Quanto ne sai sulla malattia renale cronica?
Mar 03, 2022
Contatto: emily.li@wecistanche.com
Valutazione dell'albuminuria e del suo rapporto con la pressione sanguigna nei cani con malattia renale cronica
Angela Bacic1, Marcia M. Kogika1, et al
Parole chiaveAlbuminuria, canino,malattia renale cronica, ELISA, ipertensione,funzione renale
SfondoLa microalbuminuria e l'ipertensione sono state a lungo associate a una prognosi riservata nei pazienti umani con una varietà di malattie. In medicina veterinaria, i test per la microalbuminuria sono stati utilizzati per rilevare precocementedanno ai reni, ma ci sono poche informazioni sulla sua associazione con l'ipertensione nei cani conmalattia renale cronica(CKD). Obiettivo: L'obiettivo di questo studio era di valutare l'albuminuria e la sua associazione con l'ipertensione arteriosa nei cani con insufficienza renale cronica.
MetodiIl rapporto albumina urinaria:creatinina (UAC), il rapporto proteine urinarie:creatinina (UPC) e la pressione arteriosa sistolica sono stati determinati in 39 cani clinicamente sani e 40 cani con insufficienza renale cronica.
RisultatiL'UAC nei cani con insufficienza renale cronica (intervallo, {{0}}.002–7,99; mediana, {{10}}}.38) era statisticamente diverso da quello dei cani di controllo (intervallo, 0.0005–0.01; mediana, {{42} }.002). La microalbuminuria (UAC 0,03–0,3) e la microalbuminuria (UAC 4 0.3) sono state rilevate rispettivamente nel 32,5% e nel 50% dei cani con insufficienza renale cronica. Il 60% (24/40) dei cani con insufficienza renale cronica aveva una pressione sistolica Z180 mmHg; in questi cani, il rapporto UAC (range, 0,006–7,99; mediana, 1,72) era significativamente più alto rispetto ai cani con insufficienza renale cronica e pressione sistolica o 180 mmHg (range, 0,002–4,83; mediana, 0,10). Dei cani ipertesi con insufficienza renale cronica, quelli con UPC 41,0 di solito presentavano macroalbuminuria, quelli con UPC 0,5–1,0 di solito avevano microalbuminuria e quelli con UPC o 0,5 di solito mancavano di albuminuria.
ConclusioniIl rapporto UAC era più alto nei cani ipertesi rispetto a quelli normotesi con insufficienza renale cronica. I test progettati per rilevare la microalbuminuria possono essere utili per i cani ipertesi con CKD e UPC 1.0 per rilevare l'insorgenza e l'entità dell'albuminuria. Una volta che la macroalbuminuria è conclamata, lo stesso rapporto UPC può essere utilizzato per lo stesso scopo.
Cistanche cura la malattia renale
introduzione
La proteinuria è stata implicata come mediatore indipendente della progressione dimalattia renale.1,2Nei ratti con proteinuria indotta sperimentalmente e nell'uomo con presenza naturaleinsufficienza renale, l'entità della proteinuria è correlata alla velocità di progressione diinsufficienza renale.3,4 Recentemente, la mortalità complessiva e il numero di crisi uremiche sono stati associati a proteinuria nei cani conmalattia renale cronica(CKD).5
La microalbuminuria è generalmente definita come albuminuria subclinica, cioè un tasso di escrezione dell'albumina che è anormalmente elevato ma non rilevabile dalle procedure standard di laboratorio come il metodo di routine dell'astina di livello.6 Ciò significa che il tasso di escrezione dell'albumina è al di sopra del livello normale ma al di sotto del normale livello proteinurico. Nell'uomo, la microalbuminuria è stata a lungo riconosciuta come un fattore predittivo di proteinuria clinica a esordio tardivo e malattia renale allo stadio terminale6così come dello sviluppo della nefropatia diabetica.7Allo stesso modo, la microalbuminuria può precedere la proteinuria nei cani con nefropatia ereditaria,8nei cani infetti da Dirofilaria immitis,9e nei Wheaten Terrier a pelo molle geneticamente predisposti allo sviluppo della malattia glomerulare.10
La coesistenza di ipertensione e proteinuria è già stata segnalata nei cani con iperadrenocorticismo11–13e diabete mellito,14,15ma non sono stati pubblicati rapporti sull'associazione della pressione arteriosa sistemica con la gravità della proteinuria e/o dell'albuminuria nei cani con insufficienza renale cronica. Whittemore et al16ha affermato che nei gatti esiste un'associazione significativa tra albumina urinaria: rapporto creatinina (UAC), ipertensione e azotemia e risultati simili sarebbero previsti nei cani, ma lo studio non ha supportato questa conclusione.
