Cistanche: produzione di ossido nitrico indotta da echinacoside nelle cellule endoteliali: ruoli del recettore degli androgeni e del percorso PI3K‑Akt

Contatto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

LI GU, dANHONG LIAN, YIMEI ZHENG, WEI ZHOU, JINLEI GU e XIN LIU

introduzione

CistancheHoffmg. Et Link è un'erba parassita perenne di un genere della famiglia delle Orobanchaceae. ErbaCistanche, lo stelo diCistanche deserticoY.c. MA eCistanche tubulosa(Schenk) R. Weight, sono stati usati come agente tonico per il trattamento di insufficienza renale, impotenza, leucorrea morbosa e costipazione senile (1), che possono essere dovuti al suo effetto di regolazione degli ormoni sessuali o simili agli androgeni (2).Echinacoside(EcH; c35H46O20;

peso molecolare, 786,73; Fig. 1), è uno dei glicosidi feniletanoidi (PhGs) isolati dagli steli di HerbaCistanchee mostra molteplici proprietà biologiche, inclusi effetti antiossidanti, antietà, antinfiammatori, epatoprotettivi e neuroprotettivi (3). Indagini farmacologiche moderne hanno dimostrato che vari costituenti di HerbaCistanche, inclusi EcH, acteoside, kankanose, kankanoside F e cistanoside F, mostrano attività vasorilassante (4).

L'endotelio è un regolatore critico del sistema vascolare e l'ossido nitrico (NO) è un importante fattore di rilassamento rilasciato dalle cellule endoteliali. Diffondendosi nelle cellule muscolari lisce, l'NO attiva la guanilato ciclasi, aumenta i livelli di guanosina monofosfato ciclico (cGMP) e quindi attiva le protein chinasi cGMP-dipendenti (PKG) per promuovere il rilassamento della muscolatura liscia (5). È stato precedentemente dimostrato che EcH a 350-400 µM agisce direttamente sulla muscolatura liscia vascolare e inibisce la proliferazione indotta dall'ipossia nelle cellule muscolari lisce dell'arteria polmonare di ratto (6), mentre 30-300 µM EcH ha causato vasorilassamento acuto nell'endotelio- anelli intatti in modo dipendente dalla concentrazione e una maggiore produzione di cGMP nella muscolatura liscia del corpo cavernoso degli anelli aortici contratta dalla fenilefrina (7). Aprendo i canali NO-cGMP-PKG-BKca nelle cellule muscolari lisce, 100 o 300 µM di EcH hanno soppresso la contrazione indotta dalla noradrenalina nelle arterie polmonari dei ratti, in particolare negli anelli privi di endotelio (8). Le cellule endoteliali sono regolatori chiave della funzione cardiovascolare e, in diversi casi, è stato riscontrato che il rilassamento endoteliale-dipendente era dovuto a una sostanza trasferibile, come l'NO, rilasciata dall'endotelio (9). Tuttavia, il meccanismo molecolare a monte della produzione di NO indotta da EcH nelle cellule endoteliali vascolari richiede ulteriori indagini.

Nell'endotelio vascolare, la generazione di NO è principalmente mediata dalla NO sintasi endoteliale (eNOS). Diversi gruppi hanno dimostrato che la via del fosfatidilinositolo {0}}chinasi (PI3K) attiva la serina treonina protein chinasi B (Akt), che provoca la fosforilazione diretta di eNOS alla serina 1177 (Ser1177) (10). Il recettore degli androgeni (AR) è un membro della sottofamiglia del recettore nucleare s3, che modifica canonicamente l'espressione genica. È coinvolta la localizzazione dell'AR alle caveole nella membrana cellulare

