I glicosidi feniletanoidi di Cistanche Tubulosa inducono l'apoptosi nelle cellule di carcinoma epatocellulare H22 attraverso vie di segnalazione sia estrinseche che intrinseche
Mar 15, 2022
Per ulteriori informazioni:ali.ma@wecistanche.com
Yuan Pengfei1 et al
Astratto
Sfondo: Cistanche tubulose(Schenk) R. Wight è una medicina tradizionale cinese che parassita le radici della pianta di Tamarix ed è stata usata per trattare l'impotenza maschile, la sterilità, la debolezza del corpo e come tonico. Tuttavia, il suo effetto antitumorale sul carcinoma epatocellulare è ancora sfuggente. Qui, abbiamo studiato l'effetto antitumorale diCistanche tubulose glicosidi feniletanoidi(CTPG) su cellule di carcinoma epatocellulare H22 sia in vitro che in vivo e suoi meccanismi.
Metodi:La morfologia, la viabilità,apoptosi, ciclo cellulare e potenziale di membrana mitocondriale (Δψm) delle cellule H22 sono stati analizzati rispettivamente mediante microscopia invertita, test MTT e citometria a flusso. L'espressione e l'attivazione di proteine nelapoptosipercorso sono stati rilevati da Western blot. L'effetto antitumorale in vivo è stato valutato in un modello murino tumorale stabilito utilizzando topi Kunming maschi.
Risultati:Il trattamento con CTPG ha soppresso significativamente la crescita delle cellule H22 in modo dose e tempo dipendente, che era correlato all'aumentoapoptosie arresto del ciclo cellulare nelle fasi G0/G1 e G2/M. Inoltre, è stata osservata condensazione cromosomica nelle cellule H22 trattate con CTPG. Il trattamento con CTPG ha aumentato significativamente il rapporto Bax/Bcl-2, ha ridotto Δψm e ha migliorato il rilascio del citocromo c. I livelli di caspasi-8 e caspasi-9 scissi nelle vie di segnalazione sia estrinseche che intrinseche sono stati significativamente aumentati rispetto alla caspasi{8}} e{9}} attivate in sequenza per scindere PARP. Infine, CTPG ha inibito la crescita delle cellule H22 nei topi e migliorato il tasso di sopravvivenza dei topi tumorali.
Conclusioni: Questi risultati hanno suggerito che il CTPG ha soppresso la crescita delle cellule H22 sia per via estrinseca che intrinsecaapoptosipercorsi.
Parole chiave: Cistanche tubulose, Glicosidi feniletanoidi, Apoptosi, Via di segnalazione, Modello murino tumorale
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Sfondo
Il cancro al fegato si è classificato al sesto posto per incidenza di cancro e al quarto per decessi per cancro in tutto il mondo. Inoltre, si è classificato quarto per incidenza di cancro e primo per mortalità per cancro nei paesi con un basso indice sociodemografico [1]. In Cina, il cancro al fegato è la terza causa di morte per cancro nel 2015 [2]. Più del 90 per cento dei tumori primari del fegato sono carcinoma epatocellulare (HCC) nel mondo [3]. Attualmente, la resezione epatica è l'opzione principale per la terapia dell'HCC. Tuttavia, meno del 30% dei pazienti con carcinoma epatocellulare ha soddisfatto i criteri della resezione epatica curativa e il tasso di sopravvivenza globale di 5-anno è ancora basso del 35-50% a causa dell'alto tasso di recidiva [4, 5] . La disponibilità di opzioni terapeutiche per i pazienti con carcinoma epatocellulare da intermedio ad avanzato è molto limitata. Sorafenib, un farmaco a bersaglio molecolare, è stato approvato dalla FDA come trattamento di prima linea per l'HCC avanzato. Tuttavia, sorafenib prolunga solo circa 3 mesi di sopravvivenza e il tasso di risposta è inferiore al 4% [6, 7]. È urgente sviluppare nuovi farmaci o strategie contro l'HCC.
