Boldine, un alcaloide del Peumus Boldus Molina, induce la vasodilatazione dipendente dall'endotelio nel rene di ratto perfuso: coinvolgimento dell'ossido nitrico e del Ca2 plus a piccola conduttanza - canale K plus attivato

Astratto

Boldine, 2,9-diidrossi-1,10-dimetossiaporfina, è il principale alcaloide presente nelle foglie e nella corteccia di Peumus boldus Molina. Negli ultimi anni, l'audacia ha dimostrato diverse proprietà farmacologiche a vantaggio della funzione endoteliale, del controllo della pressione sanguigna e della riduzione dei danni nelle malattie renali. Tuttavia, gli effetti ei meccanismi del vasodilatatore renale rimangono sconosciuti. Qui, i reni di ratto perfusi sono stati usati per studiare la capacità del boldine di indurre la vasodilatazione delle arterie renali. Per questo, i preparati del rene sinistro con e senza endotelio funzionale sono stati contratti con fenilefrina e hanno ricevuto iniezioni di boldina da 10 a 300 nmol. (i preparati sono stati quindi perfusi per 15 minuti con fenilefrina più L-NAME, indometacina, KCl, tetraetilammonio, glibenclamide, apamina, cariddotossina o iberiotossina. In dosi di 30, 100 e 300 nmol, la boldina ha indotto un effetto dose-ed endotelio-dipendente effetto rilassante sul letto vascolare renale.Non sono stati osservati effetti vasodilatatori in preparazioni prive di endotelio funzionale.Mentre l'inibizione dell'enzima cicloossigenasi attraverso l'aggiunta di indometacina non ha causato alcun cambiamento nell'azione vasodilatatrice di boldine, l'inibitore non selettivo dell'ossido nitrico sintasi L -NAME ha precluso completamente l'azione vasodilatatoria di boldine a tutte le dosi testate (e La perfusione con KCl o tetraetilammonio (bloccante non selettivo dei canali K+) ha anche abolito l'effetto vasodilatatore di boldine, indicando la partecipazione dei canali K+ all'azione renale di boldine. (e perfusione con glibenclamide (bloccante selettivo dei canali del K+ sensibile all'ATP), iberiotossina (bloccante selettivo dei canali del K+ attivato ad alta e media conduttanza con Ca2+) e cariddotossina (bloccante selettivo dei canali del K+ attivato con Ca2+ ad alta e intermedia conduttanza) ) non ha modificato l'azione vasodilatatrice di boldine. D'altra parte, la perfusione con apamina (bloccante selettivo dei canali del K+ attivato a piccola conduttanza Ca2 plus) ha completamente impedito l'azione vasodilatatoria di boldine a tutte le dosi testate. Insieme, il presente studio ha mostrato le proprietà vasodilatatrici renali di boldine, un effetto dipendente dalla generazione di ossido nitrico e dall'apertura di un canale K plus attivato da Ca2 plus a piccola conduttanza.

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introduzione

Il Peumus boldus Molina, popolarmente noto come "boldo" o "audace", è una specie arborea appartenente alla famiglia delle Monimiaceae e originaria del Cile centrale e meridionale, dove è abbondante. Oltre all'uso popolare per il trattamento di diversi disturbi, ampiamente noti per i disturbi gastrici ed epatici, i preparati a base di boldo sono descritti in diversi testi farmacognostici ufficiali, come le farmacopee ufficiali in Brasile, Cile, Germania, Portogallo, Romania, Spagna e Svizzera [1, 2].

I principi attivi di Boldo sono stati descritti in oli essenziali (ascaridolo, cineolo, esteri, aldeidi, chetoni e idrocarburi), alcaloidi (boldine, isoboldine e altri), glicosidi e altri (flavonoidi, acido citrico, gomma, zuccheri, tannini , minerali, lipidi, ecc.). (e Le cortecce sono più ricche di alcaloidi [3]. La maggior parte degli studi farmacologici sul boldo descrivono le attività osservate per l'alcaloide boldine, definito come il componente principale del tè di boldo [4]. (e la concentrazione di alcaloidi nelle foglie di boldo è stimata in 0.4 percento e la concentrazione di boldine può raggiungere più del 12 percento [5].

