Cambiamenti nei livelli di glicosidi feniletanoidi, attività antiossidante e altri tratti qualitativi nelle fette di Cistanche Deserticola mediante lavorazione a vapore

Cistanche deserticola Y. C. MA(Orobanchaceae), comunemente noto come "ginseng del deserto", è stato a lungo utilizzato come tonico in Cina e Giappone. I gambi carnosi vengono tagliati a fette per il trattamento di varie malattie tra cui l'impotenza, l'infertilità femminile, la sensazione di freddo ai lombi e alle ginocchia e la stitichezza geriatrica. Negli ultimi anni diversi studi hanno rivelato la sua efficacia in modelli sperimentali legati a disturbi neurologici, in particolare al morbo di Alzheimer e al morbo di Parkinson.Il mercato degli alimenti naturali è sempre più interessato a questo utile integratore alimentare naturale. Vino e tè a base di steli succulenti sono alimenti salutari popolari che alleviano la fatica e migliorano l'apprendimento e la memoria.C. deserticolaè una ricca fonte di glicosidi feniletanoidi, polisaccaridi e zuccheri solubili, che presentano principalmente proprietà antiossidanti,neuroprotettivo,epatoprotettivo,potenziamento immunitario,lassativo,e anti-invecchiamento effetti, tra cui l'attività antiossidante è considerata alla base delle altre azioni farmacologiche. Echinacoside e acteoside sono marcatori rappresentativi per il controllo di qualità di Cistanches Herba nella Farmacopea Cinese (edizione 2015), a causa della loro abbondanza predominante, specificità di genere e notevoli bioattività. La determinazione degli estratti diluiti solubili in etanolo è inclusa anche nel controllo di qualità di Cistanches Herba. È stato riportato che anche cistanoside A, isoacteoside e 2′-acetilatteoside sono abbondanti inC. deserticola. 

ESTRATTO NATURALE DI CISTANCHE INTEGRATORE ALIMENTARE ANTIFATICA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

L'aumentola richiesta di C. deserticola ne ha fortemente stimolato la coltivazione. C. deserticola appartiene ad un'erba parassita perenne, che cresce principalmente nelle zone aride o semiaride della Cina nordoccidentale. Immediatamente dopo la raccolta, questi steli grezzi, pesanti e altamente zuccherini, devono essere essiccati per prevenire la perdita e il deterioramento del contenuto nutritivo. Gli steli freschi solitamente contengono il 75-85% di acqua e il livello dell'acqua dovrebbe essere abbassato al di sotto del 10% per la loro conservazione. Nella maggior parte delle regioni produttrici di Cistanche, gli steli freschi interi vengono posti in campi aperti per circa 2 mesi per il processo preliminare di essiccazione. Il materiale essiccato viene poi trasportato alle fabbriche, messo a bagno in acqua, tagliato a fette e nuovamente essiccato. Il ritardo nella lavorazione delle fette può essere il risultato di agricoltori scarsamente istruiti o poco attrezzati. Tuttavia, il problema principale è la mancanza di conoscenze e tecnologie per consentire un processo di produzione efficiente.

Il trattamento ad alta temperatura è stato ampiamente utilizzato su frutta e verdura e può inibire la crescita microbica e prolungare la durata di conservazione. Tuttavia, può anche dar luogo a cambiamenti nell’aspetto e nella composizione dei nutrienti. È stato dimostrato che alcuni componenti bioattivi e attività farmacologiche come l’attività antiossidante aumentano nelle erbe medicinali dopo la cottura a vapore. Pertanto, la cottura a vapore della C. deserticola può migliorare diversi benefici per la salute. È stato segnalato anche che l'uso della cottura a vapore o della sbollentatura sulla C. deserticola di IV gamma ne aumenta la quantitàechinacoside e acteoside.19,20) Tuttavia, non è stata condotta alcuna indagine dettagliata per confrontare i cambiamenti nei composti bioattivi e nell'attività antiossidante della C. deserticola di IV gamma durante il processo di cottura a vapore. Lo scopo di questo studio era, quindi, di esaminare l'effetto del tempo di cottura a vapore (1, 3, 5, 7 minuti) sulla quantità di glicosidi feniletanoidi, polisaccaridi, zuccheri solubili, estratti solubili in etanolo diluiti, perdita di peso e proprietà antiossidanti. in C. deserticola fette rispetto ad altri tre gruppi (fresco, essiccato direttamente al forno, sbollentato).

