La Cistanche Tubulosa protegge i neuroni dopaminergici attraverso la regolazione dell'apoptosi e del fattore neurotrofico derivato dalle cellule gliali: in vivo e in vitro-Ⅱ

Test comportamentali

Test di nuoto (Zhu et al., 2014)

La coordinazione del movimento del corpo nei topi è stata misurata mediante il test di nuoto. I topi sono stati posti individualmente in un serbatoio d'acqua (25 cm di altezza e 10 cm di diametro) contenente 10 cm di acqua e testati in un ambiente silenzioso per registrare la loro durata stazionaria per 5 minuti.

Test in campo aperto (Kawai et al., 1998)

L'attività locomotoria è stata misurata utilizzando il test in campo aperto. I topi sono stati testati in un ambiente silenzioso e scarsamente illuminato e posizionati individualmente in un contenitore acrilico trasparente di 30 cm x 30 cm x 15 cm con una griglia di separazione di 6 cm x 6 cm sul fondo. Ai topi sono stati concessi 10 minuti per adattarsi all'ambiente e poi la deambulazione del numero di griglia e la frequenza di allevamento dei singoli topi sono state misurate cinque volte consecutive per ottenere valori medi.

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Campionamento del tessuto cerebrale

Prima del campionamento dei tessuti, i topi sono stati nutriti ad libitum con libero accesso all’acqua e hanno ricevuto un intervento farmacologico per 14 giorni consecutivi. Quattro topi in ciascun gruppo sono stati selezionati e rapidamente decapitati. Il SN (Bregma: −2,75 mm −2,92 mm) di ciascun animale è stato isolato e posto sul ghiaccio. I tessuti cerebrali sono stati risciacquati con una soluzione ghiacciata di cloruro di sodio al 0,9% per rimuovere eventuale sangue e asciugati su carta da filtro prima di conservarli a -80◦C. Quattro topi di ciascun gruppo sono stati anestetizzati per via intraperitoneale e i loro topi sono stati aperti. Un ago per infusione è stato quindi inserito nel ventricolo sinistro di ciascun animale. Per rimuovere il sangue nel sistema circolatorio, l'appendice atriale destra è stata tagliata e l'animale è stato infuso con soluzione salina normale a 4°C fino a quando il fegato è diventato pallido per garantire la successiva perfusione. Una volta che l'effluente dell'atrio destro è diventato limpido, ciascun animale è stato perfuso con fissativo paraformaldeide al 4%. Dopo la perfusione, il tessuto cerebrale di ciascun animale è stato quindi sezionato attentamente e post-fissato in paraformaldeide al 4% per 24 ore. I tessuti cerebrali fissati sono stati quindi sciacquati sotto acqua corrente, disidratati in una serie graduata di soluzioni di etanolo e purificati in una soluzione di xilene. Questa è stata seguita dall'immersione in paraffina e dall'inclusione.

Cambiamenti della quantità DA misurata mediante HPLC

Il SN nanopolverizzato di ciascun gruppo è stato posto in un bagno di ghiaccio contenente una soluzione di cloruro di sodio al 0,9% (rapporto 1:9). Il tessuto cerebrale è stato omogeneizzato utilizzando un disgregatore cellulare ad ultrasuoni e centrifugato a 1200 giri al minuto per 20 minuti a 4°C per ottenere il surnatante. Per HPLC, è stata utilizzata una colonna Hypersil AA-ODS (2,1 mm × 200 mm, 5 µm) alla temperatura della colonna di 30°C. Il rilevamento della fluorescenza è stato eseguito a 280 nm λex e 340 nm λem. Il volume di iniezione era di 10 µl.

