Effetti delle Cistanche sulla funzione antietà e immunitaria dei ratti modello di invecchiamento prima e dopo la lavorazione

Contatto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Astratto: Obiettivo: Esplorare i diversi prodotti trasformati diCistancehera in D - funzione antietà del galattosio nei ratti e gli effetti della funzione degli organi immunitari. Metodi: Abbiamo estratto i diversi prodotti trasformati di Cistanches herba. I ratti SD sono stati divisi casualmente in gruppo di controllo in bianco, gruppo modello di invecchiamento, gruppo vitamina E, gruppi di cistanche ad alta, media e bassa dose, gruppi di cistanche di vino ad alta, media e bassa dose. Con il modello di ratto di invecchiamento D - galattosio è stato stabilito, dopo il trattamento, abbiamo rilevato il contenuto di MDA, SOD e NO nel siero di ciascun gruppo di ratti e abbiamo contato l'indice della milza e l'indice del timo; e quindi ha osservato i cambiamenti morfologici patologici dei tessuti della milza e del mtDNA nel cervello. Risultati: L'MDA e l'NO nel siero di ratti modello invecchiati sono aumentati in modo significativo (P<0. 01)="" and="" sod="" decreased="" significantly="" (fvo.="" 01).="" the="" model="" group="" had="" a="" tendency="" to="" decrease,="" thymus="" and="" spleen="" coefficient="" had="" obvious="" pathological="" spleen="" injury,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" was="" missing.="" different="" processed="" products="" of="">Cistanceherba può ridurre significativamente MDA e NO(P<0. 01="" or="" p=""><0. 05).="" sod="" had="" a="" rising="" trend,="" improving="" the="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improving="" the="" pathological="" injury="" of="" the="" spleen.="" the="" mtdna="" in="" the="" brain="" of="" the="" high="" dose="" group="" and="" positive="" medicine="" group="" did="" not="" miss.="" and="" processing="" products="" were="" better="" than="" the="" raw="" cistanches="" herba.="" the="" high="" dose="" group="" was="" better="" than="" the="" low="" dose="" group.="" conclusion:="" different="" processing="" products="" of="" cistanches="" herbs="" have="" different="" anti-aging="" effects="" and="" immune="">

Parole chiave: Cistanches herba; in lavorazione; invecchiamento; immune

La medicina tradizionale cineseCistanche deserticheYC Ma oCistanche deserticheYC Ma o C. tubulosa (Schenk) Wight è lo stelo carnoso secco e squamoso diCistanche desertiche(Schenk) Wight. È di natura calda, di sapore dolce e salato e si trova nel meridiano dei reni e dell'intestino crasso. È essenziale per rafforzare i reni e rafforzare lo yang La medicina è chiamata "ginseng del deserto" (2). Cistanche è stato pubblicato per la prima volta in "Shen Nong's Materia Medica". È indicato come il grado più alto. Ha gli effetti di riempire l'essenza e nutrire il midollo, nutrire i reni e rafforzare lo yang, rallegrare il colore e prolungare la vita, nutrire il sangue e idratare la secchezza, ecc. Può trattare l'infertilità femminile, l'impotenza maschile, la costipazione secca di sangue, la vita fredda e le ginocchia . Malattie come dolore, intrappolamento, collasso sanguigno, ecc.! 3_5]o L'edizione 2010 di "The Pharmacopoeia of the People's Republic of China" contieneCistanche tubuloseeCistanche E.

Con l'invecchiamento del corpo, ci sarà un certo degrado sia nelle funzioni fisiologiche che nella struttura morfologica. Questo è ciò che spesso chiamiamo "invecchiamento". Le sue manifestazioni sono principalmente il deterioramento di organi, tessuti e cellule, come la diminuzione dell'elasticità dei tessuti, l'atrofia degli organi e la diminuzione del numero di cellule, che causeranno il graduale declino delle numerose funzioni dell'organismo. Gli esperimenti lo hanno confermatoCistancheha effetti antietà "I", ma studi comparativi sugli effetti antietà diCistancheprima e dopo l'elaborazione non sono stati ancora segnalati. Questo esperimento studia principalmente ileffetti antietàdiCistancheprima e dopo la lavorazione e fornisce una base scientifica per lo studio del meccanismo di invecchiamento.

