Lipidomica differenziale di cellule HK-2 ed esosomi sotto stimolazione con glucosio elevato

Astratto

Il metabolismo lipidico cellulare anormale è molto importante nell'insorgenza e nella progressione della malattia renale diabetica (DKD). Tuttavia, la composizione lipidica e l'espressione differenziale mediante l'elevata stimolazione del glucosio delle cellule tubulari renali e dei loro esosomi, che è una parte vitale dello sviluppo della DKD, sono in gran parte sconosciute. In questo studio, basato sull'analisi lipidica mirata mediante etichettatura degli isotopi e spettrometria di massa tandem, un totale di 421 e 218 specie lipidiche sono state quantificate rispettivamente nelle cellule HK-2 e negli esosomi. Ancora più importante, i risultati hanno mostrato che GM3 d18:1/22:0, GM3 d18:1/16:0, GM3 d18:0/16:0, GM3 d18:1/22:1 sono stati significativamente aumentati, mentre LPE18:1, LPE, CL66:4 (16:1), BMP36:3, CL70:7 (16:1), CL74:8 (16 :1) erano significativamente diminuiti nelle cellule HK{{4{{90}}}} altamente stimolate dal glucosio. Inoltre, PG36:1, FFA22:5, PC38:3, SM d18:1/16:1, CE-16:1, CE-18:3, CE-20:5, e CE-22:6 erano significativamente aumentati, mentre GM3 d18:1/24:1, GM3 erano significativamente diminuiti negli esosomi secreti da cellule HK-2 altamente stimolate dal glucosio. Inoltre, TAG, PC e CL sono diminuiti significativamente negli esosomi rispetto alle cellule HK-2 e LPA18:2, LPI22:5, PG32:2, FFA16:1, GM3 d18:1/18:1 , GM3 d18:1/20:1, GM3 d18:0/20:0, PC40:6p, TAG52:1(18:1), TAG52:0(18:0), CE{{101 }}:5, CE-20:4, CE-22:6 sono stati trovati solo negli esosomi. Inoltre, l'espressione di PI4P nelle cellule HK-2 è diminuita in condizioni di glucosio elevato. Questi dati possono essere utili per fornire nuovi obiettivi per esplorare i meccanismi della DKD.

Parole chiave

Lipidomica mirata; tubuli renali; esosomi; Malattia renale diabetica.

Clicca qui per acquistare l'integratore Cistanche per proteggere il Rene

introduzione

I disordini del metabolismo lipidico partecipano all'insorgenza e allo sviluppo della malattia renale diabetica (DKD) [1, 2]. I cambiamenti nella composizione lipidica cellulare nel rene in uno stato di glucosio elevato possono causare un aumento della produzione di ossigeno attivo, disfunzione mitocondriale e persino indurre l'apoptosi [3, 4, 5, 6]. Sebbene numerosi ricercatori abbiano riconosciuto l'importante ruolo dei tubuli renali nello sviluppo e nella progressione della DKD, pochi studi hanno affrontato l'espressione complessiva dei lipidi nei tubuli renali oi cambiamenti sotto alta stimolazione del glucosio [7, 8]. Pertanto, è di grande importanza ottenere informazioni complete sui lipidi nei tubuli renali, chiarendo così ulteriormente il ruolo dei lipidi nella patogenesi della DKD.

Negli ultimi anni, il ruolo degli esosomi nello sviluppo della DKD ha attirato una crescente attenzione. Gli esosomi che possono cooperare con la via autofagia-lisosoma per alleviare lo stress intracellulare hanno un ruolo importante nel mantenimento dell'omeostasi cellulare [9, 10]. Nel frattempo, agiscono come vettori per il trasferimento di materiale e la comunicazione di informazioni tra le cellule [11]. Studi recenti hanno rivelato che la diafonia tra le cellule tubulari e altri tipi di cellule renali nel nefrone potrebbe avere un ruolo importante nella progressione della malattia [12, 13]. Sebbene la composizione lipidica degli esosomi possa influenzare le loro proprietà, è stata studiata in misura minore rispetto all'attenzione delle proteine ​​e dell'RNA [14]. Poiché gli esosomi secreti da cellule diverse variano nei tipi, nei contenuti e nelle funzioni lipidiche, chiarire la composizione lipidica e l'espressione differenziale degli esosomi secreti dai tubuli renali in uno stato di glucosio elevato fornirebbe una base teorica per chiarire il meccanismo di comunicazione esosomiale riguardante i tubuli renali .