Espressione di TH, GDNF, GFR 1 e Ret rilevati mediante immunoistochimica

Sezioni di paraffina (5 µm di spessore) di tessuto cerebrale individuale sono state isolate da ciascun animale e poste in un bagno di acqua calda a 40◦C per appiattirle e farle aderire ai vetrini. Tutti i vetrini di tessuto sono stati incubati in un forno a 60°C per 3-6 ore, seguiti da deparaffinazione con xilene, disidratazione con gradiente di etanolo e recupero dell'antigene mediante incubazione in un tampone di acido citrico e riscaldamento in un microonde per 20 minuti. I vetrini con i tessuti sono stati poi incubati in una soluzione di H2O2 al 3% a temperatura ambiente per 10 minuti. Dopo essere stati lavati tre volte in PBS, i vetrini con tessuto sono stati incubati con siero normale in una camera chiusa a temperatura ambiente per 20 minuti. La colorazione immunoistochimica è stata condotta secondo le istruzioni del produttore. Per calcolare il valore della densità ottica integrata nelle cellule colorate positivamente è stato utilizzato un analizzatore di immagini Motic Med 6.0.

Analisi Western Blot nei tessuti cerebrali dei topi

Questo studio ha valutato l'espressione proteica di tirosina idrossilasi (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 e Bax. Il lisato cerebrale di ciascun gruppo è stato omogeneizzato per 3{{10}} minuti su ghiaccio, seguito da centrifugazione a bassa temperatura, 20,000 giri al minuto, a 4 ◦C per 5 minuti per raccogliere il surnatante. I campioni proteici sono stati separati sotto pressione costante utilizzando un gel SDS-PAGE all'10% come descritto sopra. La concentrazione dell'anticorpo primario: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml e Bax 0,11 mg/ml. La procedura era la stessa di cui sopra.

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Analisi statistica

Questo studio ha utilizzato il software statistico SPSS 20.0 per l'elaborazione e l'analisi dei dati. I valori dei parametri sono stati espressi come media ± deviazione standard (¯x ± S). ANOVA è stata utilizzata per l'analisi dei dati a fattore singolo. Per confrontare i gruppi è stato utilizzato l'LSD o il test Games-Howell. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

RISULTATI

I componenti attivi della nanopolvere di C. tubulosa

Nell'intervallo di scansione da 200 a 400 nm, l'ECH in C. tubulosa e il VER in 330 nm hanno avuto il picco di assorbimento massimo, che è apparso entro 20 minuti. L'ICA presentava picchi di assorbimento massimi a 270 nm ed è apparso dopo 20 minuti (Figura 1A). I risultati hanno mostrato che i campioni negativi non hanno interferito con il rilevamento (Figura 1B). I campioni e il controllo presentavano gli stessi picchi cromatografici mentre il campione negativo non ne presentava alcuno. Ciò ha dimostrato che gli altri ingredienti presenti nel campione non hanno interferito con il componente misurato. Inoltre, i tre componenti e i picchi adiacenti possono raggiungere la linea di base della separazione e il grado di separazione è maggiore di 1,5.

La nanopolvere di C. tubulosa ha ridotto l'MPP+ -citotossicità indotta nelle cellule MES23.5

La vitalità delle cellule MES23.5 è stata significativamente ridotta con l'aumento delle concentrazioni di MPP+. La Figura 2F mostra la significativa citotossicità di diverse concentrazioni di MPP+.

La nanopolvere di C. tubulosa ha ridotto la citotossicità indotta da MPP+-e ha migliorato la vitalità delle cellule MES23.5. La Figura 2G mostra che dosaggi di nanopolvere di C. tubulosa di 10–250 µg/ml esercitavano effetti protettivi dose-dipendenti sulle cellule MES23.5 trattate con MPP+-.

Effetto citomorfologico della nanopolvere di C. tubulosa

Le cellule MES23.5 normali avevano una buona adesione cellulare ed erano a forma di fuso con confini cellulari e sinapsi chiari. Le cellule MES23.5 danneggiate dall'MPP+- mostravano scarsa adesione e restringimento cellulare e molte erano sospese nel mezzo con sinapsi contratte. Queste cellule erano aggregate, rimpicciolite e rotonde con vacuoli all'interno, e i nuclei erano disintegrati o collassati. La nanopolvere di C. tubulosa in diversi dosaggi ha migliorato la citomorfologia delle cellule MES23.5 in diversi gradi migliorando l'adesione cellulare e la clearance sinaptica del gruppo veicolo. Le cellule MES23.5 nel gruppo di trattamento con C. tubulosa ad alte dosi hanno mostrato una morfologia simile al normale gruppo di controllo (Figure 2A-E).

