Sai che lo stress ossidativo può causare danni ai reni?

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Parte Ⅰ: Lo stress ossidativo a seguito di danno renale acuto provoca l'interruzione delle ciglia delle cellule polmonari e il loro rilascio nel liquido di lavaggio broncoalveolare e lesioni polmonari, che sono esacerbate dalla delezione di Idh2

Yong Kwon Hana, Ji Su Kim, Gwan Beom Leea, Jae Hang Lim, Kwon Moo Park

1. Introduzione

Danno renale acuto(AKI) si verifica in vari contesti clinici, inclusi shock, sepsi, trapianto di organi e chirurgia vascolare [1-3]. AKI (Danno renale acuto) provoca danni agli organi distanti, inclusi polmoni, fegato, cuore e cervello [4-9]. Questa lesione d'organo a distanza a seguito di AKI (Danno renale acuto)è riconosciuto come un importante fattore di rischio per scarsi risultati [5,9]; pertanto, un trattamento appropriato del danno d'organo a distanza è importante per migliorare l'esito dei pazienti con AKI (Danno renale acuto). Tuttavia, i meccanismi precisi coinvolti nell'AKI (Danno renale acuto)-le lesioni d'organo a distanza correlate restano da definire.

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Le ciglia sono proiezioni derivate da centrioli dalla superficie cellulare che contengono un citoscheletro a base di microtubuli (axonema), circondato da una membrana ciliare. Le ciglia sono caratterizzate dalla loro struttura e motilità e sono definite come ciglia immobili (ciglia primarie) o ciglia mobili. Le ciglia primarie sono organelli solitari, non mobili, a base di microtubuli 9 più 0 assonemici simili ad antenne che sporgono dalla membrana cellulare e trasducono segnali extracellulari nella cellula attraverso il coordinamento di diverse vie di segnalazione [10-12 ]. Le ciglia mobili, con una struttura multipla, 9 più 2 assonemi, si trovano principalmente nel tratto respiratorio e nell'ovidotto e funzionano per il trasporto di materiali [10,13]. Prove crescenti hanno dimostrato che i difetti nella formazione e nella funzione delle ciglia sono associati a diverse malattie umane, tra cuipolicistico malattie renalie discinesia ciliare primaria [14-20]. Inoltre, studi recenti hanno dimostrato che l'interruzione delle ciglia avviene sotto l'influenza di condizioni patologiche e che questa interruzione è coinvolta nella mediazione del danno e della disfunzione cellulare [15-20].