Qui, abbiamo presentato un'analisi lipidomica differenziale dei tubuli renali e dei loro esosomi sotto alta stimolazione del glucosio e abbiamo rilevato specie lipidiche differenzialmente espresse di cardiolipina (CL), monosialodihexosyl ganglioside (GM3) e estere di colesterolo (CE). Inizialmente abbiamo anche esplorato il ruolo dei fosfoinositidi (PIP) nella produzione esosomiale e osservato l'assorbimento di esosomi tubolari da parte delle cellule mesangiali glomerulari (GMC).

Supplemento cistanche

Metodi

1. Coltura cellulare

La linea di cellule epiteliali tubolari renali prossimali umane HK-2 è stata acquistata dallo Shanghai Institute for Biological Sciences Cell Resource Center. Le cellule HK-2 sono state coltivate in normale glucosio Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F-12) integrato con il 10% di siero bovino fetale (FBS; FSP500, Ex Cell). Il glucosio normale DMEM/F-12 era una miscela 1:1 di DMEM (11966025, Gibco) e Ham's F-12 (11765054, Gibco) che conteneva 5,56 mmol/L di glucosio. Le cellule sono state mantenute a 37 gradi in un incubatore di CO2 al 5%. Una volta raggiunta l'80% di confluenza, le cellule sono state raccolte utilizzando la procedura standard di digestione con tripsina e fatte passare con un rapporto di divisione di 1:2. Le cellule di passaggio sono state coltivate con FBS impoverito di esosoma (CMS101.03, Cellmax) in 5,5 mmol·L-1 di glucosio come gruppo di controllo del bianco (NG) e 30 mmol·L-1 di glucosio come glucosio alto gruppo (HG) per 48 ore.

2. Isolamento degli esosomi

L'ultracentrifugazione differenziale è stata utilizzata per estrarre gli esosomi dai supernatanti della coltura cellulare HK {{0}}. In breve, i supernatanti della coltura di cellule HK-2 sono stati raccolti e centrifugati in sequenza a 2000×g, 4 gradi per 10 min, e poi a 10,000×g, 4 gradi per 30 min per rimuovere cellule, detriti cellulari e grandi vescicole. Le frazioni surnatanti sono state filtrate utilizzando filtri con dimensione dei pori di 0.22-μm. I campioni filtrati sono stati quindi sottoposti a ultracentrifugazione a 110.000 × g per 75 minuti, due volte a 4 gradi per far sedimentare gli esosomi. Gli esosomi risultanti sono stati risospesi in una piccola quantità di soluzione tampone fosfato (PBS) e conservati a -80 gradi .

3. Analisi del tracciamento delle nanoparticelle (NTA)

Gli esosomi sono stati scongelati in un bagno d'acqua a 25 gradi e posti su ghiaccio, dopodiché sono stati diluiti direttamente con 1 × PBS per il rilevamento con rilevamento dell'impulso resistivo sintonizzabile (TRPS). Le analisi della distribuzione delle dimensioni e della concentrazione degli esosomi sono state eseguite utilizzando qNano Gold con Izon Control Suite 3.3.2 di Izon Science.

4. Determinazione delle proteine ​​e western blotting

Circa. 100 ul di soluzione di cracking premiscelata (soluzione di cracking RIPA e 1% di inibitore PMSF) è stata aggiunta separatamente ai campioni di cellule ed esosomi. Dopo il cracking per 30 minuti, sono stati centrifugati a 12,000×g, 4 gradi per 20 minuti. Il surnatante è stato prelevato e le concentrazioni proteiche sono state determinate utilizzando il kit di analisi delle proteine ​​dell'acido bicinconinico (BCA; Beyotime) secondo le istruzioni del produttore. L'albumina di siero bovino è stata utilizzata come proteina standard.

I campioni di proteine ​​​​sono stati frazionati mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide sodio-dodecil-solfato (SDS-PAGE). Dopo essere stati trasferiti su una membrana PVDF (Millipore), sono stati incubati con vari anticorpi primari, anti-CD63 (EXOAB-CD63A-1, SBI; 1:1000), anti-ALIX (YT6283, Immunoway; 1:1000 ), anti-calnexina (YT0613, Immunoway; 1:1000), anti-P62 (P0067, Sigma; 1:1000) e anti-LC3 (L7543, Sigma; 1:1000), seguiti da anti-coniglio di capra o topi Anticorpi secondari Ig (180202-001, SBI; 1:5000). Bande specifiche sono state rilevate utilizzando un substrato chemiluminescente potenziato (ECL; Beyotime). -actin (BM0627, Boster) è stato utilizzato come controllo interno. L'intensità relativa della banda è stata misurata utilizzando il software ImageJ.