Effetto della nanopolvere di C. tubulosa sull'espressione del TH e sull'apoptosi nelle cellule

La Figura 3 mostra una riduzione significativa nell'espressione della proteina TH nel gruppo veicolo. L'espressione della proteina TH è aumentata in modo diverso nei gruppi trattati con dosaggi diversi di C. tubulosa. Tuttavia, il test con l’LSD ha mostrato che non vi era alcuna differenza significativa tra i tre gruppi trattati.

La Figura 4 mostra i risultati della valutazione dell'apoptosi mediante citometria a flusso. Il tasso di apoptosi nel gruppo veicolo era significativamente più alto rispetto agli altri gruppi. Le cellule trattate con dosaggi diversi di nanopolvere di C. tubulosa hanno mostrato diversi gradi di declino nel tasso di apoptosi rispetto al gruppo veicolo. Le cellule nel gruppo di trattamento con C. tubulosa a dosaggio medio e alto hanno avuto il miglioramento più significativo nel tasso di apoptosi rispetto agli altri gruppi di trattamento con C. tubulosa. Il test con l’LSD ha mostrato che non vi era alcuna differenza significativa tra i due gruppi trattati, ma una differenza significativa anche tra il gruppo a basso dosaggio.

Effetto della nanopolvere di C. tubulosa sull'espressione della proteina Bcl2/Bax nelle cellule

La Figura 5 mostra che l'espressione della proteina Bcl2 nelle cellule del gruppo veicolo era significativamente inferiore rispetto al gruppo di controllo normale. Al contrario, l'espressione della proteina Bax nelle cellule del gruppo veicolo era significativamente più elevata rispetto al normale gruppo di controllo. I gruppi di trattamento con C. tubulosa hanno mostrato un aumento dell'espressione della proteina Bcl2 e una diminuzione dell'espressione della proteina Bax nelle cellule MES23.5 trattate con MPP+-. Tra i tre gruppi trattati si sono riscontrate differenze significative nel test dell’LSD. Questi effetti erano dose-dipendenti.

Test comportamentali

I risultati del test di nuoto hanno suggerito che i topi nel gruppo veicolo avevano durate stazionarie relativamente lunghe, che aumentavano nel tempo. Al giorno 14, i topi del gruppo veicolo avevano una durata stazionaria significativamente più lunga rispetto ai topi del gruppo di controllo normale. La durata stazionaria dei topi in

il dosaggio bassoC. tubulosagruppo di trattamento non era significativamente diverso da quello dei topi nel gruppo veicolo. Tuttavia, la durata stazionaria dei topi nel gruppo di trattamento con C. tubulosa ad alte dosi era significativamente inferiore a quella dei topi nel gruppo del veicolo.

I risultati del test in campo aperto suggeriscono che dopo il danno indotto da MPTP nei topi, i topi nel gruppo veicolo hanno dimostrato un calo significativo nella loro capacità di attività spontanea, come dimostrato dalla frequenza di allevamento. Dopo un 14-giorno di amministrazione diNanopolvere di C. tubulosa, i topi nei gruppi di trattamento a dose moderata e alta avevano frequenze di allevamento significativamente più elevate rispetto ai topi nel gruppo veicolo (Figure 6A, B).

Effetto della nanopolvere di C. tubulosa sul contenuto di DA nei topi

I cambiamenti nel contenuto di DA del SN sono stati determinati mediante HPLC. Si è constatato che il contenuto di DA nel cervello del gruppo veicolo era significativamente ridotto. Il contenuto di DA nel cervello dei topi PD nel gruppo di trattamento con C. tubulosa a basso dosaggio non differiva significativamente da quello dei topi nel gruppo veicolo. Tuttavia,Trattamento con C. tubulosaha aumentato i livelli di DA nel cervello dei topi PD in modo dose-dipendente. Il cervello dei topi PD trattati con C. tubulosa ad alte dosi aveva un contenuto DA significativamente più elevato rispetto al cervello dei topi nel gruppo veicolo (Figura 6C).