In effetti, al boldine è stata attribuita un'ampia gamma di effetti biologici. Boldine ha dimostrato di possedere attività antiossidante ed effetti antinfiammatori, motivo per cui è spesso studiato per le malattie associate allo stress ossidativo. Ad esempio, è stato descritto l'effetto protettivo del boldine sul danno mitocondriale ossidativo nei ratti diabetici indotti da streptozotocina [6], e la riduzione dello stress ossidativo induce le sue proprietà gastroprotettive [7]. Per quanto riguarda l'azione farmacologica sui sistemi cardiovascolare e renale per controllare l'ipertensione e patologie come il diabete, studi hanno dimostrato l'azione di boldine nel migliorare la funzione endoteliale nei topi diabetici attraverso l'inibizione dello stress ossidativo vascolare e della disfunzione endoteliale [8]. Inoltre, gli studi hanno dimostrato che il trattamento con boldine esercita effetti protettivi endoteliali nei ratti spontaneamente ipertesi attraverso l'inibizione della produzione di superossido mediata da NADPH [9]. Boldine ha migliorato il danno renale nell'ipertensione renovascolare indotta dal modello Goldblatt two-rene one-clip [10] e ha mostrato un'azione renoprotettiva nel diabete indotto da streptozotocina nei ratti [11].

Nonostante l'uso diffuso dell'alcaloide boldine, il suo meccanismo d'azione sulla funzione renale rimane poco chiaro. Considerando la necessità di nuovi approcci al trattamento dell'ipertensione o contribuendo alle azioni renoprotettive contro l'ipertensione, questo studio mirava a indagare l'azione vasodilatatoria del boldine utilizzando un modello di rene di ratto isolato e perfuso per verificare l'ipotesi che il boldine causi il rilassamento diretto delle arterie renali . (e Sono stati anche esplorati i meccanismi responsabili delle azioni vasodilatatorie renali.

Gli effetti di Cistanche

Materiali e metodi

1. Droghe.

Boldine (maggiore o uguale al 98% di purezza) è stato acquistato da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). L'eparina è stata ottenuta da Crist´alia, (San Paolo, SP, Brasile). Xilazina e ketamina cloridrato sono stati ottenuti da Vetec (Vetec, Duque de Caxias, RJ, Brasile). Acetilcolina cloruro, apamina, cariddotossina, destrosio, glibenclamide, iberiotossina, indometacina, tetraetilammonio cloruro (TEA), Nω-nitro-L-arginina metil estere (L-NAME), fenilefrina, sodio desossicolato, NaCl, NaHCO3, KCl, CaCl2, MgSO4 , KH2PO4 e acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) sono stati acquistati da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).

2. Animali.

I ratti Wistar maschi, di 3 mesi, sono stati ottenuti dalla struttura per animali dell'Università di Vale do Itaja´ı (UNIVALI). (Gli animali sono stati tenuti a temperatura ambiente controllata (22 ± 2 gradi), 12- ore di ciclo luce/buio, con libero accesso all'acqua e al cibo. Tutte le metodologie e le procedure qui utilizzate sono state presentate e approvate dal Comitato Etico il Animal Use di UNIVALI, con numero di autorizzazione 022/19p, e ha seguito tutte le raccomandazioni del Consiglio Nazionale di Controllo della Sperimentazione Animale.