5. Microscopia elettronica a trasmissione (TEM)

Il campione da 5 ul è stato lasciato cadere sulla rete di rame e incubato a temperatura ambiente per 5 minuti. Una goccia di acetato di perossido di uranio al 2% è stata aggiunta alla rete di rame e incubata a temperatura ambiente per 1 minuto. È stato quindi essiccato per circa 20 minuti a temperatura ambiente e osservato al microscopio elettronico a nanotrasmissione (Tecnai G2 Spirit BioTwin, FEI).

Estratto di cistanche

6. Lipidomica mirata

I lipidi sono stati estratti utilizzando una versione modificata del metodo di Bligh e Dyer [15]. Tutte le analisi lipidomiche sono state eseguite su una cromatografia liquida ultra-performante (UPLC) Exion abbinata a un sistema SCIEX QTRAP 6500 PLUS. Le analisi UPLC-MS/MS sono state condotte in modalità di ionizzazione elettrospray (ESI), con le seguenti condizioni: curtain gas=20, tensione di ion spray=5,500 V , temperatura=400 grado , gas sorgente ionica 1=35 e gas sorgente ionica 2=35. I lipidi polari sono stati separati utilizzando una colonna di silice Phenomenex Luna da 3 µm (diametro interno 150 × 2.0 mm) con due fasi mobili: fase mobile A (cloroformio: metanolo: idrossido di ammonio, 89,5: 10: 0.5) e fase mobile B (cloroformio: metanolo: idrossido di ammonio: acqua, 55: 39: 0.5: 5.5). La separazione del gradiente è stata condotta come segue: il gradiente è stato mantenuto con il 95 percento di A per 5 minuti e quindi ridotto linearmente al 60 percento in 7 minuti e mantenuto per 4 minuti, dopodiché è sceso al 30 per cento ed è stato poi trattenuto per 15 min. Infine, il gradiente originale è stato applicato e mantenuto per 5 min. Il monitoraggio multi-reazione spettrometrico di massa (MRM) è stato stabilito per l'identificazione di vari lipidi e l'analisi quantitativa [16, 17]. Le singole specie di lipidi polari sono state quantificate facendo riferimento a standard interni addizionati della stessa classe lipidica tra cui PE-d31(16:0/18:1), DMPE; PG-d31(16:0/18:1), DMPG; PI-d31(16:0/18:1), di-C8- PI; PS-d31(16:0/18:1), DMPS; PA-d31(16:{{1{{1{{110}}8}}4}}/18:1), PA(17:0/17:0); BMP-(14:0/14:0); LPE-17:1; LPI-17:1; LPS-17:1; LPA-17:0; GM3 d18:1/18:0-d3; d31-16:0, d8-20:4; PC-d31(16:0/18:1), DMPC; SM d18:1/ d31-16:0, SM d18:1/12:0; LPC-17:0; Cer d18:1-d7/15:0; Sph-d18:1/17:0; CL 22:1(3)-14:1.

I lipidi del glicerolo, compresi i diacilgliceroli (DAG) e i triacilgliceroli (TAG), sono stati quantificati utilizzando una versione modificata di HPLC/MS/MS in fase inversa. La separazione dei lipidi neutri è stata ottenuta su una colonna Phenomenex Kinetex-C18 2.6 µm (id 4.6x100 mm) utilizzando una fase mobile contenente cloroformio: metanolo: {{19} }.1 M di acetato di ammonio (100:100:4), a una portata di 160 µl/min. d5-TAG (16:0)3; d5-TAG (14:0)3; d5-TAG (18:0)3 sono stati utilizzati per picchi individuali di TAG. d5-DAG (1,3-17:0); d5-DAG (1,3-18:1) sono stati utilizzati per aumentare il DAG individuale in base alla tecnologia Neutral miss MS/MS.

I colesteroli liberi, gli steroli e i loro esteri sono stati analizzati mediante HPLC-MS/MS, condotto in modalità di ionizzazione chimica a pressione atmosferica (APCI), con Cholesteryl-2,2,3,4,4,6-d6 ottadeconato; Colesterolo-26,26,26,27,27,27-d6 come standard interni.