La medicina tradizionale cinese (MTC) da sola o combinata con altre strategie è stata utilizzata per trattare l'HCC e ha mostrato i benefici clinici tra cui il tempo di sopravvivenza prolungato, il miglioramento della qualità della vita, la riduzione delle reazioni avverse e così via [8, 9]. Cistanche, una sorta di MTC, ha varie funzioni biologiche, come antiossidante, antinfiammatoria, antinvecchiamento e neuroprotezione [10, 11].Glicosidi feniletanoidisono stati considerati i principali componenti attivi di Cistanche, che hanno diverse attività tra cui antiossidante, antinfiammatoria, epatoprotezione e neuroprotezione [12-15]. Il nostro gruppo lo ha segnalatoCistanche tubulose glicosidi feniletanoidi(CTPG) potrebbe indurreapoptosinel melanoma B16-cellule F10 e inibiscono la crescita di tumori nei topi [16]. In questo studio, abbiamo misurato l'effetto antitumorale del CTPG sulle cellule HCC H22 sia in vitro che in vivo e ne abbiamo studiato i meccanismi. Abbiamo trovato quel CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)indottoapoptosinelle cellule H22 attraverso vie di segnalazione sia estrinseche che intrinseche e ha soppresso la crescita dei tumori H22 nei topi.
Metodi
Linea cellulare
Le cellule di carcinoma epatocellulare H22 di topo sono state ottenute dallo Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, Xinjiang University (Urumqi, Xinjiang, China) e coltivate in terreno RPMI 1640 (Gibco) integrato con 100 U/ml di penicillina e 100 ug/ml streptomicina e siero bovino fetale inattivato al calore del 10% (Gibco) a 37 gradi in un'atmosfera umidificata con il 5% di CO2.
Saggio MTT
CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)è stata acquistata da Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, Cina) e dai principali composti di CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)sono stati qualificati e quantificati mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni [16]. La vitalità cellulare è stata valutata da 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolio bromuro (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , USA). Le cellule H22 sono state inoculate in 96-piastre a pozzetti a una densità di 2 × 104 cellule in 100 ul di mezzo per pozzetto e coltivate a 37 gradi. Dopo 24 ore, le cellule sono state trattate con diverse concentrazioni di CTPG (0,100, 200, 300 e 400 ug/ml) o 0,3 percento di DMSO (uguale a quella di 400 ug/ml CTPG) rispettivamente per 24, 48 e 72 ore. Dopo centrifugazione a 1000 rpm per 7 minuti, il surnatante è stato scartato e a ciascun pozzetto sono stati aggiunti 100 ul di soluzione MTT (5 mg/ml in PBS). Le piastre sono state incubate a 37 gradi per 4 ore e sono stati aggiunti 100 ul di DMSO per sciogliere i cristalli di formazano formati. I valori OD490 sono stati rilevati da un 96-lettore di micropiastre (Bio-Rad Laboratories, CA, USA). La vitalità cellulare è stata calcolata secondo la formula: Vitalità cellulare ( percentuale )=(trattata con OD/non trattata) x 100 percento.
Cistanche tubulosa glicosidi feniletanoidi
Rilevazione dell'apoptosi
Le cellule H22 sono state trattate con diverse concentrazioni di CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)({{0}}, 100, 200, 300 e 400 ug/ml) o 0,3 percento di DMSO per 24 h, quindi colorato con annessina VFITC/ioduro di propidio (PI)ApoptosiKit di rilevamento (YEASEN, Cina) secondo le istruzioni del produttore. I campioni sono stati analizzati mediante citometria a flusso (BD FACSCalibur, USA).
Rilevazione del potenziale di membrana mitocondriale
Le cellule H22 sono state trattate con diverse concentrazioni di CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)(0, 200 e 400 ug/ml) per 24 h, quindi colorato con il colorante JC-1 permeabile alla membrana (Beyotime, Cina) per 20 minuti a 37 gradi . Dopo aver lavato due volte con il tampone JC-1, i campioni sono stati risospesi con 300 ul di tampone JC-1 e analizzati mediante citometria a flusso (BD FACSCalibur, USA).
Analisi del ciclo cellulare
Le cellule H22 sono state inoculate in piastre di coltura da 60 mm e trattate con diverse concentrazioni di CTPG (0, 100,200, 300 e 400 ug/ml) o 0,3% di DMSO per 24 ore . Tutte le cellule sono state raccolte e lavate due volte con PBS. Le cellule sono state fissate in etanolo ghiacciato al 70% a -20 gradi per 2 ore e lavate due volte con PBS, quindi risospese in 300 ul di tampone di colorazione ioduro di propidio/RNasi (BD Biosciences). Dopo 10 minuti a temperatura ambiente, i campioni sono stati raccolti mediante citometria a flusso (BD FACSCalibur, USA) e la distribuzione del ciclo cellulare è stata analizzata con il software ModFit LT 3.0.