Echinacoside

1 Materiale sperimentale

1.1 Animali da esperimento

Ratti SD, del peso di 180-220 g. SPF è stato fornito da Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., numero di licenza: SCXK (Liao) 2015-0001.

1.2 Farmaci e reagenti

Cistancheè stato acquistato dalla cenere di carne selvatica di Alashan nella Mongolia interna ed è stato identificato come lo stelo carnoso secco con foglie di squame diCistanche deserticheYC Ma del professor Zhai Yanjun del nostro ospedale; il metodo di preparazione di ciascun gruppo di sostanze in esame è il seguente, cistanche crude: crude La cistanche viene cotta a vapore per 2 ore, tagliata a fette spesse 6 mm ed essiccata a 70P. Prendere le fette di Cistanche ed estrarre 3 volte in acqua, quindi unire il decotto e concentrare ad una certa concentrazione. Preparazione delle Cistanche: Prendere le Cistanche crude e bagnarle nel vino giallo per 8 ore, aggiungere 1:1, cuocere a vapore per 16 ore, tagliare a fette spesse 6 mm, e farle asciugare a 70 T. Prendere le fette di Cistanche ed estrarle 3 volte con acqua, quindi unire il decotto e concentrarlo a una certa concentrazione. Capsule molli di vitamina E (numero di lotto 1407061, Shenyang Hongqi Pharmaceutical Co., Ltd.); D-galattosio (lotto numero 710B055, Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.); Kit ossido nitrico (NO) (numero di lotto: BPE30262); Malondialdeide (numero di lotto: BPE30262) MDA) (numero di lotto BPE30527); kit di superossido dismutasi (SOD) (numero di lotto: BPE3O387); tutto fornito da Shanghai Langdon Biotechnology Co., Ltd.; kit di estrazione del DNA mitocondriale animale di tipo colonna (acquistato da Beijing Lab Technology Co., Ltd.); Kit PCR (acquistato da TIANGEN Reagent Company); altri reagenti sono domestici puri.

1.3 Attrezzatura sperimentale

Ciclatore genico (Hangzhou Longkey Scientific Instrument Co., Ltd.); Lettore di micropiastre (Thermo Fisher Technology Co., Ltd., USA); Camera a temperatura e umidità costanti (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); Il tipo TGL-16C indica la macchina centrifuga da banco (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Vortex Mixer (fabbrica di strumenti di Shanghai Qingpu Huxi); Bilancia elettronica (Shanghai Yousheng Weighing Apparatus Co., Ltd.); Miscelatore Vortex (fabbrica di strumenti Shanghai Qingpu Huxi).

2 Metodo sperimentale

2.1 Modello animale e raggruppamento

Dopo 1 settimana di alimentazione adattativa, i ratti sono stati divisi casualmente in un gruppo bianco, un gruppo modello, un gruppo di controllo, unCistanchegruppo ad alta, media e bassa dose e B. striata: gruppi ad alta, media e bassa dose, ciascuno dei quali era di 9 gruppi di 8 pezzi. Fatta eccezione per il gruppo bianco, gli altri gruppi sono stati iniettati con D-galattosio 167,5 mg/kg per via sottocutanea al mattino; al gruppo bianco è stato iniettato un volume uguale di soluzione fisiologica; nel pomeriggio le dosi alte, medie e basse di cenere di carne e vino sono state somministrate rispettivamente 5,48 e 2. 74, 1,37 g/kg della soluzione del prodotto in esame, al gruppo di controllo positivo sono stati somministrati 2,75 mg/mL di vitamina E, al gruppo bianco e al gruppo modello è stato somministrato un volume uguale di soluzione salina normale mediante somministrazione intragastrica. Per 6 settimane consecutive sono stati infine messi a morte e sono stati misurati vari indicatori.

2.2 Determinazione del contenuto di SOD, MDA e NO nel siero di ratto

Il sangue è stato raccolto dall'aorta addominale del ratto, centrifugato a 3000 giri/min per 15 minuti per separare il siero del sangue e conservato a -20 Y per un uso successivo. La determinazione del contenuto di MDA.SOD.NO viene eseguita secondo le istruzioni del kit di test.

2.3 Effetto sul peso degli organi immunitari nei ratti modello che invecchiano

I ratti di ogni gruppo sono stati pesati e sacrificati dopo il prelievo del sangue. La milza e il timo furono prelevati, lavati con soluzione salina, essiccati e pesati, e furono calcolati i coefficienti di milza e timo.

