Ingredienti efficaci di Cistanche: metodo di separazione e purificazione dei glicosidi feniletanoidi

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Isolamento e purificazione dei glicosidi feniletanoidi da Cistanche Deserticola mediante cromatografia in controcorrente ad alta velocità

Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a,

J. Christopher Young n. Honghui Zhu n

un Dipartimento di Chimica, Università Normale di Changchun, Changchun 130032, Cina

b Guelph Food Research Centre, agricoltura e agroalimentare Canada, 93 Stone Road West, Guelph, Ontario, Canada N1G 5C9

Ricevuto il 31 maggio 2007; ricevuto in forma rivista il 16 ottobre 2007; accettato il 29 ottobre 2007

Astratto:

Cinqueglicosidi feniletanoidi(PhG),echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside e 20-acetilacteoside sono stati isolati e purificati daCistanche deserticheper la prima volta mediante cromatografia in controcorrente ad alta velocità (HSCCC) utilizzando due sistemi bifasici, uno costituito da acetato di etile-etanolo-acqua (5:0.5:4.5, v/v/v) e un altro di acetato di etile–n-butanolo–etanolo-acqua ({{10}}.5:{14}}.5:0.1:1, v/v/v/v). Un totale di 28,5 mg di echinacoside, 18,4 mg dicistanoside A, 14,6 mg diacteoside, 30,1 mg di isoacteoside e 25,2 mg di 20-acetilacteoside sono stati purificati da 1412 mg dell'estratto di n-butanolo diCistanche desertiche, ciascuno con una purezza superiore al 92,5% come determinato da HPLC. Le strutture sono state identificate dal loro tempo di ritenzione, UV, LC–ESI-MS nella modalità di ioni negativi e confermate da esperimenti NMR. Viene discusso il caratteristico pattern di frammentazione LC–ESI-MSn dei cinque composti, che risulta essere uno strumento molto specifico e utile per l'identificazione strutturale dei PhG di questa importante pianta medicinale.

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Parole chiave:Cistanche desertiche; feniletanoide;Echinacoside; cistanoside A;Atteosidi; isoacteoside; 20-Acetilatteoside; HSCCC; LC-ESI-MS; NMR

1. Introduzione

Cistanche deserticheYC Ma è una nota erboristeria cinese ed è stata ampiamente utilizzata in preparazioni tradizionali simili agli odierni ingredienti alimentari funzionali o integratori alimentari (Wong, Li, Cheng e Chen, 2006). I principali costituenti bioattivi in ​​C. deserticola sonofeniletanoideglicosidi (PhGs), compresiechinacoside, acteoside, isoacteoside, 20-acetilacteoside ecistanoside A(Kobayashi, Karasawa e Miyase, 1984; Kobayashi et al., 1987). I PhG sono ampiamente distribuiti nel regno vegetale e sono stati ampiamente studiati per le loro varie funzioni biologiche come attività epatoprotettiva (Xiong et al., 1998), antinfiammatoria, antinocicettiva (Schapoval et al., 1998) e attività antiossidante (Cheng , Wei, Guo, Ni e Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li e But, 2000; Li, Wang e Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu e Jia, 1993; Wang, Jiang , Wu e Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani e Namba, 1996), migliorando la funzione sessuale (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu e Chen, 1996) e l'effetto sedativo (Lu, 1998) .

A causa delle suddette significative bioattività, sono urgentemente necessarie grandi quantità di composti puri come standard di riferimento e per vari studi in vitro e in vivo relativi all'uso delle medicine tradizionali cinesi. Diventano quindi necessari metodi efficaci per l'isolamento, la purificazione e la caratterizzazione strutturale dei PhG. Tuttavia, tale lavoro richiede solitamente l'uso di più fasi cromatografiche per la pulizia e l'isolamento del campione (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten e Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin e Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, & Li, 1990; Shoyama, Matsumoto, & Nishioka, 1987), che di solito si traduce in bassi tassi di recupero a causa dell'adsorbimento irreversibile di PhG sul supporto solido durante la separazione (Lei et al., 2001). Al contrario, la cromatografia in controcorrente ad alta velocità (HSCCC) è diventata un'efficace alternativa alle tecniche cromatografiche convenzionali per la separazione di alcuni PhG da estratti vegetali (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Lei et al. separato con successoacteosidee 20-acetilacteoside dalla salsa Cistanches (CA Mey.) G. Beck utilizzando HSCCC (Lei et al., 2001). Gli autori di questo articolo hanno precedentemente riportato la separazione diacteosidee isoacteoside di Plantago psyllium L. di HSCCC (Li et al., 2005). Tuttavia, nessun rapporto è stato pubblicato sulla separazione e purificazione di più PhG daCistanche deserticheutilizzando HSCCC. A causa della mancanza di standard, i metodi LC-MS sono stati sviluppati e utilizzati come un potente strumento analitico per la caratterizzazione e l'identificazione rapida di alcuni PhG nell'estratto vegetale (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).

