Effetti del poligona-polisaccarosio sulla ferroptosi nei ratti con nefropatia diabetica

Parole chiave:nefropatia diabetica;poligona-polisaccarosio; ferroptosi; transferrina; FTH1; GPX4

 

Nefropatia diabetica(DN) è una grave complicanza microvascolare didiabete mellito[1] DN è una cosa seriacomplicanza microvascolare del diabetemellito [1], che di solito si presenta come microalbuminuria nelle fasi iniziali, seguito da un progressivo sviluppo di La fase iniziale di solito si presenta con microalbuminuria, seguita da un progressivo sviluppo di una massiva proteinuria, progressiva diminuzione della velocità di filtrazione glomerulare e progressivo aumento della creatinina ematica [2 ]. aumento progressivo della creatinina[2] . Se non trattata, la malattia può portare a malattie croniche. Se non trattata, può portare a un danno renale progressivo cronico e alla fine alla malattia allo stadio terminale. Se non trattata, può portare a danno renale progressivo cronico e infine a insufficienza renale allo stadio terminale[3] . Morte del ferro La morte del ferro è un accumulo ferro-dipendente di acidi grassi insaturi La morte del ferro è un accumulo ferro-dipendente dell'ossidazione dei fosfolipidi degli acidi grassi insaturi che porta alla morte cellulare, manifestata principalmente dalla La principale manifestazione della morte del ferro è l'accumulo di ferro-dipendente perossidi lipidici intracellulari[4] . [4] . Studi È stato riscontrato che il danno delle cellule epiteliali tubulari renali è strettamente associato alla morte per ferro[5] . Wang et al.

Wang et al[6] hanno scoperto che l'espressione del glutatione perossidasi 4 (GPX4) nell'espressione dell'interstizio tubulare renale (GPX4) è strettamente correlata alla gravità e alla progressione della malattia DN. GPX4, come obiettivo importante per l'attivazione del programma di morte del ferro, è un sensore di stress ossidativo e segnalazione di morte cellulare, e la ridotta espressione di GPX4 porta a un aumento significativo della diminuzione dell'espressione di GPX4 dal vivo, con conseguente aumento significativo dell'ossigeno vivo nel corpo[ 7] . . Pertanto, l'inibizione della morte delle cellule epiteliali tubulari renali attraverso la regolazione della morte per ferro Pertanto, l'inibizione della morte delle cellule epiteliali tubulari renali attraverso la regolazione della morte per ferro per alleviare la lesione renale del DN può essere una strategia efficace per il trattamento della DN Pertanto, l'inibizione della morte delle cellule epiteliali tubulari renali attraverso la regolazione della morte del ferro la morte delle cellule epiteliali attraverso la regolazione della morte del ferro può essere una strategia efficace per il trattamento della DN.
ILpolisaccarideDiC. flavusè il componente farmacologico più abbondante e importante È uno dei componenti farmacologici più abbondanti e importanti di C. flavus. Lo studio sperimentale ha scoperto che svolge un ruolo importante nel migliorare la funzione renale della DN e nell'alleviare la risposta infiammatoria. Li et al[8]. Li et al[9]. hanno scoperto che Li et al [9] hanno scoperto che l'intervento del polisaccaride C. flavus ha migliorato significativamente i disturbi del metabolismo dei glucolipidi e la tolleranza all'insulina nei topi diabetici. Li et al. Un altro studio ha rilevato che il glucosio, il glucosio 24 ore su 24 e la tolleranza all'insulina dei topi con nefropatia diabetica erano significativamente migliorati dopo l'intervento del polisaccaride dell'estratto giallo. Un altro studio ha rilevato che la glicemia, l'24-h microalbumina urinaria, la creatinina ematica (SCr) e l'azoto ureico nel sangue (BUN) nei topi modello di nefropatia diabetica sono migliorati significativamente dopo l'intervento del polisaccaride Fructus flavus. e i livelli di azoto ureico nel sangue (BUN) erano significativamente ridotti in un modello di nefropatia diabetica[10] . Il trattamento di DN con polisaccaride di Flos Chrysanthemi Tuttavia, il meccanismo specifico della sua azione non è chiaro. Pertanto, il presente In questo studio, è stata utilizzata una dieta ricca di grassi combinata con l'iniezione di streptozotocina (STZ) per stabilire un modello di ratto DN.
Pertanto, in questo studio, abbiamo stabilito un modello di ratto DN con una dieta ricca di grassi combinata con l'iniezione di streptozotocina (STZ) e osservato l'effetto del polisaccaride di C. flavus sulla morte da ferro nei ratti. Pertanto, il presente studio è stato condotto per osservare l'effetto del polisaccaride di C. flavus sulla morte per ferro nei ratti alimentati con una dieta ricca di grassi combinata con l'iniezione di streptozotocina (STZ) e per chiarire il meccanismo d'azione del polisaccaride di C. flavus su DN.