L'evidenza accumulata lo ha dimostratoreneischemia-riperfusione (IR), una causa di AKI (Danno renale acuto), induce danno d'organo a distanza [6-8,21]. Il danno d'organo a distanza è associato a risposte infiammatorie, cambiamenti nelle vie di segnalazione associate alla morte e sopravvivenza cellulare elo stress ossidativo [8,22-24]. Lo stress ossidativoè direttamente collegata alla disfunzione dei componenti cellulari, che possono provocare disturbi d'organo, ed è riconosciuta come una delle principali cause direneDanno d'organo a distanza indotto da IR [21,25,26]. Lo abbiamo già dimostratoreneAKI indotto da IR e cisplatino (Danno renale acuto)altera le lunghezze delle ciglia primarie inrenecellule epiteliali tramite assemblaggio, disassemblaggio e distruzione (deciliazione, spargimento o frammentazione) delle ciglia [17-19]. Questi processi sono associati a specie reattive dell'ossigeno (ROS) elo stress ossidativo. a seconda della concentrazione di perossido di idrogeno e del grado diossidativofatica; una bassa concentrazione di H2O2 induce l'allungamento della lunghezza delle ciglia primarie, mentre un'alta concentrazione di H, O induce l'interruzione [17-20]. Inoltre, abbiamo scoperto che ha interrotto le ciglia primarie dei feritirenele cellule epiteliali tubulari vengono escrete nelle urine e che questa interruzione ed escrezione può essere prevenuta con un trattamento antiossidante [17-20]. Rodriguez-Ribera et al. ha anche riferito che composti carbonilici reattivi come la malondialdeide, un prodotto dilo stress ossidativo, inducono la perdita delle ciglia primarie nell'uomorenecellule del tubulo prossimale [27]. Pertanto, abbiamo ipotizzato che l'AKI (Danno renale acuto)-danno polmonare acuto (ALD) e danno cellulare sono associati alle ciglia e alle cellule polmonariossidativofaticae quella prevenzione diossidativofaticariduce l'AKI (Danno renale acuto)-danno polmonare indotto. Nel presente studio, abbiamo studiato sereneAKI indotto da IR (Danno renale acuto)provoca l'interruzione delle ciglia e delle cellule dei polmoni e, in tal caso, se queste interruzioni sono associateossidativoB. A tal fine, abbiamo impiegato approcci farmacologici e genetici, compreso l'uso di topi eliminati dall'isocitrato deidrogenasi 2(Idh2). IDH2 è un enzima localizzato nei mitocondri [28]. Nei mitocondri, IDH2 catalizza la decarbossilazione ossidativa dell'isocitrato in -chetoglutarato, accompagnata dalla riduzione dell'NADP in NADPH, che è un fattore critico nel sistema antiossidante della tioredossina e del glutatione [29-32]. Inoltre, abbiamo studiato se la presenza di proteine ​​e frammenti ciliari nel liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF) è indicativa di danno polmonare. Riportiamo qui, per la prima volta, quell'AKI (Danno renale acuto)provoca l'interruzione delle ciglia delle cellule polmonari e il loro rilascio nel BALF, nonché lesioni polmonari, che sono esacerbate dalla delezione di IDH2.

lo stress ossidativo provoca danno renale

2. Materiali e metodi

Preparazione degli animali.

Tutti gli esperimenti sono stati condotti utilizzando topi C57BL/6 maschi di 8-10-una settimana di età (Koatech, Pyeongtaek, Gyeonggi-do, Corea), topi femmine Idh2 eliminati dal gene (Idh2~/) e wild-type (dh2 plus / )topi [28]. Ai topi è stato consentito il libero accesso all'acqua e al cibo standard per topi. Lo studio sugli animali è stato approvato dall'Institutional Animal Care and Use Committee della Kyungpook National University, Repubblica di Corea. Per indurre ischemia renale bilaterale, ilrenisono stati esposti attraverso incisioni del fianco sotto anestesia con pentobarbital sodico (60 mg/kg di peso corporeo) e quindi i peduncoli delrenisono stati completamente bloccati per 35 minuti utilizzando pinze per microaneurisma. La stessa procedura, esclusareneil bloccaggio del peduncolo, è stato eseguito nell'operazione simulata La temperatura corporea è stata mantenuta a 36,5 gradi -37 gradi C durante le procedure chirurgiche utilizzando un dispositivo di riscaldamento a temperatura controllata (FHC, Bowdoin, ME, USA). Ad alcuni topi sono stati somministrati {{4 }}(2,2,6,6-Tetrametilpiperidin-1-ox-yl-4-arilamino)-2-ossoetil trifenilfosfonio cloruro (Mito--TEMPO,{{14 }}.7 mg/kg di peso corporeo; Sigma, St.Louis, MO, USA) a 17 e 1 ora prima dell'operazione (pretrattamento) o 6 ore dopo l'operazione (post-trattamento).

Alla fine degli esperimenti, il polmone erenei tessuti sono stati congelati a scatto in azoto liquido o perfusione fissati con soluzione PLP (4% paraformaldeide, 75 mM L-lisina, 10 mM periodato di sodio: Sigma) per studi biochimici e istologici, rispettivamente. I tessuti congelati sono stati conservati a -70 gradi fino al momento del bisogno.

Collezione di BALF.