In questo articolo riportiamo un metodo HSCCC sviluppato per la preparazione di echinacoside,cistanoside A, acteoside, isoacteoside e 20-acetilacteoside daCistanche desertiche. La caratterizzazione e l'analisi dei cinque PhG separati sono state realizzate mediante l'uso di LC accoppiato con spettrometria di massa ESI in linea e esperimenti NMR. Il tempo di ritenzione, il peso molecolare e il caratteristico frammento di ioni dei cinque PhG sono presentati e discussi in questo articolo. Le strutture dei cinque PhG identificati in questa indagine sono mostrate in Fig. 1.

echinacosidein cistanche

2. Sperimentale

2.1. Sostanze chimiche e reagenti

Atteosidiè stato acquistato da Sigma–Aldrich (Oak-Ville, ON), l'echinacoside è stato acquistato da ChromaDex (Santa Ana, CA). L'isoacteoside è stato isolato da P. psyllium L. (Li et al., 2005).Cistanche deserticheè stato acquistato dal Beijing TongRenTang Medicinal Store (Cina). Tutti i solventi erano di grado HPLC e acquistati da Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).

2.2. preparazione del campione

Cistanche desertiche(20 g) è stato estratto cinque volte a temperatura ambiente per 12 ore ciascuna con 100 mL di etanolo acquoso all'80%. Ogni volta la miscela di estrazione veniva filtrata attraverso una carta da filtro Whatman No.1 (Whatman International Ltd., Maidstone, Inghilterra). Il filtrato combinato è stato concentrato a 100 mL sotto vuoto a < 40="" gradi.="" la="" soluzione="" acquosa="" risultante="" è="" stata="" sgrassata="" due="" volte,="" ciascuna="" con="" 100="" ml="" di="" esano,="" e="" quindi="" estratta="" successivamente="" per="" cinque="" volte,="" ciascuna="" con="" 100="" ml="" di="" n-butanolo.="" gli="" strati="" di="" n-butanolo="" sono="" stati="" combinati="" e="" concentrati="" a="" secchezza="" sotto="" vuoto="" a="">< 40="" gradi,="" il="" che="" ha="" prodotto="" 2,2="" g="" di="" estratto="" di="" n-butanolo.="" l'estratto="" è="" stato="" conservato="" a="" -20="" gradi="" prima="" della="" separazione="">

2.3. Procedura di separazione HSCCC

L'HSCCC preparativo è stato eseguito in una cromatografia in controcorrente modello CCC{{0}} ad alta velocità (Pharma-Tech Research, Baltimora, Maryland USA). Questo apparato aveva tre bobine preparative, collegate in serie (volume totale, 325 mL). La velocità di rotazione dell'apparato può essere regolata tra 0 e 2000 giri/min. Il sistema HSCCC era dotato di una pompa HPLC (Pharma-Tech Research, Baltimora, Maryland, USA), un rilevatore UV modello 450 (Alltech, USA), un registratore a letto piatto modello L 120 E (Linseis Inc., Princeton Jct, USA), un raccoglitore di frazioni (Advantec MFS Inc., USA) e una valvola di iniezione del campione con un ciclo di 10-mL.