la regolazione non genomica della funzione delle cellule endoteliali o dell'espressione genica innescando la cascata c-Src/PI3K/Akt, che alla fine si traduce nella fosforilazione di eNOS e nella produzione di NO (11). Nelle cellule endoteliali aortiche umane, è stato riportato che il testosterone attiva la segnalazione di PI3K/Akt e induce rapidamente la produzione di NO a causa dell'interazione diretta di AR e della subunità p85 di PI3K sul sistema cardiovascolare (12). È stato riportato che EcH aggrava i sintomi correlati alla carenza ormonale ed esercita i suoi effetti simili agli androgeni a causa del legame competitivo con l'AR invece del testosterone (2). Pertanto, il presente studio ha ipotizzato che il percorso PI3K/Akt possa essere coinvolto nella produzione di NO attraverso la fosforilazione di eNOS dipendente da AR indotta da EcH. Lo scopo del presente studio era di valutare i seguenti effetti di EcH: i) Induzione della produzione di NO e fosforilazione di eNOS; ii) coinvolgimento di AR nella fosforilazione di eNOS; e iii) attivazione della via PI3K/Akt nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEcs), un noto modello sperimentale per lo studio della regolazione delle funzioni delle cellule endoteliali e dell'angiogenesi (13).

Materiali e metodi

Sostanze chimiche e reagenti.EcH (purezza, 92,5 percento) è stato ottenuto dal National Drug Reference Standards in National Institute for the Food and Drug Control. Gli anticorpi contro p-Akt (Ser473; cat. n. ab8805), Akt (cat. n. ab81283), p-eNOS (Ser1177; cat. n. ab184154) ed eNOS (cat. n. ab76198) sono stati acquistati da Abcam. Gli inibitori di nilutamide e IcI 182780 sono stati ottenuti da Sigma-Aldrich; Merck KGaA. L-NAME è stato acquistato da Adamas-Beta, Ltd. e wortmannin è stato acquistato da Pribolab.

Cellula cultura e droga trattamento.Gli HUVEc sono stati ottenuti da Sciencell Research Laboratories Inc. e coltivati ​​in mezzo di cellule endoteliali (EcM; Sciencell Research Laboratories) con il 5% (v/v) di siero bovino fetale (FBS; Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc.) e l'1% di cellule endoteliali supplemento di crescita (ECGS) a 37˚C (5 percento di CO2 e 95 percento di umidità) (14). Al raggiungimento della confluenza, le cellule sono state digerite con tripsina e piastrate in EcM con 1% FBS e 1% EcGS. Per tutti gli esperimenti, gli HUVEc sono stati piastrati a una concentrazione di 1x104/ml e fatti crescere fino a raggiungere la confluenza. Prima del trattamento con EcH o altri stimolatori, le cellule sono state incubate in EcM senza rosso fenolo senza FBS ed EcGS per 6 ore per indurre

arresto della crescita. Negli esperimenti inibitori, gli HUVEc sono stati pre-incubati con vari antagonisti o inibitori, tra cui 10 µM nilutamide, 10 µM IcI 182780, 0,5 mM L-NAME o 5 µM wortmannin, per 30 min, con o senza ECH, a 37˚C. In tutti i gruppi, compreso il controllo, dMSO è stato utilizzato come solvente a concentrazioni uguali dello 0,001 percento.

Misura di intracellulare NOproduzione.

I cambiamenti relativi nella concentrazione di NO citosolico negli HUVEc sono stati monitorati utilizzando la sonda NO fluorescente DAF‑FM (Cayman Chemical Company), come riportato in precedenza (12). In breve, le cellule sono state caricate con 5 µM di diacetato DAF‑FM per 20 minuti a 37 ° C in una piastra per microtitolazione nera e risciacquate più volte con PBS (pH 7,4). La fluorescenza è stata determinata a lunghezze d'onda di eccitazione ed emissione di 495 e 515 nm, rispettivamente, utilizzando un lettore di micropiastre fluorescente (Biotek Synergy H4; BioTek Instruments, Inc.) e un microscopio invertito compatto (Nikon eclipse Ts2R; Nikon Corporation).