glicosidi feniletanoidiinCistanche tubulose
Colorazione Hoechst 33.258
I cambiamenti morfologici dei nuclei delle cellule H22 sono stati analizzati mediante colorazione Hoechst 33.258 del colorante legante il DNA permeabile alla membrana. Le cellule H22 sono state seminate in una 6-piastra a pozzetti alla concentrazione di 1 × 105 cellule/pozzetto in un mezzo da 2 ml. Dopo il 60% ~ 70% di confluenza, le cellule sono state trattate con CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)(0, 100, 200, 300 e 400 ug/ml) per 24 ore. Le cellule sono state raccolte e fissate con paraformaldeide ghiacciata al 4% a 4 gradi per 10 minuti. Dopo il lavaggio con PBS, le cellule sono state colorate con Hoechst 33.258 (Beyotime, Cina) a 4 gradi per 10 minuti. I campioni sono stati osservati da un microscopio a fluorescenza invertito (Nikon Eclipse Ti-E, Giappone).
Macchia occidentale
Anti-caspase-3, anti-cleaved caspase-3, Anti-Bcl-2 e anti-Bax sono stati acquistati da Beyotime Biotech Co., Ltd. (Shanghai, Cina). Anti-caspase-7, anti-caspase-7, anti-caspase-8, anti-caspase-8, anti-caspase-9, anti cleaved-caspase-9, anti-PARP, anti-cleaved PARP, antimouse IgG-HRP e anti-rabbit IgG-HRP sono stati acquistati da Cell Signaling Technology. L'anti{26}}actina è stata acquistata da Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Pechino, Cina).
Le cellule H22 sono state trattate con diverse concentrazioni di CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)({0}}, 100, 200, 300 e 400 ug/ml) o 0,3% DMSO per 24 ore. Le cellule sono state raccolte e lisate con la soluzione di lisi cellulare RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) per 30 minuti su ghiaccio. I campioni sono stati centrifugati (12,{10}} g per 15 minuti a 4 gradi) per raccogliere i supernatanti e le concentrazioni proteiche sono state misurate con il kit BCA (Thermo Fisher Scientific, USA). Una uguale quantità di proteine in ciascun campione è stata isolata dal 12% di SDS-PAGE e trasferita su membrane PVDF (Biosharp, Cina). Dopo il blocco con il tampone TBST contenente il 5% di latte scremato, le membrane sono state incubate con anticorpi primari corrispondenti e anticorpi secondari coniugati rispettivamente con perossidasi di rafano (HRP). Dopo il lavaggio con TBST, le proteine target sono state rilevate dal kit di analisi ECL (Beyotime, Cina).
Animali e dichiarazione etica
6-8 topi maschi Kunming vecchi di settimane sono stati acquistati dall'Animal Laboratory Center, Xinjiang Medical University (Urumqi, Xinjiang, Cina). I topi sono stati tenuti in una struttura standard per animali dell'Università dello Xinjiang a temperatura controllata e sottoposta a ciclo leggero. Tutti gli studi sugli animali sono stati condotti secondo le linee guida del Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università dello Xinjiang. Il protocollo è stato approvato dal Comitato per l'etica degli esperimenti sugli animali dello Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering (BRGE-AE001), Xinjiang University.
Studio sui topi tumorali
Per l'induzione del modello murino tumorale, i topi Kunming maschi sono stati iniettati per via sottocutanea con 1 × 10 6 cellule H22 in 100 ul PBS nel fianco destro. Dopo 3 giorni, i topi sono stati divisi casualmente in 3 gruppi (7 topi/gruppo). Al gruppo di controllo è stato iniettato 0,1 ml di DMSO per via sottocutanea attorno al tumore. I gruppi CTPG-200 e CTPG-400 sono stati iniettati per via sottocutanea con 200 o 400 mg/kg di CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)in 0,1 ml di DMSO intorno al tumore. I topi sono stati trattati ogni 2 giorni per un massimo di 21 giorni. Le dimensioni del tumore sono state misurate utilizzando calibri fino a 25 giorni e il volume del tumore è stato calcolato secondo la formula: volume del tumore (mm3)=(lunghezza×larghezza2)/2. Dopo 25 giorni, la sopravvivenza dei topi tumorali è stata monitorata ogni giorno fino alla fine di questo studio.
