli a causa dei numerosi parametri analizzati nel nostro studio.

Noifornito sia le correlazioni corrette che non corrette per affrontare un possibilerifiuto non necessario di risultati veri al momento dell'adeguamento per test multipli [52]. Ilsi basa sull'interpretazione dei risultati nella coorte senza insorgenza innescata dall'infezioneun numero minore di pazienti e alcuni risultati non significativi. Non abbiamo aumentato ilnumero di pazienti con ME/CFS non infettiva perché non volevamo aggiungereun gruppo di pazienti diagnosticato e analizzato in un momento successivo. Inoltre, l'esordio della malattia èauto-riferito e alcuni pazienti potrebbero essere classificati erroneamente. La gravità dei sintomi è auto-riferitae una misura soggettiva, che porta a un'ampia distribuzione. Come lo sono i disturbi del sonnoun sintomo chiave anche nella ME/CFS, e il sonno è associato al sistema parasimpatico, ail punteggio del sonno dovrebbe essere valutato in ulteriori studi. Inoltre, non abbiamo analizzato un sanocoorte di controllo in questo studio. In studi inediti precedenti e in corso, abbiamo costantementehanno scoperto che un sottogruppo di circa un terzo dei pazienti con ME/CFS ha AAB più elevaticontro beta2-AdR e M3/M4-AChR rispetto ai controlli sani [19,20]. Risultatidal nostro recente studio funzionale suggeriscono che la funzione agonistica di beta2-AdR AABpuò essere attenuato anche nei pazienti ME/CFS, nonostante i normali livelli di AAB [22]. In conclusione, il nostro studio fornisce prove che AAB e/o le vie recettoriali diAdR, AChR così come AT1-R ed ET-R svolgono un ruolo nella ME/CFS a causa dell'associazione congravità dei sintomi. Pertanto, è concepibile che vari sintomi di ME/CFS, inclusiaffaticamento, dolore muscolare, deterioramento cognitivo e disregolazione autonomica potrebbero essere mediatio aggravato da queste AAB. Sono necessari ulteriori studi per decifrare il meccanismoe specificità di legame di questi GPCR-AAB e il loro effetto sulla funzione vascolare inME/CFS, e come questo possa essere tradotto in concetti terapeutici. In caso di disfunzionaleAAB, terapie mirate ad AAB, come l'immunoadsorbimento o il rituximab, lo farebberoessere giustificati e si sono dimostrati efficaci in un sottogruppo di pazienti con ME/CFS (rivistoin [5]). Un ulteriore targeting specifico di AAB disfunzionale o regolativo può essere sviluppato comestrategie di trattamento nella ME/CFS.

5. Brevetti

CellTrend GmbH detiene un brevetto per l'uso di anticorpi del recettore beta-adrenergico inla diagnosi di CFS.

Materiali supplementari:Tabella S1: correlazioni paracliniche AAB, Tabella S2: rapporto AAB/IgG parcorrelazioni cliniche, Tabella S3: correlazioni cliniche AAB di AdR-, AChR- e altri AAB; esordiostratificato, Tabella S4: correlazioni cliniche di AdR-, AChR- e altri rapporti AAB/IgG; stratificato all'esordio,Figura S1: correlazioni tra gravità dei sintomi e AAB, figura S2: correlazioni con affaticamentoin pazienti con insorgenza innescata da infezione, Figura S3: correlazioni con dolore muscolare, cognitivo esintomi immunitari in pazienti con insorgenza innescata da infezione, Figura S4: correlazioni con il punteggio di Bell,funzionamento fisico e sintomi di disfunzione autonomica in pazienti con infezione innescatainsorgenza, Figura S5: correlazioni in pazienti senza insorgenza innescata da infezione.

Contributi dell'autore:Concettualizzazione, metodologia CS, MS, SL, HF e HH; convalida,MS, HF, SB e FS; analisi formale, SM; indagine, SB, CK, PG e HH; risorse, CKe PG; cura dei dati, MS, SL e TL; scrittura: preparazione della bozza originale, MS, HF e CS;scrittura: revisione e modifica, SL, FS, SB, AP, CK, PG, TL, GR e HH; visualizzazione, HFe SM; supervisione, CS; amministrazione del progetto, CS; acquisizione di finanziamenti, CS Tutti gli autori hannoletto e accettato la versione pubblicata del manoscritto.

Finanziamento:Questa ricerca è stata finanziata dalla Weidenhammer-Zöbele Foundation, MS ha ricevuto aborsa di studio della Lost Voices Foundation.

Dichiarazione del comitato di revisione istituzionale:Lo studio è stato condotto secondo le linee guida delDichiarazione di Helsinki e approvata dal Comitato Etico di Charité Universitätsmedizin Berlino(codice protocollo EA4/090/10, data di approvazione 11 dicembre 2012).

Dichiarazione di consenso informato:Il consenso informato è stato ottenuto da tutti i soggetti coinvoltilo studio.

Dichiarazione sulla disponibilità dei dati:I dati presentati in questo studio sono disponibili su richiesta ragionevoledall'autore corrispondente.

Ringraziamenti:Si riconosce il supporto delle cure ospedaliere e della gestione dei dati da parte di Silvia Thiel. Inoltre, ringraziamo tutti i pazienti che hanno donato con fiducia i loro campioni di sangue e hanno accettatopartecipare a questo progetto di ricerca.

Conflitto di interessi:HH, amministratore delegato di CellTrend GmbH, detiene un brevetto per l'uso della versione betaanticorpi del recettore adrenergico nella diagnosi di CFS. Tutti gli altri autori non dichiarano conflitti di interesse.I finanziatori non hanno avuto alcun ruolo nella progettazione dello studio; nella raccolta, analisi o interpretazione didati; nella stesura del manoscritto, o nella decisione di pubblicare i risultati.