Cistanche deserticola polisaccaridi attenua la nefropatia diabetica nei topi influenzando la flora intestinale e inibendo la via di segnalazione del recettore 4/fattore nucleare-κB ⅱ

2,5 Effetto dei CDP sulla patologia del colon nei topi C57BL/6J

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Come mostrato nella Figura 2, la colorazione H&E ha rivelato che la struttura del tessuto del colon dei topi normali era normale, le cripte erano ordinatamente e strettamente disposte, il numero era grande e le cellule epiteliali non avevano ovvie degenerazione e spargimento. Al contrario, i topi DN hanno mostrato un evidente spargimento di cellule epiteliali del colon, l'infiltrazione di cellule infiammatorie, il danno alle cellule di cripta, la scomparsa della struttura ghiandolare intestinale e l'aumento della permeabilità. Dopo 4 settimane di intervento CDPS, le condizioni patologiche di cui sopra si sono riprese a vari gradi.

I risultati della colorazione AB-PAS hanno mostrato che, rispetto al gruppo di controllo, il numero di cellule di calice non impegnate nel colon dei topi del gruppo modello era significativamente ridotto e la secrezione della proteina del muco acido era significativamente aumentata; Il numero di cellule di calice non impegnate nel colon del gruppo di controllo era il più grande; Rispetto al gruppo modello, è stata ridotta la secrezione della proteina del muco acido colico nel gruppo CDPS-H.

Fig. 2 Effetto dei CDP sui cambiamenti istopatologici del colon nei topi DN esaminati dalla colorazione H&E e AB-PAS

2,6 Effetto dei CDP sulla flora intestinale di topi C57BL/6J

Gli effetti dei CDP sugli indicatori biochimici e i risultati patologici dei topi DN sono stati analizzati in modo completo e sono stati selezionati i contenuti del colon dei topi nel gruppo CDPS-H con la migliore efficacia complessiva per la ricerca flora intestinale.

2.6.1 Diagramma Venn della variante di sequenza di amplicon (ASV) come mostrato nella Figura 3, rispetto al gruppo di controllo, l'abbondanza relativa delle specie di flora intestinale nei topi del gruppo modello è diminuita e l'abbondanza relativa è migliorata dopo il trattamento con CDPS.

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2.6.2 Analisi della diversità alfa, come mostrato nella Tabella 6, rispetto al gruppo di controllo, è diminuito l'indice Chao1 della flora intestinale dei topi del gruppo modello. Dopo l'intervento di CDPS, l'indice CHAO1 è aumentato, ma non vi era alcun significato statistico, indicando che i CDP possono cambiare la struttura della flora intestinale aumentando il numero totale di specie. L'indice di copertura è vicino a 1, indicando che i risultati del sequenziamento possono sostanzialmente riflettere la vera situazione del campione. Non vi era alcuna differenza statisticamente significativa in Shannon, Simpson, Copertura e Pielou _ e indice tra i gruppi, indicando che la ricchezza e la diversità delle specie delle comunità ambientali in ciascun gruppo erano buone e la copertura delle colonie era coerente e uniformemente distribuita.

Fig. 3 Diagramma di Venn di distribuzione ASV

Tabella 6 Indici alfa-diversity del microbiota intestinale nei topi nei gruppi di controllo, modello e CDPS (n=6)

2.6.3 Analisi della diversità beta

Come mostrato nella Figura 4, attraverso l'analisi della diversità beta, l'analisi dei componenti principali (PCA) può distinguere tre gruppi di campioni nello spazio tridimensionale, indicando che ci sono differenze significative nella flora intestinale di questi tre gruppi di campioni. Il gruppo modello e il gruppo di controllo sono separati lungo l'asse PC2 e il gruppo CDPS-H si trova tra il gruppo modello e il gruppo di controllo, vicino al gruppo di controllo.