Sperimentale

Sostanze chimiche

Prodotti chimici di grado analitico: metanolo, etanolo, D-glucosio, acido solforico, potassio idrogeno fosfato e potassio diidrogeno fosfato monoidrato sono stati acquistati da Beijing Chemical Works (Pechino, Cina). L'acido formico e il fenolo sono stati acquistati da Sinopharm Chemical Reagent Co. (Shanghai, Cina). Il metanolo di grado HPLC è stato acquistato da Fisher Scientific (Toronto, Canada). L'acqua deionizzata è stata ottenuta utilizzando un sistema Milli-Q (Millipore Corp., Bedford, MA, USA). Il 2,2-Difenil-1-picrilhydrazyl (DPPH) è stato fornito da Alfa Aesar (Ward Hill, MA, USA) e 2,2′-azobis(2-ammino-propano) dicloridrato (AAPH ) di Adamas-beta (Shanghai, Cina). Acido 6-metossi-2,5,7,8- tetrametilcroman-2-carbossilico (Trolox), 2,6-di-tertbutil-p-cresolo (BHT) e fluoresceina (sale di sodio) (FL) sono stati ottenuti dal TCI (Tokyo, Giappone) e il kit di analisi della capacità antiossidante totale (T-AOC) dal Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Cina). Gli standard per acteoside (111530-200706) ed echinacoside (111670-200503) sono stati acquistati dall'Istituto nazionale per il controllo degli alimenti e dei farmaci (Pechino, Cina). Gli standard per2'-acetilatteoside, cistanoside A e isoacteoside sono stati regalati dal Dr. Zhiguo Ma. È stato determinato che la purezza di ciascun composto di riferimento era superiore al 98% mediante normalizzazione dell'area del picco rilevata dal rilevatore a serie di diodi HPLC (DAD).

Trattamento del materiale e determinazione della perdita di peso

I campioni sono stati raccolti nella primavera del 2{{10}}14 nella piantagione di Cistanches Herba di Ningxia (106.08 grado N, 38,24 grado E, 1124,2 m ) in Cina, e identificato da uno di noi (il Prof. Jun Chen). Un esemplare di buono è stato depositato presso l'Istituto per lo sviluppo delle piante medicinali, Accademia cinese delle scienze mediche, College medico dell'Unione di Pechino. Circa 3 kg di fusti di C. deserticola sono stati raccolti in modo casuale e risciacquati con acqua pulita. Le parti dell'infiorescenza sono state rimosse con un coltello di ceramica, quindi i gambi sono stati tagliati in fette di 3 mm. Ogni fetta da 100 g è stata misurata in peso (W0) come replica. Sono stati valutati sette trattamenti sperimentali con tre repliche per trattamento. Per la cottura a vapore, quattro lotti di fette sono stati immersi in vapore acqueo a 93 gradi per 1, 3, 5 o 7 minuti. Per lo sbiancamento, un trattamento è stato messo in acqua a 96 gradi per 5 minuti. Gli altri due trattamenti riportati in questo esperimento sono stati le fette fresche e quelle essiccate direttamente al forno. Le fette trattate sono state pesate (W1) ed essiccate a 60 gradi in forno. Le fette essiccate sono state quindi pesate nuovamente (W2), macinate e polverizzate (65 mesh). Le polveri campione sono state conservate in sacchetti sottovuoto a -20 gradi fino al giorno dell'analisi. La perdita di peso è stata calcolata come segue: perdita di peso dopo il trattamento ad alta temperatura (%)=[(W0−W1)/ W0]×100, perdita di peso dopo l'essiccazione in forno (%)=[(W0 −W2)/W0]× 100, dove W0 è il peso iniziale e W1 e W2 sono i pesi misurati rispettivamente dopo il trattamento ad alta temperatura e l'essiccazione in forno.

