Proprietà Chimiche Di Un Mannoglucano Da Cistanche Deserticola

Contatto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

1. Materiali

Sono state utilizzate paste orali per cavalli di due diversi produttori contenenti rispettivamente 10 mg/g (A) o 20 mg/g (B) di ivermectina. È stato eseguito il dosaggio quantitativo per l'ivermectina e il contenuto era 104,4-107,7% della concentrazione dichiarata.

2. Prova di scioglimento

Il test è stato eseguito con Ph. Eur. apparato a paletta (Pharma Test, Heinberg, Germania), con agitazioni di 75 giri/min o 50 giri/min, a 37 -0,5 C. Sodio lauril solfato (BDH Chemicals, Poole, Inghilterra) 0,5 percento (p /v) è stata utilizzata una soluzione acquosa come mezzo di dissoluzione (900 ml). La pasta (4 g di A o 2 g B) è stata posta nel recipiente con una siringa con cannula (A) o facendo cadere il campione sulla superficie del mezzo di dissoluzione (B). Dopo gli intervalli di tempo (15, 30, 45, 60 min e 2 h), un campione del mezzo di dissoluzione è stato prelevato (2 ml), filtrato attraverso un filtro di vetro e analizzato.

3. Analisi HPLC

La determinazione dell'ivermectina è stata eseguita con un metodo HPLC modificato come descritto in Ph. Eur. Le soluzioni analizzate sono state diluite con metanolo (1: 10). Il sistema HPLC consisteva in una colonna ottadecile (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), un integratore D-12500 A, un rivelatore UV-Vis L{{7} }, pompa L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Germania). Come fase mobile è stata utilizzata una miscela di acetonitrile: metanolo: acqua (64: 24: 16) con una portata di 1,9 ml/min. Il volume del campione iniettato era di 20 ml e il rilevamento è stato eseguito a 254 nm.

4. Studi di solubilità

Un accesso della sostanza è stato agitato in flaconi di vetro ben chiusi con un solvente adatto (Tabella 1) per 20 ore a 37 0.1 C. Le sospensioni sono state filtrate e il filtrato, dopo diluizione in metanolo, è stato analizzato mediante HPLC .

5. Stabilità in soluzione acida

Soluzioni di ivermectina in HCl {{0}}.1 M sono state conservate in fiale di vetro ben chiuse a 20°C e 37°C. I cromatogrammi delle soluzioni sono stati registrati a t ¼ 0 e dopo 1, 2 e 6 ore. Sono stati calcolati l'area dell'ivermectina (tempo di ritenzione 10,5 min) e picchi aggiuntivi.

Riferimenti

Guida FDA per l'industria: forme di dosaggio semisolide non sterili SUPAC-SS. Modifiche di scale-up e post-approvazione: chimica, produzione e controlli; test di rilascio in vitro e documentazione di bioequivalenza in vivo. Maggio 1997. Linee guida FIP per il test di dissoluzione di prodotti orali solidi (1997) Dissolute. Tecno. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Linee guida FIP/AAPS per il test di dissoluzione/rilascio in vitro di forme di dosaggio nuove/speciali, AAPS PharmSciTech, 4 (1) articolo 7 Centro di ricerca moderno per la medicina tradizionale cinese, scuola di Scienze Farmaceutiche, Centro di Scienze della Salute dell'Università di Pechino, Pechino, Cina

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Ricevuto il 13 febbraio 2004, accettato il 4 aprile 2004, Prof. Dr. Pengfei Tu, Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University Health Science Center, No. 38, Xueyuan Road , Distretto di Haidian, Pechino 100083, Cina Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Un nuovo mannoglucano daCistanche desertichedalla Cina è caratterizzato. Il composto è responsabile di una lieve stimolazione della proliferazione dei linfociti T e B indotta dai mitogeni.