Occidentale macchia analisi.Come riportato in precedenza (15), i monostrati confluenti di cellule sono stati lavati due volte in PBS ghiacciato e lisati con tampone RIPA (P0013d; Beyotime Institute of Biotechnology). La concentrazione proteica nel surnatante è stata misurata utilizzando il metodo del dosaggio dell'acido bicinconinico (16). Successivamente, sono stati caricati 30 µg di proteine ​​per corsia, separati utilizzando gel di poliacrilammide al 10% e trasferiti su membrane di polivinilidene difluoruro. Le membrane sono state bloccate con latte scremato al 5% per 1 ora a 25°C. Dopo incubazione con anticorpi monoclonali contro Akt (1:1,{12}} diluizione), p-Akt (1:500 diluizione), eNOS (1:2,{18}} diluizione) o p-eNOS (1 :1,{22}} diluizione) a 4˚C durante la notte, le membrane sono state lavate con TBST (contenente lo 0,1 percento di Tween-20) 4 volte per circa 15 minuti per lavaggio a 25˚C. Successivamente, le membrane sono state incubate con anticorpi secondari coniugati con perossidasi di rafano (diluizione 1:5,{33}}; anticorpo anti-topo, n. cat. A0216, o anticorpo anti-coniglio, n. cat. A0208, Beyotime Institute di biotecnologia) per 1 ora a 25˚C e rilevati utilizzando un kit di chemiluminescenza potenziato (n. cat. 32209, Thermo Fisher Scientific, Inc.). Le intensità di banda sono state quantificate utilizzando il software di analisi del gel Image J, versione 1.8.0_112 (National Institutes of Health).

Piccolo interferendo (si) RNA preparazione e trasfezione.I lunghi RNA a doppio filamento sono stati sintetizzati dall'mRNA bersaglio dell'AR e dal recettore degli estrogeni (ER) con le sequenze mostrate nella Tabella I. Le condizioni per il knockdown del siRNA prevedevano la trasfettazione di HUVEC a una confluenza del 70 percento mantenuta in non antimicrobici terreno di coltura in piastre di coltura rivestite di collagene da 60 mm. La trasfezione di 5 nM AR-siRNA o 10 nM ER -siRNA con il reagente Lipofectamine 3000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) è stata eseguita separatamente, secondo i protocolli del produttore. L'efficienza della trasfezione è stata valutata mediante analisi PcR quantitativa di trascrizione inversa (RT-qPcR), come precedentemente riportato (17). Le condizioni di ciclo termico erano le seguenti: 10 min a 95˚C; 40 cicli di 95˚C per 5 sec e 60˚C per 1 min, e una curva di fusione a 95˚C per 15 sec, 60˚C per 1 min e 95˚C per 15 sec; per ogni campione sono state eseguite tre repliche biologiche indipendenti. Gli esperimenti successivi sono stati condotti 48 ore dopo la trasfezione. Le coppie di primer sono state progettate utilizzando il software Primer Premier v5.0 (PREMIER Biosoft) con le seguenti sequenze: AR avanti, 5'-GGTTAcAccAAAGGGcTAGAA-3' e retromarcia, 5'-GAcTTGTAGAGAGAcAGGGTAGA-3'; ER avanti, 5'-ccAGTAccA ATGAcA AGG GAAG -3' e retromarcia, 5'-TcAGGAccAGAcTccATAA-3'; e GAPdH avanti, 5'-cAGGGcTGcTTTTAAcTcTGGTAA-3' e indietro, 5'-GGTGGAATcATATTGGAAcATGT-3'.

Statistico analisi.Tutti i dati sono presentati come media ± deviazione standard. I confronti statistici tra i gruppi sono stati eseguiti utilizzando il test di Kruskal-Wallis o l'ANOVA a due vie con il test post hoc di Tukey per confronti multipli. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Risultati

ECH induce NO produzione e eNOSfosforilazione.Come mostrato in Fig. 2A e B, 1 µM ECH ha aumentato significativamente la produzione intracellulare di NO negli HUVEc rispetto alle cellule di controllo negativo, mentre l'effetto stimolatore di EcH è stato attenuato al livello di controllo dal pretrattamento con L-NAME. Per ottenere la concentrazione ottimale, la fosforilazione di eNOS è stata testata 60 minuti dopo il trattamento con EcH a concentrazioni