Glicosidi feniletanoidi e proprietà antiossidanti

Estrazione dei campioni

Un campione in polvere da {{0}}.5-g è stato estratto con 25 mL di soluzione acquosa di metanolo al 60% mediante ultrasuoni KQ-250DE (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Jiangsu, Cina) a 40 kHz, 200 W e 40 gradi per 30 min. Dopo l'estrazione, i campioni trattati sono stati centrifugati per 10 minuti a 4600×g (TD5; Hunan Herexi Instrument & Equipment Co., Hunan, Cina). Il surnatante è stato filtrato attraverso un filtro con dimensione dei pori di 0,45-μm per le analisi successive.

Determinazione dei glicosidi feniletanoidi

Determinazione dell'echinacoside, del cistanoside A,acteoside, isoacteoside e 2′-acetilatteosideda campioni di C. deserticola è stata effettuata come descritto da Ma et al.21) con alcune modifiche. L'analisi è stata eseguita utilizzando uno strumento HPLC 2695–2996 (Waters Corp., Milford, MA, USA) con assorbimento ultravioletto monitorato a 330 nm. La separazione è stata effettuata su una colonna Merck Purospher® Star RP-C18 (250 mm×4,6 mm, 5 µm) operata a 30 gradi. La fase mobile a una portata di 1 ml/min era costituita dal solvente A (metanolo) e dal solvente B (0,1% acido formico acquoso, v/v). Un'eluizione con gradiente è stata effettuata come segue: 28% A ({{30}}–10 min), 28–38% A (10–30 min), 38% A (30– 45 min) e il volume di iniezione era 10 µL. È stata preparata una soluzione mista contenente cinque standard di riferimento sciogliendo gli standard di riferimento in metanolo al 60% fino ad una concentrazione finale di 0,20 mg/mL per echinacoside, 0,21 mg/mL per acteoside, 0,20 mg/mL per 2′-acetilacteoside, 0,05 mg/ mL per cistanoside A e 0,05 mg/mL per isoacteoside. La soluzione è stata quindi diluita a sette diverse concentrazioni per stabilire le curve di calibrazione. La concentrazione di glicosidi feniletanoidi dei campioni è stata espressa in g/kg di peso fresco (FW).

ESTRATTO NATURALE DI CISTANCHE MIGLIORA LA MEMORIA INTEGRATORE ALIMENTARE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Determinazione della capacità di assorbimento dei radicali dell'ossigeno (ORAC)

Il test ORAC è stato condotto come descritto da Huang et al.22) con alcune modifiche. L'antiossidante sintetico BHT è stato utilizzato come controllo positivo. In breve, 25 µl di estratti di campione diluiti e 160 µl di FL sono stati miscelati in una micropiastra a 96-pozzetti. La miscela è stata incubata a 37 gradi per 15 minuti, prima dell'aggiunta di 20 µl di AAPH. La fluorescenza è stata monitorata utilizzando 485 nm (eccitazione) e 520 nm (emissione) a intervalli di 3-min per 72 minuti utilizzando Fluoroskan Ascent FL (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Trolox (2,5–50,0 µmol/L) è stato utilizzato come standard di riferimento e i risultati sono stati espressi come micromoli di Trolox per massa di fetta fresca, µmol TE/g FW.