2.4 Osservazione della morfologia del tessuto della milza

Le milze pesate sono state fissate con paraformaldeide al 4%, incorporate in paraffina, sezionate e colorate con HE. I cambiamenti nelle sezioni patologiche della milza in ciascun gruppo sono stati osservati al microscopio.

2.5 Metodi statistici

Utilizzare il software SPSS per eseguire un'analisi unidirezionale della varianza e il test LSD-t per il confronto a coppie.

2.6 Rilevazione delle mutazioni del mtDNA nel cervello

Il tessuto cerebrale di ratto è stato posto in un mortaio con azoto liquido, rapidamente macinato in polvere e quindi riferito al metodo della letteratura, secondo le istruzioni del kit per l'estrazione del mtDNA del tessuto cerebrale.

L'amplificazione PCR rileva la delezione del frammento mtDNA4834: i primer si riferiscono alla sequenza completa del genoma del mtDNA di ratto riportato da Gada-leta et al. (1898) e i primer sono sintetizzati da Shanghai Shengang Industrial Co., Ltd. Pl: 5'-GCGAAGCTTAGAGCGTTAC-3'P2: 5'AGTGAGATAAGGAAGCCTGC -3' P3: 5'-AG- GACTTAACCAGACCCAAAGACG{ {13}}, P4: 5'-CCTCTTTTCTGATAGGCGGG-3,

Sistema di reazione PCR: DNA templato 1 |xL, 2 x Taq PCR MasterMix 25 |xL, ddH2O 20 jiL, 2 primer ciascuno. Condizioni di amplificazione: prima denaturazione a 95 Y per 5 min; denaturazione 95 T per 30 s, ricottura 56 T per 30 s, estensione 72 T per 45 s, per un totale di 35 cicli; l'ultima estensione 72 T per 7 minuti. I prodotti amplificati sono stati sottoposti a elettroforesi su gel di agarosio all'1,5%.

Atteosidi

3 Risultati e analisi

3.1 L'effetto diCistanchesui segni fisici dell'invecchiamento dei topi

Rispetto al gruppo bianco, i ratti anziani hanno mostrato mantello scuro e giallo, pelle flaccida e opaca, pelle flaccida, perdita di capelli, perdita di appetito, attività spontanea ridotta, lentezza di movimento, rigonfiamento della colonna vertebrale, svogliatezza, risposta lenta e altre manifestazioni dell'invecchiamento. Più lungo è il tempo di iniezione, più evidenti saranno i sintomi. Rispetto al gruppo di invecchiamento, lo stato mentale, il colore del mantello, l'appetito, la forma del corpo e la sensibilità alla reazione dei ratti sono migliorati con l'aumento del tempo di somministrazione in ciascun gruppo di somministrazione diCistanche. Tra questi, non c'era praticamente alcuna differenza tra il gruppo di prodotti ad alto dosaggio e il gruppo di controllo.

3.2 L'effetto diCistanchesul contenuto di MDA, SOD e NO nel siero di ratti modello di invecchiamento

I risultati sono mostrati nella Tabella I. Rispetto al gruppo bianco, il gruppo modello mda.no è stato significativamente aumentato (P<0.01), and="" sod="" was="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" each="" treatment="" group="" mda.no="" was="" significantly="" lower=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" but="" it="" is="" not="" statistically="" significant;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="">Cistanche, la MDA.N0 dei gruppi di Cistanche a dose media e bassa è stata significativamente ridotta (F<0.05 ),="" sod="" tends="" to="" increase;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="" cistanche,="" the="" mda.no="" of="" the="" middle="" and="" low-dose="" groups="" of="" cistanche="" rose="" significantly="" (p=""><0.01 or="" p=""><0.05), and="" the="" sod="" tended="" to="" decrease;="" compared="" with="" the="" jiu="" nvrong="" gao="" dose="" group,="" the="" mda.no="" of="" the="" high-dose="" eggplant="" paste="" group="" increased="" significantly="" (p=""><0.01), and="" sod="" tended="" to="" decrease.="" this="" result="" shows="" that="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group="" compared="" with="" different="" dose="" groups,="" and="" the="" treatment="" effect="" of="" the="" product="" group="" is="" better="" than="" that="" of="" the="" raw="" product="" group="" compared="" with="" the="" same="" dose="" group.="">

