Caratterizzato da un declino delle funzioni fisiologiche nei singoli sistemi di organi

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RIEPILOGO

Il tè nero è la bevanda a base di tè più consumata al mondo ed è stato costantemente segnalato per possedere benefici antietà. Tuttavia, resta in gran parte sconosciuto se le teaflavine, un tipo di sostanze fitochimiche caratteristiche negli estratti di tè nero, siano coinvolte nella regolazione dell'invecchiamento e della durata della vita dei consumatori. In questo studio, mostriamo che le teaflavine svolgono un ruolo benefico nel prevenire la perdita intestinale e la disbiosi a esordio con l'età, ritardando così l'invecchiamento nella Drosophila. Meccanicamente, le teaflavine regolano l'assemblaggio del condensato di Imd per governare negativamente l'iperattivazione dei segnali di Imd nell'intestino dei moscerini della frutta. Inoltre, le teaflavine prevengono la colite indotta da DSS nei topi, suggerendo che le teaflavine svolgono un ruolo nella modulazione dell'integrità intestinale. Nel complesso, il nostro studio rivela un meccanismo molecolare mediante il quale le teaflavine regolano l'omeostasi intestinale probabilmente controllando la coalescenza di Imd.

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INTRODUZIONE

L'invecchiamento, caratterizzato da un declino delle funzioni fisiologiche nei singoli apparati e da un crescente rischio di malattia e morte, comporta l'accumulo di danni a molecole, cellule e tessuti (Alavez et al., 2011; Bartke et al.,2019; Engeet al.,2017). L'identificazione di materiali funzionali o sostanze chimiche che prevengano il deterioramento biologico per ritardare il processo di invecchiamento e prolungare la durata della vita è senza dubbio fondamentale (Bar-ardo et al., 2017; Kapahi et al., 2017). Studi precedenti hanno riportato che il tè nero, il tè più consumato al mondo, possiede attività significative che ritardano l'invecchiamento (Cameron et al.,2008; Fei et al.,2017; Kumar e Rizvi, 2017; Naumovski et al.,2019 ; Peng et al.,2009; Xiao et al.,2020). L'integrazione alimentare con gli estratti di tè nero prolunga efficacemente la durata della vita di animali da esperimento come vermi (Feet al.,2017), moscerini della frutta (Peng et al.,2009; Sito al.,2011), topi(Sito al.,2011 ; Xiao et al.,2020) e ratti (Kumar e Rizvi, 2017).

È noto che gli estratti di tè nero contengono principalmente due tipi di sostanze fitochimiche, vale a dire, catechine e teaflavine (TF) (Cameron et al.,2008; Kondo et al.,2019; Li et al.,2013), l'ultima delle quali sono prodotti dalle catechine dalla polifenolo ossidasi e dalla perossidasi endogene durante il processo di ossidazione nella produzione del tè nero (Li et al.,2013). Una serie di studi ha identificato il ruolo antietà delle catechine migliorando lo stress ossidativo e l'infiammazione associata all'età e riducendo il danno tissutale (Cameron et al.,2008; Niu et al.,2013; Peng et al.,2009; Si et al. .2011; Waaner et al.,2015). Tuttavia, gli studi funzionali sui contributi dei TF all'invecchiamento sono rimasti molto indietro rispetto a quelli sulle catechine, perché è difficile estrarre quantità sufficienti di TF dalle foglie di tè nero per gli studi medici (Takemoto e Takemoto, 2018). Recentemente, sono stati sviluppati diversi metodi biosintetici per la produzione in serie di TF (Takemoto e Takemoto, 2018), che consentono di esplorare gli esatti effetti biologici dei TF e i meccanismi regolatori sottostanti.

Recentemente, serie crescenti di dati hanno evidenziato i ruoli chiave dell'intestino nell'invecchiamento e nella modulazione della durata della vita (Guo et al., 2014; Jji et al., 2019; Maynard e Weinkove, 2018; Rothenberg e Zhang, 2019; Salazar et al. ,2018). L'epitelio intestinale, che funge da barriera selettiva, consente l'assorbimento di nutrienti, ioni e acqua e limita il contatto dell'ospite con entità nocive, inclusi microrganismi, antigeni alimentari e tossine ambientali (Capo et al.,2019; Nicholson et al. , 2012; Ryu et al., 2010). Essendo un tessuto ad alto turnover negli individui, il tratto intestinale fornisce il miglior ambiente di vita per i microrganismi simbionti, comprese le condizioni anaerobiche naturali, nutrienti abbondanti e una temperatura e un pH adeguati

Figura 1. Le teaflavine prolungano la durata della vita della Drosophila e migliorano la capacità di arrampicata

(A e B) Le femmine di moscerino della frutta sono state coltivate con alimenti standard che sono stati integrati con 1 mg/ml o 2,5 mg/ml di theaflavine (TF) o senza TF come base. Le mosche sono state trasferite in fiale fresche contenenti nuovi media a giorni alterni e le mosche morte hanno segnato per tutta la durata della vita adulta, le curve di sopravvivenza (A) e la longevità media (B) delle mosche femmine sono state analizzate e mostrate.

(Cand D) Le femmine w18 sono state alimentate con cibi standard di Drosophila (basali riferiti) o con alimenti integrati rispettivamente con 1 mg/ml o 2,5 mg/ETF. Sei gruppi indipendenti di mosche dell'età indicata (rispettivamente 10 giorni, 30 giorni, 40 giorni e 50 giorni) sono stati sottoposti alle analisi del caffè (C) e dell'alimentazione con fluoresceina (D). valore, formando nicchie occupate da specifiche specie batteriche nel corpo (Bonfini et al., 2016; Buchon et al., 2013; Nicholson et al., 2012). Nel frattempo, questi microrganismi simbionti e i loro metaboliti influenzano anche direttamente o indirettamente l'elaborazione dei nutrienti; digestione e assorbimento; bilancio energetico; Funzione immunitaria; sviluppo e maturazione gastrointestinale; e molte altre importanti attività fisiologiche (Bonfini et al.,2016; Broderick,2016; Maynard e VVeinkove,2018; Nicholson et al., 2012). La relazione reciprocamente vantaggiosa tra i due simbionti può mantenere la stabilità e l'equilibrio dinamico del microecosistema intestinale (Bonfini et al.,2016; Brodeerick,2016; Broderick et al.,2014; Guo et.,2014; May-nard e Weinkove, 2018; Nicholson et al., 2012).