Determinazione dell'attività di eliminazione dei radicali liberi del 2,2-difenil-1-picrilidrazil (DPPH)

Il test DPPH è stato eseguito come descritto da Goupy et al.23) con alcune modifiche. L'antiossidante sintetico BHT è stato utilizzato come controllo positivo. In breve, 1 mL dell'estratto del campione diluito è stato miscelato con 1 mL di 0,2 mmol/L di soluzione metanolo DPPH. Le soluzioni sono state mantenute al buio a 25 gradi per 90 minuti, quindi l'assorbanza è stata misurata a 517 nm. Trolox (4,0–119,5 µmol/L) è stato utilizzato come standard di riferimento e i risultati sono stati espressi come micromoli di Trolox per massa di fetta fresca, µmol TE/g FW.

Determinazione della proprietà antiossidante di riduzione del ferro (FRAP)

Il test FRAP è stato eseguito utilizzando il kit di test T-AOC secondo le istruzioni del produttore.

Zuccheri solubili e polisaccaridi

Preparazione del campione di zuccheri solubili

Un campione in polvere da 0.5-g è stato estratto con 25 mL di soluzione acquosa di etanolo all'80% mediante ultrasuoni KQ-250DE a 40 kHz, 150 W e 80 gradi per 30 minuti. La prima soluzione estrattiva è stata filtrata e trasferita in un matraccio tarato da 50-ml. I sedimenti sono stati riestratti e il filtrato è stato combinato con la prima soluzione estrattiva nel matraccio tarato da 50-mL e riempito fino alla tacca con una soluzione acquosa di etanolo all'80%.

Quindi, 1 ml di questa soluzione è stato pipettato in una provetta di vetro da 10- ml per far evaporare l'etanolo in un bagno di acqua bollente. È stata aggiunta acqua distillata (5 mL) per sciogliere il residuo, quindi questo è stato trasferito in un matraccio tarato da 100- mL e riempito fino alla tacca con acqua distillata. Infine, 2 ml di questa soluzione diluita sono stati utilizzati per la determinazione degli zuccheri solubili.

Preparazione del campione di polisaccaridi

I sedimenti derivanti dall'estrazione degli zuccheri solubili sono stati essiccati all'aria ed estratti con 25 mL di acqua distillata mediante ultrasuoni KQ- 250DE a 40 kHz, 150 W e 80 gradi per 30 minuti. La prima soluzione estrattiva è stata filtrata e trasferita in un matraccio tarato da 50- ml. I sedimenti sono stati riestratti e il filtrato è stato combinato con la prima soluzione estrattiva nel matraccio tarato da 50- mL e riempito fino alla tacca con acqua distillata. Quindi, una soluzione da 5- ml di questo è stata pipettata in un matraccio tarato da 50- ml e riempita fino alla tacca con acqua distillata. Infine, 2 mL di questa soluzione diluita sono stati utilizzati per la determinazione dei polisaccaridi.

Determinazione degli zuccheri solubili e dei polisaccaridi

La determinazione degli zuccheri solubili e dei polisaccaridi è stata effettuata utilizzando il metodo dell'acido fenolo-solforico, come descritto da Wang et al.24) Un millilitro di soluzione di fenolo al 6% è stato aggiunto a 2 mL della soluzione campione e miscelato bene. Successivamente sono stati aggiunti rapidamente 5 ml di acido solforico concentrato e agitati per 5 minuti. La miscela è stata trasferita in un bagnomaria bollente per 15 minuti e raffreddata rapidamente a temperatura ambiente per la rilevazione nell'ultravioletto. L'assorbimento dell'ultravioletto è stato monitorato a 490 nm in uno spettrofotometro UV2550 (Shimadzu Co., Kyoto, Giappone). Come bianco è stata utilizzata acqua distillata. Il D-glucosio anidro standard di riferimento è stato accuratamente pesato e sciolto in acqua distillata fino ad una concentrazione finale di 0,10 mg/mL. Quindi 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7 ml della soluzione madre sono stati pipettati in sette matracci tarati da 10- ml e riempiti fino al segno con acqua distillata. Quindi le sette diverse concentrazioni di soluzioni standard sono state utilizzate per stabilire le curve di calibrazione.