BALF è stato raccolto dopo l'eutanasia dei topi mediante iniezione di sovradosaggio di pentobarbital sodico. Le perdite polmonari sono state valutate determinando la concentrazione proteica e il numero di cellule nel BALF. Per raccogliere BALF, il bronco del polmone sinistro è stato completamente bloccato utilizzando pinze per microaneurisma. Un ago è stato inserito nella trachea e 0,8 ml di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) fredda è stata iniettata lentamente nei lobi del polmone destro. BALF è stato raccolto ritraendo il pistone della siringa una volta. Il numero totale di cellule e la concentrazione proteica in BALF sono stati analizzati immediatamente utilizzando un ematocitometro e un kit di test BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA), rispettivamente. BALF è stato mantenuto a -70 grado fino a quando non è stato richiesto per l'analisi del western blotting.

Renefunzione. Il sangue è stato raccolto dai topi usando una siringa eparinizzata. La concentrazione di azoto ureico (BUN) nel plasma è stata determinata utilizzando un analizzatore chimico Vitros 250 (Johnson& Johnson, New Brunswick, NJ, USA).

Colorazione periodica con acido Schiff (PAS) ed ematossilina ed eosina (H&E).

Risolto il problema con PLPrenee i tessuti polmonari sono stati inclusi in paraffina, tagliati in sezioni spesse 3-μm utilizzando un microtomo (Leica, Bensheim, Germania) e montati su vetrini.Renee le sezioni polmonari sono state colorate con PAS e H&E. Ilrenedannoil punteggio è stato valutato alla cieca dai ricercatori come descritto in precedenza [3,19].

Analisi Western blot.

Il Western blotting è stato eseguito come descritto in precedenza [3]. Gli anticorpi utilizzati per il western blotting erano i seguenti: anti-4-idrossi nominale (4-HNE; Abcam, Cambridge, MA, USA), anti- -tubulina (Santa Cruz, CA, USA) , anti-acetilato-tubulina (ac- -tubulina, Sigma), superossido dismutasi anti-manganese-dipendente (MnSOD; Calbiochem, San Diego, CA, USA), anticatalasi (Fitzgerald, Concord, MA, USA) , proteina simile al fattore anti-ADP-ribosilazione 13B (Arl13B, Proteintech, Chicago, IL, USA), anti-isocitrato deidrogenasi 2 (IDH2; Santa Cruz), atrofia anti-ottica 1 (Opal; BD Bioscience, San Diego, CA ), anti-fissione 1 (Fis1; Sigma), proteina 1 correlata all'antidinamina (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) e anti-gliceraldeide 3-fosfato deidrogenasi (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, USA).

Colorazione immunofluorescente.

Dopo la deparaffinazione, le sezioni sono state incubate in PBS contenente {{0}},2 percento di Triton X-100(Sigma) per 1 minuto e quindi lavate in PBS per 10 minuti. Per esporre l'epitopo dell'antigene, le sezioni sono state bollite in tampone di citrato di sodio da 10 mm (pH 6,0) per 10 minuti, raffreddate per 20 minuti e quindi lavate tre volte con PBS per 5 minuti a ogni lavaggio. Le sezioni sono state bloccate con albumina di siero bovino al 3% in PBS (tampone bloccante) per 30 minuti e quindi incubate con anticorpo anti-Arll3b a 4 gradi durante la notte. Dopo il lavaggio, le sezioni sono state incubate con IgG anti-coniglio di capra coniugata con FITC (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) per 60 minuti e quindi lavate 3 volte con PBS per 5 minuti ciascuna. I nuclei cellulari sono stati colorati utilizzando 4'-6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI; Sigma).

Misurazione del superossido nel tessuto polmonare.

I livelli di superossido sono stati misurati utilizzando diidroetidio (DHE; Sigma) come descritto in precedenza 【33,34】. In breve, 10 μM di DHE in 1 ml di PBS preriscaldato (37 gradi) sono stati aggiunti a una 96- piastra a pozzetti contenente 20 ul di lisato di tessuto polmonare. La piastra è stata letta ogni 10 minuti per un totale di 30 minuti a filtri di eccitazione/emissione di 530 nm/620 nm.

Misurazione di IL-6.

I livelli di IL-6 nel plasma e nel BALF sono stati determinati tramite test ELISA utilizzando il kit di test ELISA secondo le istruzioni del produttore (BD Bioscience).