Cistanche deserticheYC Ma è un oloparassita che cresce sulle radici della pianta dicotiledone Haloxylon ammodendron Bunge, ampiamente distribuita nel nord-ovest della Cina. Trattandosi di un importante tonico nella medicina orientale, sono stati rivendicati molti componenti attivi e attività farmacologiche (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Queste proprietà potrebbero essere associate ad alcuni dei componenti polisaccaridi diCistancheche non sono stati ancora indagati. Sono stati isolati e caratterizzati da polisaccaridi pectici mitogeni e polisaccaridi neutriCistanche desertichedalla Mongolia (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Qui riportiamo le proprietà chimiche di un nuovo mannoglucano daCistanche desertichedalla Cina, responsabile della lieve stimolazione della proliferazione dei linfociti T e B indotta dai mitogeni. Dopo gli steli diCistanche deserticheYC Ma è stato estratto con il 95% di etanolo, per estrarre il residuo è stata utilizzata acqua distillata fredda. L'estratto di acqua fredda è stato precipitato con EtOH, la proteina è stata rimossa e dializzata ottenendo il polisaccaride grezzo CCDP. Il polisaccaride grezzo è stato frazionato su una colonna DEAE e una colonna Sephadex G-150 per ottenere un polisaccaride privo di proteine ​​(CDP-6), che comprendeva glucosio (89,2 percento) e mannosio (1{{58} },4 percento ), e di cui la media Mr è stata stimata in 6.8 -104. Il polisaccaride CDP-6 ha mostrato [a 20 D 42 (c 1, H2O). Le configurazioni assolute degli zuccheri sono state determinate mediante GC di TMS (– )-2-butilglicosidi. CDP-6 è stato metilato (Needs et al. 1993), idrolizzato, convertito in acetati di alditolo e analizzato mediante GC e GC-MS (Tabella). Questo risultato, insieme ai dati sul rapporto molare dell'analisi di metilazione, ha suggerito che CDP-6 ha una Glcp collegata prevalentemente a 1,{21}}e una spina dorsale 1,6- collegata in misura minore ramificata a O{{ 24}} di mannosio. L'analisi di metilazione di due polimeri (CDP-6-1, CDP-6–2) da idrolisi parziale ha confermato che CDP-6 ha una spina dorsale costituita da 1,{30}}residui di glucosile legati e 1,{32}}residui di mannosile legati, che sono sostituiti in O-3 di mannosio da rami costituiti dal terminale, 1,6- residui di glucosile legati e 1,3,{{38} }residui di mannosile legati. Secondo i rapporti molari e la letteratura (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), lo spettro 13C NMR di CDP-6 ha mostrato segnali dovuti ai carboni anomerici dell'a-d-Glcp (C{{45 }} a 98,4 ppm), bd-Map (C-1 a 104,3–104,9 ppm) e ad-Map (C-1 a 100,0 ppm). Lo spettro 1 H NMR di CDP-6-2 in D2O ha mostrato segnali protonici corrispondenti ad ad-Glcp (H-1 a 4,94–4,95 ppm) e a-d-Map (H{71}} a 4,96–5,00 ppm). Lo spettro 13C NMR di CDP-6-2 in D2O ha mostrato segnali protonici corrispondenti ad ad-Glcp (C-1 a 98,6 ppm) e ad-Map (C-1 a 98,4 ppm). Si dice che i mannoglucani abbiano una spina dorsale 1,{90}}collegata al glucopirannan e 1,{92}}mannopirannano collegata (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 ha alcune caratteristiche strutturali diverse dalla sua dorsale mappa a-1,{97}}collegata Glcp e b-1,{99}}collegata ed è sostituita da rami di mannoglucano (Figura.). Per indagare sull'uso diCistanche desertichenella medicina popolare è stato valutato l'effetto della CDP-6 sui sistemi di cellule T e B. È stato scoperto che stimola leggermente la proliferazione dei linfociti T e B indotta da mitogeni.