3. Isolamento e perfusione del rene di ratto.

Per evitare la comparsa di coaguli nel letto vascolare renale durante la procedura di isolamento e perfusione del rene, gli animali sono stati precedentemente trattati con eparina (30 UI, per via intraperitoneale), da 5 a 10 min prima la somministrazione dell'agente anestetico. (e I ratti sono stati quindi anestetizzati con 80 mg/kg di ketamina più 10 mg/kg di xilazina per via intraperitoneale. Dopo aver ottenuto un'anestesia profonda, è stata eseguita una laparotomia, consentendo l'accesso a tutti i visceri dell'animale. (e L'intestino è stato spostato sul lato destro, permettendo la visualizzazione del rene sinistro e la dissezione dell'aorta addominale.Durante queste procedure, i visceri, in particolare il rene sinistro, venivano mantenuti umidi con garze chirurgiche imbevute di soluzione fisiologica salina.Con l'ausilio di un filo chirurgico, veniva legato l'uretere sinistro , impedendo il flusso urinario e, di conseguenza, la produzione di urina da parte del rene. Un altro filo chirurgico è stato posizionato nell'arteria dell'aorta addominale, tra le arterie renali destra e sinistra, per dirigere il flusso sanguigno solo verso il lato sinistro. Flusso sanguigno nell'aorta arteria è stata interrotta al di sotto dell'arteria renale destra.(it, è stata praticata una piccola incisione nell'arteria aorta, consentendo l'inserimento di un catetere diretto all'arteria renale sinistra e fissato all'arteria aorta con fili chirurgici. (È stato legato il filo chirurgico posizionato sopra l'aorta addominale, interrompendo il flusso renale, ed è stata attivata una pompa di perfusione peristaltica, avviando il processo di perfusione. Nel processo di perfusione continua, il rene è stato rimosso dalla cavità addominale e posto in una piastra per rimuovere il grasso adiacente e la ghiandola surrenale, per evitare l'influenza della ghiandola surrenale sul letto vascolare renale durante il periodo di sperimentazione. (it, il rene è stato posto in una camera contenente 100 ml di soluzione fisiologica salina (PSS; mM KCl, 2,4 mM CaCl2, 1,2 mM MgSO4, 25,0 mM NaHCO3, 1,2 mM KH2PO4, 11,1 mM destrosio e 0,03 mM EDTA) e accoppiato al sistema di perfusione, mantenuto a una temperatura di 37 gradi, costantemente aerato con il 95% di O2 e 5 percento di CO2, con un flusso costante di 4 ml/min. È stato rispettato un periodo di 30 min prima di iniziare la valutazione sperimentale. (La registrazione della pressione di perfusione è stata eseguita tramite un trasduttore di pressione accoppiato al sistema di perfusione, collegato a un poligrafo computerizzato con software di integrazione specifico (sistema PowerLab e software Chart 7.1, ADInstruments, Castle Hill, Australia). Un diagramma della configurazione sperimentale del rene perfuso isolato è visualizzato nella Figura 1.

4. Valutazione degli effetti e dei meccanismi di Boldine sulle arterie renali.

Dopo un tempo di stabilizzazione di 30 min, l'integrità del tessuto è stata verificata con un'iniezione in bolo di 120 mmol KCl. (L'integrità dell'endotelio è stata controllata 20 minuti dopo con l'aggiunta di fenilefrina (300 nmol) seguita da acetilcolina (300 nmol). Atteso un ulteriore periodo di 20 minuti, quindi i preparati sono stati continuamente perfusi con PSS contenente fenilefrina (3 µM) , che è sufficiente per indurre un aumento sostenuto della pressione di perfusione renale Dopo la stabilizzazione dell'aumento della pressione di perfusione, le preparazioni hanno ricevuto iniezioni in bolo contenenti 10, 30, 100 e 300 nmol di boldina ed è stata valutata la riduzione della pressione di perfusione. (Le iniezioni in bolo delle sostanze testate sono state effettuate in un volume finale di 10 o 30 ul attraverso un accesso vicino alla preparazione, con un intervallo di tempo minimo di 3 minuti tra le dosi. Alcune preparazioni renali sono state perfuse con PSS che conteneva sodio desossicolato (1,8 mg/ml) per 30 secondi per rimuovere chimicamente l'endotelio delle arterie renali. Dopo l'infusione di sodio desossicolato, PSS regolare è stato perfuso per 40 minuti per la stabilizzazione (la mancanza di vasodilatazione ha confermato la rimozione dell'endotelio dopo un'iniezione in bolo di acetilcolina. Una curva dose-risposta (30, 100 e 300 nmol) di boldine è stata generata per le preparazioni senza endotelio. Le risposte sono state registrate 10 secondi dopo la somministrazione. Le variazioni della pressione di perfusione (in mmHg) sono state registrate e confrontate tra i gruppi.

In un altro set sperimentale, utilizzando preparazioni con un endotelio intatto, le preparazioni sono state perfuse con PSS che conteneva 3 μM di fenilefrina più i seguenti agenti: 100 μML-NAME (inibitore non selettivo dell'ossido nitrico sintasi), 1 μM di indometacina (inibitore non selettivo della cicloossigenasi), 40 mM KCl (depolarizzazione mediata da K plus), 10 mM TEA (bloccante dei canali del potassio non specifico), 10 μM glibenclamide (bloccante selettivo dei canali K plus sensibile all'ATP), apamin 10 nM (Ca2 plus selettivo a piccola conduttanza - bloccante dei canali K plus attivato ), iberiotossina (bloccante selettivo dei canali del K più attivato con Ca2 più ad alta conduttanza), 1 nM cariddotossina (bloccante selettivo dei canali del K più attivato con Ca2 più ad alta e media conduttanza). Dopo 15 minuti di perfusione, è stata iniettata la boldina (30, 100 e 300 nmol). La sua capacità di ridurre la pressione di perfusione è stata confrontata con i risultati ottenuti con le preparazioni di controllo perfuse solo con il veicolo.