Statistiche.

Tutti i dati sono stati analizzati utilizzando il software GraphPad Prism 7 (San Diego, CA, USA). I risultati sono espressi come media ± errore standard della media (SEM). L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando il test t di Student e l'analisi unidirezionale della varianza con la procedura post hoc di Tukey. Le differenze sono state considerate statisticamente significative quando lo erano i valori p<>

3. Risultati

1. L'IR renale provoca lesioni polmonari.

Come previsto, notevole danno morfologico alreni(Fig.1A e B) e aumenti del BUN plasmatico (Fig.1C) sono stati osservati 4 e 24 ore dopo 35 minuti di bilateralereneischemia. Nel polmone è stato osservato un aumento dei neutrofili e un ispessimento della parete alveolare 4 e 24 h doporeneischemia (Fig. 1D). Inoltre, è stato osservato l'aumento dell'espressione del locus complesso dell'antigene linfocitario 6 G6D (Ly6G, un marker per monociti, granulociti e neutrofili) nel tessuto polmonare in modo dipendente dal tempo di riperfusione (Fig. 1E e F). La concentrazione di interleuchina-6 (IL-6) nel plasma è aumentata doporeneIR, con un picco a 4 ore dopo l'ischemia (Fig. 1G). Le concentrazioni di I-6 e proteine, nonché il numero totale di cellule in BALF sono aumentate gradualmente a 4 e 24 ore dopo l'ischemia renale (Fig.1H-J). Il tasso di sopravvivenza a 24 h dopo 35 min direneL'IR era di circa il 92 percento (dati non mostrati).

quandoreneil tempo ischemico è stato esteso a 45 minuti, gli aumenti post-ischemici della concentrazione di BUN nel plasma e la concentrazione proteica totale e il numero di cellule in BALF erano maggiori di quelli dopo 35 minuti di ischemia (Fig.1K-M). Questi dati indicano che il danno polmonare indotto dareneLa lesione IR si basa sul grado direnelesione.

Fig. 1. Danno istologico e funzionale del polmone dopo IR renale. I topi maschi C57BL/6 sono stati sottoposti a 35 (A–M) e 45 (K–M) min di ischemia renale bilaterale o operazione simulata. Rene, polmone, sangue e BALF sono stati raccolti 4 e 24 ore dopo l'operazione. BALF è stato raccolto come descritto nei Materiali e Metodi. (A–J) I topi sono stati sacrificati 4 o 24 ore dopo 35 minuti di ischemia. (A, B)Renele sezioni (3 μm) sono state colorate con PAS ereneè stato segnato un danno tubolare. (C, K) Le concentrazioni di BUN sono state misurate nel plasma. (D) Le sezioni polmonari (3 μm) sono state colorate con H&E. (E, F) L'espressione di Ly6G nel tessuto polmonare è stata analizzata mediante western blotting. GAPDH è stato utilizzato come controllo di caricamento. Le densità delle bande sono state misurate utilizzando il software ImageJ. (G, H) La concentrazione di IL-6 è stata misurata nel plasma e nel BALF. (I, J, L, M) La concentrazione proteica e il numero totale di cellule sono stati misurati in BALF. (K–M) I topi sono stati sacrificati 4 ore dopo 35 o 45 minuti di ischemia. I risultati sono espressi come media ± SEM (n=3–6). *p < 0.05="" contro="" farsa.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" h="" dopo="" ischemia="" o="" ischemia="" per="" 35="">

2. Rene IRprovoca la rottura delle ciglia delle cellule epiteliali polmonari e questi frammenti vengono rilasciati in BALF.