Fig. 4 Diversità beta della flora intestinale nei topi nei gruppi di controllo, modello e CDPS (n=6)

2.6.4 Effetti dei CDP sulla flora intestinale dei topi C57BL/6J

2.6.4.1 Livello di phylum

Come mostrato nella Figura 5, rispetto al gruppo di controllo, l'abbondanza relativa di Firmicutes nel gruppo modello è aumentata in modo significativo, l'abbondanza relativa di Bacteroidota e Verrucomicrobia è diminuita in modo significativo e il rapporto di abbondanza relativa (B/F) dei batteriidete a Firmicutes è diminuita. Rispetto al gruppo modello, i CDP hanno aumentato in modo significativo l'abbondanza relativa di batteteroidete e verrucomicrobia, ha ridotto l'abbondanza relativa di firmicuti e ha aumentato il valore B/F, che era più vicino al valore B/F del gruppo di controllo.

Fig. 5 grafici a barre dell'abbondanza relativa della flora intestinale a livello di phylum (n=6)

2.6.4.2 Livello del genere

L'istogramma della composizione di abbondanza di specie ai primi 30 livelli di generi (Figura 6) mostra che ci sono differenze nella flora intestinale dei topi nel gruppo modello e nel gruppo CDPS-H. Esistono 16 diversi generi batterici tra il gruppo modello e il gruppo di controllo; Esistono 8 diversi generi batterici tra il gruppo CDPS-H e il gruppo modello; 5 generi batterici nell'area sovrapposta possono essere i generi batterici che i CDP possono migliorare la nefropatia diabetica (Figura 7). Come si può vedere dalla Tabella 7, a livello di genere nella flora intestinale del topo, rispetto al gruppo di controllo, l'abbondanza relativa di allobaculum nel gruppo modello era significativamente ridotta e l'abbondanza relativa di Roseburia, Romboutsia, Ruminococcus _ Torques _<0.05) was increased. ; Compared with the Model group, the relative abundance of Roseburia, Romboutsia, Ruminococcus_torques_group and RF39 (P＜0.05) decreased in the CDPs-H group; the relative abundance of Allobaculum increased (P＜0.05).

Fig. 6 grafico a barre dell'abbondanza relativa della flora intestinale a livello del genere (n=6)

Fig. 7 Venn Diagramma della flora intestinale a livello del genere (n=6)

Tabella 7 Effetti dei CDP sull'abbondanza relativa di generi microbici intestinali differenziali tra i gruppi di controllo, modello e CDPS (n=6)

2.6.4.3 Effetto dei CDP sull'espressione del colon ZO -1 e Occludin

Come mostrato nella Figura 8 e nella Tabella 8, rispetto al gruppo di controllo, i livelli di espressione relativa di ZO -1 e le proteine ​​dell'occludina nel tessuto del colon dei topi nel gruppo modello erano significativamente ridotti (p <0. 01); Rispetto al gruppo modello, l'intervento CDPS ad ogni dose potrebbe essere significativamente aumentato i livelli di espressione relativa delle proteine ​​-1 e occludin<0.01).

Fig. 8 Espressione di ZO -1 e occludina nel tessuto del colon dei topi da ciascun gruppo (n=3)

Tabella 8 Livelli di espressione relativa di ZO -1 e occludina nel tessuto del colon dei topi da ciascun gruppo (n=3)

Materie prime cistanche

2,7 Effetto dei CDP sull'espressione della proteina di segnalazione renale TLR4/NF-κB

Come mostrato nella Figura 9 e nella Tabella 9, rispetto al gruppo di controllo, l'espressione relativa della proteina TLR4 nel tessuto renale dei topi nel gruppo modello e i rapporti di P-NF-κBP65/NF-κB p65 e PI κBα/I κBα sono stati significativamente aumentati. Alto (p<0.01); compared with the Model group, the relative expression of TLR4 protein and p-NF-κBp65/NF-κB p65 and p-I κBα/I κBα in the kidney tissue of mice in the CDPs-M and CDPs-H groups The ratios were significantly reduced (P＜0.01, P＜0.05).

Fig. 9 Analisi Western blot dell'espressione proteica correlata alla via di segnalazione TLR4/ NF-κB nel tessuto renale dei topi da ciascun gruppo (n=3)

Tabella 9 Livelli di espressione relativa delle proteine ​​correlate alla via di segnalazione TLR4/NF-κB nel tessuto renale dei topi da ciascun gruppo (n=3)