5. Analisi statistica.

i risultati sono espressi come media ± errore standard della media di sei preparazioni in ciascun gruppo. (e Le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando un'analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) seguita dal test post hoc di Bonferroni. I valori di p < 0.05 sono stati considerati statisticamente significativi. (e Le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando il GraphPad Prism versione software 6.00 per Windows (GraphPad, La Jolla, CA, USA).

Polvere di cistanche

Risultati e discussione

L'effetto vasodilatatore sulle arterie renali utilizzando reni di ratto isolati e perfusi è stata una strategia ampiamente utilizzata per valutare le azioni emodinamiche di composti isolati, con un'approssimazione più vicina al meccanismo d'azione, data la capacità di valutare diversi bersagli molecolari [12]. Nel presente studio, la somministrazione di boldine (30, 100 e 300 nmol) nel letto vascolare del rene ha indotto un risultato dilatatorio dose-dipendente (Figura 2(c)), rispondendo così all'ipotesi iniziale del lavoro che ha discusso la possibilità che boldine abbia un'azione vasodilatatrice nel letto arterioso renale. (è il primo studio a dimostrare gli effetti rilassanti del boldine sul letto vascolare renale. Tuttavia, l'effetto rilassante del boldine su altri tessuti vascolari è stato descritto per la prima volta nel 1996, quando Chen et al. hanno dimostrato l'azione vasodilatatrice di questo alcaloide nel ratto isolato aorta toracica [13].

Figura 2: Vasorilassamento indotto dose-dipendente di Boldine nei reni isolati e perfusi. (a) Struttura molecolare di boldine. (b) Registrazione della traccia della pressione di perfusione renale che mostra gli effetti dell'acetilcolina (ACh) e della boldina. (c) Effetti del boldine sulla pressione di perfusione nei reni isolati intatti dall'endotelio. (d) Effetti del boldine sulle preparazioni con endotelio intatto (End plus) e con endotelio denudato (End-). (i dati sono espressi come media ± SEM di sei esperimenti. ∗p < 0.05, rispetto alla pressione di perfusione dopo la somministrazione di PSS (identificata come il numero 0); # p <0,05, rispetto alla precedente dose di boldine (a) o preparazioni denudate di endotelio (b).

Sulla base di questo risultato positivo, sono state condotte indagini sul coinvolgimento dell'endotelio e sui meccanismi sottostanti legati alle azioni rilassanti. Come illustrato nella Figura 2 (d), gli effetti del boldine nelle preparazioni precedentemente somministrate con sodio desossicolato (cioè, per rimuovere l'endotelio) erano completamente assenti (Figura 2 (d)), indicando che l'endotelio funzionale è essenziale per il suo vasodilatatore azione. Di conseguenza, gli effetti di tutte le dosi di boldine sono stati prevenuti nelle preparazioni trattate con l'inibitore non selettivo dell'ossido nitrico sintasi L-NAME (Figura 3 (a)), mentre nelle preparazioni perfuse con l'inibitore non selettivo dell'enzima cicloossigenasi indometacina, gli effetti vasorilassanti di boldine è rimasto invariato (Figura 3 (b)), indicando che le proprietà rilassanti dipendenti dall'endotelio di boldine erano dipendenti dalla generazione di ossido nitrico (NO) e indipendenti dalla produzione di prostanoidi.

Figura 3: Ruolo dell'ossido nitrico e dei prostanoidi negli effetti vasodilatatori della boldina. Effetti di boldine su preparati renali intatti con endotelio che sono stati perfusi con (a) L-NAME o (b) indometacina. I dati sono espressi come media ± SEM di sei esperimenti. #p < 0.05, rispetto alle preparazioni perfuse solo per veicolo.