Una miscela di acetato di etile-etanolo-acqua (5:0.5:4,5, v/v/v) è stata agitata vigorosamente in un imbuto separatore e lasciata riposare e separare a temperatura ambiente. Le due fasi sono state utilizzate nell'HSCCC dopo aver raggiunto l'equilibrio. L'intera colonna a spirale è stata prima riempita con lo strato superiore, che funge da fase stazionaria. Lo strato inferiore (fase mobile) è stato quindi pompato nell'estremità di testa della colonna a una portata di 1,5 mL/min. La velocità di rotazione è stata impostata a 1050 giri/min. Un campione (ca. 230 mg ogni volta) disciolto in 8 ml della miscela di acetato di etile-etanolo-acqua (5:0,5:4,5, v/v/v) è stato caricato nella valvola di iniezione dopo che il sistema ha raggiunto l'idrodinamica equilibrio. Questo sistema solvente bifasico è stato selezionato in base al coefficiente di partizione (K), che era 0,87, 1,11 e 1,32 peracteoside, isoacteoside e 20 acetylacteoside, rispettivamente. Il valore K era il rapporto tra le concentrazioni negli strati superiore e inferiore dello stesso composto determinato mediante HPLC (Fig. 2). L'effluente dall'uscita della colonna è stato continuamente monitorato da un rivelatore UV a 254 nm e raccolto in provette con un collettore di frazioni impostato a 4 minuti per ciascuna provetta.

2.4. Condizioni LC

per l'analisi dei PhG nell'estratto n-butanolo diCistanche desertichee frazioni raccolte dalla separazione HSCCC. La separazione è stata effettuata in una colonna Phenomenex ODS-C18 (250 × 4,6 mm, 5 lm) con una colonna di guardia C18. La fase mobile binaria era costituita da acetonitrile (solvente A) e acqua contenente il 2% di acido acetico (solvente B). Tutti i solventi sono stati filtrati attraverso a

{{0}}.45 filtro lm prima dell'uso. La portata è stata mantenuta costante a 1.0 ml/min per un tempo di esecuzione totale di 25 min. Il sistema è stato eseguito con un programma gradiente: 0–20 min: dal 90 percento B al 60 percento B; 20–22 min: dal 60% B allo 0% B; e 22–25 min, da 0% B a 90% B. Il volume di iniezione del campione era di 10 lL. I picchi di interesse sono stati monitorati a 320 nm da un rilevatore DAD.

2.5. Esperimenti LC-ESI-MS

Gli esperimenti LC-MS sono stati condotti utilizzando uno spettrometro di massa a trappola ionica Finnigan LCQ DECA (Thermo Finnigan, San Jose, CA, USA) dotato di una sorgente di ionizzazione elettrospray (ESI). I campioni sono stati analizzati nelle stesse condizioni cromatografiche. Per la raccolta dei dati è stato utilizzato un modello negativo. La portata del gas di guaina e quella ausiliaria sono state fissate rispettivamente a 96 e 7 (unità arbitraria). La tensione capillare è stata fissata a 29 V e la sua temperatura è stata controllata a 350 gradi. La tensione della lente d'ingresso è stata fissata a 40 V e l'ampiezza RF multipolare è stata fissata a 540 V. La tensione dell'ago ESI è stata controllata a 4,5 kV. L'offset della lente del tubo era 16 V, l'offset della lente multipolare 1 era 8,20 V e l'offset della lente multipolare 2 era 10,5 V. La tensione del moltiplicatore di elettroni era impostata a 980 V per il rilevamento di ioni.

2.6. NMR per l'identificazione

Gli spettri NMR sono stati registrati su uno spettrometro Bruker Avance{0}} (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Canada). Solo i composti 2 e 5 (nessuno standard disponibile) sono stati sottoposti a esperimenti NMR. I campioni sono stati disciolti in CD3OD.

3. Risultati e discussioni

3.1. Separazione HSCCC

L'estratto di n-butanolo diCistanche desertichee le frazioni corrispondenti a ciascun picco isolato da HSCCC sono state analizzate mediante HPLC e i risultati sono riportati in Fig. 2. Cinque composti principali (picchi 1–5) sono stati separati e rilevati con tempi di ritenzione a 9,2 min, 10,7 min, 12,3 min ,

13,3 min e 16,2 min, rispettivamente.