cistanche può antinvecchiamento

Una serie di studi ha dimostrato che la risposta immunitaria innata è fondamentale per il mantenimento dell'omeostasi del microbiota intestinale ed è conservata dagli invertebrati ai vertebrati (Guillouet al.,2016; Guo et al.,2014; Ryu et al., 2006, 2010; Vijay- Kumar et al., 2010). In Drosophila, due principali vie di segnalazione, vale a dire, le vie di pedaggio e di immunodeficienza (Imd), sono coinvolte nelle risposte immunitarie innate (Lu et al., 2020; Myllymakiet al.,2014; Valanne et al.,2011). In particolare, la via Drosophila Toll condivide somiglianze con le vie del recettore dell'interleuchina-1 dei mammiferi (IL-1R) e delle vie del recettore Toll-like (TLR) MyD88-dipendente, mentre la via Imd è simile alla via del recettore del fattore di necrosi tumorale (TNFR) e alla via TLR TRIF-dipendente nei mammiferi (Imler, 2014; Myllymaki et al., 2014; Valanne et al., 2011). Questi due percorsi controllano l'espressione dei peptidi antimicrobici (AMP) attraverso l'attivazione dei fattori di trascrizione NF-KB (Imler,2014; Myllymaki et al.,2014; Valanne et al.,2011).bioflavonoidiLa via di segnalazione Imd è normalmente attivata da un'infezione batterica Gram-negativa e provoca l'espressione di un altro insieme di AMP, come Attacin, Cecropin e Diptericina (Kleino e Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014). L'espressione di questi AMP richiede il recettore-LC della proteina di riconoscimento del peptidoglicano (PGRP) nella via Imd e la scissione dipendente dal segnale e la traslocazione nucleare di Relish, un fattore di trascrizione della famiglia NF-kB (Kleino e Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014). Uno studio recente ha dimostrato che la formazione di amiloide è necessaria per l'attivazione della via della Drosophila Imd dopo il riconoscimento dei peptidoglicani batterici (Kleino et al.,2017). Tuttavia, rimane in gran parte sconosciuto se questo condensato Imd sia coinvolto in altri processi biologici, come il mantenimento dell'omeostasi intestinale e la regolazione dell'invecchiamento.

Nel presente studio, abbiamo utilizzato moscerini della frutta e topi come modelli animali per studiare i ruoli dei TF nel controllo dell'integrità intestinale e dell'invecchiamento. Abbiamo dimostrato che i TF ritardano la proliferazione senile delle cellule staminali intestinali, proteggono dalla disbiosi del microbioma intestinale e prevengono l'attivazione della via di segnalazione Imd, prolungando così la durata della vita in Drosophila. Ulteriori studi meccanicistici hanno indicato che i TF contribuiscono negativamente alla segnalazione di Imd potrebbe essere bloccando la condensazione di Imd piuttosto che la sua ubiquitinazione. Inoltre, abbiamo scoperto che i TF sono altamente efficaci nel prevenire la colite indotta da DSS nei topi. Nel loro insieme, i nostri risultati rivelano un ruolo potenziale dei TF nella modulazione del comportamento di Imd, che potrebbe essere il fattore chiave nel loro contributo positivo all'omeostasi intestinale e all'estensione della durata della vita.

RISULTATI

L'integrazione alimentare di teaflavine prolunga la durata della vita della Drosophila

Per esaminare se le teaflavine (TF) influiscono sull'invecchiamento e sulla durata della vita nella Drosophila, abbiamo allevato mosche femmine w'118 con alimenti per l'allevamento standard che sono stati integrati con TF da 1 mg/mL o 2,5 mg/ml ed eseguito test sulla durata della vita come descritto in precedenza (Ji et al. .,2019). Le mosche alimentate con una dieta integrata con un volume uguale di solvente TF (H2O) sono state considerate controlli. Come mostrato nella Figura 1A, l'aggiunta dietetica di una concentrazione relativamente bassa di TF (1 mg/mL) ha leggermente prolungato la durata della vita dei moscerini della frutta e un'elevata concentrazione di TF (2,5 mg/mL) ha avuto un effetto significativamente positivo sull'estensione della durata della vita. In particolare, l'assorbimento a lungo termine di alte concentrazioni di TF (2,5 mg/mL) ha comportato circa 8 giorni di elevazione della durata media della vita delle mosche femmine (Figura 1B), suggerendo un ruolo benefico di TFsin nella regolazione della longevità in Drosophila. Risultati simili sono stati ottenuti quando abbiamo testato i potenziali effetti di ulteriori TF sulla durata della vita dei maschi w'*'''8 mosche (Figure S1A e S1B).

Figura 2. Le teaflavine prevengono la disfunzione intestinale e la disbiosi del microbiota nella Drosophila

(A e B) La perdita dell'integrità intestinale è stata valutata dal Puffo all'età di 10 giorni, 30 giorni, 40 giorni e 50 giorni di femmine w18 adulti. Esempi di non Puffo e Puffo sono stati mostrati in (A). Le percentuali di Puffo nei diversi gruppi indicati sono state analizzate e mostrate in (B).

(C) Sono state analizzate e mostrate le sostanze batteriche salvate da qPCR del gene 16S rRNA nei file w18 femminili di diversi gruppi indicati.

(DF) È stato eseguito il sequenziamento del gene batterico 16S rRNA commensale. Sono state analizzate e presentate le proporzioni dei taxa batterici (D), una mappa termica dei principali taxa microbici (F) e l'abbondanza relativa dei gammaproteobatteri (F).

Figura 2. Continua

(G e H) Le budella sono state sezionate dalle mosche femmine indicate alimentate con 2,5 mg/ml di TF o senza TF come controllo a 10 giorni e 40 giorni di età. Le immagini dei vetrini dell'intestino medio sono state catturate mediante microscopia a fluorescenza per i segnali GFP (G). L'analisi statistica che mostra le percentuali di cellule GFP-positive è mostrata in (H).