Estratti diluiti solubili in etanolo

I campioni (4,0 g) sono stati pesati accuratamente per determinare i loro estratti diluiti solubili in etanolo, secondo il metodo descritto nella Farmacopea cinese (edizione 2015).25) Il campione in polvere è stato pesato (W3) ed estratto con 100 mL di soluzione acquosa di etanolo al 50% in una beuta conica da 250-mL agitando occasionalmente per 6 ore e lasciando riposare per 18 ore. La soluzione estrattiva è stata filtrata e 20 mL del filtrato sono stati evaporati a secchezza, essiccati a 105 gradi per 3 ore e raffreddati in un essiccatore (gel di silice) per 30 minuti. Infine, la quantità è stata pesata accuratamente (W4). Il contenuto di estratto solubile in etanolo diluito è stato espresso come g/kg di peso corporeo del campione. Gli estratti diluiti solubili in etanolo sono stati calcolati come segue: estratti diluiti solubili in etanolo (g/kg FW)=[(W4×5)/W3]×(100−W5)×10, dove W3 è il peso iniziale , W4 è il peso misurato dopo l'estrazione e W5 è la perdita di peso dopo l'essiccazione in forno (%).

Analisi statistica

Per chiarire eventuali differenze tra i gruppi di trattamento, è stata applicata l'ANOVA unidirezionale utilizzando SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Le differenze sono state valutate utilizzando il test di Duncan con un limite di significatività di 0,05. I dati sono stati espressi come deviazione standard (DS) (n=3).

Risultati e discussione

Perdita di peso

Il peso delle fette di C. deserticola determina direttamente il suo valore commerciale nel mercato delle erbe medicinali. Come mostrato nella Tabella 1, la perdita di peso di C. deserticola è stata analizzata dopo il trattamento ad alta temperatura e l'essiccazione in forno. Livelli inferiori di perdita di peso sono stati riscontrati quando le fette venivano essiccate direttamente al forno anziché cotte al vapore o sbollentate. I campioni scottati presentavano i più alti livelli di perdita di peso. I campioni cotti a vapore presentavano livelli più elevati di perdita di peso con tempi di cottura a vapore più lunghi. Sette minuti di cottura a vapore, il tempo più lungo impiegato dalle fette appena tagliate per mantenere la forma, hanno mostrato in modo significativo (p<0.05) higher levels of weight loss after oven-drying than 5 min of steaming. Since phenylethanoid glycosides had been detected in the hot water (data not shown), it suggested that blanching/steaming promoted more water-soluble compounds to be dissolved in the hot water. Concerning weight loss after high-heat exposure, samples steamed for 1 minute exhibited extremely low weight loss. Therefore, 1 min of steaming was too short to make the Cistanche tissue brittle, so it was less able to release bioactive compounds (such as phenylethanoid glycosides) during the subsequent extraction procedure, compared with samples that had been steamed longer.

Glicosidi feniletanoidi

I livelli di echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside e 2'-acetilatteoside in fette di C. deserticola trattate con metodi diversi sono mostrati nella Fig. 1. I campioni cotti a vapore per 7 minuti contenevano 2,16 g/kg di peso fresco di echinacoside e {{6} },29 g/kg di peso fresco di cistanoside A, con un aumento rispettivamente di −140 e −6 volte rispetto alle fette fresche. Il contenuto di glicosidi feniletanoidi è aumentato notevolmente quando i campioni freschi sono stati trattati con calore elevato ed essiccazione, in particolareacteoside, isoacteoside e 2′-acetilatteoside,mentre non sono stati rilevati nei campioni freschi. Una possibile ragione di ciò potrebbe essere la degradazione dei glicosidi feniletanoidi da parte della perossidasi e della -glucosidasi. Questi enzimi verrebbero inattivati ​​nei campioni essiccati dalle alte temperature e dal ridotto contenuto di acqua, portando a livelli elevati di glicosidi feniletanoidi trattenuti negli estratti. Inoltre, i glicosidi feniletanoidi sono composti fenolici, che verrebbero sintetizzati nelle piante fresche in risposta allo stress dovuto alle alte temperature e alla perdita di umidità.