analisi statistica
La significatività statistica è stata calcolata mediante l'analisi unidirezionale della varianza tra i gruppi di trattamento e di controllo. Tutti i dati sono stati espressi come media ± deviazione standard (DS). p < 0.05="" è="" stato="" considerato="" statisticamente="">
Risultati
CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)ridotto la vitalità delle cellule H22 in vitro
Per esplorare l'effetto antitumorale del CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)su HCC, le cellule H22 sono state trattate con diverse concentrazioni di CTPG (0, 100, 200, 300 e 400 ug/ml) in vitro. Dopo 24 ore, la morfologia delle cellule H22 è stata osservata utilizzando un microscopio invertito. Abbiamo scoperto che la morfologia delle cellule H22 è stata drasticamente modificata dal trattamento CTPG. Con l'aumento della concentrazione di CTPG, le cellule sono diventate piccole e rotonde e anche il numero di cellule è stato notevolmente ridotto (Fig. 1a). Il test MTT è stato utilizzato per analizzare la vitalità delle cellule H22 dopo il trattamento con CTPG rispettivamente per 24, 48 e 72 ore. CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)ha ridotto significativamente la vitalità delle cellule H22 in modo dose-dipendente e dipendente dal tempo (Fig. 1b). CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)a 300 ug/ml è arrivato al miglior tasso inibitorio (Fig. 1c). I valori di IC50 di CTPG per le cellule H22 sono 236 ug/ml a 24 ore e 169,8 ug/ml a 48 ore.
CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)apoptosi indotta nelle cellule H22
Per indagare se la ridotta vitalità delle cellule H22 è mediata dall'induzione diapoptosi, le cellule H22 sono state trattate con diverse concentrazioni di CTPG (0, 100, 200, 300 e 400 ug/ml) per 24 ore e colorate con PI e annessina V. I risultati della citometria a flusso hanno mostrato che il CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)significativamente indottoapoptosidi cellule H22 (compresi quelli precoci e tardiviapoptosi) in modo dose-dipendente (Fig. 2a). Sebbene l'alta dose di CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)anche significativamente aumentata la necrosi delle cellule H22, la necrosi gioca un ruolo minore nell'inibizione della crescita delle cellule H22 a causa della sua proporzione inferiore (8,3 percento) rispetto a quella diapoptosi(52,6 per cento). Inoltre, le proteine totali delle cellule H22 sono state isolate dopo CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)il trattamento e le espressioni del linfoma a cellule B anti-apoptotico 2 (Bcl-2) e della proteina X associata a BCL-2-proapoptotica (Bax) sono state rilevate mediante Western blot. I dati di scansione in scala di grigi hanno mostrato che i livelli di espressione di Bax e Bcl-2 erano rispettivamente aumentati e diminuiti. Il rapporto Bax/Bcl-2 è stato notevolmente aumentato (Fig. 2b). Questi risultati suggeriscono che il CTPG induceapoptosinelle cellule H22.
CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)induce la condensazione cromosomica e l'arresto del ciclo cellulare nelle cellule H22
È stato riportato che il danno al DNA e l'arresto del ciclo cellulare indotto dai farmaci possono inibire la crescita e la causa delle cellule tumoraliapoptosinelle cellule tumorali [17, 18]. Per rilevare la morfologia dei nuclei nelle cellule H22 dopo CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)trattamento per 24 ore, le cellule H22 sono state colorate da Hoechst 33.342 e osservate mediante microscopia a fluorescenza invertita. CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)le cellule trattate hanno mostrato un aumento dose-dipendente della cromatina dei nuclei brillantemente condensata, mentre le cellule non trattate hanno mostrato nuclei colorati in modo omogeneo (Fig. 3a). La distribuzione del ciclo cellulare nelle cellule H22 è stata ulteriormente analizzata mediante colorazione PI dopo il trattamento con CTPG per 24 ore. Come mostrato in Fig. 3b, CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)il trattamento ha aumentato significativamente la proporzione di cellule della fase G0/G1- e G2/M e ha ridotto significativamente la proporzione delle cellule della fase S, suggerendo che il CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)indotto l'arresto di fase G0/G1 e G2/M nelle cellule H22. L'alta dose di CTPG ha anche aumentato significativamente la proporzione di cellule sub G1.
CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)diminuzione del potenziale della membrana mitocondriale e aumento del rilascio del citocromo c
la via mitocondriale-dipendente gioca un ruolo importante nell'induzione diapoptosi[19, 20]. I cambiamenti nel potenziale della membrana mitocondriale (Δψm) possono essere
monitorato dalla colorazione JC-1 dovuta all'aggregato JC-1 (fluorescenza rossa) può disintegrarsi in monomero (fluorescenza verde) con la riduzione di Δψm [21]. Dopo CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)trattamento per 24 ore, le cellule H22 sono state colorate dal colorante JC-1. I dati della citometria a flusso hanno mostrato che la fluorescenza rossa nel canale FL-2 e la fluorescenza verde nel canale FL-1 erano significativamente diminuite e aumentate al CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)trattamento. La proporzione di cellule PE-FITC plus è stata significativamente aumentata (Fig. 4a), suggerendo che CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)ridotto il Δψm nelle cellule H22. Ciò è coerente con l'aumento del rapporto Bax/Bcl-2. Di conseguenza, abbiamo osservato che il rilascio del citocromo c era significativamente aumentato su CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)trattamento (Fig. 4b). Questi risultati hanno indicato che il CTPG potrebbe indurre parzialmenteapoptosinelle cellule H22 attraverso una via mitocondriale (intrinseca).
Il CTPG ha attivato la via della caspasi e ha impedito la riparazione del DNA
Successivamente, l'attivazione della caspasi indotta da CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)attraverso le vie di segnalazione sia estrinseca che intrinseca è stata analizzata. Dopo CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)trattamento per 24 ore, le proteine totali sono state isolate dalle cellule H22 e i livelli di pro-e caspasi scisse sono stati rilevati mediante Western blot. Rispetto al controllo non trattato o DMSO, CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)il trattamento ha aumentato significativamente non solo il livello di caspasi scissa-8 (via estrinseca) ma anche il livello di caspasi scissa-9 (via intrinseca) (Fig. 5). In sequenza, le caspasi attivate-8 e -9 hanno scisso la pro-caspasi a valle-3 e -7 osservate in Fig. 5. La caspasi attivata-3 ha scisso il DNA enzima di riparazione della poli (ADP-ribosio) polimerasi (PARP) per prevenire la riparazione del DNA e accumulare danni al DNA come osservato in Fig. 3a. Questi risultati hanno indicato che CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)indottoapoptosinelle cellule H22 attraverso vie di segnalazione sia estrinseche che intrinseche.
CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)sopprime la crescita di H22 HCC in vivo e migliora il tasso di sopravvivenza dei topi tumorali
Infine, l'effetto antitumorale del CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)su HCC è stato valutato in un modello murino tumorale, che è stato stabilito mediante iniezione sottocutanea di cellule H22. Dopo 3 giorni di iniezione di cellule H22, i topi tumorali sono stati trattati con CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)8 volte. Il peso corporeo dei topi e le dimensioni del tumore sono stati monitorati nei punti temporali indicati. Come mostrato in Fig. 6a, il peso corporeo dei topi in ciascun gruppo non ha differenze significative, suggerendo che le dosi selezionate di CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)non hanno effetti collaterali evidenti. È interessante notare che la crescita del tumore nei topi trattati con 200 mg/kg e 400 mg/kg di CTPG è stata significativamente inibita (Fig. 6b). Inoltre, le due dosi di CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)il trattamento ha notevolmente migliorato la sopravvivenza dei topi tumorali (3/7, 3/7) rispetto al gruppo di controllo (0/7) alla fine dell'esperimento (Fig. 6b). Abbiamo anche scoperto che il CTPG ha migliorato significativamente la proliferazione degli splenociti isolati dai topi Kunming maschi in modo dose-dipendente (Fig. 6c), suggerendo che il CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)ha un effetto immunostimolante.
Discussione
La MTC è stata utilizzata per il trattamento di varie malattie, inclusi i tumori, per una lunga storia. È stato riportato che la MTC può indurreapoptosiin diversi tipi di cellule tumorali attraverso vie di segnalazione sia estrinseca (mediata dal recettore della morte) che intrinseca (dipendente dai mitocondri) per esercitare effetti antitumorali [22-25]. I due percorsi possono attivare rispettivamente la caspasi-8 e -9 [24, 26]. Qui abbiamo trovato quel CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)ha soppresso in modo significativo la crescita delle cellule H22 attraverso l'induzione dell'apoptosi e l'arresto del ciclo cellulare. I livelli di caspasi scissa-8 e -9 sono stati significativamente sovraregolati da CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)trattamento, suggerendo che le vie di segnalazione sia estrinseca che intrinseca erano coinvolte nell'induzione diapoptosi. Il nostro studio precedente ha mostrato che CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)apoptosi indotta nelle cellule del melanoma B16-F10 da una via mitocondriale-dipendente che aumentava il livello della caspasi scissa-9 ma non della caspasi-8 [16]. CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)potrebbe attivare vie di segnalazione distinte in diversi tipi di cellule tumorali.