(I) Le budella delle mosche femmine indicate sono state raccolte e sottoposte a test di immunocolorazione utilizzando anticorpi contro l'istone 3(pH3) fosforilato. Sono stati analizzati e mostrati risultati statistici che quantificano il pH3-cellule positive per intestino. In B, C, H e, i dati sono analizzati dal test di Student a due code e sono mostrati come medie ± SEM.NS, non significativo,*p<><0.001. see="" also="" figure="">

È noto che gli ETF hanno un sapore amaro e gli alimenti amari sono generalmente evitati da entrambi i consumatori, compresi i moscerini della frutta e i mammiferi (Yamazaki et al., 2014; Yang et al., 2018). Abbiamo quindi cercato di chiarire se i TF possono influire sull'assunzione di cibo della Drosophila, perché studi precedenti hanno dimostrato che la restrizione dietetica porta a una maggiore durata della vita sia nei vertebrati che negli invertebrati (Hudry et al.,2019; Kapahi et al.,2017; Moger-Reischer et al. ., 2020). Per fare ciò, abbiamo prima eseguito il test del caffè, un approccio ampiamente utilizzato per misurare direttamente e accuratamente la velocità di alimentazione utilizzando un alimentatore capillare contenente un mezzo liquido, come descritto in precedenza (Ja et al., 2007). Come mostrato nelle Figure 1C e S1C, l'integrazione alimentare di TF (rispettivamente 1 mg/mL e 2,5 mg/mL) non ha alterato il consumo di cibo delle mosche testate. Per confermare ulteriormente ciò, abbiamo quindi utilizzato la fluoresceina come tracciante alimentare (Rera et al.,2012; Wang et al.,2005) ed eseguito un test di alimentazione naturale (Danilov et al.,2015). Come mostrato nelle Figure 1D e S1D, non abbiamo osservato alcuna correlazione tra l'integrazione di TF e i livelli di assunzione di cibo. Presi insieme, i nostri risultati hanno suggerito che i ruoli benefici dei TF nel prolungare la durata della vita potrebbero non essere dovuti a restrizioni dietetiche nella Drosophila.

Ulteriori TF sono superflui per influenzare l'omeostasi energetica della Drosophila

È stato suggerito che i polifenoli del tè nero esercitino un effetto positivo sulla prevenzione dell'obesità inibendo la digestione, l'assorbimento e l'assunzione di lipidi e saccaridi, riducendo così l'apporto calorico (Cameron et al.,2008). Abbiamo quindi cercato di chiarire se l'estensione della durata della vita di LDrosophila regolata da TF è dovuta ad alterazioni nell'assorbimento dei nutrienti e nell'accumulo di energia. Per fare ciò, abbiamo prima esaminato i livelli di triacilgliceridi (TAG), uno dei metaboliti lipidici più comunemente rilevati (Tennessen et al., 2014), nelle femmine di mosca per tutta la loro vita, come descritto in precedenza (Fan et al., 2017).comprare cistancheCome mostrato nella Figura 1E, il trattamento dei TF ha avuto un impatto minimo sulle abbondanze complessive di TAG in diversi punti di età. Quando abbiamo ulteriormente rilevato il contenuto di glicogeno e quantificato i carboidrati circolanti (glucosio e trealosio) mediante il kit Hexokinase (Li et al., 2018; Ten-nessen et al., 2014), i risultati hanno mostrato che non c'erano alterazioni evidenti tra i campioni con o senza trattamento TF (Figure 1F-1H). Da notare, risultati coerenti sono stati ottenuti quando abbiamo esaminato i fenotipi metabolici utilizzando il maschio w118 come modelli animali (Figure S1E-S1H). Collettivamente, questi dati hanno suggerito che l'integrazione alimentare di TF è superflua per la regolazione dell'omeostasi dei carboidrati e dell'energia per tutta la durata della vita della Drosophila.

Abbiamo ulteriormente studiato la cinetica della senescenza naturale della Drosophila sotto l'intervento di TF dietetici eseguendo test di geotassi negativa iterativa rapida (RING) come descritto in precedenza (Dilliane et al., 2017; Staats et al.,2018). Come mostrato nelle Figure 1l, 1J, S1l e S1J, gli indici di arrampicata di età (40 giorni) w1118 (sia femmine che maschi) nei gruppi di supplementazione con TF sono stati notevolmente migliorati (un aumento di quasi il 12% nelle femmine e quasi il 18% di elevazione nei maschi ) rispetto ai gruppi di controllo, suggerendo che i TF migliorano potenzialmente le attività di arrampicata e locomotoria della Drosophila.

Le teaflavine prevengono la perdita intestinale e la disbiosi del microbiota a esordio con l'età

Precedenti studi hanno dimostrato che le attività locomotorie e la durata della vita del moscerino della frutta sono fortemente correlate alle condizioni di salute dell'ospite, come sesso, dieta, età e genotipo (Caruso et al.,2013; Heintz e Mair,2014). Recentemente, diverse linee di evidenza hanno dimostrato che preservare l'omeostasi intestinale di segnalazione Imd migliora l'integrità intestinale prevenendo la proliferazione eccessiva di ISC e cellule precursori e ritardando la disfunzione epiteliale intestinale a esordio con l'età, che a sua volta contribuisce positivamente alla salute dell'organismo (Clark et al. , 2015; Guo et al., 2014). In Drosophila, una durata della vita ridotta è strettamente associata alla disfunzione della barriera epiteliale intestinale e lo sviluppo dell'integrità di questa barriera durante l'invecchiamento si traduce in un'estensione della durata della vita (Clark et al.,2015; Guoet al.,2014; Jet al., 2019). Pertanto, abbiamo cercato di determinare se i TF alterano l'integrità dell'intestino eseguendo il test Smurf, un metodo che è stato descritto in precedenza (Clark et al.,2015; Rera et al.,2011). Come mostrato nella Figura 2A, i moscerini della frutta testati in cui i coloranti blu erano limitati al tubo digerente sono stati indicati come non Puffo (pannello di sinistra nella Figura 2A). Se sono stati osservati coloranti blu

