Effetti dell'estratto di Cistanche Deserticola sulla risposta erettile del pene nei ratti castrati

Astratto:Cistanche desertiche(CD) è stato considerato un agente tonico sulla funzione riproduttiva per migliaia di anni. Gli effetti dell'estratto del CD supene erettilerisposta sono state studiate nel presente studio. Dopo l'intervento chirurgico di castrazione, i ratti sono stati trattati per via intragastrica con estratto di CD ({0}}.45, 0,90 e 1,8 g/kg) ogni giorno per quattro settimane.Pene erettilela risposta è stata misurata e gli ormoni sierici sono stati analizzati alla fine dell'esperimento. Si è valutato che ilerettile latenzaè diventato più lungo e ildurata erettilepiù breve significativamente nei ratti castrati rispetto ai controlli sham. Tuttavia, l'estratto del CD ha abbreviato il filelatenza erettilee ha prolungato la durata dell'erezione per ridurre al minimo gli effetti negativi della castrazione. Alla dose di 0,9 g/kg, l'estratto di CD ha regolato l'avvicinamento della concentrazione sierica dell'ormone luteinizzante a un livello normale nei ratti castrati. Questi risultati hanno indicato che il CD ha facilitato la risposta erettile del pene e ha modulato in una certa misura il livello di ormone sierico.

Parole chiave:Cistanche desertiche; risposta erettile; castrazione; ormone

Per maggiori dettagli sul cistanche migliora la funzione sessuale

INTRODUZIONE

CistancheHoffmg. Et Link, uno dei generi della famiglia delle Orobanchaceae, è distribuito principalmente nelle zone aride e desertiche dell'emisfero settentrionale, come la Mongolia Interna,Xinjiang, Ningxia regioni autonome della Cina e Iran, India, Mongolia, ecc. Le specie Cistanche appartengono alle erbe parassitarie perenni, che si attaccano comunemente alle radici di piante che fissano la sabbia come Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliatum e piante di Tamarix, ecc. (Jiang e Tu 2009).Herba Cistanche, la radice della specie Cistanche, è stata considerata un tonico superiore e si è guadagnata l'onore di "Ginseng dei deserti". Tra le specie Cistanche, Cistanche deserticola YC MA è stata indicata come fonte primaria di Cistanche (Stefanova et al.2011). Tuttavia, a causa dell'eccessivo raccolto negli ultimi anni, le risorse naturali della C. deserticola (CD) selvatica sono carenti, che è stata raccolta come una delle piante di classe II bisognose di protezione in Cina, quindi altre specie di questo genere, come C. salsa e C. sinensis, sono anche usati come sostituti in alcune aree. Sin dalla prima registrazione nel Chinese Material Medica di ShenNong (un antico compendio farmacologico), si è pensato che il CD totonifica il rene e rinvigorisce lo "Yang" nella pratica clinica secondo la teoria della medicina tradizionale cinese, che si presume sia efficace per la riproduzione, lo sviluppo e la funzione della fertilità. Nel frattempo, il CD è stato anche bollito con montone, patate o riso per produrre un alimento tonico per il trattamento del danno indotto da sovraccarico per centinaia di anni, suggerendo che è sicuro da assumere per via orale (Xiong et al.2013). Tuttavia, questi usi aneddotici esistono principalmente negli incunaboli cinesi, con informazioni scientifiche limitate discusse in termini di concetti farmacologici moderni. La disfunzione erettile (DE) è una condizione caratterizzata da un'erezione inadeguata del pene o da un'erezione che non dura sufficientemente a lungo nei maschi adulti (Cohan e Korenman 2000 ). In risposta ad agenti chimici moderni e sofisticati, c'è stato un rinnovato interesse per la ricerca di farmaci efficaci e sicuri dalle piante per il trattamento della DE (Adimoelja 2000). Uno studio precedente (Liuet al. 2009) ha indicato che CD electuary ha accelerato l'erezione del pene nei ratti normali, tuttavia, non c'erano dati coinvolti nell'effetto della CD sulla disfunzione erettile.Negli animali, la castrazione chirurgica con orchiectomia bilaterale è stata considerata lo standard di castrazione per indagare su ED (Tombal 2005). Pertanto, il presente studio è stato intrapreso per valutare i potenziali effetti della CD contro la DE, studiando la latenza e la durata dell'erezione nei ratti castrati.