Una corretta separazione HSCCC dipende in gran parte da un adatto sistema solvente a due fasi che fornisce un coefficiente di partizione ideale (K) intorno a 1 per il composto desiderato. Un tale sistema bifasico dovrebbe anche produrre un tempo di assestamento ragionevolmente breve (Chen, Games, & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka, & Ito, 1991). Nel nostro esperimento, abbiamo selezionato quattro serie di sistemi solventi in base alla solubilità dei composti target inCistanche desertiche. HPLC è stato utilizzato per misurare la concentrazione in ciascuna fase, da cui sono stati calcolati i valori K dei composti target. Due sistemi, acetato di etile–n-butanolo–etanolo-acqua (4:0.6:0.6:5, v/v/v/v) e acetato di etile–acqua (1: 1, v/v), sono stati precedentemente utilizzati in HSCCC per separareacteosidee 20-acetilatteoside da C. salsa,acteoside, e isoacteoside di P. Psyllium, rispettivamente (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Sebbene il primo sistema abbia avuto un tempo di assestamento relativamente breve, ha avuto scarse prestazioni nel separare i PhG diCistanche desertiche, a causa dei bassi valori di K per i composti 1 e 2 e di K elevati per i composti 3–5. I valori di K erano molto bassi per i composti 1–4 nel secondo sistema, ma molto alti per il composto 5 (Tabella 1). Un sistema modificato contenente acetato di etile-etanolo-acqua (5:{{10}}.5:4.5, v/v/v), ha fornito un valore K ideale per i composti 3–5 a 0,87, 1,11, e 1,32, rispettivamente, e ha portato alla buona separazione di questi tre composti (Fig. 3A e B). Questo sistema, tuttavia, ha prodotto

un valore K troppo piccolo per i composti 1 e 2, causando la coeluizione dei due composti vicino al fronte del solvente (frazione 1 in Fig. 3A). Un'ulteriore modifica al sistema (acetato di etile–n-butanolo–etanolo-acqua (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/ v) ha elevato i valori K per il composto 1 e 2 a 0.52 e 0.92, rispettivamente, e ha portato alla separazione completa (Fig. 3C). La Fig. 3A mostra la separazione HSCCC di un campione contenente 230 mg di estratto di n-butanolo diCistanche deserticheusando acetato di etile-etanolo-acqua (5:0.5:4.5, v/v/v). Le frazioni che sono state confermate dall'HPLC per contenere solo i composti 3, 4 o 5 sono state combinate separatamente e quelle contenenti i composti 3 e 4 sono state riunite, liofilizzate e sottoposte nuovamente all'HSCCC per un'ulteriore separazione (Fig. 3B). La separazione HSCCC in due fasi sopra descritta ha prodotto un totale di 14,6 mg, 30,1 mg e 25,2 mg di composti 3–5 da 1412 mg di estratto di n-butanolo. La Fig. 3C mostra la separazione HSCCC di un campione contenente i composti 1 e 2 (frazione 1 nella prima separazione) utilizzando acetato di etile–n-butanolo–etanolo-acqua (0.5:0.5 :0.1:1, v/v/ v/v). Sono stati ottenuti in totale 28,5 e 18,4 mg dei composti 1 e 2. Le purezza cromatografiche dei composti liofilizzati 1–5 erano superiori al 92,5 percento, che sono stati utilizzati direttamente per le analisi LC-ESI-MS e NMR.

3.2. Identificazione strutturale mediante LC–ESI-MS e NMR

L'identificazione provvisoria dei composti 1, 3 e 4 è stata ottenuta mediante tempi di ritenzione congruenti e dati spettrali UV con quelli dell'echinacoside autentico,acteoside, e isoacteoside (Fig. 2). I composti 2 e 5 erano sconosciuti, tuttavia, gli spettri UV di tutti e cinque i composti erano molto simili, indicando caratteristiche strutturali simili.

Per studiare ulteriormente le strutture di questi cinque composti, sono stati tentati esperimenti LC-ESI-MSn ei risultati sono mostrati in Fig. 4 e Tabella 2. I composti relativi ai picchi (1–5) in Fig. 2 hanno mostrato intensi ioni molecolari deprotonati [MH]— a m/z 785, 799, 623, 623 e 665, rispettivamente, in modalità negativa. Gli ioni dimerici [2M H]— sono stati osservati anche per i picchi 1–4 in Fig. 2. Questi hanno confermato che i pesi molecolari dei picchi 1–5 erano rispettivamente 786, 800, 624, 624 e 666. I dati LC-MSN (Tabella 2) hanno fornito informazioni strutturali molto utili per i cinque PhG, come la perdita neutra di

una procedura sperimentale: circa 1 mg di ciascun campione è stato pesato in una provetta da 10 mL in cui è stato aggiunto 1 mL di ciascuna fase del sistema solvente bifasico pre-equilibrato. La provetta è stata tappata e agitata vigorosamente per 1 minuto e lasciata riposare fino a quando non si è separata completamente. Un'aliquota di 100 1L di ciascuno strato è stata estratta ed evaporata separatamente a secchezza sotto vuoto a<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

il gruppo caffeoile (162), il gruppo glucosio (162), il gruppo ramnosio (146), un radicale CH2 (14) e il gruppo COCH2 (42).