Le sezioni di tessuto polmonare e i vetrini caricati con BALF sono stati immunocolorati con un anticorpo anti-ADP-ribosylation factor-like protein 13B(Arl13B, a marker of cilia). Segnali positivi per Arll3B sono stati osservati sulla parte luminale degli alveoli e sui bronchioli terminali del polmone (Fig.2A). La perdita del segnale Arl13B-positivo è stata osservata nel polmone direneTopi soggetti a IR (Fig.2A). Questa perdita del segnale positivo per Arll13B è gradualmente aumentata doporeneischemia nel tempo (Fig. 2A). In BALF, sono state osservate varie lunghezze di particelle Arl13B-positive dopo l'ischemia renale e il numero di particelle Arl13B-positive in BALF è aumentato gradualmente nel tempo dopo l'ischemia (Fig. 2B e C). L'espressione di Arl13B, acetilato-tubulina (ac- -tubulina, granulociti e neutrofili) nel tessuto polmonare è stata osservata in modo dipendente dal tempo di riperfusione (Fig.1E e F). La concentrazione di interleuchina-6 (IL-6) nel plasma è aumentata doporeneIR, con un picco a 4 ore dopo l'ischemia (Fig. 1G). Le concentrazioni di I-6 e proteine, nonché il numero totale di cellule in BALF sono aumentate gradualmente a 4 e 24 ore dopo l'ischemia renale (Fig.1H-J). Il tasso di sopravvivenza a 24 ore dopo 35 minuti di IR renale era di circa il 92 percento (dati non mostrati).

quandoreneil tempo ischemico è stato esteso a 45 minuti, gli aumenti post-ischemici della concentrazione di BUN nel plasma e la concentrazione proteica totale e il numero di cellule in BALF erano maggiori di quelli dopo 35 minuti di ischemia (Fig.1K-M). Questi dati indicano che il danno polmonare indotto dareneLa lesione IR si basa sul grado direnelesione.

Fig. 2. Rottura delle ciglia delle cellule polmonari e dei loro frammenti e proteine ​​rilasciati nel BALF dopo l'IR renale.I topi maschi C57BL/6 sono stati sottoposti a 35 minuti di ischemia renale bilaterale oa un'operazione simulata. Il tessuto polmonare e il BALF sono stati raccolti 4 e 24 ore dopo l'operazione, come descritto nei Materiali e nei metodi. (A) Le sezioni polmonari (5 μm) sono state sottoposte a colorazione immunofluorescente utilizzando un anticorpo anti-Arl13B; il verde indica Arl13B-positivo. La colorazione DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindolo; blu) è stata utilizzata per visualizzare i nuclei delle cellule. Le punte di freccia indicano le ciglia. (B) BALF (10 ul) è stato posto su un vetrino colorato con immunofluorescenza utilizzando un anticorpo anti-Arl13B; il verde indica Arl13B-positivo (n=3). (C) Il numero di particelle Arl13B-positive è stato contato al microscopio a fluorescenza (n=3). (D–G) Le espressioni di Arl13B, acetilato- -tubulina (ac- -tub) e -tubulina (-tub) in BALF sono state analizzate mediante western blotting. Le densità delle bande sono state misurate utilizzando il software ImageJ. I risultati sono espressi come media ± SEM (n=3). *p < 0.05="" contro="" farsa.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" h="" dopo="" l'ischemia.="" r:="" alveoli,="" tb:="">

3. L'IR renale aumenta i livelli di superossido e di stress ossidativo sia nel tessuto polmonare che nel BALF.

ReneL'IR ha aumentato il livello di superossido nel tessuto polmonare (Fig. 3A), mentre ha ridotto l'espressione di IDH2 (Fig. 3B e C), ma non MnSOD e catalasi (Fig, 3B.DE). Questi risultati indicano che il danno polmonare indotto da IR renale è associato ad aumenti dei livelli di ROS elo stress ossidativonei polmoni. A sostegno di ciò, il livello di 4-idrossi nominale (4-HNE), un prodotto della perossidazione lipidica, nel tessuto polmonare è aumentato significativamente 4 e 24 h doporeneischemia(Fig.3F-D). 4-HNE è stato osservato in quasi tutte le aree del tessuto polmonare, inclusi alveoli e bronchioli (Fig. 3H e D. Inoltre, l'espressione di 8-idrossi{5}}'-deossiguanosina ({{ 7}}OhdG), un noto marcatore dell'ossidazione del DNA come derivato ossidato della deossiguanosina, è aumentato sia nel citosol che nei nuclei delle cellule epiteliali polmonari doporeneischemia (Fig.3J e K. In BALF, anche l'espressione di 4-HNE è aumentata doporeneischemiain modo dipendente dal tempo di riperfusione (Fig. 3L, M). Inoltre, quando il tempo ischemico renale è stato esteso a 45 min, l'aumento post-ischemico dell'espressione 4- di HNE nei polmoni era maggiore di quello dopo 35 min direneischemia (Fig.3N, O). Questi risultati indicano che sia il DNA mitocondriale che il DNA nucleare sono danneggiati ossidativamente dall'aumento della formazione di ROS e dalle alterazioni dei sistemi di rimozione, suggerendo che il danno alle ciglia delle cellule epiteliali polmonari è associato alo stress ossidativo.