Effetto della nanopolvere di C. tubulosa sull'espressione del TH nei topi

Il numero di cellule TH-positive e il livello di espressione della proteina TH nel SN dei topi PD indotti da MPTP erano inferiori rispetto ai topi del gruppo di controllo. Dopo il trattamento con C. tubulosa, il numero di cellule TH-positive e il livello di espressione della proteina TH nel SN dei topi PD indotti da MPTP sono aumentati, con una differenza significativa tra il gruppo di trattamento con C. tubulosa ad alte dosi e il gruppo con veicolo mediante test dell'LSD; e c'erano differenze significative tra i tre gruppi trattati (Figura 7).

Effetto della nanopolvere di C. tubulosa sull'espressione proteica del GDNF e dei suoi recettori, GFR 1 e Ret nei topi

L'espressione proteica di GDNF e dei suoi recettori, GFR 1 e Ret, nelle cellule colorate positivamente, è stata valutata mediante immunoistochimica. L'analisi Western blot è stata utilizzata per valutare i livelli di espressione proteica nel SN dei diversi gruppi di topi. I risultati per i diversi gruppi erano simili utilizzando i due metodi di rilevamento. L'espressione di GDNF e delle sue proteine ​​recettrici, GFR 1 e Ret, nelle cellule colorate positivamente nel SN dei topi del gruppo veicolo, era significativamente inferiore rispetto ai topi del gruppo di controllo normale. Diversi dosaggi di trattamento con C. tubulosa hanno aumentato il numero di cellule GDNF, GFR 1- e Ret-positive (Figure 8A–S).

L'espressione proteica di GDNF, GFR 1 e Ret nel SN dei topi del gruppo veicolo era significativamente inferiore rispetto ai topi del gruppo di controllo. Aumentando le concentrazioni di trattamento diNanopotenza di C. tubulosaha aumentato significativamente l’espressione di queste proteine. L'espressione proteica di GDNF, GFR 1 e Ret nel SN dei topi nel gruppo di trattamento con C. tubulosa ad alte dosi era significativamente più alta rispetto ai topi nel gruppo veicolo (P< 0.01; Figures 8T, U). 

Effetto della nanopolvere di C. tubulosa sull'espressione proteica di Bcl2/Bax nei topi

L’espressione della proteina Bcl2 era significativamente ridotta e l’espressione della proteina Bax era significativamente aumentata nel SN dei topi del gruppo veicolo (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

DISCUSSIONE

PD e apoptosi

La malattia di Parkinson è una malattia neurodegenerativa. Secondo Zhang et al. (2005), la prevalenza è del 10,7% nella popolazione cinese di età superiore ai 55 anni e dell’1,67% in quella di età superiore ai 65 anni. Il numero di pazienti affetti da PD è aumentato ogni anno con l’accelerazione dell’invecchiamento globale, ponendo un pesante onere finanziario sulle famiglie dei pazienti. e la società in generale. Nel cervello, i neuroni dopaminergici sono coinvolti principalmente nella sintesi e nella secrezione di DA. Sono ampiamente distribuiti nel sistema nervoso centrale e localizzati principalmente nel SN (80%). Il TH è l’enzima limitante la velocità chiave per la sintesi del DA. Pertanto, l’inibizione dell’attività del TH riduce la sintesi del DA (Huot e Parent, 2007). I principali cambiamenti patologici e biochimici del PD sono l'apoptosi dei neuroni dopaminergici nel SN, una riduzione significativa della DA nigrostriatale e la formazione di corpi di Lewy nei neuroni dopaminergici (Dexter e Jenner, 2013). L'eziologia della malattia di Parkinson coinvolge fattori genetici associati, fattori ambientali e invecchiamento del sistema nervoso (Allam et al., 2005). La patogenesi della malattia di Parkinson rimane poco chiara nella medicina moderna. Dalla fine degli anni ’60, la terapia sostitutiva con levodopa è stata utilizzata con successo per il trattamento della malattia di Parkinson ed è stata riconosciuta come un importante punto di svolta nel trattamento della malattia. Tuttavia, l’applicazione a lungo termine di questa terapia provoca effetti collaterali e la terapia non tratta le cause alla base della malattia di Parkinson (Del Sorbo e Albanese, 2008). Pertanto, la ricerca attiva di nuovi farmaci o metodi di trattamento mirati alla protezione dei neuroni dopaminergici è fondamentale per il trattamento della malattia di Parkinson.

