Effetto dell'echinacoside sui ratti con ischemia cerebrale

Astratto: Obiettivo Studiare l'effetto diEchinoside(ECH) sui neurotrasmettitori monoamminici nel fluido extracellulare dello striato nei ratti con ischemia cerebrale focale e per esplorare il possibile meccanismo dell'effetto neuroprotettivo dell'ECH sul cervello. Metodi I ratti SD sono stati divisi casualmente in un gruppo di controllo, un gruppo modello, gruppi ECH ad alta e bassa dose e gruppo ligustrazina (CXQ). Ai ratti di ciascun gruppo sono stati somministrati i farmaci corrispondenti o la soluzione salina fisiologica per via intraperitoneale una volta al giorno per 7 giorni. Il terzo giorno di somministrazione, il manicotto della sonda è stato incorporato nello striato del cervello. Un'ora dopo l'ultima somministrazione è stato realizzato il modello di ischemia cerebrale focale (MCAO) nel ratto. Dopo aver realizzato il modello, è stata eseguita immediatamente la microdialisi. Il dializzato è stato iniettato nel rilevatore elettrochimico-cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC-ECD) per determinare il contenuto di norepinefrina (NE), dopamina (DA), 5-idrossitriptamina (5-HT), 3 ,4-acido diidrossifenilacetico (DOPAC), acido omovanillico (HVA), 5-acido idrossiindolacetico (HIAA) nel fluido extracellulare dello striato di ciascun gruppo. Risultati Rispetto al gruppo di controllo, i livelli di NE, DA e 5-HT nel gruppo modello sono aumentati, così come sono aumentati anche i metaboliti acidi DOPAC, HVA e HIAA. Rispetto al gruppo modello, il contenuto di sei sostanze nei gruppi ad alto e basso dosaggio ECH (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) e CXQ è diminuito. Conclusione L'effetto neuroprotettivo dell'ECH può essere correlato all'aumento dei neurotrasmettitori monoaminici dopo ischemia cerebrale.

Polvere di cistanza

Parole chiave: Echinoside; Ischemia cerebrale; Striato; HPLC-ECD; Neurotrasmettitori e metaboliti delle monoammine

Echinaceoside(ECH) è un componente efficace dei glicosidi feniletanoidi isolati e purificatiCistanche deserticola, uno stabilimento speciale nello Xinjiang. Gli studi hanno dimostrato che l'ECH ha effetti neuroprotettivi come antiossidante [1-2], protezione dei nervi [3-4], antietà [5] e miglioramento dell'apprendimento e della memoria [6-8]. I risultati di Chen Hong et al. hanno confermato che l'ECH ha un effetto protettivo sui neuroni DA nella malattia di Parkinson [9]. I neurotrasmettitori monoaminici sono una sorta di sostanze importanti che regolano le attività fisiologiche del corpo.Il contenuto nel tessuto può riflettere i processi di biosintesi, rilascio, assorbimento e inattivazione dei neurotrasmettitori [10-11]. Al momento non esiste alcun rapporto rilevante sull’effetto dell’ECH sui trasmettitori delle monoammine nel cervello dei ratti con ischemia cerebrale. In questo studio, l'effetto dell'ECH sul contenuto dei neurotrasmettitori monoaminici nel fluido extracellulare dello striato di ratti con ischemia cerebrale è stato studiato utilizzando la tecnologia della microdialisi cerebrale ed è stato esplorato preliminarmente il possibile meccanismo dell'ECH sulla neuroprotezione cerebrale.

Polvere di estratto di Cistanche tubulosa

1.Materiale

1.1 Animali da esperimento

Ratti SD, ♂, massa corporea 250~300 g (acquistati dallo Xinjiang Experimental Animal Center, numero di licenza: 2009-0053).