CISTANCHE NATURALI TUBULOSA MIGLIORANO LA FUNZIONE RENALE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

È stato riportato che sia la cottura a vapore che la sbollentatura di C. deserticola di IV gamma migliorano il contenuto di echinacoside e acteoside.19,20). Tuttavia, nel presente studio, la sbollentatura ha dato un risultato significativo (p<0.05) lower concentration of acteoside and cistanoside A than drying directly. Regarding the total concentration of the five phenylethanoid glycosides, the blanched samples were still lower than the directly oven-dried ones (1.73, 2.35 g/kg FW, respectively). Slices steamed for 5 and 7 min contained significantly (p<0.05) higher amounts of acteoside, isoacteoside, and 2′-acetylacteoside than directly oven-dried samples. In general, the highest levels of phenylethanoid glycosides were found in the steamed samples, suggesting that the above-mentioned pharmacological activities produced by glicosidi feniletanoidiin C. deserticola le fette possono essere migliorate mediante trattamento a vapore.

Inoltre, abbiamo scoperto che il tempo di cottura a vapore era cruciale nel determinare il contenuto di glicosidi feniletanoidi. Echinacoside, cistanoside A, acteoside e isoacteoside hanno mostrato un andamento crescente simile durante il processo di cottura a vapore, che è aumentato bruscamente (a 1, 3 minuti) e ha raggiunto i livelli massimi a 7 minuti. Non sono stati osservati cambiamenti significativi nei quattro glicosidi feniletanoidi sopra menzionati durante il processo di cottura a vapore da 3 a 7 minuti. Al contrario, il 2′-acetilacteoside è aumentato significativamente (p<0.05) with processing time. Notably, the levels of phenylethanoid glycosides in slices steamed for 1 min were significantly (p<0.05) lower than in directly oven-dried slices, except isoacteoside. Therefore, 1 min steaming of 3-mm fresh-cut C. deserticola was not long enough to inactivate the above-mentioned enzymes. Higher total levels of the five phenylethanoid glycosides were observed when the slices were steamed for 5 and 7 min (3.20, 3.52 g/kg FW, respectively) rather than directly oven drying. Steaming from 5 to 7 min more effectively promoted the extraction of phenylethanoid glycosides from C. deserticola, leading to a higher level of phenylethanoid glycosides in the extracts.

Fig. 1. Concentrazione (g/kg di peso corporeo) di echinacoside (A), cistanoside A (B), acteoside (C), isoacteoside (D) e 2′-acetilacteoside (E) in fette di Cistanche deserticola secondo diversi metodi di lavorazione Lettere diverse (a–e) indicano differenze statisticamente significative tra i trattamenti (test di Duncan, p<0.05, n=3).

Attività antiossidante

Le proprietà antiossidanti delle fette, analizzate mediante ORAC, DPPH e FRAP, sono presentate nella Figura 2. Come previsto, i valori ORAC hanno mostrato un'ampia variazione tra i campioni, variando da 13,34 µmol TE/g FW nei campioni freschi, a 108,62 µmol TE/g FW a 7 minuti di cottura a vapore. Durante il processo di cottura a vapore, il valore ORAC è aumentato di 4-volte tra 1 e 7 minuti di cottura a vapore. Tendenze simili sono state osservate in entrambi i test DPPH e FRAP, mostrando rapidi aumenti durante il trattamento con vapore. Sebbene i campioni trattati con vapore avessero inizialmente valori antiossidanti più bassi (a 1 minuto), hanno mostrato una ritenzione molto migliore della capacità antiossidante durante il processo. Nel caso della scottatura non sono state osservate differenze significative nelle proprietà antiossidanti rispetto all’essiccazione diretta in forno.