Figura 3. Continua

(EG) Le budella sono state isolate da file w1118 femminili alimentati con 2,5 mg/ml TF o senza TF come basali rispettivamente a 10 giorni, 30 giorni, 40 giorni e 50 giorni di età. L'RNA totale è stato estratto e sottoposto ad analisi con aRT-PCR. Sono stati analizzati e mostrati i livelli di espressione dell'mRNA di diptericina (F), attacina (F) e cecropina A1(G). In EG, i dati vengono analizzati dal test t di Student a due code e mostrati come medie ± SEM.NS, non significativo, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

fuoriuscendo dalle viscere nell'addome, gli ospiti sono stati contati come Puffo (pannello di destra nella Figura 2A). Coerentemente con i risultati precedenti (Clark et al.,2015), le proporzioni di Puffo sono aumentate gradualmente durante l'invecchiamento (Figura 2B). È interessante notare che le proporzioni di adulti Puffi erano notevolmente diminuite nei gruppi alimentati con TF rispetto ai controlli della stessa età in entrambe le femmine (dall'8,2% al 3,7%, dal 19,4% al 15,6% e dal 35,4% al 27,1% per i gruppi rispettivamente all'età di 30 giorni, 40 giorni e 50 giorni, Figura 2B) e adulti maschi (dal 2,7% allo 0,9%, dal 6,9% allo 0,9% e dall'8,3% al 2,7% all'età di 30 anni giorni, 40 giorni e 50 giorni, rispettivamente, Figura S2A), indicando che i TF possono prevenire la disfunzione della barriera intestinale nei moscerini della frutta invecchiati. Da notare, abbiamo osservato diminuzioni maggiori delle percentuali di Puffi nei maschi (ridotte di quasi il 65,8 percento, 86,9 percento e 67,4 percento rispettivamente all'età di 30 giorni, 40 giorni e 50 giorni) rispetto a quelli di età femmine corrispondenti (ridotte di quasi il 54,1 percento, 19,5 percento e 23,3 percento rispettivamente all'età di 30 giorni, 40 giorni e 50 giorni), il che implica che i TF potrebbero svolgere un ruolo migliore nell'abbassare la perdita intestinale nei mosche maschi.

Studi precedenti hanno suggerito che la disfunzione della barriera intestinale a esordio con l'età è spesso correlata alla disbiosi del microbiota intestinale (Clark et al.,2015; Guo et al.,2014). Pertanto, abbiamo esaminato la composizione batterica commensale intestinale dopo l'integrazione di TF. Per prima cosa abbiamo utilizzato primer universali ed eseguito esperimenti PCR quantitativi per quantificare i livelli del gene batterico 16S rRNA. Come mostrato nella Figura 2C, nei tagli invecchiati, la popolazione batterica totale dei gruppi di intervento dei TF ha mostrato una notevole riduzione (quasi il 45 percento -55 percento) rispetto ai controlli, suggerendo che l'integrazione di TF probabilmente previene l'espansione del microbiota durante l'invecchiamento . Quindi, abbiamo eseguito la metagenomica per esaminare in dettaglio le alterazioni nella comunità microbica intestinale causate dall'integrazione alimentare con TF. Come mostrato nelle Figure 2D-2F, la proporzione di Gammaproteobacteria, la cui espansione è risultata strettamente associata all'insufficienza della barriera intestinale (Clark et al.,2015), è stata ovviamente ridotta dall'integrazione di TF nell'intestino invecchiato ( una riduzione di quasi il 7 percento), il che implica che i TF contribuiscono positivamente all'omeostasi del microbiota intestinale durante l'invecchiamento in Drosophila.

Le teaflavine migliorano l'omeostasi proliferativa intestinale in Drosophila

We further examined the intestinal integrity of flies that were treated with or without TFs. First, we employed the widely-used P{Esg-Gal4}/P{Uasp-GFP};{Tub-Gal80*s}strain(referred to as esgts>GFP), in cui le cellule staminali intestinali (ISC) e le cellule progenitrici sono state etichettate con GFP. Come mostrato nelle Figure 2G e 2H, il numero di cellule GFP-positive nei gruppi di intervento dei TF all'età di 40 giorni (sono stati contati 20 budelli) era molto inferiore (quasi il 29,7 percento) rispetto a quello dei controlli di pari età (quasi il 47,6 percento e sono state contate 19 budella), suggerendo che i TF potrebbero inibire l'iperproliferazione degli ISC all'inizio dell'età. Inoltre, abbiamo eseguito esperimenti di immunocolorazione utilizzando anticorpi contro il fosfo-istone 3(pH3), un marcatore specifico per le cellule mitotiche nei tessuti intestinali. Abbiamo osservato un minor numero di cellule pH3-positive nell'intestino di adulti invecchiati supplementati con TF (il numero medio era 20,6) rispetto a quelli dei controlli (il numero medio era 39,5, Figura 2). Presi insieme, i nostri risultati suggeriscono che l'integrazione alimentare con TF migliora l'omeostasi proliferativa intestinale e previene la displasia del microbiota a esordio con l'età, ritardando così l'invecchiamento nella Drosophila.

Le teaflavine modulano negativamente i segnali Imd intestinali

Per esplorare i meccanismi molecolari sottostanti mediante i quali i TF contribuiscono positivamente all'omeostasi intestinale della Drosophila, abbiamo eseguito l'analisi dell'RNA-seq utilizzando campioni intestinali corrispondenti all'età di donne adulte w1118 trattate con o senza TF. Le analisi di frammenti per kilobase per milione (FPKM) hanno suggerito che i modelli complessivi di espressione genica erano simili tra i due gruppi sperimentali (Figura 3A). Un'ulteriore analisi dell'espressione differenziale, tuttavia, ha identificato un totale di 229 geni espressi in modo differenziale, di cui 99 erano sovraregolati e 126 erano sottoregolati (Figura 3B). È interessante notare che l'analisi dell'ontologia genica di questi geni ha rivelato che il percorso della risposta immunitaria era altamente alterato dall'integrazione alimentare con TF (Figura 3C).

In Drosophila, è stato dimostrato che le vie di segnalazione immunitaria innate svolgono un ruolo dominante nella regolazione dell'omeostasi intestinale e della longevità dell'età (Clark et al, 2015; Guo et al, 2014). Ci siamo quindi concentrati sull'esame dei modelli di espressione dei peptidi antimicrobici (AMP) a valle dei segnali immunitari innati. Come mostrato

Figura 4. Continua

(D) Le proteine ​​​​Imd purificate sono state incubate con varie concentrazioni di TF (50 uM, 100 uM e 200 uM, rispettivamente) a temperatura ambiente per 5 minuti. I campioni sono stati quindi sottoposti all'analisi dello spettro di emissione di fluorescenza utilizzando le lunghezze d'onda indicate (eccitazione a 430 nm, emissione da 450 nm a 550 nm con una larghezza della fenditura di 5 nm). Come controllo di base è stato utilizzato un campione senza TF.

（E and F）Lysates of guts from NP11>Le mosche Myc-Imd sono state preparate e incubate con TF (100μM) a temperatura ambiente per 30 minuti. I saggi SDD-AGE (pannello superiore in E) e SDS-PAGE (pannello inferiore in E) sono stati eseguiti per analizzare gli aggregati proteici Imd. La tubulina è stata utilizzata come controllo del carico.cistanciaL'analisi della densitometria è stata eseguita per quantificare i condensati Imd in diversi campioni e i risultati sono stati mostrati in (F). (G) Un cromatogramma rappresentativo del campione di TF.