1.2 Farmaci e reagenti

L'ECH è donato dal Professor Tu Pengfei, Facoltà di Farmacia, Università di Pechino (purezza superiore al 95%); Noradrenalina (NE), dopamina (DA), 5-idrossitriptamina (5-HT), acido 3,4-diidrossifenilacetico (DOPAC), acido omovanillico (HVA)

5-l'acido idrossi indolacetico (HIAA) è Sigma; Tetrametilpirazina cloridrato iniettabile (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Cemento al fosfato di zinco (prodotto della Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., composto da liquido e polvere, miscelati con il tempo); Sodio 1-alchilsolfato (DIKMA); Acido citrico idrato (Tianjin Jinke Fine Chemical Research Institute); Citrato trisodico (Acros); Acido disodico etilendiamminotetracetico (JTTakerChemicalco); Metanolo (DIKMA); Acetonitrile (DIKMA); Il liquido di perfusione per microdialisi cerebrale è un'iniezione composta di cloruro di sodio (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Tutta l'acqua utilizzata è acqua ri-vapore.

1.3 Strumento

Apparato stereotassico americano per cervello di ratto BAS4100; Sonda CMA/12 e manicotto della sonda; Dispositivo per animali coscienti CMA/120; Micropompa CMA/402; CMA/150 Raccoglitore automatico di campioni a bassa temperatura. Pompa per infusione Esa 5600A; Pompa per infusione Esa 5600A; Dispositivo automatico per l'iniezione del campione Esa 542; il rilevatore elettrochimico CoulArray dell'Esa; Elettrodo di lavoro in carbonio vetroso ed elettrodo di riferimento Ag/AgCl; colonna C18 (DIKMA, ODS5 μ m, 150 mm × 4,6 mm); Stazione di cromatografia CoulArraywin (società Esa); Miscelatore vortex (tipo QL-861); Tester di acidità da tavolo (HANNA-211); Centrifuga da tavolo ad alta velocità (tipo XYJ-2).

2.Metodo

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2.1 Raggruppamento e somministrazione degli animali

Trenta ratti sono stati divisi casualmente in cinque gruppi: ① Gruppo di controllo: 1 ml · kg-1 · d-1 soluzione salina normale; ② Gruppo di modelli: soluzione salina normale 1 ml · kg-1 · d-1; ③ Modello+ligustrazina (CXQ) 30 mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Modello+ECH gruppi a dosaggio alto e basso (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; A tutti gli animali di ciascun gruppo è stata iniettata per via intraperitoneale per 7 giorni.

2.2 Metodo di modellazione e microdialisi

Ciascun ratto è stato sepolto con una cannula il terzo giorno di somministrazione: i ratti sono stati anestetizzati con cloralio idrato all'10% (3,5 ml · kg-1), fissato sull'apparato stereotassico cerebrale BAS4100, e un catetere sonda è stato impiantato nello striato sinistro (coordinate AP:+0.2mm; ML: - 3.0mm; DV: - 3.5mm) riguardante la "Mappa stereotassica del cervello di ratto" di GeorgePaxinos. Dopo l'ultima somministrazione, i ratti sono stati anestetizzati 1 ora dopo e ai ratti è stato realizzato un modello di ischemia cerebrale focale (modello MCAO) utilizzando il metodo di sutura Longa migliorato di Yang Zanzhang [12]. La lenza nel gruppo di controllo è stata inserita solo per 10 mm e gli altri passaggi erano gli stessi del gruppo operativo. Dopo la modellazione, inserire la sonda per microdialisi nello stato di movimento cosciente e libero e utilizzare la soluzione Ringer per μ. Il microdializzato cerebrale è stato raccolto a 4 gradi e un tubo di dializzato è stato raccolto a 20 minuti. Dopo aver raccolto ciascuna provetta di dializzato, deve essere immediatamente conservata in un frigorifero a - 20 gradi e trasferita in un frigorifero a - 70 gradi dopo la dialisi. Prima dell'uso è stato misurato il tasso di recupero della sonda, che è stata utilizzata per convertire la concentrazione di neurotrasmettitori monoaminici nel dializzato.

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2.3 Analisi HPLC-ECD

Configurazione della fase mobile: la fase mobile contiene 829 ml di 0,15mol · L-1 tampone acido citrico-sodio citrato per litro; 0.1mol · L-1 EDTA disodico 1ml; Metanolo 150ml; Sodio {{10}}alchilsolfato 0,283 g. Impostare la portata della fase mobile su 0.7ml · min-1 e la temperatura del forno della colonna su 28 gradi. La tensione di funzionamento del rilevatore elettrochimico è 200mV, 400 mV e 600 mV, rispettivamente con 2, 3 e 4 canali; Il guadagno è 2nA. Il volume di iniezione è di 25 μl. La curva standard è disegnata con una soluzione standard mista con gradiente 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 mg · L-1.