Fig. 2. Livelli (μmol TE/g FW) di capacità di assorbimento dei radicali liberi dell'ossigeno (ORAC) (A), attività di eliminazione dei radicali liberi del 2,2-difenil-1-picrilidrazil (DPPH) (B) e Proprietà antiossidante di riduzione del ferro (FRAP) (C) di fette di Cistanche deserticola secondo diversi metodi di lavorazione Lettere diverse (a-f) indicano differenze statisticamente significative tra i trattamenti (test di Duncan, p<0.05, n=3).

L'attività antiossidante ORAC negli steli crudi o nelle fette di C. deserticola non è stata precedentemente segnalata. Tuttavia, gli estratti etanolici di steli grezzi di C. deserticola sono stati misurati nei test DPPH e FRAP,28) mostrando un'elevata attività antiossidante, leggermente inferiore a quella del 2(3)-t-butil-4-idrossianisolo (BHA) e superiore a BHT. Inoltre, i glicosidi feniletanoidi isolati da C. deserticola hanno mostrato forti attività di eliminazione del DPPH, leggermente inferiori a quelle dell'acido ascorbico29) e superiori a -tocoferolo.2) C. deserticola può essere una potenziale fonte di antiossidanti naturali, poiché le proprietà antiossidanti dei composti puri isolati da C. deserticola erano superiori a quelli di alcuni antiossidanti sintetici. Come mostrato nella Tabella 2, il BHT ha mostrato risultati significativi (p<0.05) higher antioxidant properties than C. deserticola slices steamed for 7 min. Therefore, there is still a big gap between C. deserticola slices and synthetic antioxidants of equal quality.

Il test DPPH utilizza sia meccanismi di trasferimento dell'atomo di idrogeno (HAT) che di trasferimento di elettroni singoli (SET), mentre i test ORAC e FRAP seguono rispettivamente i principi delle reazioni HAT e SET.30) Nel presente studio, le tendenze generali della capacità antiossidante valutati dai tre test erano molto simili. Pertanto, abbiamo confermato che le fette essiccate di C. deserticola (cotte a vapore, essiccate direttamente al forno e sbollentate) avevano significativamente (p<0.05) higher levels of antioxidant activity than fresh ones. Furthermore, steaming for 5 and 7 min significantly (p<0.05) enhanced levels of antioxidant activity compared with direct oven drying and blanching. Overall, our results showed that steaming fresh-cut C. deserticola slices was effective in preserving phenylethanoid glycoside levels and antioxidant activity.

Zuccheri solubili, polisaccaridi ed estratti diluiti solubili in etanolo

As shown in Fig. 3, levels of soluble sugars and polysaccharides exhibited the following descending order: fresh>directly oven-dried>steamed>sbollentato. Le fette sbollentate presentavano livelli molto bassi di zuccheri solubili, polisaccaridi ed estratto solubile in etanolo diluito, correspotrovandosi bene con la loro elevata perdita di peso. I campioni freschi hanno avuto un significativo (p<0.05) higher content of soluble sugars (62.89 g/kg FW) and polysaccharides (17.36 g/kg FW) than the other samples, suggesting that heat treatment (oven drying, steaming, blanching) on fresh-cut samples would reduce the extraction of soluble sugars and polysaccharides. Heat treatment inhibited the hydrolysis of phenylethanoid glycosides to release the glucose, rhamnose, and so on. Moreover, heat treatment, used as an abiotic stress factors on fresh slices, gave rise to the synthesis of several phenylpropanoid compounds including phenylethanoid glycosides.27) Particularly, sugars contained in the slices were dissolved in the hot water to different extents by steaming or blanching. Thus, it is not surprising to see that the content of soluble sugars decreased by 23.88% in steaming and by 60.82% in blanching, while the content of polysaccharides decreased by 41.33% in steaming and by 53.83% in blanching, compared with fresh slices. It has been reported that the steaming process can increase reducing sugars and acidic polysaccharides in Ginseng Radix et Rhizoma,18) and mono sugars, including galactose and glucose, in Rehmanniae Radix.17) However, the whole dried crude drugs studied in the above-mentioned literature were quite different from the fresh-cut slices used in the present study.