（H e I） Le proteine ​​Flag-Imd purificate sono state incubate con TF, TF1, TF2a, TF2b o TF3 (100 μM per ciascun campione) o con un volume uguale di tampone (controllo) a temperatura ambiente per 30 minuti come indicato. I campioni sono stati quindi sottoposti a test SDD-AGE (pannello superiore in H) e SDS-PAGE (pannello inferiore in H) per determinare i modelli di aggregazione di Imd. L'analisi della densitometria per quantificare i condensati Imd in diversi campioni è stata eseguita e mostrata in (). In C, F e I, i dati vengono analizzati dal test di Student a due code e mostrati come medie ± SEM.***p< 0.001.="" see="" also="" figure="">

nella Figura 3D, i geni AMP governati dalla via dell'immunodeficienza (Imd), tra cui diptericina A (DptA), dip-tericina B (DptB), attacina A (AttA), cecropina A1 (CecA1), cecropina A2 (CecA2) e cecropin C (Cece), sono stati significativamente ridotti (rispettivamente del 39,4 percento, 72,3 percento, 10,5 percento,86,5 percento, 99,8 percento e 36,1 percento) nei gruppi trattati con TF rispetto ai gruppi di controllo. Per confermare ulteriormente i risultati ottenuti dall'analisi dell'RNA-seq, abbiamo effettuato una reazione a catena quantitativa della trascrizione inversa-polimerasi (gRT-PCR) per quantificare i livelli di espressione relativa dei geni AMP correlati a Imd nei campioni intestinali di Drosophila ottenuti in quattro diversi punti di età di cui 10 giorni, 30 giorni, 40 giorni e 50 giorni. Come mostrato nelle Figure 3E-3G, i livelli di espressione dell'mRNA di alcuni geni, tra cui diptericina, attacina e cecropina A1, erano significativamente ridotti (di quasi il 35,9 percento -66,6 percento) nei TF trattati budella invecchiate. Collettivamente, i nostri dati hanno rivelato che i TF potenzialmente antagonizzavano l'attivazione della via di segnalazione Imd nelle cellule intestinali della Drosophila durante l'invecchiamento.

Le teaflavine sono superflue per la regolazione trascrizionale della via Imd o per l'ubiquitinazione di Imd

Abbiamo cercato di esaminare l'associazione tra TF e Imd e abbiamo eseguito il test di risonanza plasmonica di superficie (SPR) come descritto in precedenza (Lan et al., 2020). Come mostrato nella Figura 4A. I TF hanno mostrato un'affinità di legame moderata con la proteina Imd purificata a una costante Kp stimata di 8,078 uM. Quindi tendiamo a determinare come i TF controllano la via di segnalazione intestinale di Imd. Sulla base dei risultati dell'analisi del trascrittoma dai dati di RNA-seq, abbiamo scoperto che i livelli di espressione dei fattori regolatori chiave nella via di segnalazione di Imd, come PGRP-LC, Imd e Relish, erano difficilmente alterati dal trattamento con TF (Figura S3A ). Abbiamo inoltre raccolto campioni intestinali da mosche che sono state sottoposte a integrazione alimentare con o senza TF a varie età ed eseguito esperimenti qRT-PCR per rilevare specificamente i modelli di espressione di questi geni. Come mostrato nella Figura S3B, i livelli di mRNA di alcuni geni, inclusi effete, faded, tak1, pgrp-Ica, uev1a, bendless, relish, imd, pgrp-sc2, tab2, ird5 Kenny e diap2, erano simili tra i gruppi di controllo e gruppi di intervento dei TF, suggerendo che i TF non sono coinvolti nella regolazione dei segnali Imd a livello trascrizionale.

Successivamente, abbiamo esaminato i profili di ubiquitinazione di Imd perché studi precedenti hanno suggerito che l'ubiquitinazione di Imd è essenziale per la trasduzione del segnale a valle nel percorso di Imd (Myllymaki et al.,2014; Zhou et al.,2005). Per prima cosa abbiamo eseguito un test di spostamento E1 in vitro e abbiamo scoperto che il trattamento con TF non ha alcuna influenza apparente sulle reazioni enzimatiche di E1 e ubiquitina per formare E1/Ub coniugato (Figura S4A). Inoltre, abbiamo trasfettato cellule di Drosophila S2 con plasmidi che esprimono Imd contrassegnato da Flag insieme a Ub contrassegnato da HA e quindi trattato le cellule con o senza TF. Ulteriori test di ubiquitinazione hanno suggerito che l'integrazione di TF influiva a malapena sui livelli di Imd ubiquitinato nelle cellule in coltura (Figure S4B e S4C). Per determinare le relazioni tra TF e ubiquitinazione di Imd in vivo, abbiamo utilizzato la mosca transgenica P {NP1-Gal4}/P{Uasp-Myc-Imd};P{Tub-Gal80*} (denominata NP1* s > Myc-Imd), in cui una proteina Imd etichettata con Myc era altamente espressa nelle cellule intestinali (Figura S4D). I nostri esperimenti di ubiquitinazione hanno mostrato che l'integrazione alimentare con TF era superflua per modulare l'ubiquitinazione di Imd nei tessuti intestinali (Figure S4D e S4E). Presi insieme, i nostri risultati hanno indicato che i TF governano negativamente i segnali di Drosophila Imd non influenzando il modello di ubiquitinazione di Imd.

Le teaflavine impediscono l'accumulo di condensa Imd

Uno studio recente ha suggerito che l'aggregazione di Imd è essenziale per l'attivazione dei geni a valle nel percorso di Imd (Kleino et al.,2017). Abbiamo quindi cercato di esaminare se i TF regolano il processo di

Figura 5. Continua

(F e G) Le femmine w18 (indicate come imd plus / plus), imd' eterozigoti e omozigoti (indicate rispettivamente come imd plus /- e imd-/-) sono state allevate con alimenti standard di Drosophila (denominati basali) o integrazione dietetica con 2,5 mg/mL (indicati come TF) e quindi sono stati sottoposti a test di durata della vita La curva di sopravvivenza (F) e la longevità media (G) sono state analizzate e mostrate.