MATERIALI E METODI

 Chemicals and materials Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >Il 98 percento) è stato acquistato dal National Institutes for Food and Drug Control (Pechino, Cina). Il metanolo di grado HPLC è stato acquistato da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). L'acqua purificata è stata prodotta utilizzando un sistema MilliporeMilli-Q Integral 3 e un sistema Q-POD Milli-Q (Bedford, MA, USA). Gli steli di C. deserticola sono stati acquistati da Shenzhen GURU Biology Co., Ltd (GuangDong, Cina) e macinati in polvere fine con un polverizzatore passato attraverso un setaccio da 60 mesh. Analisi HPLC e preparazione del materiale vegetale I contenuti di echinacoside e acteoside della polvere di CD sono stati determinati seguendo il nostro metodo precedente (Zhao et al.2011). Quindi, ogni 100 g di polvere essiccata è stata fatta bollire in 1,5 L di acqua per 1,5 ore. Raffreddando a temperatura ambiente, il liquido miscelato è stato centrifugato a 2000 rpm per 10 minuti (Eppendorf 5810R, Germania) e il precipitato è stato riestratto due volte nelle stesse condizioni. I supernatanti combinati sono stati concentrati mediante un evaporatore rotante sotto vuoto (Heidolph laborota 4001-efficient, Germania) a 60 gradi, quindi liofilizzati e hanno prodotto circa il 42% di polvere di estratto secco. Durante l'esecuzione del successivo esperimento animale, l'estratto secco è stato sciolto in acqua purificata a temperatura ambiente.

Animali da esperimento

Ratti Sprague-Dawley maschi adulti (200-220g) sono stati ottenuti da Medicine Experimental Animal

Centro della provincia del Guangdong (Guangzhou, Repubblica Popolare Cinese), mantenuto in quartieri a temperatura controllata con 12-h cicli luce/buio a temperatura ambiente (22-24 gradi ) e umidità costante (40-70 percento) in SPF (specifico esenti da patogeni) in laboratorio e alimentate ad libitum. Le procedure sperimentali erano conformi alla Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio degli Istituti Nazionali di Sanità. Procedura sperimentale

Una settimana prima della somministrazione, cinquanta ratti maschi SD sono stati anestetizzati con sodio pentobarbital per via intraperitoneale (40 mg/kg) (Jung et al. 1999) e assegnati in modo casuale a cinque gruppi: ad eccezione dei ratti nel gruppo operato con la simulazione (Sham), il resto è stato castrato bilateralmente tramite l'approccio scrotale (Anderes 2003, Schlatt et al. 2002). Nel frattempo, i gruppi trattati con CD sono stati somministrati per via intragastrica con 0,45 g/kg (bassa dose di estratto di CD, LCD più Cas), 0,9 g/kg (dose mediana di estratto di CD, MCD più Cas) e 1,8 g/kg (dose alta di CD estratto, HCD più Cas) estratto CD, rispettivamente, mentre i gruppi sham e castrati sono stati somministrati solo con la corrispondente quantità di acqua. La misurazione del peso corporeo è stata effettuata all'inizio della procedura e poi ogni settimana. Tutti i ratti sono stati sottoposti a laparotomia subito dopo la morte per la rimozione e la pesatura posteriore dei seguenti organi: ghiandole prepuziali, vescicole seminali, ghiandola prostatica e muscolo elevatore dell'ano.