Al campione sono stati aggiunti cloroformio: metanolo: (1:1), acido cloridrico 2,4 M e 0.25 M EDTA, seguiti da macinazione a basse temperature. Il campione è stato centrifugato dopo incubazione per 3 ore a 4 gradi, dopodiché è stata estratta la fase organica inferiore. È stato aggiunto cloroformio per la seconda estrazione, seguita dal lavaggio della fase organica usando acido cloridrico 1N: metanolo (1:1). La fase organica è stata essiccata in un concentratore rotante sotto vuoto. Come riportato in precedenza, il 40% di metilammina: acqua: n-butanolo: metanolo (36:8:9:47) è stato utilizzato per la deacilazione e analizzato mediante cromatografia ionica Thermo ICS-5000. PI4P, PI3P, PI4P, PI(3, 4)P2, PI(3, 5)P2, PI(4, 5)P2 e PI(3, 4,5) P3 sono stati utilizzati per costruire una curva di calibrazione esterna per la misurazione quantitativa analisi. L'analisi è stata supportata da Lipidall Technologies Company Limited.

7. Microscopia a fluorescenza

Per visualizzare l'assorbimento degli esosomi nelle GMC (Sicencell), una quantità uguale di esosomi secreti dalle cellule HK-2 con o senza un'elevata stimolazione del glucosio sono stati entrambi etichettati con PKH67 (mini67, Sigma) secondo le istruzioni del produttore. Gli esosomi marcati sono stati coltivati ​​con GMC per 24 ore. Le GMC confluenti sono state lavate tre volte con PBS, dopodiché le cellule sono state fissate con paraformaldeide al 4% e tenute al riparo dalla luce per 30 minuti. Le cellule sono state lavate tre volte con PBS e colorate con DAPI (28718903, Solarbio) per 4-6 min. Dopo aver lavato tre volte, i GMC confluenti sono stati fotografati utilizzando il microscopio confocale Nikon C2.

8. Analisi statistica

GraphPad 7.0 è stato applicato per l'analisi statistica e la mappatura. I dati sono espressi come media ± SEM. Il test t di Student è stato utilizzato per il confronto tra i due gruppi. Un valore P < 0.05 è stato considerato come significatività statistica.

Capsule di cistanche

Discussione

Il nostro studio fornisce le specie lipidiche espresse in modo differenziato di cellule HK {{0}} ed esosomi sotto alta stimolazione del glucosio, che non erano state precedentemente riportate. È interessante notare che specie di GM3, come GM3 d18:1/22:0, GM3 d18:1/16:0, GM3 d18:0/16:0 , GM3 d18:1/22:1 erano significativamente aumentati nelle cellule HK-2 altamente stimolate dal glucosio e GM3 d18:1/24:1, GM3 erano significativamente diminuiti nei loro esosomi. Inoltre, GM3 d18:1 /18:1, GM3 d18:1/20:1 e GM3 d18:0/20:0 sono stati trovati solo negli esosomi. GM3 è il ganglioside più ampiamente distribuito nel corpo, costituito da glucosio, galattosio e acido sialico caratterizzato da gruppi sialici associati alla struttura dello scheletro della ceramide [18]. È coinvolto nella regolazione di una varietà di funzioni cellulari, tra cui la trasduzione del segnale, la proliferazione, la differenziazione e l'apoptosi. Secondo studi recenti, la concentrazione sierica di GM3 è più elevata nei pazienti con diabete di tipo 2, iperlipidemia e pazienti obesi, mentre il GM3 può promuovere la rimozione dei recettori dell'insulina e ridurre la segnalazione dell'insulina [19]. I nostri risultati hanno indicato livelli elevati di tutte le specie GM3 differenziali espresse nelle cellule HK -2 sotto stimolazione con glucosio elevato, in particolare l'aumento di GM3 con catena laterale (22: 0) che era il più evidente. Zhang et al. [20] hanno anche osservato un'espressione elevata di GM3 d18:1/22:0 nella corteccia renale di topi con nefropatia diabetica, che era coerente con i nostri risultati. Lo studio sui ratti con diabete di tipo 2 indotto da streptozotocina condotto da Anela et al. [21] hanno trovato GM3 invariato nei glomeruli ma un'espressione di GM3 significativamente aumentata nei tubuli renali, il che è in linea con la nostra scoperta di cambiamenti di GM3 nei tubuli renali. Kwak et al. [22] hanno riscontrato una diminuzione di GM3 nel contenuto glomerulare di ratti diabetici indotti da streptozotocina, seguita da una perdita di barriera filtrante selettiva di carica nei glomeruli. È importante notare che il ruolo di GM3 nei glomeruli e nei tubuli renali può variare. GM3 è anche una parte importante della zattera lipidica [23]. I cambiamenti nei livelli di espressione di GM3 nei rafts lipidici alterano le attività del cotrasportatore Na+-glucosio di tipo 2 (SGLT2) e del cotrasportatore renale Na+/K+/Cl-, che sono entrambi lipid raft-dipendenti [24]. Alcuni ricercatori hanno presunto che una maggiore concentrazione di GM3 aumenti le attività di SGLT2 e Na plus/K plus/Cl-cotrasportatore, portando ad un aumento del riassorbimento tubulare e della pressione idrostatica dell'arteriola efferente e quindi causando lesioni delle cellule tubulari renali danneggiando l'equilibrio tubuloglomerulare. Kumari et al. [25] hanno scoperto che il GM3 negli esosomi urinari dei pazienti mostrava una differenza significativa tra DKD e diabete mellito. Nel loro insieme, il ruolo dell'espressione elevata di GM3 in condizioni di glucosio elevato nei tubuli renali dovrebbe essere affrontato dalla ricerca futura.