In e F, il test Log Rank è stato utilizzato per l'analisi statistica. In BE, e, il test t di Student a due code è stato utilizzato per l'analisi statistica e i dati sono sh come medie ± SEM. NS, non significativo, *p<0.05, **p="" <="" 0.01,=""><0.001. see="" also="" figure="">

Imd formazione aggregata. Innanzitutto, abbiamo purificato le proteine ​​​​Imd contrassegnate da Myc da cellule S2 coltivate e abbiamo incubato le proteine ​​​​con diverse concentrazioni di TF (Figura 4B). È interessante notare che abbiamo scoperto che i TF hanno notevolmente impedito l'aggregazione di Imd (ridotta dell'81,7 percento -89,7 percento, Figure 4B e 4C), come suggerito dai nostri saggi di elettroforesi su gel di agarosio detergente semidenaturante (SDD-AGE). Per confermare questa scoperta, abbiamo ulteriormente eseguito saggi di legame tioflavina-T e ottenuto risultati coerenti (Figura 4D). Infine, abbiamo allevato mosche transgeniche NP1ts > Myc-Imd che sono state sottoposte a integrazione alimentare con o senza TF e raccolto campioni intestinali da adulti anziani. Gli esperimenti SDD-AGE hanno suggerito che l'aggregazione di Imd era notevolmente sottoregolata dai TF nelle cellule intestinali (diminuita del 16,7% -22 percento, Figure 4E e 4F).

Per determinare in che modo i TF contribuiscono al controllo dell'assemblaggio del condensato Imd, abbiamo sottoposto i TF all'analisi HPLC e abbiamo scoperto che contenevano principalmente quattro tipi di monomeri (Figura 4G), vale a dire, theaflavina (TF1), theaflavina 3- O-gallato ( TF2a), theaflavina 3'-O-gallato (TF2b) e theaflavina 3,3'-di-O-gallato (TF3), che erano coerenti con i rapporti precedenti (Li et al., 2013; Takemoto e Takemoto, 2018) . Quindi, abbiamo incubato ciascuna di queste sostanze chimiche con Imdprotein purificata ed eseguito esperimenti SDD-AGE. Come mostrato nelle Figure 4H e 4l, il trattamento di tutti questi TFmonomeri ha comportato una marcata riduzione (rispettivamente del 59,5%,60,9%,58,4%,58,2% e 55,8% per TF, TF1, TF2a, TF2b e TF3) in i livelli aggregati di Imd. Collettivamente, i nostri risultati hanno suggerito che i TF regolano negativamente la via di segnalazione di Drosophila Imd probabilmente controllando il comportamento dei condensati di Imd.

Le teaflavine prolungano la durata della vita della Drosophila in modo dipendente da Imd

To examine whether TFs prolong Drosophila lifespan depending on their regulatory role in Imd, we specifically knocked down Imd in gut tissues using the transgenic flies P{NP1-gal4)PITub-gal80*}/P{Uasp-imd-IR(KK)} (referred to as Imd RNAi). As shown in Figures 5A and 5B, dietary supplementation of TFs extended the lifespan of controls (elevation of nearly 7.2 days in the mean lifespan), whereas prevention of Imd expression in guts apparently reversed the lifespan extension caused by TFs. Consistent results were obtained when we utilized male Imd RNAi and control flies to perform lifespan assays (Figures S5A and S5B). Further qRT-PCR assays showed that the mRNA expression levels of AMP genes at ages of 10 days, 30 days, 40 days, and 50 days, including diptericin, attacin, and cecropin A1.hardly changed in the gut tissues of Imd RNAi flies(Figures 5C-5E), whereas additional TFs caused reductions of 31%-72.3% in mRNA abundances of these genes in samples from control groups. To confirm these results from Imd RNAi flies, we first performed lifespan assays using w18(control, referred to as imd+/+), imd' heterozygous (referred to as imd+/-), and homozygous(referred as imd-/-)mutant flies. We found that TFs addition extended lifespan and increased mean life longevity of imd+/-flies (elevation of nearly 6.2 days, Figures 5F and 5G). However, this lifespan extension effect by TFs was almost abolished in imd-/-flies (Figures 5F and 5G). Next, we performed lifespan assays utilizing Relish RNAi(NP1's>Relish RNAi and control(NP1ts>più) mosche. perché Relish è il fattore di trascrizione chiave responsabile delle espressioni del gene AMP a valle di Imd (Myllymaki et al., 2014). Come mostrato in Fiqures S5C e S5D. l'aggiunta dietetica di TF ha notevolmente prolungato la longevità delle mosche di controllo e questa estensione della durata della vita è stata significativamente prevenuta nelle mosche Relish RNAi. Collettivamente, i nostri dati hanno indicato che l'integrazione alimentare di TF contribuisce positivamente alla durata della vita della Drosophila, probabilmente a seconda dei segnali Imd intestinali.

Per vedere se l'estensione della durata della vita di TF si verifica ancora in uno sfondo axenico, abbiamo eseguito test sulla durata della vita utilizzando femmine w1118 in condizioni axeniche. Come mostrato nelle Figure S5E e S5F, l'aggiunta di diverse concentrazioni di TF (1 mg/mL e 2,5 mg/mL) ha influenzato poco i rapporti di mortalità e longevità media negli adulti w18. Poiché le condizioni di allevamento axenico possono in gran parte prevenire l'abbondante microbiota, limitando così i segnali Imd nei tagli (Clarke al.,2015), i nostri dati hanno suggerito che i TF prolungano la durata della vita della Drosophila attraverso la modulazione dei segnali immunitari innati regolati dal microbiota intestinale.

Figura 6. Le teaflavine alleviano la colite indotta da DSS nei topi CD-1

(A) Il trattamento con TF non ha influito sul consumo di acqua in vari gruppi di topi CD-1.

(BD) La somministrazione di sonda gastrica di varie concentrazioni di TF (1 mg/mL, 2,5 mg/mL e 5 mg/mL, rispettivamente) ha migliorato l'accorciamento del colon e l'allargamento della milza causato da DSS nei topi CD-1. Sono state mostrate immagini rappresentative (B) e analisi statistiche del colon (C) e della milza (D). (E) La somministrazione di varie concentrazioni di TF (rispettivamente 1 mg/mL, 2,5 mg/ml e 5 mg/mL) ha impedito la perdita intestinale indotta da DSS nei topi CD-1. (F e G) I due punti sono stati raccolti da gruppi di topi indicati. L'RNA totale è stato estratto e sottoposto a test qRT-PCR per rilevare i livelli di espressione di mRNA di TNFa(F) e IL-6 (G).