Fig. 3. Concentrazione (g/kg di peso corporeo) di zuccheri solubili (A), polisaccaridi (B) ed estratti diluiti solubili in etanolo (C) di fette di Cistanche deserticola secondo diversi metodi di lavorazione Lettere diverse (a–e) denotano statisticamente differenze significative tra i trattamenti (test di Duncan, p<0.05, n=3).

Le fette essiccate direttamente al forno avevano il contenuto più elevato di estratti solubili in etanolo diluiti (89,26 g/kg FW), mentre le fette sbollentate avevano il contenuto più basso (47,60 g/kg FW). Sebbene tutte le fette lavorate di C. deserticola soddisfacessero lo standard della Farmacopea cinese (edizione 2015) per essere qualificate come Cistanches Herba, le fette sbollentate apporterebbe meno benefici per la salute rispetto ai campioni essiccati direttamente in forno per la grave perdita di etanolo diluito solubile estratti. Per quanto riguarda il processo di cottura a vapore, l’andamento degli zuccheri solubili è stato molto simile all’andamento osservato per gli estratti solubili in etanolo diluiti, diminuendo gradualmente senza cambiamenti significativi osservati da 3 a 7 minuti. La concentrazione di polisaccaridi ha oscillato con un leggero aumento durante l'intero periodo di cottura a vapore. In particolare, 7 minuti di cottura a vapore hanno mostrato una buona conservazione dei polisaccaridi ma una grande perdita di zuccheri solubili, mentre 5 minuti di cottura a vapore hanno mostrato il contrario, rispetto all’essiccazione diretta in forno.

Conclusione

Abbiamo segnalato per la prima volta l'effetto della cottura a vapore sui composti bioattivi e sull'attività antiossidante nella C. deserticola di IV gamma e abbiamo fornito importanti informazioni per lo sviluppo di processi efficaci per il trattamento post-raccolta degli steli di C. deserticola. Le fette fresche hanno mostrato la peggiore efficienza nell’estrazione dei glicosidi feniletanoidi e dei composti antiossidanti, rivelando che queste sostanze erano soggette a degradazione enzimatica. Al contrario, i campioni cotti al vapore presentavano i più alti livelli di glicosidi feniletanoidi e attività antiossidanti. Sebbene la scottatura abbia leggermente aumentato il contenuto di acteoside, isoacteoside e 2′-acetilatteoside rispetto all’essiccazione diretta in forno, i valori di peso, zuccheri solubili, polisaccaridi ed estratti diluiti solubili in etanolo sono tutti diminuiti drasticamente. Per il processo di cottura a vapore, i livelli di glicosidi e polisaccaridi feniletanoidi sono leggermente aumentati nel tempo. Cottura a vapore per 5 e 7 minuti in modo significativo (pag<0.05) enhanced total levels of the five phenylethanoid glycosides than directly oven drying. However, the longer the steaming process, the greater the decrease in weight, soluble sugars, and dilute ethanol-soluble extracts. No significant decrease in soluble sugars was observed when slices were steamed from 1 to 5 min compared with directly oven-dried samples. The steaming time had a consistent effect on the antioxidant properties, with a significant increase evaluated by the DPPH, ORAC, and FRAP assays. It was concluded that C. deserticola slices can be successfully treated with 5 to 7 min of steaming to improve the phenylethanoid glycoside levels and antioxidant activity while preserving the amounts of soluble szuccheri, polisaccaridi ed estratti diluiti solubili in etanolo.

Cistanche TUBULOSA ANTIFATICA ANTIOSSIDANTE PHGS75% ECH 30% ACT 12%