È importante sottolineare che i nostri risultati hanno anche mostrato che alcune specie di CL, tra cui CL66:4(16:1), CL70:7(16:1) e CL74:8(16:1) erano significativamente diminuite nell'HK{ {13}} celle. Rispetto alle cellule HK-2, la CL era significativamente ridotta negli esosomi. CL si trova quasi interamente nella membrana interna mitocondriale ed è una parte importante del mantenimento della struttura mitocondriale. Ha un ruolo importante nella conduzione elettronica, nella produzione di adenosina trifosfato, nel metabolismo energetico e nell'apoptosi [26, 27]. Nel diabete, i cambiamenti e le disfunzioni morfologiche mitocondriali sono spesso accompagnati da un cambiamento patologico del CL [28,29]. Le cellule epiteliali tubolari renali prossimali richiedono abbastanza ATP per mantenere il trasporto attivo e il riassorbimento di varie sostanze. In quanto cellule ad alto consumo energetico, le cellule epiteliali tubulari renali prossimali sono ricche di mitocondri [30]. La frammentazione mitocondriale è stata osservata nelle cellule epiteliali tubulari prossimali nel diabete precoce. Zhang et al. [31] hanno scoperto che la CL era essenziale per mantenere la funzione mitocondriale tubulare nei topi con diabete di tipo 1. I nostri risultati possono fornire una nuova base teorica per lo studio del meccanismo di lesione mitocondriale della DKD.

Gli esosomi hanno un ruolo importante nel mantenimento dell'omeostasi cellulare cooperando con la via autofagia-lisosoma. Studi precedenti hanno scoperto che i cambiamenti nei livelli di espressione dei PIP potrebbero influenzare sia la secrezione esosomica che l'autofagia cellulare regolando la trasformazione degli MVB [32, 33, 34]. Nina et al. [35] hanno scoperto che nelle cellule PC-3, l'inibizione di PIKfyve, il cui substrato è PI3P, ha aumentato la secrezione di esosomi e ha indotto l'autofagia secretoria, dimostrando così che questi percorsi erano strettamente collegati dai PIP. Sulla base di quanto sopra, abbiamo osservato i cambiamenti nei PIP, nella produzione esosomiale e nell'autofagia nelle cellule HK -2 altamente stimolate dal glucosio. I nostri risultati hanno mostrato che l'alto glucosio ha stimolato sia la secrezione di esosomi che l'attivazione dell'autofagia nelle cellule HK-2, mentre è stata riscontrata una significativa diminuzione nell'espressione di PI4P. Sono necessari ulteriori studi per studiare il meccanismo di regolazione dell'esosoma-autofagia dei PIP coinvolti nella stimolazione ad alta glicemia.