In studi precedenti, l'applicazione dell'etichettatura del nick end del dUTP mediata dalla deossinucleotidil transferasi terminale indicava che 0,6%–4,8% dei neuroni dopaminergici nel SN dei pazienti con PD mostravano apoptosi (Mochizuki et al., 1996). La microscopia elettronica ha mostrato caratteristiche apoptotiche, inclusa la condensazione cromatica e i corpi apoptotici nelle cellule dopaminergiche (Anglade et al., 1997). Tompkins et al. (1997) hanno eseguito un'analisi ultrastrutturale delle autopsie del tessuto cerebrale di pazienti con PD, AD e malattia diffusa a corpi di Lewy (DLBD). Hanno trovato corpi apoptotici nello strato denso del SN nei pazienti con malattia di Parkinson e DLBD, fornendo prove conclusive dell'apoptosi neuronale nella malattia di Parkinson e nelle malattie correlate. Pertanto, la riduzione o la soppressione dell'apoptosi nei neuroni dopaminergici è fondamentale per il trattamento della malattia di Parkinson.

Studi precedenti hanno dimostrato che l’MPTP induce sintomi simili alla malattia di Parkinson. L'MPTP attraversa la barriera ematoencefalica e viene metabolizzato dalle monoaminossidasi di tipo B negli astrociti. Viene successivamente convertito in MPP+ tossico, che si accumula nei mitocondri dei neuroni dopaminergici attraverso l'assunzione proteica del trasportatore DA. Genera così radicali liberi di ossigeno in eccesso che inibiscono l'attività del complesso I della catena respiratoria mitocondriale e la sintesi di ATP. Questi eventi promuovono ulteriormente la formazione di radicali liberi e reazioni di stress ossidativo e alla fine portano alla degenerazione e alla morte dei neuroni dopaminergici. Pertanto, questo studio ha utilizzato MPP+ per stabilire un veicolo in vitro nei neuroni dopaminergici MES23.5 e MPTP per indurre un topo veicolo per la verifica reciproca. Secondo i risultati del test MTT, MPP+ ha ridotto significativamente la vitalità delle cellule MES23.5, suggerendo che MPP+ era citotossico per i neuroni dopaminergici. I risultati hanno inoltre dimostrato che C. tubulosa ha potenziato efficacemente l'espressione delle proteine ​​anti-apoptotiche e ha inibito l'aumento dell'apoptosi indotta da MPP+-.

PD e GDNF

Il GDNF è un fattore neurotrofico isolato per la prima volta da Lin et al. (1993). Lin et al. (1993) hanno anche dimostrato che il GDNF ha effetti nutrizionali specifici sui neuroni dopaminergici nel mesencefalo dei ratti. GDNF, neurturina (NTN), persefina (PSP) e artemina (ART) costituiscono la famiglia GDNF. Sono proteine ​​secretorie strutturalmente simili e funzionalmente correlate (Kotzbauer et al., 1996; Baloh et al., 1998; Milbrandt et al., 1998; Woodbury et al., 1998).

Il recettore GDNF è costituito da due componenti. Il primo componente, GFR, è fissato alla membrana esterna del glicosilfosfatidilinositolo (GPI) e ancorato alla superficie della connessina. Il secondo componente è la proteina Ret. La ricerca ha dimostrato che esistono quattro diversi tipi di GFR: GFR 1, GFR 2, GFR 3 e GFR 4. GFR 1 è un recettore ad alta affinità del GDNF (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl et al., 2001). La proteina Ret è un recettore funzionale del GDNF. La molecola omodimerica di GDNF si lega direttamente al GFR 1 per formare complessi e interagisce con Ret, determinando la dimerizzazione e l'attivazione di Ret. A causa dell'autofosforilazione di Ret, Ret attiva diverse vie comuni di segnalazione del TH. In assenza della proteina Ret, GDNF provoca la fosforilazione proteica di MAPK, PI-3 e PLC-, oltre all'espressione dell'mRNA e all'attività funzionale di C-fos attraverso la sua proteina recettore, GFR 1 (He et al., 2008).