È essenziale non solo la diagnosi di albuminuria e/o proteinuria, ma anche l'identificazione e il controllo di altri fattori che la aggravano.17–19Ipertensione sistemica, molto probabilmente secondaria nei cani conmalattia renale,20può causare glomerulosclerosi, atrofia glomerulare e glomerulite proliferativa. Lesioni arteriolari renali ipertensive possono causare degenerazione tubulare renale e fibrosi interstiziale.21
I test semiquantitativi (p. es., dipstick) spesso sottovalutano la proteinuria perché i cani con insufficienza renale di solito hanno campioni di urina diluiti. D'altra parte, il rapporto UAC è altamente correlato con la concentrazione di albumina urinaria misurata dalla raccolta di urina a tempo e corregge la variabilità nella diuresi e nella concentrazione di urina.22,23 Nell'uomo, la microalbuminuria è definita come 30–300 mg di albumina/g di creatinina, con un rapporto UAC di 0,03–0,3 mg/mg.24,25Pertanto, lo scopo di questo studio era di determinare la prevalenza e l'entità dell'albuminuria nei cani con insufficienza renale cronica e di indagare se l'ipertensione è associata all'aumento dell'escrezione di albumina. Per raggiungere questo obiettivo, è stato sviluppato un test ELISA a cattura quantitativa per quantificare l'albumina nei campioni di urina di cani con insufficienza renale cronica ed è stato determinato il rapporto UAC per valutare la gravità dell'albuminuria.
Cistanche da migliorarefunzione renale
Materiali e metodi
Animali
Tutte le procedure che prevedono l'uso di animali sono state approvate dal Comitato Etico per la Cura e l'Utilizzo degli Animali della Scuola di Medicina Veterinaria, Università di San Paolo (protocollo n. 378/2003). Il gruppo di controllo comprendeva 39 cani normotesi clinicamente sani di entrambi i sessi (23 maschi e 16 femmine), di età compresa tra 1 e 5 anni e di razze diverse. Il gruppo CKD comprendeva 40 cani (20 maschi e 20 femmine), di età compresa tra 2 e 18 anni, e anche di razze diverse, con una diagnosi clinica di CKD classificati come stadi 3 o 4 secondo la classificazione del sistema di stadiazione proposta dall'International Renal Interest Società.26 I criteri per includere i cani nel gruppo CKD erano: anamnesi e risultati di laboratorio complementari compatibili con CKD, tra cui anemia non rigenerativa, isostenuria e azotemia renale cronica (concentrazione sierica di creatinina Z2,0 mg/dL per 4 2 mesi nei cani idratati), nonché nessuna precedente somministrazione di farmaci antipertensivi.
Pressione sanguigna
La pressione arteriosa sistolica è stata misurata utilizzando il rilevatore di flusso Doppler (Doppler Ultrasound Parks Medical Model 811B, Las Vegas, NV, USA). La larghezza del bracciale è stata scelta per essere il 30-40 percento della circonferenza dell'arto nel sito di posizionamento. Per questo studio, l'ipertensione è stata considerata presente quando era la media di almeno 5 diverse misurazioni eseguite in successioneZ180 mmHg.27 I cani sono stati sistemati e tenuti in un ambiente tranquillo con il proprietario prima della procedura. Lo stesso medico ha eseguito le misurazioni della pressione sanguigna in tutti i cani nello studio.
Analisi delle urine
I campioni di urina sono stati raccolti in modo asettico mediante cistocentesi o cateterizzazione uretrale e inviati per un'analisi delle urine completa, inclusa la valutazione microscopica del sedimento urinario. Sono stati esclusi gli animali i cui campioni di urina avevano evidenza macroscopica di ematuria e/o evidenza microscopica di piuria e batteriuria. Aliquote di surnatante di urina sono state congelate e conservate a –201°C per un massimo di 1 anno per la successiva determinazione del rapporto UAC.