Come messaggeri, gli esosomi hanno un ruolo importante nella segnalazione intracellulare e nei cambiamenti funzionali nello sviluppo della DKD [36, 37, 38]. Abbiamo etichettato in modo fluorescente gli esosomi rilasciati dalle cellule HK-2 e ne abbiamo dimostrato l'assorbimento paracrino da parte delle GMC. Rispetto alle loro cellule madri, gli esosomi hanno una composizione speciale, che li rende più stabili e funzionali grazie ai domini ricchi di colesterolo, sfingolipidi, fosfolipidi saturi e zattera lipidica [39]. Anche piccoli cambiamenti nella composizione lipidica possono influenzare le proprietà della membrana, avendo così un grande effetto sulla sua funzione. Nel presente studio, abbiamo scoperto che TAG, PC e CL erano significativamente diminuiti negli esosomi rispetto alle cellule madri HK-2, mentre 13 specie di lipidi tra cui LPA18:2, LPI22:5, PG32:2, FFA16: 1, GM3 d18:1/18:1, GM3 d18:1/20:1, GM3 d18:{{30}}/20:0, PC40: 6p, TAG52:1(18:1), TAG52:0(18:0), CE-20:5, CE-20:4, CE-22:6 sono stati rilevati solo in esosomi. Il lavoro qui presentato fornisce una base per un'ulteriore analisi dei ruoli paracrini degli esosomi rilasciati dalle cellule tubulari.

Polvere di cistanche

Conclusioni

In conclusione, il nostro studio ha dimostrato l'importanza dell'analisi lipidomica nel fornire nuovi bersagli per esplorare la patogenesi della DKD. Ulteriori studi sulla funzione dei lipidi differenziali espressi, nonché studi completi sui lipidi su altre cellule nel nefrone e sui loro esosomi, potrebbero fornire una nuova prospettiva che chiarirebbe ulteriormente il meccanismo della DKD.

Riferimenti

1. Stephanie Eid, Kelli M. Sas, Steven F. Abcouwer, Eva L. Feldman, Thomas W. Gardner, Subramaniam Pennathur. et al. Nuove conoscenze sui meccanismi delle complicanze diabetiche: ruolo dei lipidi e del metabolismo lipidico. Diabetologia. 2019; 62(9): 1539-49.

2. Krisztian Stadler, Ira J. Goldberg, Katalin Susztak. La comprensione in evoluzione del contributo del metabolismo lipidico alla malattia renale diabetica. Curr Diab Rep. 2015; 15(7): 40.

3. Michal Herman-Edelstein, Pnina Scherzer, Ana Tobar, Moshe Levi, Uzi Gafter. Metabolismo lipidico renale alterato e accumulo di lipidi renali nella nefropatia diabetica umana. J risoluzione lipidica. 2014; 55(3): 561-72.

4. G Michelle Ducasa, Alla Mitrofanova, Alessia Fornoni. Crosstalk tra lipidi e mitocondri nella malattia renale diabetica. Curr Diabetes Rep. 2019; 19: 144.

5. Kerri J. Grove, Paul A. Voziyan, Jeffrey M. Spraggins, Suwan Wang, Paisit Paueksakon, Raymond C. Harris. et al. La nefropatia diabetica induce alterazioni del profilo lipidico glomerulare e tubulare. J risoluzione lipidica. 2014; 55(7): 1375-85.

6. Kelli M. Sas, Jiahe Lin, Thekkelnaycke M. Rajendiran, Tanu Soni, Viji Nair, Lucy M. Hinder. et al. Interazioni lipide-lipidiche condivise e distinte nel plasma e nei tessuti interessati in un modello di topo diabetico. J risoluzione lipidica. 2018; 59(2): 173-83.

7. Giuseppe V. Bonventre. Possiamo mirare al danno tubulare per prevenire il declino della funzione renale nel diabete? Semin Nephrol. 2012; 32(5): 452-62.

8. Bi-Cheng Liu, Tao-Tao Tang, Lin-Li Lv, Hui-Yao Lan. Lesione del tubulo renale: una forza trainante verso la malattia renale cronica. Rene Internazionale. 2018; 93(3): 568-79.

9. Nina Pettersen Hessvik, Alicia Llorente. Conoscenze attuali sulla biogenesi e sul rilascio degli esosomi. Cell Mol Life Sci. 2018; 75(2): 193-208.

10. Leila Salimi, Ali Akbari, Nassrollah Jabbari, Behnam Mojarad, Ali Vahhabi, Sławomir Szafert. et al. Sinergie negli esosomi e nei percorsi autofagici per l'omeostasi cellulare e la metastasi delle cellule tumorali. Cell Biosci. 2020; 10:64.

11. Suresh Mathivanan, Hong Ji, Richard J. Simpson. Esosomi: organelli extracellulari importanti nella comunicazione intercellulare. J Proteomica. 2010; 73(10): 1907-20.