Cistanche tubulosa

Il principale fattore rilassante derivato dall'endotelio è l'NO, che è considerato uno dei principali mediatori dei processi cellulari. Nei vasi sanguigni, l'NO viene prodotto nelle cellule endoteliali a partire dalla L-arginina, avendo un'azione vasodilatatrice. Si diffonde alle cellule muscolari lisce interagendo con l'enzima guanilato ciclasi solubile rendendolo attivo, causando la formazione di guanosina monofosfato ciclico, che si traduce nel rilassamento della cellula muscolare liscia vascolare [14, 15]. Considerando che la rimozione endoteliale o la soppressione della produzione di NO attraverso la somministrazione di L-NAME ha completamente impedito gli effetti vascolari di boldine, i nostri risultati suggeriscono che l'endotelio ha svolto una funzione cruciale nel ridurre la pressione di perfusione indotta da boldine. Infatti, le azioni di boldine sull'endotelio vascolare sono già state descritte in letteratura. Il trattamento con Boldine ha migliorato il massimo rilassamento all'acetilcolina nell'aorta di ratti spontaneamente ipertesi [9], ha migliorato il rilassamento endotelio-dipendente nelle aorte dei ratti diabetici trattati con streptozotocina [16] e ha migliorato il rilassamento endotelio-dipendente nelle aorte dei topi diabetici [17 ].

Figura 4: Effetto dei canali del potassio sull'effetto vasodilatatore di boldine. Effetti di boldine su preparati renali intatti con endotelio che sono stati perfusi con (a) KCl o (b) TEA. (I dati sono espressi come media ± SEM di sei esperimenti. #p <0.05, rispetto alle preparazioni perfuse con solo veicolo.

Per verificare le azioni relative ai canali K plus, i preparati sono stati perfusi con una soluzione nutritiva in cui è stato aggiunto KCl 40 mM, che induce la depolarizzazione mediata da K plus e TEA, un bloccante non selettivo del canale K plus (Figure 4 (a) e 4(b), rispettivamente). È stato osservato che entrambi i trattamenti hanno bloccato gli effetti vasorilassanti indotti dalla boldina, suggerendo un ruolo predominante dei canali K plus negli effetti vasodilatatori di questo composto. I canali K plus sono strutture proteiche presenti in diversi tipi di cellule e funzionano come pori nelle membrane che consentono il passaggio di K plus. (Sono divisi in 4 classi principali: canali K+ dipendenti dal voltaggio, canali K+ sensibili all'ATP, canali K+ con raddrizzatore verso l'interno e canali K+ attivati ​​da Ca2+ [18-20]. (e Trattamento con glibenclamide, un bloccante del canale K plus sensibile all'ATP, ha mantenuto invariata l'azione vasorilassante di boldine in tutte le dosi utilizzate (Figura 5 (a)).Allo stesso modo, la perfusione con cariddotossina, un canale K plus selettivo ad alta e media conduttanza attivato bloccante (Figura 6 (a)) e l'iberiotossina, un bloccante selettivo del canale K plus attivato ad alta conduttanza Ca2 plus (Figura 6 (b)), non ha modificato l'azione vasodilatatoria di boldine. D'altra parte, la perfusione con apamin, un bloccante selettivo del canale K plus attivato da Ca2 plus a piccola conduttanza, ha completamente impedito l'azione vasodilatatoria di boldine a tutte le dosi testate (Figura 5 (b)), indicando che questo sottotipo di canale K plus sembra essere cruciale per le azioni rilassanti evocato da boldine.In sintesi, considerando che gli obiettivi a valle della via dell'ossido nitrico nei vasi includono l'apertura dei canali K plus [21, 22], questa serie di risultati suggerisce che la vasodilatazione endotelio-dipendente mediata da boldine nelle arterie renali dipende da l'apertura di canali K plus attivati ​​da Ca2 plus a piccola conduttanza indotti dall'ossido nitrico nelle cellule muscolari lisce.

Figura 5: Effetto dei bloccanti del sottotipo dei canali del potassio sull'effetto vasodilatatore della boldina. Effetti di boldine su preparati renali intatti con endotelio che sono stati perfusi con (a) glibenclamide o (b) apamina. (I dati sono espressi come media ± SEM di sei esperimenti. #p <0.05, rispetto alle preparazioni perfuse con solo veicolo.

Figura 6: Effetto dei bloccanti del sottotipo dei canali del potassio sull'effetto vasodilatatore della boldina. Effetti di boldine su preparati renali intatti con endotelio che sono stati perfusi con (a) cariddotossina o (b) iberiotossina. (I dati sono espressi come media ± SEM di sei esperimenti.