Fig. 3. Stress ossidativo nel tessuto polmonare dopo IR renale. I topi maschi C57BL/6 sono stati sottoposti a 35 (A–O) e 45 (N, O) min di ischemia renale bilaterale o operazione simulata.Polmone erenesono stati raccolti 4 e 24 ore dopo 35 minuti o 45 minuti di ischemia. (A-M) I topi sono stati sacrificati 4 o 24 ore dopo 35 minuti di ischemia. (A) Il livello di superossido nel tessuto polmonare è stato misurato come descritto in Materiali e metodi (n=3-5). (B–E) L'espressione di IDH2, catalasi e MnSOD nel tessuto polmonare è stata analizzata mediante western blotting (n {{10}}). GAPDH è stato utilizzato come controllo del caricamento. (C–E) Le densità delle bande sono state misurate utilizzando il software ImageJ. (F, G) 4-L'espressione HNE nel polmone è stata analizzata mediante western blotting e la densità della banda è stata misurata utilizzando ImageJ (n=4). (H–K) Le sezioni polmonari (3 μm) sono state colorate mediante immunoistochimica utilizzando anticorpi anti-4-HNE e 8-OHdG e controcolorate utilizzando ematossilina; il marrone indica 4-HNE- e 8-OHdG-positivo (n {{20}}). (I, K) Le intensità dei segnali 4-HNE- e 8-OHdG-positivi sono state misurate utilizzando il programma i-Solution (n=3). (L, M) 4-L'espressione HNE in BALF è stata analizzata mediante western blotting e la densità di banda è stata misurata utilizzando ImageJ (n=3). (N, O) I topi sono stati sacrificati 4 ore dopo 35 o 45 minuti di ischemia. 4-L'espressione HNE nel polmone è stata analizzata mediante western blotting e la densità della banda è stata misurata utilizzando ImageJ (n=3). I risultati sono espressi come media ± SEM (n =3–5). *p < 0,05="" rispetto="" a="" finto.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" h="" dopo="" l'ischemia="" o="" 35="" min="" di="" ischemia.="" (per="" l'interpretazione="" dei="" riferimenti="" al="" colore="" in="" questa="" legenda="" della="" figura,="" si="" rimanda="" il="" lettore="" alla="" versione="" web="" di="" questo="">

Nelle cellule, i mitocondri. un importante organello intracellulare che produce ROS subisce normalmente fusione e fissione per adattarsi a condizioni fisiologiche e patologiche. L'alterazione di questi processi di fusione e fissione può indurre disfunzioni e danni cellulari[36]. Studi precedenti lo hanno dimostratoossidativofaticaaltera la normale dinamica della fusione e fissione mitocondriale, con conseguente disfunzione mitocondriale e danno cellulare [32,{1}}]. Abbiamo cercato di valutare la dinamica mitocondriale determinando le espressioni proteiche di regolazione della fissione e della fusione mitocondriale. Le espressioni di Fis1 e Drp1, che regolano la fissione mitocondriale, erano significativamente aumentate nei polmoni dei topi conreneischemia(Fig.4A-C). Tuttavia, l'espressione di OPA1, che regola la fusione mitocondriale, non è stata significativamente alterata dall'IR renale (Fig.4A, D). Questi dati indicano che l'equilibrio della fusione mitocondriale e della fissione nelle cellule polmonari è interrotto a causa dell'AKI (Danno renale acuto).