Sperimentale

1. Procedure generali

La rotazione ottica è stata misurata con un polarimetro automatico W22-1S. Gli spettri IR sono stati determinati su uno spettrometro Perkin-Elmer 599B. L'analisi GC è stata eseguita su uno strumento Agilent HP6890N, dotato di un rilevatore FID. La GC-MS è stata eseguita su uno strumento Finnigan Trace GC-MS. L'omogeneità e il Mr di CDP-6 sono stati stimati dalla curva di calibrazione del volume di eluizione dei destrani standard, che è stata eseguita su

un apparato Agilent serie 1100 con una colonna Shodex KS-805.1 spettri H NMR e 13C NMR sono stati registrati con uno strumento INOVA-500. Il contenuto proteico è stato analizzato con il metodo di Bradford (Andre et al. 1975). I monosaccaridi sono stati analizzati per quanto riguarda il loro alditolo acetato dopo che erano stati idrolizzati (2 M TFA, 2 ore, 110°C), ridotti e acetati. Gli idrolizzati sono stati analizzati mediante TLC su una lastra di gel di silice contenente il 5% di sodio diidrogeno fosfato in BuOH-EtOAc-alcol isopropilico-HOAC––H2Opiridina (3,5: 10: 6: 3,5: 3: 3) e gli zuccheri sono stati rilevati spruzzando con orcinolo -H2SO4. Gli acetati di alditolo risultanti sono stati analizzati mediante GLC utilizzando una colonna capillare HP-5 (30 m 0,32 mm). CDP-6 è stato metilato con il metodo Ciucanu, seguito da idrolisi ed è stato analizzato come acetato di alditolo parzialmente metilato mediante GC-MS. Dopo idrolisi parziale, i prodotti sono stati dializzati e separati, ottenendo due polimeri, CDP-6-1 e CDP-6–2.

2. Materiale vegetale

La pianta è stata raccolta nella provincia della Mongolia Interna in Cina nell'agosto 2001 ed è stata identificata da Hu-Biao Chen, Dipartimento di Medicina Naturale, Scuola di Scienze Farmaceutiche, Centro di Scienze della Salute dell'Università di Pechino. Un esemplare di voucher [E-1-(9)] di questa pianta è stato depositato presso la School of Pharmaceutical Sciences, Università di Pechino. 3. Estrazione, isolamento e purificazione del polisaccaride CDP-6 Lo stelo diCistanche deserticheYC Ma (1500 g) è stato estratto con il 95% di etanolo (6 L) a riflusso. Il residuo insolubile in etanolo essiccato è stato macerato tre volte con acqua distillata fredda per 12 ore. L'estratto di acqua fredda è stato filtrato e il filtrato centrifugato. Dopo precipitazione con quattro volumi di EtOH (agitando e stando per 24 h a 4°C), si ottiene il prodotto precipitato (35,5 g). La proteina nel precipitato è stata rimossa con il metodo di Savage. Dopo dissoluzione in acqua distillata, il residuo (25,5 g) è stato dializzato e liofilizzato (resa: 10,6 g). Il polisaccaride grezzo (8 g) è stato sciolto in acqua distillata (100 mL, 8% p/v) e separato utilizzando una colonna DEAE (70 5 cm, il gradiente di 0–2 M NaCl, per 1,5 L). Si è ottenuta una frazione eluita con acqua (600 mg). Un campione (250 mg) è stato purificato mediante cromatografia a permeazione di gel su colonna su colonne Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 mL, 5 mL per frazione). Frazioni di CDP-6 (1500–1600 ml) sono state raggruppate, dializzate e liofilizzate. Dopo essere stato dissalato da Sephadex G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) è stato ottenuto e determinato come picco singolo mediante HPSGC.

Riconoscimento:L'autore ringrazia il Dr. Baomei Shao e il Prof. Xiaoming Gao, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center, per aver misurato l'attività immunomodulante della CDP-6.