(HL) I due punti di vari gruppi di topi sono stati raccolti longitudinalmente e sottoposti a saggi di colorazione HE. I campioni sono stati esaminati al microscopio e sono state ottenute e mostrate immagini rappresentative dei campioni indicati (HL). Barre di scala, 40 μm. (MQ') Immagini SEM che mostrano i microtricomi dei due punti da diversi campioni indicati. Barre di scala, 50 um (MQ) e 4 um (M'-Q').

In CG, i dati sono analizzati dal test di Student a due code e mostrati come medie ± SEM.NS, non significativo, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

Le teaflavine alleviano la colite indotta da DSS nei topi CD-1

Per studiare ulteriormente il potenziale ruolo dei TF nel mantenimento dell'omeostasi intestinale nei mammiferi, sono stati utilizzati topi CD-1 per indurre la colite da destrano solfato di sodio (DSS). Ai topi sono state somministrate per via intragastrica diverse concentrazioni di TF (1 g/L, 2,5 g/L o 5 a/L) o acqua come controllo per quattro settimane, seguite da un trattamento con DSS al 2% in acqua da bere per 7 giorni. Per vedere se i TF influiscono sulla quantità di DSSa da bere in diversi gruppi di topi, abbiamo monitorato il consumo di topi ogni giorno. Come mostrato in Fiqure6A, il trattamento con TF è superfluo per influenzare il consumo di bevande nei topi con colite indotta da DSS, i topi trattati con DSS hanno presentato sindrome di colite con diarrea e/o ematochezia, che sono state prevenute dal trattamento con TF dose-dipendente (Figure S6A-S6E).cistanche AustraliaInoltre, l'intervento con i TF ha salvato la riduzione della lunghezza del colon causata da DSS e ha migliorato l'allargamento della milza (Figure 6B-6D).

Abbiamo quindi utilizzato destrano-4000-FITC (FITC-DX) per esaminare la funzione di barriera intestinale di questi topi. Come mostrato nella Figura 6E, i topi dei gruppi trattati con DSS hanno mostrato un'alta concentrazione di FITC-DX nei campioni di sangue, indicando una perdita intestinale in questi animali, tuttavia, l'intervento con i TF ha impedito significativamente il trasporto di FITC-DX dagli organi digestivi nel sistema circolatorio (ridotto del 56,1% -77,5%, Figura 6E). In particolare, la somministrazione di TF non ha alterato la permeabilità intestinale dei topi in condizioni normali (Figura S6F). Poiché l'infiammazione gioca un ruolo fondamentale nello sviluppo della colite del modello murino, abbiamo ulteriormente eseguito esperimenti di qRT-PCR, dimostrando che il trattamento con TF ha significativamente sottoregolato le espressioni di IL-6 e TNF nell'intestino dei topi trattati con DSS (Figure 6F e 6G).

Per analizzare ulteriormente i cambiamenti patologici nel colon, abbiamo eseguito saggi di colorazione ematossilina-eosina (HE). Come mostrato nelle Figure 6H-6L e S6G-S6J, il grave danno epiteliale indotto da DSS è stato notevolmente migliorato dal trattamento con TF in modo dose-dipendente. L'imaging al microscopio elettronico a scansione di questi campioni intestinali ha inoltre fornito risultati coerenti (Figure 6M-6Q' e S6K-S6N'). Nel loro insieme, i nostri risultati hanno indicato che i TF svolgono un ruolo benefico nella protezione della funzione di barriera intestinale sia negli insetti che nei mammiferi.

DISCUSSIONE

In questo studio, abbiamo studiato le funzioni fisiologiche dei TF nella modulazione dell'omeostasi intestinale e della longevità ei meccanismi molecolari sottostanti. Abbiamo dimostrato che l'integrazione alimentare con TF contribuisce positivamente alla prevenzione della disbiosi senile del microbiota intestinale e al ritardo della disfunzione epiteliale intestinale, prolungando così la durata della vita della Drosophila. I nostri studi meccanicistici in vitro e in vivo hanno rivelato che i TF probabilmente svolgono un ruolo negativo nel controllo della via di segnalazione di Imd bloccando la coalescenza di Imd. Inoltre, abbiamo scoperto che la colite indotta da DSS può essere efficacemente alleviata dall'integrazione di TF nei topi CD-1. I nostri risultati supportano l'idea che i TF contribuiscano vantaggiosamente all'omeostasi intestinale sia negli invertebrati che nei vertebrati.

L'integrazione alimentare con teaflavine prolunga la durata della vita della Drosophila

Il consumo di tè è popolare in tutto il mondo ed è secondo solo al consumo di acqua (Rothenberg e Zhang, 2019). Numerosi studi si sono concentrati sulle funzioni fisiologiche spesso attraverso approcci sia sperimentali che clinici (Cameron et al.,2008; Niu et al.,2013; Peng et al.,2009; Rothenberg e Zhang.2019; Spindleret al.,2013; Takemoto e Takemoto,2018; Unno et al.,2020;Zhou et al.,2020.È stato ampiamente dimostrato che il tè apporta benefici alla salute abbassando i livelli lipidici e tramite effetti anti-obesità, e i principali composti funzionali nel tè sono le catechine, in particolare epigallocatechina gallato (EGCG)(Abbas and Wink,2009; Modernelli et al.,2015; Niu et al.,2013; Wagner et al.,2015; Xiong et al.,2018). Studi precedenti hanno anche indicato che il tè verde e il tè nero può aumentare la durata della salute e della vita dei moscerini della frutta (Sito al.,2011; Wagner et al.,2015), dei vermi (Fei et al.,2017; Xiong et al.,2018) e dei ratti (Imran et al. .,2018; Niu etal.2013). e il principale meccanismo di regolazione è l'efficace prevenzione dello stress ossidativo da parte dell'EGCG attraverso la modulazione dei segnali ROS.benefici di cistance,Tuttavia, rimane in gran parte sconosciuto se i TF, come i caratteristici composti "dorati" nel tè nero, svolgano un ruolo nella regolazione dell'invecchiamento e della durata della vita. Questo studio fornisce prove convincenti che indicano che l'intervento dei TF è superfluo per avere un impatto sull'assunzione di cibo e l'assorbimento a lungo termine dei TF attraverso la dieta estende significativamente la durata della vita nei moscerini della frutta sia maschi che femmine. Questi risultati forniscono linee guida per ulteriori studi sulle funzioni dei TF nella longevità dei mammiferi.