È interessante notare che, negli ultimi anni, molti composti isolati da piante medicinali sono stati studiati per le loro azioni renali, rivelando importanti azioni vasodilatatrici, diuretiche, antiurolitiche e protettive contro il danno ipertensivo. Nothofagin, un glicoside mono-C di 4,2′,4′,6′-tetraidrossi-diidrocalcone trovato nelle foglie di Leandra dasytricha, ha dimostrato la capacità di indurre diuresi [23], nefroprotezione [24], vasodilatazione [12] e effetto ipotensivo [25]. Diversi composti delle classi di xantoni isolati dai rami di Garcinia achachairu hanno rivelato azioni diuretiche acute [26, 27], effetti diuretici e renoprotettivi prolungati [28] e proprietà anti-urolitiche [29]. Inoltre, i flavonoidi glicosilati ottenuti dalle foglie di Bauhinia forficata hanno rivelato effetti vasodilatatori [30], diuretici e protettivi sui reni [31].

Pillole di cistanche

Tuttavia, sebbene i risultati qui descritti indichino indubbiamente la partecipazione dei canali K plus attivati ​​da Ca2 plus negli effetti renali indotti da boldine, sono necessari ulteriori studi per studiare altri bersagli molecolari e sottotipi di canali utilizzando diversi approcci combinati di inibitori. Inoltre, un'altra importante limitazione dello studio è che non siamo stati in grado di esplorare il recettore coinvolto nell'effetto vasodilatatore della boldina, che resta da studiare in futuro. Considerando le azioni già descritte in letteratura per questo alcaloide, questo studio aggiunge informazioni sull'effetto vasodilatatore renale, contribuendo a una migliore comprensione del potenziale di boldine per essere utilizzato come farmacoterapia o integratore alimentare.

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[25] CH da Silva, RA Palozi, P. de Souza, et al., "La via di segnalazione dell'ossido nitrico/cGMP e i canali del potassio contribuiscono agli effetti ipotensivi della nothofagina", Minerva Cardioangiologica, vol. 68, n. 6, pp. 602–608, 2020.

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[27] LN Bolda Mariano, T. Boeing, V. Cechinel-Filho, R. Niero, L. Mota da Silva e P. de Souza, "(e effetti diuretici acuti con basse dosi di xantoni prenilati naturali nei ratti, "Giornale europeo di farmacologia, vol. 884, ID articolo 173432, 2020.

[28] LN Bolda Mariano, T. Boeing, V. Cechinel Filho, et al., "Effetti diuretici e renoprotettivi prolungati di uno xantone ottenuto da Garcinia achachairu rusby in ratti normotesi e ipertesi", Complement Alternative Medicine, vol. 2021, ID articolo 5510053, 9 pagine, 2021.

[29] LNB Mariano, T. Boeing, V. Cechinel Filho, R. Niero, L. Mota da Silva e P. de Souza, "1,3,5,6-tetraidrossixantone promuove la diuresi, la protezione renale e proprietà antiurolitiche nei ratti normotesi e ipertesi," Journal of Pharmacy and Pharmacology, vol. 73, n. 5, pp. 700–708, 2021.

[30] CC Cechinel-Zanchett, R. d. CMV d. AF da Silva, A. Tenfen, et al., "Bauhinia forficata link, una pianta medicinale brasiliana tradizionalmente usata per trattare i disturbi cardiovascolari, esercita un vasorilassamento endotelio-dipendente e indipendente nell'aorta toracica di ratti normotesi e ipertesi," Journal of Ethnopharmacology, vol. . 243, pag. 112118, 2019.

[31] CC Cechinel-Zanchett, LN Bolda Mariano, T. Boeing et al., "Effetto protettivo diuretico e renale del kaempferol 3- O-Alpha-l-rhamnoside (afzelin) in ratti normotesi e ipertesi," Journal di prodotti naturali, vol. 83, n. 6, pp. 1980–1989, 2020.

Priscila de Souza, 1 Rita de C´assia Vilhena da Silva,1 Luisa Mota da Silva,1 Viviane Miranda Bispo Steimbach,1 Karyne Garcia Tafarelo Moreno,2 e Arquimedes Gasparotto Junior 2

1 Graduate Program in Scienze farmaceutiche, Nucleo di indagini chimico-farmaceutiche (NIQFAR), Università di Vale do Itaja´ı, Itaja´ı, SC, Brasile

2 Laboratorio di Elettrofisiologia e Farmacologia Cardiovascolare, Facoltà di Scienze della Salute, Universidade Federal da Grande Dourados, Dourados, Mato Grosso do Sul, Brasile