12. Maja Kosanović, Alicia Llorente, Sofija Glamočlija, José M. Valdivielso, Milica Bozic. Vescicole extracellulari e fibrosi renale: un'odissea verso un nuovo approccio terapeutico. Int J Mol Sci. 2021; 22(8): 3887.

13. Lin-Li Lv, Ye Feng, Min Wu, Bin Wang, Zuo-Lin Li, Xin Zhong. et al. Il miRNA esosomico-19b-3p delle cellule epiteliali tubulari promuove l'attivazione dei macrofagi M1 nella lesione renale. La morte cellulare è diversa. 2020; 27(1): 210-26.

14. Raghu Kalluri, Valerie S. LeBleu. La biologia, la funzione e le applicazioni biomediche degli esosomi. Scienza. 2020; 367(6478): eau6977.

15. Jieli Lu, Sin Man Lam, Qin Wan, Lixin Shi, Yanan Huo, Lulu Chen. et al. La lipidomica mirata ad alta copertura rivela nuovi predittori di lipidi sierici e disregolazione della via lipidica antecedente all'insorgenza del diabete di tipo 2 negli adulti cinesi normoglicemici. Cura del diabete. 2019; 42(11): 2117-26.

16. Sin Man Lam, Raoxu Wang, Huan Miao, Bowen Li, Guanghou Shui. Un metodo integrato per l'interrogatorio diretto dell'omeostasi degli sfingolipidi nei tessuti cardiaci e cerebrali dei topi attraverso lo sviluppo postnatale fino alla senescenza riproduttiva. Anal Chim Acta. 2018; 1037: 152-58.

17. Sin Man Lam, Zehua Wang, Jie Li, Xun Huang, Guanghou Shui. Il sequestro degli acidi grassi polinsaturi nei fosfolipidi di membrana della larva di Caenorhabditis elegans dauer attenua la biosintesi degli eicosanoidi per una sopravvivenza prolungata. Redox Biol. 2017; 12: 967-77.

18. Masako Nishikawa, Makoto Kurano, Takahiro Nitta, Hirotaka Kanoh, Jin-ichi Inokuchi, Yutaka Yatomi. I livelli sierici di GM3(d18:1-16:0) e GM3(d18:1-24:1) possono essere associati al linfoma: uno studio esplorativo sulle malattie ematologiche. Sci Rep. 2019; 9: 6308.

19. Takashige Sato, Yutaka Nihei, Masakazu Nagafuku, Seiichi Tagami, Rina Chin, Mitsunobu Kawamura. et al. Livelli circolanti di ganglioside GM3 nella sindrome metabolica: uno studio pilota. Obes Res Clin Pratica. 2008; 2(4): 231-38.

20. Biyu Hou, Ping He, Peng Ma, Xinyu Yang, Chunyang Xu, Sin Man Lam. et al. Profilo lipidico completo del rene nella nefropatia diabetica in stadio iniziale. Front Endocrinol (Losanna). 2020; 11: 359.

21. Anela Novak, Nikolina Režić Mužinić, Vedrana Cikeš Čulić, Joško Božić, Tina Tičinović Kurir, Lejla Ferhatović. et al. Distribuzione renale del ganglioside GM3 in modelli di ratto con diabete di tipo 1 e 2. J Physiol Biochem. 2013; 69: 727-35.

22. Dong Hoon Kwak, Young Il Rho, Oh Deog Kwon, Seon Ho Ahan, Ju Hung Song, Young Kug Choo. et al. Diminuzioni del ganglioside GM3 nei glomeruli diabetici indotti da streptozotocina di ratti. Scienze della vita. 2003; 72(17): 1997-2006.

23. Yong Chen, Jie Qin, Zheng W. Chen. La fluorescenza-topografica NSOM visualizza direttamente le polarità picco-valle delle zattere GM1/GM3 nelle fluttuazioni della membrana cellulare. J risoluzione lipidica. 2008; 49(10): 2268-75.

24. Pia Welker, Alexandra Böhlick, Kerim Mutig, Michele Salanova, Thomas Kahl, Hartmut Schlüter. et al. L'attività del cotrasportatore renale Na plus -K plus -Cl- - e il traffico indotto dalla vasopressina dipendono dal raft lipidico. Am J Physiol Renale Physiol. 2008; 295(3): F789-F802.