Materiali e metodi
1.1 Animali
Cinquanta ratti SD maschi sani con una massa corporea di (200±20) g sono stati ospitati presso l'Istituto di radiologia, Accademia cinese delle scienze mediche, Pechino, Cina, sotto un ciclo luce-buio di 12- ore a una temperatura di (25 ± 2) gradi e umidità relativa del (50 ± 15) percento e alimentato ad libitum. Dieta ricca di zuccheri e grassi (10% di strutto, 20% di saccarosio, 2,5% di colesterolo, 67,5% di mangime convenzionale), (4,8% di grassi, 20% di proteine ​​e 59,4% di zucchero totale), Beijing Huafukang Biotechnology Co. Questo esperimento è stato approvato da l'ospedale di medicina integrativa di Cangzhou (CZX2022-KY-023).

1.2 Droga e preparazione
PolisaccarideDiFlos Astragalo(purezza 70 percento, numero di lotto S27804), Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. Ltd. è stata preparata con soluzione salina alla concentrazione di 200, 800 mg/mL, rispettivamente. Soluzione 800 mg/mL. Irbesartan compresse (lotto 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. è stato preparato in soluzione salina a 30 mg/mL. soluzione.

 

1.3 Principali reagenti e strumenti
Proteina urinaria (numero di lotto C035-2-1), SCr (numero di lotto C011-2-1), BUN (numero di lotto C013-2-1) BUN (numero di lotto C013-2-1), malondialdeide ( MDA, numero di lotto C003-1- 2), glutatione (GSH, lotto C006-2-1), contenuto totale di ioni ferro (numero di lotto A039-2-1), Nanjing Jiancheng Biological Engineering Research Institute Institute of Biological Engineering , Nanchino, Cina; Transferrina (numero di lotto ab278498), ferritina Transferrina (lotto ab278498), catena pesante della ferritina (FTH1, lotto ab75973), GPX4 (lotto ab252833) e -ferritina (lotto ab252833). ab252833), -actina (lotto ab179467), Abcam, Regno Unito. Marcatore enzimatico multifunzionale iMark680, Bio-Rad, USA. centrifuga Fresco17, Thermo, USA; centrifuga congelata da banco 5810, Eppndorf, Germania; Quantificazione della fluorescenza ABI Prism® 7500 Applied Biosystems, USA; Vasca per elettroforesi verticale DYCZ-24DN, Beijing Liuyi Instrument Factory, Pechino, Cina; SH-523 chemiluminescence imaging Ltd, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Modellazione, raggruppamento e somministrazione di farmaci
Dopo 1 settimana di alimentazione adattativa, 10 ratti sono stati selezionati casualmente come normali. I restanti 40 ratti sono stati riferiti al metodo della letteratura [11] per stabilire il modello di ratto DN. I ratti sono stati alimentati con una dieta ricca di zuccheri e grassi per 7 settimane e poi sono stati digiuni per 12 ore senza acqua. I ratti sono stati alimentati con una dieta ricca di zuccheri e grassi per 7 settimane, quindi sono stati digiuni con cibo e acqua per 12 ore. STZ è stato iniettato per via intraperitoneale a 30 mg/kg. Dopo 72 ore, il sangue è stato prelevato dalla vena della coda per rilevare la glicemia casuale e una glicemia maggiore o uguale a 16,7 mmol/L è stata considerata come modellazione riuscita del diabete. I ratti sono stati alimentati con una dieta ricca di zuccheri e grassi per 1 settimana e 24-ore di urina sono state raccolte dalla gabbia metabolica.