di {{0}}, 0.01, 0.1, 1 e 10 µM. I risultati hanno rivelato che EcH a concentrazioni di 0,01‑10 µM può indurre significativamente la fosforilazione di eNOS a Ser 1177 in modo dipendente dalla concentrazione, con la massima fosforilazione di eNOS osservata a 10 µM di induzione di EcH (Fig. 2c e d). Inoltre, la fosforilazione di eNOS a Ser1177 è stata esaminata mediante analisi western blot a 0, 5, 15, 30, 60 e 120 minuti dopo l'incubazione con 1 µM EcH. È stato osservato che la fosforilazione di eNOS è stata rapidamente attivata da EcH a 5 minuti e ha continuato ad aumentare fino a 30 minuti di incubazione (Fig. 2E e F). Successivamente, nonostante il trattamento con EcH, l'entità relativa della fosforilazione di eNOS è rimasta stabile da 30 min in poi; pertanto, EcH non ha influenzato l'espressione totale di eNOS (Fig. 2c ed E).

AR media Indotto da ECH NO produzione e eNOSgli effetti interferenti di AR-siRNA-1 ed ER -siRNA-2 sono stati i più efficaci nell'inibire l'espressione di AR ed ER negli HUVEc nel presente studio (Fig. 3). Successivamente, sono stati applicati un antagonista per l'analisi di inibizione della funzione di AR e siRNA per l'analisi di perdita di funzione di AR per valutare il coinvolgimento di AR nell'attivazione di eNOS indotta da EcH e nella produzione di NO. Come mostrato in Fig. 4A, 1 µM ECH ha aumentato significativamente la produzione di NO negli HUVec (P<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789,="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibi-="" tion="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphoryla-="" tion="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ECH si attiva il PI3K/Att percorso.Nel presente studio, la fosforilazione di Akt a Ser473 è stata testata 60 min dopo l'incubazione di EcH a concentrazioni di 0, 0.01, 0.1 , 1 e 10 µM. I risultati hanno indicato che EcH (0.{10}} µM) può indurre significativamente la fosforilazione di Akt. I livelli di espressione relativa di p-Akt hanno raggiunto il picco a 1 e 10 µM del trattamento EcH (Fig. 5A e B). Inoltre, la fosforilazione di Akt è stata esaminata mediante analisi western blot a 0, 5, 15, 30, 60 e 120 minuti dopo l'aggiunta di 1 µM EcH alle colture HUVEc. Come mostrato in Fig. 5c e d, EcH ha aumentato rapidamente la fosforilazione di Akt dopo 5 minuti di incubazione e il livello proteico massimo di p-Akt è stato osservato a 60 minuti. Al contrario, EcH non ha influenzato l'espressione totale di Akt (Fig. 5A e c). Inoltre, per studiare il potenziale effetto della via PI3K sulla fosforilazione di eNOS, gli HUVEc sono stati pretrattati con l'inibitore PI3K wortmannin prima dell'applicazione di EcH. È stato riscontrato che Wortmannin riduce la produzione di NO indotta da EcH ai livelli basali (Fig. 5E). Un fenomeno simile è stato osservato utilizzando la microscopia a fluorescenza durante l'esame della fluorescenza DAF‑FM indotta da EcH (Fig. 5F). Inoltre, la wortmannina può avere la capacità di abolire la rapida fosforilazione di eNOS negli HUVEc (Fig. 5G e H). I suddetti risultati suggeriscono che EcH può attivare la fosforilazione di eNOS e la produzione di NO attraverso la via PI3K/Akt.

Discussione

EcH è un composto naturale isolato da HerbaCistanche, con diverse proprietà farmacologiche. In precedenza era stato dimostrato che EcH esercitava un effetto di rilassamento vascolare endotelio-dipendente aprendo i canali NO-cGMP-PKG-BKca nelle cellule muscolari lisce dei vasi sanguigni (7,8). I risultati attuali forniscono la prova che l'ECH ha esercitato un'attivazione AR-dipendente di eNOS per indurre la produzione di NO con il coinvolgimento della via di segnalazione PI3K/Akt nelle cellule endoteliali vascolari.