25. Sangeeta Kumari, Ajeet Singh. La lipidomica urinaria esosomiale rivela marcatori per la nefropatia diabetica. Metabolomica attuale. 2018; 6: 131-39.

26. Alexander V. Panov, Sergey I. Dikalov. Cardiolipina, radicali peridrossilici e perossidazione lipidica nelle disfunzioni mitocondriali e nell'invecchiamento. Oxid Med Cell Longev. 2020; 2020: 1323028.

27. Giuseppe Paradies, Valeria Paradies, Francesca M. Ruggiero, Giuseppe Petrosillo. Ruolo della cardiolipina nella funzione e dinamica mitocondriale in salute e malattia: aspetti molecolari e farmacologici. Cellule. 2019; 8(7): 728.

28. Edgard M Mejia, Hieu Nguyen, Grant M Hatch. Biosintesi della cardiolipina nei mammiferi. Chimica Fisica Lipidi. 2014; 179: 11-6.

29. G. Michelle Ducasa, Alla Mitrofanova, Shamroop K. Mallela, Xiaochen Liu, Judith Molina, Alexis Sloan. et al. La carenza di cassetta A1 legante l'ATP causa una disfunzione mitocondriale guidata dalla cardiolipina nei podociti. J Clin Invest. 2019; 129(8): 3387–400.

30. Alejandra Guillermina Miranda-Díaz, Ernesto Germán Cardona-Muñoz, Fermín Paul Pacheco-Moisés. Il ruolo della cardiolipina e del danno mitocondriale nel trapianto di rene. Oxid Med Cell Longev. 2019; 2019: 3836186.

31. Guanshi Zhang, Jialing Zhang, Rachel J. DeHoog, Subramaniam Pennathur, Christopher R. Anderton, Manjeri A. Venkatachalam. et al. DESI-MSI e METASPACE indicano anomalie lipidiche e componenti alterati della membrana mitocondriale nei tubuli prossimali renali diabetici. Metabolomica. 2020; 16(1): 11.

32. Johan-Owen De Craene, Dimitri L. Bertazzi, Séverine Bär, Sylvie Friant. I fosfoinositidi sono i principali attori nel traffico di membrana e nelle vie di segnalazione dei lipidi. Int J Mol Sci. 2017; 18(3): 634.

33. Kay O. Schink, Kia-Wee Tan, Harald Stenmark. Fosfoinositidi nel controllo della dinamica di membrana. Annu Rev Cell Dev Biol. 2016; 32: 143-71.

34. Tore Skotland, Nina P. Hessvik, Kirsten Sandvig, Alicia Llorente. Composizione lipidica esosomiale e ruolo dei lipidi eterei e dei fosfoinositidi nella biologia degli esosomi. J risoluzione lipidica. 2019; 60(1): 9-18.

35. Nina Pettersen Hessvik, Anders Øverbye, Andreas Brech, Maria Lyngaas Torgersen, Ida Seim Jakobsen, Kirsten Sandvig. et al. L'inibizione di PIKfyve aumenta il rilascio di esosomi e induce l'autofagia secretoria. Cell Mol Life Sci. 2016; 73: 4717-37.

36. Margherita AC Pomatto, Chiara Gai, Benedetta Bussolati, Giovanni Camussi. Vescicole extracellulari in fisiopatologia renale. Fronte Mol Biosci. 2017; 4: 37.

37. Xiaoming Wu, Yanbin Gao, Liping Xu, Wanyu Dang, Huimin Yan, Dawei Zou. et al. Gli esosomi delle cellule endoteliali glomerulari trattate con glucosio elevato innescano la transizione epiteliale-mesenchimale e la disfunzione dei podociti. Sci Rep. 2017; 7: 9371.

38. Xiao-ming Wu, Yan-bin Gao, Fang-qiang Cui, Na Zhang. Gli esosomi delle cellule endoteliali glomerulari trattate con glucosio elevato attivano le cellule mesangiali per promuovere la fibrosi renale. Biolo Aperto. 2016; 5(4): 484-91.

39. Tore Skotland, Kirsten Sandvig, Alicia Llorente. Lipidi negli esosomi: conoscenze attuali e via da seguire. Prog Ris. Lipidica 2017; 66: 30-41.

Weidong Wang, Tingting Li, Zhijie Li, Hongmiao Wang, Xiaodan Liu

Dipartimento di Nefrologia, The First Affiliated Hospital of China Medical University, 155 North Nanjing Street, Shenyang, Liaoning, Cina, 110001