3.3 Ileffetto di Cistanchesulla funzione immunitaria dei ratti modello di invecchiamento Chi

3.3.1 L'effetto di Cistanche sull'indice della milza e sull'indice del timo dei ratti modello di invecchiamento

I risultati sono mostrati nella tabella 2. Rispetto al gruppo bianco, il coefficiente di timo e milza nel gruppo modello è g

La tendenza è decrescente, ma non è statisticamente significativa. Rispetto al gruppo modello, i coefficienti di timo e milza di ciascun gruppo di trattamento erano significativamente aumentati (F<0.05); compared="" with="" the="" high-dose="" cistanche="">

Confronto di gruppo, i coefficienti di timo e milza dei gruppi a dose media e bassa diCistanchehanno la tendenza a diminuire

Potenziale; rispetto all'alto dosaggioCistanche desertichegruppo ad alto dosaggio, il timo e la milza dei gruppi di pasta di wine girl a dosaggio medio

Il coefficiente viscerale ha andamento decrescente; rispetto all'alto dosaggioCistanche desertichegruppo ad alto dosaggio, i coefficienti di timo e milza del gruppo ad alto dosaggiocistanche desertichegruppo ad alto dosaggio hanno un andamento decrescente. Questo risultato mostra che il gruppo ad alto dosaggio è migliore del gruppo a basso dosaggio rispetto ai diversi gruppi di dosaggio e l'effetto del trattamento del gruppo di prodotti è migliore di quello del gruppo di prodotti grezzi rispetto allo stesso gruppo di dosaggio.

Tabella 1 Confronto del contenuto di SOD.MDA.NO nel sangue di ratti in ciascun gruppo (n. =8, x ± s)

Nota:. Compared with I model group, P<005.><001; j="" air-day="" group="" comparison.=""><[)01; tlilll="" high-dose="" ether="" group="" jqi="" [i_low-dose="" group="" comparison.=""><005.><(). ()1;="" the="" high-dose="" product="" group="" is="" compared="" with="" the="" product="" tl="" and="" ff="" [journal="" f="" group.="" })=""><0.05.1l><(1o1; product="" high="" yanlian="" group="" q.="" pindaoli="" {group="" comparison.=""><005.><>

3.3.2 L'effetto di alterazioni patologiche nella milza diCistancheratti modello che invecchiano. Il gruppo bianco ha una capsula splenica sottile e uniforme, trabecole spleniche chiare senza rigonfiamento, netta separazione della polpa rossa e bianca, più noduli splenici e della stessa dimensione, al centro della milza Il numero di cellule nella guaina linfatica attorno alla milza le arteriole sono dense. Nel gruppo modello, la milza era ispessita, la trabecola e la corteccia erano gonfie, la polpa rossa e bianca non era chiara, la polpa bianca era significativamente ridotta, il numero di linfociti era ridotto, un gran numero di cellule infiammatorie era infiltrato e il struttura morfologica è stata danneggiata. Sebbene la dimensione dei noduli della milza in ciascun gruppo di trattamento fosse diversa, i confini della polpa bianca e rossa erano chiari. Il numero di cellule nella guaina linfatica attorno alla piccola arteria centrale della milza era denso e la morfologia e la struttura sono state ripristinate. Inoltre, il gruppo dei distillatori ad alto dosaggio è stato in grado di migliorare i cambiamenti patologici. È migliore del gruppo della vitamina E, in cui ilCistancheprodotto è migliore del gruppo di prodotti grezzi e il gruppo ad alto dosaggio è migliore del gruppo a basso dosaggio. Vedere inserto X-XI inserto.1-10 è il mtDNA nel cervello dei ratti nel gruppo vuoto, nel gruppo modello, nel gruppo di controllo e nel gruppo elevato. mtDNA Figura 3 Risultati dell'elettroforesi dei prodotti di amplificazione della PCR del mtDNA nel cervello di ratto (primer PI.P2)

3.4 Delezione e mutazione del mtDNA nel cervello

Secondo i primer P3 e P4, è possibile ottenere un frammento conservativo di mtDNA di circa 770 bp. Dalla Figura 2 possiamo vedere che i frammenti target sono stati amplificati in tutte le 9 corsie, indicando che tutti i 9 gruppi di mtDNA sono stati estratti con successo.