Fig. 4. Modifica della dinamica mitocondriale nel polmone dopo IR renale. I topi maschi C57BL/6 sono stati sottoposti a 35 minuti di ischemia renale bilaterale o a un'operazione simulata.I polmoni sono stati prelevati 4 e 24 ore dopo l'ischemia. (AD) Le espressioni di Drp1, Fis1 e OPA1 nei tessuti polmonari sono state analizzate mediante western blotting. GAPDH è stato utilizzato come controllo del caricamento. Le densità delle bande sono state misurate utilizzando il software ImageJ. I risultati sono espressi come media ± SEM (n=4). *p < 0.05="" contro="" farsa.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" h="" dopo="">

4. Il trattamento antiossidante specifico per i mitocondri riduce il danno polmonare indotto dall'IR renale e la rottura delle ciglia polmonari.

Per confermare il ruolo del mitocondrialeossidativofaticaSureneDanno polmonare indotto da IR e rottura delle ciglia delle cellule epiteliali polmonari, abbiamo testato se il pretrattamento (Fig. 5A-D o il post-trattamento (Fig. 5J-L) con Mito-TEMPO, un antiossidante specifico dei mitocondri, inibisce il rene indotto da IRossidativofatica, I{0}} produzione e deciliazione nei polmoni di topi maschi C57BL/6. Il pretrattamento (Fig. 5A-D), ma non il post-trattamento (Fig. 5J-L), con Mito-TEMPO, ha inibito significativamente l'aumento delle concentrazioni di BUN e IL-6 nel plasma (Fig.5A e B) come così come la concentrazione di IL-6, la concentrazione proteica totale e il numero totale di cellule in BALF (Fig, 5C-E). Le espressioni di Arl13B, ac{15}}tubulina e -tubulina nel BALF dei topi pretrattati con Mito-TEMPO erano inferiori a quelle dei topi trattati con veicolo (Fig. 5F-I). In questo studio, un 6-h post-trattamento non ha protetto i polmonireneIR(Fig.5J-L). Questi risultati indicano che la produzione iniziale di ROS, il suo accumulo eossidativofaticapuò contribuire in modo importante all'AKI (Danno renale acuto)-danno polmonare indotto. I livelli di superossido e l'espressione di 4- HNE nel tessuto polmonare (Fig. 6A-C) e in BALF (Fig. 6D ed E) erano inferiori nei topi pretrattati con Mito-TEMPO rispetto ai topi trattati con veicolo. Questi risultati lo indicanoreneIl danno polmonare indotto da IR e la deciliazione delle cellule epiteliali polmonari sono associati al mitocondrialeossidativofatica.

Fig. 5. Prevenzione del danno polmonare indotto da IR renale e della rottura delle ciglia da Mito-TEMPO, un antiossidante mirato ai mitocondri. I topi maschi C57BL/6 sono stati sottoposti a 35 minuti di ischemia renale bilaterale.Ad alcuni topi è stato somministrato Mito-TEMPO (Mito-T, 0.7 mg/kg di peso corporeo, ip) 17 e 1 ora prima dell'ischemia, due volte (A–I) o 6 ore dopo l'ischemia (J– L). Polmone, BALF e sangue sono stati raccolti 24 h dopo l'ischemia. (A, J) È stata misurata la concentrazione di BUN nel plasma. (B, C) Le concentrazioni di IL-6 nel plasma e BALF sono state misurate utilizzando il kit di test ELISA. (D, E, K, L) Sono state misurate la concentrazione proteica e il numero di cellule in BALF. (F–I) Arl13B, espressioni acetilate{{10}}tubulina (ac- -tub) e -tubulina (-tub) in BALF sono state analizzate mediante western blotting. Le densità delle bande sono state misurate utilizzando il software ImageJ. I risultati sono espressi come media ± SEM (n=4). *p < 0,05="" rispetto="" al="">

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