Misurazione della risposta erettile del pene

La funzione erettile dei ratti in ciascun gruppo è stata valutata seguendo i metodi precedenti (Ji et al. 2009, Luo et al.2006). In breve, un elettrodo bipolare in acciaio inossidabile (BL420F Data Acquisition & Analysis System, TmeTechnology Co., Ltd, Chengdu, PR China) è stato accuratamente posizionato sul pene fino a quando non è stato eretto con l'impulso della stimolazione elettrica (5 V) 0,2 s. Il tempo dalla stimolazione all'erezione è stato registrato come latenza erettile del pene. Quando è stata osservata la risposta erettile del pene, l'elettrodo poteva essere ritirato dal pene e la durata del tempo in cui il pene ha mantenuto l'erezione è stata registrata come durata dell'erezione.

Prelievo di sangue e analisi degli ormoni sierici

I ratti sono stati anestetizzati con pentobarbital di sodio per via intraperitoneale (40 mg/kg) (Jung et al. 1999).

I campioni di sangue sono stati prelevati e coagulati a 4 gradi per 4 ore, da cui il siero è stato raccolto mediante centrifugazione a 4{25}}00 giri al minuto per 5 minuti a 4 gradi (Eppendorf 5810 R, Germania) e immediatamente conservato in congelatore a -20 gradi fino a quando ulteriori analisi. I livelli totali di LH e FSH sono stati misurati utilizzando kit commerciali per test radioimmunologici (RIA) (Beijing North Institute of Biological Technology, Pechino, Cina) facendo riferimento alle istruzioni del produttore (Matsumoto et. 1986). Sulla base dell'immunotecnica radioattiva competitiva, nel test è stato utilizzato LH (o FSH) marcato con I125-. In breve, sono stati aggiunti 100 µl di agente LH (o FSH) marcato con I125-a un campione di siero da 100 µl e incubato con 100 µl di anticorpi di coniglio purificati a 4 gradi (o 37 gradi) durante la notte. Quindi, un agente separatore immunitario asino-anti-coniglio è stato aggiunto al complesso antigene-anticorpo e centrifugato (3500 rpm, 15 min) per separare 125I-LH (o FSH) libero e legato all'anticorpo. Successivamente, la radioattività del precipitato è stata misurata al contatore di test radioimmuni (DMF-96, Zhongcheng Electrical Technology Development Co., Ltd., Hefei, Cina). I limiti di sensibilità del dosaggio LH e FSH erano entrambi 1,0 mIU/ml.

ANALISI STATISTICA

L'analisi dei dati è stata eseguita utilizzando il software SPSS versione 16.0.

I valori sono stati espressi come media ± deviazione standard (DS). I dati parametrici sono stati analizzati utilizzando l'analisi unidirezionale della varianza (ANOVA) seguita da test LSD post hoc. I dati non parametrici sono stati analizzati dal test di Kruskal-Wallis. Le differenze sono state considerate statisticamente significative se la probabilità di deviazione era inferiore a 0.05.

RISULTATI

Determinazione quantitativa del contenuto di echinacoside e acetonide di polvere CD

Il contenuto di echinacoside e acetonide nella polvere di CD era 1,27±0.01% e 0,52±0,003%, conforme ai requisiti della farmacopea cinese. Il cromatogramma HPLC della polvere CD è stato mostrato in fig. 1.

(4,6 mm×250 mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, USA);fase mobile: 0,5 percento (V/V) soluzione acquosa di acido acetico(A) e metanolo ( B) ingrediente (0min, A: B=25:75; 10-30 min, A: B=40: 60; 30 min, A: B=0: 100); portata: 1 ml/min; lunghezza d'onda del detective: 330 nm; temperatura: 30.