L'integrità della membrana mitocondriale è strettamente regolata dai membri della famiglia di proteine BCL-2 tra cui Bax e Bcl-2 [27, 28]. Il rapporto tra Bax e Bcl-2 gioca un ruolo fondamentale nella dipendenza dai mitocondriapoptosipercorso [29]. Nelle cellule H22 trattate con CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi), il rapporto Bax/Bcl-2 era significativamente sovraregolato, il che potrebbe causare la riduzione di Δψm e il rilascio di citocromo c osservato in questo studio. Di conseguenza, la pro-caspase-9 è stata scissa e attivata. Infine, gli iniziatori della caspasi attiva-8 e -9 hanno attivato il carnefice della caspasi-3 per fendere PARP per prevenire la riparazione del DNA. Presi insieme, questi risultati hanno suggerito che il CTPG fosse indottoapoptosinelle cellule H22 attraverso vie di segnalazione sia estrinseche che intrinseche. In un modello murino tumorale, il CTPG ha soppresso significativamente la crescita dell'HCC H22 e ha notevolmente migliorato la sopravvivenza dei topi tumorali. È interessante notare che CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)ha promosso in modo dose-dipendente la proliferazione di splenociti dai topi Kunming, il che è coerente con il nostro studio precedente [16]. Questi risultati hanno suggerito che il CTPG potrebbe sopprimere la crescita dell'HCC H22 nei topi sia attraverso l'effetto antitumorale diretto che il potenziamento immunitario indiretto.
Cistanche tululosaprodotti
Conclusioni
CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)soppresso la crescita delle cellule H22 sia in vitro che in vivo e indottoapoptosinelle cellule H22 attraverso vie di segnalazione sia estrinseche che intrinseche. Questi dati indicavano che CTPG(Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi)potrebbe essere un potenziale candidato per il trattamento dell'HCC.
Abbreviazioni
Bax: proteina X associata a BCL-2-; Bcl-2: linfoma a cellule B 2; CTPG:Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidi; HCC: carcinoma epatocellulare; HRP: perossidasi di rafano; MTT: 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-yl)-2, 5-difeniltetrazolio bromuro; PARP: enzima di riparazione del DNA della poli(ADP-ribosio)polimerasi; MTC: medicina tradizionale cinese; Δψm: potenziale di membrana mitocondriale
Finanziamento
Questo lavoro è stato sostenuto dal progetto di introduzione di talenti di alto livello della regione autonoma uigura dello Xinjiang a JL, dalla sovvenzione della Fondazione nazionale di scienze naturali cinese (31460241) a JL e dal fondo per l'avvio del dottorato dell'Università dello Xinjiang (da BS160261 a XW e BS150236 a YL).
Disponibilità di dati e materiali
I dati grezzi per questo studio sono disponibili su richiesta ragionevole all'autore corrispondente.
Contributi degli autori
JL e JL hanno progettato gli esperimenti. PY, JL, AA e YY hanno eseguito gli esperimenti. LX, XW e YL hanno analizzato i dati. PY, JL e JL hanno scritto il manoscritto. Tutti gli autori hanno contribuito e approvato il manoscritto finale.
Approvazione etica
Lo studio sugli animali è stato approvato dal Comitato per l'etica degli esperimenti sugli animali dello Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, Xinjiang University
Interessi conflittuali
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
Nota dell'editore
Springer Nature rimane neutrale riguardo alle rivendicazioni giurisdizionali nelle mappe pubblicate e nelle affiliazioni istituzionali.
Dettagli dell'autore
1Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, College of Life Science and Technology, Xinjiang University, 666 Shengli Road, Urumqi, Xinjiang 830046, Cina.2College of Life Science, Xinjiang Normal University, 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Xinjiang, Cina.3Ospedale dei tumori affiliato della Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Cina.
Cistanche tululosaprodotti
Da: 'Cistanche tubulose glicosidi feniletanoidiindurreapoptosinelle cellule di carcinoma epatocellulare H22 attraverso vie di segnalazione sia estrinseche che intrinseche ' di Pengfei Yuan1 et al
---Yuan et al. Medicina complementare e alternativa BMC (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1
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