 

 

1.5.5 Saggio Western blot
Raccogliere i tessuti renali, aggiungere 150 μL di tampone di lisi RIPA, omogeneizzare Il surnatante proteico è stato trattenuto dopo la centrifugazione. La concentrazione proteica totale è stata determinata utilizzando il kit di analisi delle proteine ​​BCA. La concentrazione proteica totale è stata determinata utilizzando il kit di analisi proteica BCA e la concentrazione proteica è stata omogeneizzata. Quantità uguali di proteine ​​20 ug, 8 percento -12 percento SDS-PAGE sono state utilizzate per la separazione delle proteine ​​e la proteina è stata trasferita Le membrane sono state chiuse con il 5 percento di latte scremato in polvere a temperatura ambiente per 2 ore. Sono stati aggiunti anticorpi primari di coniglio anti-ratto transferrina (1:2 000), FTH1 (1:3 000) e GPX4 (1:3 000). 3,000), GPX4 (1:3,000), -actina (diluito 1:5,000) e incubato durante la notte a 4 gradi . Incubare durante la notte a 4 gradi. La membrana è stata lavata, l'anticorpo secondario (1:9 000) è stato aggiunto e incubato per 2 ore a temperatura ambiente. Le membrane sono state lavate con TBST, sviluppate mediante chemiluminescenza ECL e rilevate utilizzando
Il software Image J è stato utilizzato per analizzare i valori della scala di grigi delle bande.

 

1.6 Metodi statistici
Per l'analisi è stato utilizzato il software statistico SPSS Statistics25.0. Esperimento I risultati sono stati espressi come xˉ±s e tutti i dati sono stati testati per normalità e chi-quadrato. Tutti i dati sono stati testati per la normalità e il chi-quadrato e sono stati utilizzati test t se erano soddisfatti e test non parametrici se non erano soddisfatti. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 Risultati
2.1 Effetti del polisaccaride Flavopiridium sulla massa corporea e sulla glicemia a digiuno dei ratti modello Rispetto al gruppo normale, la massa corporea dei ratti nel gruppo modello era significativamente ridotta (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Vedere la tabella 2.

2.2 Effetti del polisaccaride Flavopiridium sugli indici di funzionalità renale dei ratti modello
Rispetto al gruppo normale, la SCr, il livello di BUN e il contenuto proteico nelle urine delle 24 ore dei ratti nel gruppo modello erano significativamente più alti (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Effetti del polisaccaride estratto giallo sulla morfologia istopatologica del rene di ratti modello
Il glomerulo e la struttura tubolare dei ratti del gruppo normale non mostravano alcuna anomalia e la membrana tilacoide e lo stroma tilacoide non erano proliferati e non vi era infiltrazione di cellule infiammatorie, ecc.; il modello Nei ratti modello sono state osservate degenerazione e atrofia tubulare focale e la membrana basale glomerulare era leggermente I ratti nel gruppo modello hanno mostrato degenerazione e atrofia tubulare focale, membrana basale glomerulare leggermente ispessita, iperplasia tilacoide e degenerazione grassa dei glomeruli e tubuli. I ratti in ciascun gruppo di somministrazione del farmaco hanno mostrato lesioni ridotte e il miglioramento è stato più evidente nel gruppo del farmaco positivo e con l'alta dose di Flavopiridium polisaccaride. Il miglioramento è stato più evidente nel gruppo farmaco positivo e nell'alta dose di polisaccaride Flavopiridium. Vedere la figura 1.