Fig. 2: Latenza e durata dell'erezione del pene nei ratti castrati. I dati sono espressi come media ± DS (n=10). ##p<0.01 relative="" to="" sham-operated="" group,=""><0.01 relative="" to="" castrated="" group.="" abbreviation="" (below):="" sham,="" sham-operated="" group;="" cas,="" castration="" control="" group;="" lcd="" +cas="" (0.45g/kg),="" mcd="" +cas="" (0.9g/kg)="" and="" hcd="" +cas="" (1.8g/kg),="" three="" groups="" of="" cd="" extract="" treated="" in="" castrated="">

Fig. 3: Gli effetti dell'estratto di CD sulle concentrazioni sieriche di LH nei ratti castrati. I dati sono espressi come media ± DS (n=10). #p<0.05 relative="" to="" sham-operated="" group,="" *=""><0.05 relative="" to="" castrated="" group.="" body="" weights="" and="" relative="" accessory="" organs="" weights="" shown="" in="" table="" 1,="" all="" rats="" were="" of="" similar="" initial="" body="" weights="" with="" an="" increase="" from="" day="" 1="" to="" day="" 28.="" however,="" mean="" values="" in="" castrated="" group="" increased="" from="" 216.8±9.2="" g="" to="" 251.4±12.7,="" 283.3±15.1,="" 306.8±15.4="" and="" 322.2±18.4="" g,="" gaining="" less="" weights="" compared="" to="" the="" sham="" operated="" counterparts=""><0.05). there="" were="" no="" statistical="" difference="" between="" sham="" group="" and="" cd="" treated="">

Inoltre, i pesi relativi medi della ghiandola prepuziale, della ghiandola prostatica e della vescicola seminale e dei ratti incastrati del muscolo elevatore dell'ano erano significativamente inferiori (p<0.05) than="" those="" of="" normal="" controls,="" respectively.="" compared="" with="" the="" rats="" castrated="" only,="" the="" relative="" values="" of="" these="" organs="" weight="" tended="" to="" be="" higher="" under="" the="" treatment="" of="" cd="" extract.="" erectile="" response="" assessment="" in="" contrast="" to="" sham="" group,="" castration="" made="" the="" rats="" spend="" more="" time="" gaining="" penis="" erection="" under="" electric="" stimulation=""><0.01). however,="" the="" erectile="" latency="" was="" shortened="" by="" cd="" extract,="" exhibiting="" a="" significant="" decrease="" by="" 52.7%="" in="" lcd="" +cas="" group=""><0.01), 73.5%="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 74.5%="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01), respectively.="" furthermore,="" castration="" shortened="" the="" erectile="" duration="" with="" the="" mean="" value="" of="" 37.2±17.3="" s="" compared="" to="" sham="" operated="" group=""><0.01). however,="" the="" erectile="" duration="" in="" rats="" was="" significantly="" prolonged="" approximately="" by="" 2.6-fold="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 2.1-fold="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01). it="" showed="" no="" strict="" dose-related="" correlation.="" (fig.="">

Livelli sierici di ormoni

Analizzata dal test RIA, la concentrazione sierica media di LH nei ratti castrati era 2,50±0,34 mIU/ml, mostrando un aumento rispetto al controllo simulato (p<0.05). however,="" the="" value="" descended="" about="" 49.2%="" in="" mcd="" +cas="" group="" relative="" to="" that="" in="" castrated="" control=""><0.05) (fig.="" 3).="" shown="" in="" fig.="" 4,="" no="" statistical="" differences="" were="" observed="" among="" all="" groups="" on="" fsh="">

DISCUSSIONE

I nostri risultati hanno dimostrato che la castrazione prolungava significativamente la latenza erettile del pene e ne riduceva la durata, con notevole atrofia degli organi accessori. Tuttavia, l'estratto di CD ha facilitato la risposta erettile del pene e modulato il livello sierico di LH in una certa misura nei ratti castrati. L'erezione spontanea è principalmente stimolata e mantenuta dagli androgeni attraverso meccanismi cellulari, molecolari e fisiologici, che coinvolgono il rilassamento della muscolatura liscia cavernosa (Traish et al. 2007, Talha et al.2007). Livelli insufficienti di testosterone portano ad una diminuzione del suo rilassamento (McClure 1988), che di conseguenza si traduce in impotenza nel maschio (Bivalacqua et al. 2000).