Gli studi hanno dimostrato che il GDNF ha avuto il più forte effetto protettivo sui neuroni dopaminergici (Rangasamy et al., 2010; Campos et al., 2012). Nei veicoli che utilizzano MPTP e 6-idrossidopamina (6-OHDA) per indurre danni nei neuroni dopaminergici, GDNF protegge i neuroni dopaminergici riducendo l'apoptosi e promuovendo la crescita assonale per indurre la differenziazione delle cellule staminali (Lucas et al., 2012; Littrell et al., 2013). Lin et al. (1993) hanno dimostrato che GDNF promuove specificamente la vitalità, la differenziazione e la crescita assonale dei neuroni dopaminergici per promuovere l'assorbimento di DA nei neuroni. Lo studio ha anche dimostrato che il GDNF non solo ha prevenuto la tossicità acuta, ma ha anche alleviato la tossicità a lungo termine di MPP+ o 6-OHDA nei neuroni dopaminergici, prevenendo inoltre la morte cellulare nelle cellule stressate o danneggiate (Yu et al., 2010). Inoltre, il GDNF ha promosso la proliferazione e la differenziazione delle cellule staminali neurali verso i neuroni dopaminergici nel mesencefalo (Lindsay, 1995) per salvare i neuroni dopaminergici dalla degenerazione retrograda (Hong-Juan et al., 2011).

Gli studi hanno dimostrato che l'espressione di GDNF nel SN era significativamente ridotta nei veicoli animali (Yang et al., 2010). Ciò suggerisce che potrebbe essere uno dei meccanismi di patogenesi nei ratti PD. L'iniezione di 5-15 µg/giorno di GDNF nel ventricolo laterale o nello striato di un animale veicolo indotto da MPTP per tre mesi consecutivi ha promosso la riparazione nigrostriatale del sistema dopaminergico nell'animale veicolo (Grondin et al., 2002). Studi sul trattamento con GDNF per la PD nei veicoli animali hanno dimostrato che l'iniezione intracerebrale di GDNF in diverse regioni del cervello, come il SN, il nucleo caudato e il ventricolo laterale, ha migliorato i disturbi del movimento associati ai modelli animali con PD, tra cui diminuzione dell'attività motoria, rigidità muscolare e tremore (Grondin et al., 2002). Tuttavia, il GDNF non può passare direttamente attraverso la barriera ematoencefalica. Pertanto, l’iniezione cerebrale locale di GDNF comporta rischi sostanziali e difficoltà nell’applicazione clinica. Le applicazioni per introdurre GDNF esogeno tramite microsfere a rilascio controllato, capsule a rilascio prolungato e geni virali sono ancora in fase di studio (Liang et al., 2010; Yang et al., 2010; Qiao et al., 2012). Date le limitazioni delle varie tecniche per introdurre GDNF esogeno nel cervello, gli agenti neuroprotettivi che promuovono il rilascio di GDNF endogeno sono significativi per l’applicazione clinica.