Le teaflavine migliorano la disbiosi del microbiota senile e promuovono l'omeostasi intestinale Il progressivo squilibrio dell'omeostasi proliferativa e della capacità rigenerativa è un segno distintivo dell'invecchiamento e delle malattie a esordio con l'età (Clark et al., 2015; Heintz e Mair, 2014; Maynard e Weinkove, 2018; Rera et al. 2012). L'infiammazione cronica è associata alla perdita dell'omeostasi e all'aumento dell'incidenza del cancro negli organismi che invecchiano (Bartke et al.,2019; Kapahi et al., 2017; Xiao et al.,2020). Ciò è particolarmente significativo negli epiteli di barriera come l'epitelio intestinale (Guo et al.,2014; Maynard e Weinkove,2018). Con un modello per lo sviluppo della displasia legata all'età nell'intestino dell'invecchiamento, abbiamo dimostrato che il miglioramento delle interazioni ospite-commensale negli epiteli della barriera dell'invecchiamento potrebbe promuovere la salute e la durata della vita. Abbiamo utilizzato una serie di approcci non invasivi per analizzare la funzione intestinale e la dinamica del microbiota durante l'invecchiamento. In primo luogo, il test Smurf ha indicato un ruolo positivo dei TF nella regolazione della disfunzione della barriera epiteliale durante l'invecchiamento. Quindi, il test di immunocolorazione utilizzando diverse mosche transgeniche ha rivelato che i TF ritardavano l'eccessiva proliferazione degli ISC e il turnover delle cellule differenziate. Infine, il sequenziamento del microbioma ha suggerito che i TF sottoregolano l'espansione senile della microflora commensale intestinale. Questi risultati hanno indicato fortemente che i TF svolgono un ruolo chiave nel ritardare il processo di invecchiamento dell'ospite mantenendo l'omeostasi intestinale.

Le teaflavine alleviano le risposte immunitarie eccessive nell'intestino regolando negativamente la segnalazione di Imd

È stato suggerito che il delicato equilibrio tra la funzione immunitaria intestinale e il microbiota debba essere mantenuto per garantire l'omeostasi a lungo termine degli epiteli di barriera (Guo et al., 2014; Maynard e Weinkove, 2018). Studi precedenti hanno anche dimostrato che l'eccessiva infiammazione cronica dell'intestino è associata a disfunzione legata all'età negli epiteli di barriera ed è un segno distintivo dell'invecchiamento (Clark et al.,2015; Guo et al., 2014; Ji et al.,2019) . Pertanto, il mantenimento di una popolazione commensale sana preservando l'omeostasi immunitaria innata in tali epiteli è un approccio promettente per promuovere la salute e la longevità (Bonfini et al.,2016; Broderick,2016; Clark et al.,2015). Esplorare i meccanismi molecolari mediante quali TF ritardano l'invecchiamento, abbiamo eseguito l'analisi dell'RNA-seq utilizzando intestini sezionati con o senza trattamento con TF. I nostri dati hanno suggerito che il gruppo di geni altamente espressi nell'intestino dei moscerini della frutta di controllo rispetto a quello degli animali trattati con TF era arricchito con geni classificati come geni di "risposta immunitaria". Ulteriori analisi bioinformatiche e test get-PCR hanno rivelato che l'espressione dei geni AMP correlati a Imd era drammaticamente inibita dall'aggiunta dietetica di TF. I risultati degli esperimenti sui topi CD-1 che utilizzano DSS per indurre risposte immunitarie anormali nell'intestino hanno ulteriormente confermato l'idea che i TF funzionano come protettori contro l'infiammazione intestinale.

Le teaflavine sopprimono i segnali determinando l'assemblaggio amiloide di Imd

In che modo i TF regolano negativamente la via di segnalazione Imd? Sulla base dei risultati dell'analisi del trascrittoma, abbiamo scoperto che i TF sono superflui per la regolazione trascrizionale dei fattori chiave nella via di segnalazione Imd. Di interesse, abbiamo osservato l'apparente affinità di legame dei TF con la proteina Imd purificata mediante il test SPR, che ha suggerito una probabilità che i TF possano svolgere un ruolo nel controllo del comportamento della proteina Imd o nel suo processo di modifica post-traduzionale. Studi precedenti hanno evidenziato un ruolo fondamentale dell'ubiquitinazione nella trasduzione del segnale Imd (Kleino e Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014) e la prevenzione dell'ubiquitinazione di Imd si traduce in una profonda chiusura della segnalazione di Imd (Myllymaki et al., 2014; Thevenon et al., 2009). Tuttavia, i nostri test di ubiquitinazione in vitro e in vivo hanno mostrato che i TF influenzano difficilmente il modello di ubiquitinazione di Imd. Uno studio recente ha dimostrato che la formazione di amiloide è necessaria per l'attivazione della via della Drosophila Imd al riconoscimento dei peptidoglicani batterici (Kleino et al.,2017). È interessante notare che i nostri test SDD-AGE e ThTbinding hanno suggerito che la coalescenza di Imd è prevenuta dai TF. La prevenzione dell'aggregazione di Imd mediante abbattimento o mutazione di Imd nelle cellule intestinali ha apparentemente invertito gli effetti benefici dei TF sull'estensione della durata della vita. Per confermare ulteriormente la nostra scoperta, sarebbe interessante esaminare se i TF non sono più funzionali per prolungare la durata della vita nei volantini della frutta quando il motivo criptico conservato RHIM (cRHIM, aminoacidi dalla 118a alla 121h) di Imd viene specificamente eliminato distrutto, sulla base della constatazione che il reato nell'Imd è essenziale per la sua aggregazione e formazione di amiloide (Kleino et al.,2017). Tuttavia, il nostro studio evidenzia un ruolo fondamentale dei TF nel controllo dell'omeostasi intestinale e del processo di invecchiamento, forse attraverso la modulazione della coalescenza Imd. Gli studi futuri dovrebbero concentrarsi sull'esplorazione di quali residui o regioni di Imd sono legati da TF e come questo legame si traduce nella prevenzione della condensazione di Imd. Inoltre, i nostri risultati nel sistema dei mammiferi hanno indicato che i TF potrebbero proteggere efficacemente il colon dall'infiammazione causata dal DSS chimico velenoso esogeno, suggerendo un ruolo regolatorio conservato dei TF nel mantenimento dell'omeostasi intestinale. Vale la pena indagare se i TF svolgono un ruolo nel governo dell'assemblaggio delle proteine ​​nei tessuti dei mammiferi.

Questo articolo è estratto da zhongwenxie@ahau.edu.cn