2.4 Elaborazione statistica

I dati sperimentali sono espressi nel campo x ± s e i dati delle misurazioni ripetute vengono analizzati utilizzando il software statistico SPSS13.0.

La Fig. 1-6 illustra i cambiamenti nei livelli di NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA e 5-HT nel fluido extracellulare dello striato del ratto. Dalla figura si può vedere che dopo l'ischemia cerebrale, i neurotrasmettitori monoaminici nel fluido extracellulare dello striato presentano un disordine metabolico e il contenuto di ciascun neurotrasmettitore è aumentato. Entro un certo intervallo l'aumento è più evidente con il prolungamento del tempo di ischemia. A 90 minuti di ischemia, la concentrazione di DA e NE nel liquido extracellulare dello striato era più di tre volte superiore al livello del gruppo di controllo. I livelli di NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA e 5-HT nel gruppo di controllo sono diminuiti da alti a bassi, il che potrebbe essere correlato all'ischemia temporanea del cervello sinistro dopo la legatura dell'arteria carotide comune sinistra e i danni causati dall'inserimento della sonda. Dalla curva di cambiamento, ECH e CXQ possono ridurre la concentrazione di picco di DA, DOPAC, HIAA, HVA e 5-HT dopo ischemia cerebrale, e CXQ e ECH ad alte dosi sono più evidenti. Lo spostamento verso il basso della curva dell'andamento temporale di ciascun neurotrasmettitore indica che l'ECH può inibire l'aumento dei neurotrasmettitori e dei loro metaboliti nel cervello dei ratti con ischemia cerebrale.

                                                                           Fig2 Effetto dell'echinoside sul livello extracellulare di DA nello striato dei ratti

Fig3 Effetto dell'echinoside sul livello extracellulare del DOPAC nello striato dei ratti Fig4Effetto dell'echinoside sul livello extracellulare dell'HIVV nello striato dei ratti

Fig5 Effetto dell'echinoside sul livello extracellulare dell'HVA nello striato dei ratti Fig6 Effetto dell'echinoside sul livello extracellulare dell'5-HT istriato dei ratti

4.Discussione

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Il meccanismo della lesione cerebrale causata dall’ischemia cerebrale è complesso. In caso di ischemia cerebrale, i neurotrasmettitori monoaminici nel cervello sono disturbati e il contenuto di NE, DA e 5-HT è significativamente ridotto. Più grave è l'ischemia cerebrale, minore è il contenuto di NE, DA e 5-HT nel tessuto cerebrale [13]. Il metodo della microdialisi intracerebrale ha dimostrato che il contenuto dei neurotrasmettitori monoamminici aumenta nel liquido extracellulare durante l'ischemia cerebrale, perdura per tutto il periodo ischemico ed aumenta ulteriormente con il prolungamento del tempo ischemico. I risultati sperimentali erano coerenti con il rapporto [14].Echinosideè un componente efficace dei glicosidi feniletanoidi isolati e purificati dalla Cistanche deserticola, una pianta speciale dello Xinjiang. Ha molti effetti neuroprotettivi come anti-invecchiamento, miglioramento dell'apprendimento e della memoria e apoptosi anti-neuronale. In questo studio, la microdialisi cerebrale avanzata domestica combinata con la tecnologia di rilevamento HPLC-ECD è stata utilizzata per esplorare preliminarmente l'effetto diEchinosidesui neurotrasmettitori monoamminici e sui loro metaboliti nel liquido extracellulare dello striato di ratti sperimentali con ischemia cerebrale. I risultati hanno mostrato che l'ECH può ridurre l'aumento dei neurotrasmettitori monoaminici nel liquido extracellulare dello striato causato dall'ischemia cerebrale e ha un effetto migliore nel migliorare il danno del tessuto ischemico cerebrale.