Pd eC. tubulosaNanopolvere

La malattia di Parkinson è più comune negli adulti di mezza età e negli anziani. La teoria della MTC ritiene che la malattia di Parkinson si localizzi principalmente nel cervello ed è dovuta principalmente a deficit di fegato e reni, oltre che a insufficienza di energia vitale e sangue. Secondo questa teoria, il trattamento della malattia di Parkinson dovrebbe quindi concentrarsi sul rinvigorimento dei reni e del midollo osseo.Yang et al. (2010)hanno utilizzato studi clinici randomizzati, in doppio cieco e controllati con placebo e hanno scoperto che la terapia combinata con Madopar e ricette tonificanti dei reni ha alleviato le disfunzioni motorie dei pazienti con malattia di Parkinson. Il risultato del trattamento è stato migliore rispetto ad una singola terapia con Madopar. L’efficacia del trattamento della monoterapia della MTC o della prescrizione di composti nel PD è stata confermata in modelli animali PD e applicazioni cliniche. Le applicazioni della MTC per tonificare i reni e promuovere la circolazione sanguigna hanno ridotto il dosaggio della monoterapia per la malattia di Parkinson utilizzando Madopar. Alcuni studi hanno suggerito che la medicina tradizionale cinese migliora i sintomi della malattia di Parkinson e protegge i neuroni dopaminergici, il che potrebbe essere strettamente correlato alla promozione dell’espressione endogena del GDNF (Hong-Juan et al., 2011; Qiao et al., 2012).

Il composto tonificante dei reni utilizzato in questo studio,C. tubulosananopolvere, contenutaCistanche, epimedio, ERizoma poligonato. La ricerca moderna suggerisce che la composizione chimica diCistancheè l'ECH, che protegge i neuroni dopaminergici nel SN nei topi PD indotti da MPTP e inibisce la riduzione del DA e del trasportatore DA (Zhao et al., 2010). Inoltre, previene la riduzione della DA 6-indotta dall'OHDA e protegge i neuroni dopaminergici striatali (Chen et al., 2007). Epimedium inibisce l'attivazione della caspasi-3 ed esercita ruoli neuroprotettivi (Liu et al., 2011). I flavonoidi epimedi promuovono efficacemente la proliferazione e la differenziazione delle cellule staminali neurali (Yao et al., 2010).

In questo studio,C. tubulosala nanopolvere ha antagonizzato l'aumento di MPP+-induce apoptosi in modo dose-dipendente. Ha migliorato significativamente l'espressione del TH nelin vitroveicolo e ha avuto significativi effetti anti-apoptotici nei neuroni dopaminergici. I topi veicolo indotti da MPTP hanno mostrato disturbi comportamentali e un'espressione di TH significativamente ridotta nei tessuti del mesencefalo e nei livelli di DA, che sono caratteristiche patologiche tipiche del PD. Diversi dosaggi diC. tubulosala nanopolvere ha accorciato la durata stazionaria, ha migliorato le attività autonome, ha migliorato i disturbi comportamentali, ha aumentato i livelli di DA nel cervello e ha aumentato l’espressione di TH nei veicoli. Questi risultati lo hanno suggeritoC. tubulosala nanopolvere ha esercitato effetti protettivi sui neuroni dopaminergici, migliorando così i disturbi comportamentali dei veicoli. Diversi dosaggi diC. tubulosala nanopolvere ha aumentato l’espressione della proteina GDNF e dei suoi recettori nel cervello dei topi veicolo. Ad alte dosiC. tubulosail trattamento ha sovraregolato significativamente l'espressione di Bcl2 e ridotto l'espressione di Bax, il che lo ha suggeritoC. tubulosananopolverepotrebbe promuovere l'espressione e la secrezione di GDNF nel cervello del topo danneggiato da MPTP. Inoltre, potrebbe esercitare effetti neuroprotettivi nei neuroni dopaminergici e ridurre al minimo l’apoptosi neuronale attraverso i ruoli di supporto neurotrofico del GDNF.

Questo studio lo ha dimostratoC. tubulosala nanopolvere ha esercitato effetti protettivi sui neuroni dopaminergici in entrambiin vitroEin vivoe una maggiore espressione di TH per migliorare il contenuto di DA. Ha inoltre migliorato i disturbi comportamentali nei topi veicolo indotti da MPTP, ha regolato l'espressione proteica del GDNF e delle sue proteine ​​recettoriali nel SN e ha avuto effetti anti-apoptotici nei topi PD. Il meccanismo alla base degli effetti clinici diC. tubulosala nanopolvere nella malattia di Parkinson può comportare l’aumento del contenuto di GDNF endogeno nel cervello e quindi la riduzione del danno ai neuroni dopaminergici.

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