Essendo lo strato più interno della parete del vaso, l'endotelio può percepire e rispondere rapidamente ai cambiamenti nel flusso sanguigno, con conseguente trasmissione del segnale alle cellule muscolari lisce sottostanti per regolare il tono vascolare (18). È stato ampiamente riportato che esistono molteplici composti vasodilatatori di derivazione endoteliale, con la sostanza più prototipicaessendo NO, formato dall'isoforma endoteliale di eNOS, che si traduce in fosforilazione (19). In condizioni normali, eNOS rimane inattivo quando legato alla caveolina e si attiva con la successiva successione di eventi a livello endotelialecellule: i) eNOS si dissocia dalla caveolina-1 e si associa a ca2 più /caM; ii) la proteina da shock termico (HSP)90 promuove eNOSdimerizzazione e favorisce una formazione sterica per reclutare Akt; e iii) la calcineurina defosforila Thr495 per rafforzare lo stato di attivazione (20). Nel presente studio, la produzione di NO è stata significativamente aumentata negli HUVEC trattati con 1 µM ECH. Questo fenomeno era simile ai risultati precedenti, in cui EcH aumentava il rilascio di NO e stimolava la sintesi di cGMP negli anelli aortici toracici di ratto (7). Inoltre, due siti di fosforilazione, Ser1177 e Thr495, sembrano essere particolarmente importanti per la regolazione dell'attività di eNOS (20), e il presente studio ha rivelato che EcH ha indotto la fosforilazione acuta di eNOS a Ser1177 in modo dipendente dalla concentrazione. Inoltre, gli stimoli associati agli effetti sui livelli della proteina eNOS determinano principalmente la stabilità dell'mRNA di eNOS e, se lo stimolo viene mantenuto per un periodo di tempo più lungo, la trascrizione dell'mRNA di eNOS avviene tramite la protein chinasi attivata dal mitogeno e il fattore nucleare κB (20). Nel loro insieme, queste osservazioni indicano che l'attivazione di eNOS a Ser1177 è responsabile della sintesi di NO indotta da EcH.

Inoltre, un numero crescente di studi ha dimostrato che l'AR è espressa nelle cellule endoteliali in un certo numero di tessuti umani, il che suggerisce un ruolo potenziale per gli androgeni e i loro analoghi, che agiscono attraverso processi mediati dall'AR, nella modulazione dell'endotelio umano omeostasi cellulare (21). Nella via non classica PI3K/Akt, AR può attivare PI3K interagendo direttamente con la subunità regolatrice PI3K p85 (22). Il presente studio ha dimostrato che un antagonista AR o siRNA AR diminuiva la produzione di NO e la fosforilazione di eNOS indotta da EcH in HUVEcs. È stato precedentemente riportato che gli estrogeni inducono la fosforilazione di eNOS e stimolano la produzione di NO attraverso la classica attivazione di ER nelle cellule endoteliali (23), e la somministrazione di ECH migliora significativamente l'espressione di ER nell'utero (24). Tuttavia, nel presente studio, l'effetto di AR era più evidente rispetto a quello di ER sull'attivazione di eNOS indotta da EcH e sulla produzione di NO. Inoltre, è stato osservato che EcH ha causato la produzione acuta di NO in pochi minuti tramite l'attivazione di eNOS coinvolta con AR negli HUVEcs, che è coerente con la natura non genomica della risposta nelle cellule endoteliali. L'AR è associato alle proteine ​​dello scaffolding, tra cui HSP90, HSP70 e chinasi Src, nel citoplasma, e può essere trasportato alla membrana dal complesso AR entro 5 minuti dal trattamento con testosterone (23). Sulla base della strategia 'target fishing', HSP90 è stato identificato come target accoppiato a PhGs, il che indicava che EcH può facilitare la dissociazione dell'AR dalle proteine ​​dello scaffolding (25). Un altro studio ha suggerito che, nell'ipotalamo, EcH può combinarsi con la tasca AR degli aminoacidi Met-894 e Val-713 e inibire il trasporto di AR citoplasmatico al nucleo (26). Tuttavia, il meccanismo sottostante attraverso il quale EcH media la traslocazione citoplasmatica dell'AR alla membrana richiede ulteriori indagini. Pertanto, sono necessarie ulteriori ricerche per chiarire il meccanismo attraverso il quale EcH ottiene l'attivazione di eNOS dipendente da AR e come può essere associato al legame con HSP90 nelle cellule endoteliali vascolari.