L'LC-ESI-MS del picco 1 è mostrato in Fig. 4A. Lo ione molecolare deprotonato [MH] — a m/z 785 con un'elevata abbondanza e un molecolare dimerico deprotonato

ione [2M H]— a m/z 1571 è stato osservato in modo negativo, indicativo di un peso molecolare di 786, che era lo stesso di quello dell'echinacoside. Ulteriori indagini nell'esperimento LC-MS2 degli ioni m/z 785 hanno prodotto uno ione figlia principale a m/z 623 (Fig. 4B) prodotto direttamente da m/z 785 dalla perdita di una parte caffeoile o di una parte esosa come [M 162 H]—. Lo spettro LC-MS3 di m/z 623 mostrava due ioni principali a m/z 477 e 461 e due ioni minori a m/z 315 e 179 (Fig. 3C, Tabella 2). Le differenze di massa tra m/z 623 e gli ioni frammento m/z 477 e 461 erano rispettivamente di 146 e 162, corrispondenti alla perdita di un'unità di ramnosio e di una frazione di glucosio o di una frazione caffè-feel [M 162 H]—. Gli ioni m/z 623 hanno anche perso una parte caffeoile e una parte ramnosio per produrre gli ioni m/z 315. Lo ione a m/z 179 è stato prodotto dalla scissione della frazione caffeoil, con la carica negativa rimanente da parte della parte caffeoil. L'esperimento LC-ESI-MSN sull'echinacoside autentico ha mostrato lo stesso modello di frammentazione. Il picco 1 è stato quindi confermato essere echinacoside.

Per il picco 2, LC-ESI-MS ha mostrato m/z 799 come ione molecolare deprotonato [MH] — e m/z 1599 come suo ione dimerico, indicativo di una massa molecolare di 800. Durante gli esperimenti MS2, m/z 799 ioni formarono tre figlie

ioni a m/z 637, 623 e 475 (Tabella 1). Lo ione a m/z 637 è stato prodotto direttamente dallo ione genitore di m/z 799 di nuovo a causa della perdita neutra del caffeoile [M—162—H]— o di una frazione di glucosio [M—162—H]—. Lo ione a m/z 623 risultava dalla perdita di un radicale CH2. Lo ione a m/z 475 è stato formato dalla perdita neutra sia della parte caffeoile [M 162 H]— sia della parte glucosio dallo ione genitore. L'esperimento MS3 su m/z 637 ha prodotto tre ioni a m/z 619, 491 e 475, corrispondenti rispettivamente alle perdite di un'acqua, un'unità di ramnosio e una frazione di glucosio. Lo ione figlia m/z 623 ha prodotto m/z 461 e 315 nello studio MS3, che ha seguito gli stessi percorsi di frammentazione dell'echinacoside come discusso sopra. I dati LC–ESI-MSN hanno supportato un'identificazione provvisoria per il picco 2 comecistanoside A.

Sono stati condotti anche esperimenti LC-ESI-MS per i picchi

3 e 4 (tR 12,49 e 13,46 min in Fig. 2). Entrambi i picchi hanno mostrato lo stesso ione [MH]— a m/z 623 e dimero a m/z 1247 in modalità negativa (Tabella 1), indicando che sono probabilmente isomeri con lo stesso peso molecolare di