Determination of mtDNA4834 bp deletion mutation: If there is a rat mtDNA4834 bp deletion, primers P1 and P2 will amplify the 4834 bp loss and break the fusion gene fragment with a length of 597 bp. As shown in Figure 3, there is a clear DNA band between 500 l>p e 750 bp nelle corsie 2, 4, 5, 7, 9 e 10. I frammenti sono stati recuperati e inviati alla Hangzhou Baocheng Biotechnology Company per il sequenziamento. Rispetto alla sequenza riportata da Gadateta et al. (1989), ha dimostrato che esiste una delezione di frammenti di mtDNA di circa 4000-5000 bp. Pertanto, mostra che c'è circa 4834 bp di cancellazione del mtDNA nel cervello del gruppo modello. Le corsie 1, 3 e 8 non hanno frammenti, indicando che non ci sono delezioni di frammenti mitocondriali in 1, 3 e 8. I risultati hanno mostrato che non c'erano frammenti mancanti nel gruppo di lievito del distillatore ad alte dosi, il gruppo di farmaci positivi, e il gruppo bianco, suggerendo che il gruppo di lievito del distillatore ad alte dosi potrebbe avere effetti anti-invecchiamento. Vedere Figura 2~Figura 3.

1-10 è il mtDNA nel cervello dei ratti nel gruppo vuoto, nel gruppo modello, nel gruppo di controllo e nel gruppo elevato. mtDNA Figura 3 Risultati dell'elettroforesi dei prodotti di amplificazione della PCR del mtDNA nel cervello di ratto (primer PI.P2)

Cistanche: antietà

4. Discussione

Il modello di invecchiamento causato dalla somministrazione intragastrica di D-galattosio è attualmente un modello di invecchiamento più comunemente utilizzato. Il modello riduce principalmente l'attività di una varietà di enzimi antiossidanti, in modo che un gran numero di radicali liberi venga generato durante il metabolismo del corpo, il che porta all'invecchiamento del corpo. I cambiamenti nella morfologia dei tessuti sono simili a quelli dell'invecchiamento naturale ⑻. Un gran numero di esperimenti ha dimostrato che un aumento anomalo indotto dal D-galattosio del contenuto di NO nel cervello e nella corteccia cerebellare e nel sangue dei topi che invecchiano. I risultati di questo studio hanno confermato che il contenuto ematico dei ratti anziani era significativamente superiore a quello del gruppo normale, il che era simile ai risultati riportati in letteratura "-m.

In questo esperimento, l'effetto anti-invecchiamento del modello di invecchiamento dei ratti prima e dopo l'elaborazione diCistancheè stato studiato. I risultati hanno mostrato il siero MDA e N nei ratti modello di invecchiamento. Significativamente aumentato (P<0.01), sod="" significantly="" decreased="" (p=""><0.01), the="" model="" group="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" have="" a="" tendency="" to="" decrease,="" the="" spleen="" has="" obvious="" pathological="" damage,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" is="" also="" missing.="" different="" processed="" meat="" ash="" can="" significantly="" reduce="" the="" levels="" of="" mda="" and="" no="" (/=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" increase="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improve="" spleen="" pathological="" damage,="" and="" high="" mtdna="" in="" the="" brain="" the="" dose="" group="" and="" the="" positive="" drug="" group="" also="" did="" not="" appear="" to="" be="" missing.="" and="" the="" prepared="" meat="" puree="" is="" better="" than="" the="" raw="" meat="" puree,="" and="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group.="" research="" in="" recent="" years="" believes="" that="" aging="" is="" also="" related="" to="" the="" lipid="" peroxidation="" of="" biological="" membranes="" caused="" by="" free="" radicals.="" sod="" "'-e="" is="" an="" enzyme="" that="" scavenges="" superoxide="" free="" radicals.="" the="" older="" the="" body,="" the="" weaker="" the="" body's="" sod="" activity="" and="" the="" fewer="" antioxidants.="" this="" will="" increase="" the="" free="" radical="" damage="" factor="" mda,,4~,7],="" and="" eventually="" accelerate="" aging.="" in="" addition,="" the="" results="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" of="" aging="" model="" rats="" indicate="" that="" roujing="" rong="" can="" delay="" aging="" by="" improving="" the="" immune="" function="" of="" the="" body.="" the="" results="" of="" the="" study="" hope="" to="" provide="" a="" scientific="" basis="" for="" the="" clinical="" application="" of="">Cistanche.