Specialmente nei ratti, è mantenuto da un'ampia gamma di concentrazioni di testosterone sistemico pari al {{0}} percento, al di sotto della quale la risposta erettile è attenuata in modo dose-dipendente (Armagan et al. 2006). Nel presente studio, la concentrazione di testosterone in circolo era troppo bassa per soddisfare il limite di sensibilità (0,02 ng/ml) in tutti i ratti castrati (i dati non sono stati mostrati nei risultati). Tuttavia, CDextract ha ridotto significativamente la latenza erettile del pene a tre dosaggi e ha prolungato la durata dell'erezione a 0,90 g/kg e 1,8 g/kg. Probabilmente era la conseguenza dell'effetto simil-androgeno del CD menzionato in alcuni studi precedenti (He et al. 1996a, He et al. 1996b). Alcuni organi accessori, come la prostata e la vescicola seminale, sono androgeni dipendenti, quindi le variazioni di peso possono riflettere il alterazioni dello stato endocrino (Trisomboon et al. 2007, Jang et al. 2011).

Esisteva un livello soglia di testosterone, al di sotto del quale il metabolismo di questi organi era inibito (Trachtenberg1985). Nel nostro studio è stato confermato che la castrazione ha indotto la diminuzione del peso degli organi riproduttivi accessori a causa della carenza di testosterone. Il testosterone è secreto principalmente dalle cellule di Leydig del testicolo e regolato dagli ormoni ipofisari, come l'ormone luteinizzante (LH) e l'ormone follicolo-stimolante (FSH), che svolgono un ruolo importante nel mantenimento della funzione del pene degli animali castrati (Robert et al. 2004). Poiché l'asse ipotalamo-ipofisi-gonade (HPG) è un meccanismo di controllo del feedback ad anello chiuso, bassi livelli di ormone gonadico possono regolare a loro volta la secrezione di LH e FSH (Morales et al. 2004). Il nostro studio ha studiato che il livello sierico di LH era significativamente aumentato nei ratti castrati e poi è sceso a livelli normali dall'estratto di CD a 0,90 g/kg, il che era d'accordo con la precedente conclusione che un aumento del livello di LH era associato a un rischio più elevato di disfunzione erettile (Kupelian et al. 2006).

Nel testicolo, LH stimola la sintesi e il rilascio di testosterone, il cui controllo del feedback è relativamente consistente, mentre l'FSH agisce direttamente sulle cellule del Sertoli per il nutrimento con il complesso di controllo del feedback (Hellqvist et al. 2008). Questi risultati hanno offerto un maggiore supporto alla supposizione che CD esprimesse un effetto simile agli androgeni, che potrebbe essere principalmente responsabile della riduzione dell'LH sierico più dell'FSH. Nell'attuale osservazione, l'influenza della castrazione sullo sviluppo del peso corporeo nei ratti maschi era simile ai risultati dello studio precedente (Christoffersen et al. 2006), mentre contrariamente ai risultati nelle femmine di ratto (Pantaleão et al. 2010). L'estratto di CD non è stato in grado di migliorare significativamente il peso corporeo, probabilmente a causa dell'insufficiente durata del trattamento o dei complessi impatti sullo stato di salute generale. L'estratto di CD ha facilitato la risposta erettile del pene riducendo la latenza erettile e prolungando la durata dell'erezione nei ratti castrati. Questi effetti erano probabilmente dovuti all'effetto simile agli androgeni, supportato dall'osservazione che l'estratto di CD normalizzava le concentrazioni di LH nel siero specialmente alla dose di 0,90 g/kg.

Tuttavia, sono necessarie ulteriori prove per dimostrare l'effetto dell'estratto di CD contro i livelli atipotalamici e limbici di DE e si potrebbe ottenere maggiore attenzione su questa preziosa medicina tradizionale nel mondo moderno.