La via PI3K/Akt è una delle cascate di segnalazione più importanti, la cui attivazione è indotta dalla produzione di fosfatidilinositolo-3,4,{3}}trifosfato per legare il dominio di omologia della plestrina N-terminale del Ser/ Thr chinasi Akt. Ciò facilita il reclutamento di Akt nella membrana plasmatica (27). La via PI3K/Akt può svolgere un ruolo importante nel controllo del rilassamento NO-dipendente indotto da EcH.

Il presente studio ha rivelato che la produzione di NO indotta da EcH è stata significativamente ridotta quando le cellule sono state incubate con l'inibitore PI3K wortmannin. Un precedente rapporto ha dimostrato che 15 mg/kg di EcH attivavano la via di segnalazione PI3K/Akt nelle cellule del midollo osseo soppresse dal 5‑fluorouracile (28). Nel presente studio, gli inibitori di PI3K hanno ridotto significativamente la fosforilazione di eNOS indotta da EcH a Ser1177. Inoltre, l'attività di Akt era prevalentemente regolata da vie di regolazione a monte, in particolare dalla fosforilazione PI3K-dipendente a Ser473 (20). Nel presente studio, EcH ha indotto la fosforilazione di Akt a Ser473 in modo dose-dipendente; allo stesso modo, uno studio precedente ha dimostrato che 5, 10 o 20 µM di EcH esercitavano un effetto cardioprotettivo contro il trattamento di anossia/riperfusione in modo dose-dipendente, aumentando potenzialmente p-Akt e SLc8A3 (29). La regolazione trascrizionale del gene Akt rimane in gran parte sconosciuta (30); pertanto, il presente studio si è concentrato sugli effetti regolatori post-trascrizionali di EcH su Akt. Prendendo in considerazione i suddetti risultati, si è dedotto che l'applicazione di EcH agli HUVEcs può portare all'attivazione della via PI3K/Akt, che fosforila eNOS e, successivamente, aumenta la produzione di NO.

In conclusione, EcH è un prodotto naturale principalmente isolato da HerbaCistanche.Il potenziale meccanismo alla base della produzione di NO indotta da EcH nelle cellule endoteliali può includere quanto segue (Fig. 6): i) EcH agisce come un ligando funzionale di AR che è localizzato alle caveole nella membrana cellulare; ii) PI3K si lega al dominio idrofobico di Akt a Ser473 e facilita il reclutamento di Akt nella membrana cellulare; iii) il reclutamento delle cascate PI3K/Akt innesca la fosforilazione di eNOS AR-dipendente; e iv) la generazione di NO è mediata da eNOS nelle cellule endoteliali. L'osservazione che EcH induce la produzione di NO attraverso la fosforilazione AR-dipendente di eNOS con il coinvolgimento della via PI3K/Akt può contribuire a un'ulteriore comprensione degli effetti vasorilassanti di EcH. Inoltre, l'EcH che prende di mira i percorsi NO derivati ​​​​dall'endotelio può essere dovuto a effetti non genomici. Pertanto, il presente studio può aiutare a chiarire i meccanismi attraverso i quali EcH esercita i suoi effetti farmacologici per prevenire le malattie cardiovascolari.

Ringraziamenti

Non applicabile.

Finanziamento

Il presente studio è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (concessione n. 81503333).

Disponibilità di dati e materiali

I set di dati generati e analizzati durante il presente studio sono disponibili presso l'autore corrispondente su ragionevole richiesta.

Autori' contributi

LG e XL hanno ideato e progettato gli esperimenti. dL e YZ hanno eseguito gli esperimenti. WZ e JG hanno analizzato i dati. LG ha redatto il manoscritto. XL ha rivisto e modificato il manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

1202 GUet al: L'ECCINACOSIDE INDUCE LA PRODUZIONE DI OSSIDO NITRICO MEDIANTE IL PERCORSO PI3K/AKT AR-DIPENDENTE

Etica approvazione e consenso a partecipare

Non applicabile.

Paziente consenso per pubblicazione

Non applicabile.

Competere interessi

Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.

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