624, lo stesso diacteosidee isoacteoside. Gli spettri MS2 degli ioni [MH]— mostravano anche uno stesso ione figlia di m/z 461, che indicava la perdita della porzione caffeoile dallo ione genitore m/z 623 (Tabella 1). Spettri MS3 simili sono stati ottenuti per i due composti. Per il picco 3, lo spettro MS3 dello ione a m/z 461 ha formato tre ioni a m/z 315, 161 e 135. Il m/z 315 si forma dopo aver perso ramnosio come discusso in precedenza. Lo ione m/z 161 è stato prodotto dalla scissione della parte caffeoile, seguita da un'ulteriore perdita di un'acqua; l'accusa è rimasta da parte della parte caffeoil. Lo ione a m/z 135 [aglycone 18 H] — è nato dalla scissione del legame glicosidico in posizione C1 con una perdita aggiuntiva di un'acqua, lasciando la carica da parte della parte aglicone. Lo spettro MS3 del picco 4 ha seguito la stessa via di frammentazione del picco 3 ad eccezione dello ione mancante a m/z 135. Lo ione molecolare e i modelli di frammentazione di questi due composti sono coerenti con i dati della letteratura suacteosidee isoacteoside (Wang et al., 2000), sebbene sia stato trovato uno ione aggiuntivo m/z 153 e

assegnato come [aglicone H]— da Wang et al. (Wang et al., 2000). Questo ione potrebbe essere stato instabile e ha perso acqua per dare m/z 135 nel nostro esperimento. Sulla base dei dati MS e dei tempi di ritenzione congruenti dei picchi 3 e 4 con gli standard, sono quindi identificati comeacteosidee isoacteoside, rispettivamente.

I dati LC-ESI-MS del picco 5 sono mostrati nella Tabella 2. Uno ione molecolare deprotonato [MH]— (m/z 665) era l'unico ione trovato in modalità negativa, implicando una massa molecolare di 666. Tre ioni figli sono stati osservati a m/z 623, 503 e 461 nell'esperimento MS2 (Tabella 2). Gli ioni figli a m/z 623 e 503 sono stati formati direttamente dallo ione genitore per perdita di un gruppo COCH2 e di una frazione caffeoile, rispettivamente. Lo ione a m/z 461 proveniva dalla perdita sia del caffeoile che della parte COCH2 [M 162 42 H] — dallo ione genitore. Nell'esperimento MS, m/z 623 ha prodotto m/z 461 e m/z 503 ha prodotto tre ioni a m/z 485, 461 e 315. Lo spettro MS3 dello ione figlia m/z 461 ha fornito due ioni a 443 e 315. Confrontando il pattern di frammentazione LC–MSN del picco 5 con altri composti riportati in questo studio e con altri riportati (Li et al., 2005; Wang et al., 2000), abbiamo concluso che il picco 5 era strutturalmente altamente correlato ad acteoside con l'unica differenza che l'unità COCH3 in posizione R3. È stata quindi data un'identità provvisoria al picco 5 come 20-acetilacteoside (Fig. 1).

Le strutture dei due composti provvisoriamente identificati, il picco 2 (come cistanoside A) e il picco 5 (come 20-acetil-acteoside) sono state confermate delle loro strutture mediante 1H NMR. Gli spostamenti chimici e le costanti di accoppiamento di tutti i protoni nei composti 2 e 5, come mostrato nella Tabella 3., abbinati ai dati NMR riportati percistanoside Ae 20-acetilatteoside, rispettivamente (Kobayashi et al., 1984, 1987). Nel presente studio sono stati condotti anche esperimenti 2D NMR (correlazione COSY, ROESY e CH a lungo raggio) e hanno ulteriormente confermato l'identificazione (dati non mostrati).

feniletanoideglicosidi in cistanche

4. Conclusioni

Nel presente documento, l'HSCCC è stato utilizzato con successo per l'isolamento e la purificazione dell'echinacoside,cistanoside A, acteoside, isoacteoside e 20-acetilacteoside dall'estratto di n-butanolo di C. deserticola. È quindi un mezzo collaudato per la separazione semi-preparativa del bioattivo. Nel frattempo, le strutture dei cinque PhG in Cistanche deserticola sono state studiate mediante LC–ESI-MSN; sono stati trovati alcuni tratti caratteristici dei PhG, che hanno permesso di determinare i gruppi funzionali nelle strutture. Il metodo LC–ESI-MSN è quindi un potente strumento per una rapida identificazione difeniletanoidie i loro glicosidi inCistanche deserticheestratti, soprattutto se motivati ​​da dati NMR.

Riconoscimento

Gli autori desiderano ringraziare Jun Gu del Nuclear Magnetic Resonance Center, University of Guelph, Ontario, Canada per la sua assistenza negli esperimenti NMR. Questo progetto è stato in parte sostenuto da un finanziamento della provincia di Jilin, Cina (n. 20060904).

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