Purificazione dell'albumina canina e immunizzazione dei conigli
In primo luogo, l'albumina canina liofilizzata (Frazione V, # A9263, Sigma, St Louis, MO, USA) è stata ulteriormente purificata mediante cromatografia per affinità su colonne Blue Sepharose e Q-sepharose (GE Biotech, Piscataway, NJ, USA). Successivamente, 2 conigli sono stati immunizzati per via intramuscolare con
l'albumina purificata nell'adiuvante di Freund a intervalli di quindici giorni e le IgG sono state isolate dal siero.28
Elettroforesi e Western blotting di albumina canina purificata
Il western blotting è stato ottenuto modificando un protocollo precedentemente descritto.29 In breve, campioni di urina non ridotti di un cane sano e di un cane con insufficienza renale cronica, un campione di siero di un cane sano e l'albumina canina purificata sono stati sottoposti a elettroforesi in gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide all'11%.30Le proteine sono state trasferite su fogli di membrana di nitrocellulosa ({0}}. 22 mm di dimensione dei pori, Sigma) a 15 V per 2 ore, utilizzando un sistema di blotting a trasferimento semisecco (BioRad, Hercules, CA, USA). Le membrane sono state risciacquate con tampone di lavaggio (10 mM Tris, 150 mM NaCl, 0,1 percento [v/v] Tween 20, pH 7,5) e quindi incubate con soluzione bloccante (5 percento [v /v] gelatina di pelle di pesce d'acqua fredda [Sigma G7765] disciolta in tampone di lavaggio) per 18 ore a 41°C. Le membrane sono state incubate con anticorpi disciolti in tampone di lavaggio contenente lo 0,5 percento (v/v) di gelatina di pesce per 2 ore a temperatura ambiente sotto agitazione. Per valutare la specificità degli anticorpi contro l'albumina canina purificata, le membrane sono state incubate con albumina anti-canina IgG di coniglio totale. Dopo il lavaggio, le strisce sono state incubate con coniugato di capra anti-coniglio IgG-perossidasi (Sigma A6154) per 2 ore a temperatura ambiente con agitazione. Tutti gli anticorpi ei coniugati sono stati diluiti in un tampone di lavaggio contenente lo 0,5 percento (v/v) di gelatina di pesce. La reazione è stata sviluppata come descritto in precedenza.31
ELISA per l'albumina canina nei campioni di urina
Per misurare l'albumina nei campioni di urina, piastre per microtitolazione (Maxisorp-Nunc Immunoplate, Montreal, Canada) sono state rivestite per una notte a 41°C con una soluzione da 100 mg/mL di IgG di coniglio albumina anti-canina disciolta in 0.1 M di tampone carbonato (pH 9,6), quindi bloccato con il 3% di caseina disciolta in tampone carbonato. Le curve standard a sei punti per l'albumina sono state costruite utilizzando albumina canina purificata, diluita in serie (a concentrazioni di 250.0, 83,3, 27,8, 9,3, 3,1 e 1,0 ng/mL) in incubazione tampone (0,05 percento Tween 20 e 0,6 percento di gelatina di pesce in soluzione salina tamponata con fosfato, pH 7,4). Anche i campioni di urina sono stati opportunamente diluiti (1:100, 1:300, 1:500, 1:1000, 1:10,000 e 1:50.000) nel tampone di incubazione in modo che le reazioni si verificano all'interno dell'intervallo lineare della curva standard (1,03–250 ng/mL). I campioni e gli standard sono stati analizzati in triplicato. Lo stesso anticorpo è stato utilizzato come anticorpo secondario, ma è stato coniugato con biotina29,32 e utilizzato a una concentrazione di 3,15 ng/mL, sciolto in tampone di incubazione. Le piastre sono state quindi incubate con 100 ng/mL di coniugato avidina-perossidasi (Sigma A3151) e successivamente con un reagente per lo sviluppo del colore fresco, come descritto altrove.33 La concentrazione di albumina urinaria per ciascun campione è stata estrapolata dalla curva standard e i risultati sono stati corretti per la diluizione iniziale del campione.
Cistanche perrene
UAC e proteine urinarie: rapporti di creatinina (UPC).
La concentrazione totale di proteine nelle urine (mg/dL) è stata misurata utilizzando un test Coomassie G{{0}}34; ogni campione è stato analizzato in triplicato e i valori sono stati ottenuti da una 8-curva standard puntuale (0.025, 0.075, {{16 }}.10, 0,50, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5 e 3,0 mg/mL). La concentrazione di creatinina urinaria (mg/dL) è stata determinata utilizzando un test dell'acido picrico35 su un analizzatore di chimica clinica automatizzato (Liasys, AMS, Roma, Italia) ed eseguito con controlli di qualità (Precinorm Uplus e Precipath Uplus, Roche Diagnostics, Mannheim, Germania). L'UAC è stato determinato utilizzando la concentrazione di albumina (mg/dL) ottenuta mediante ELISA. Poiché tutte le analisi sono state riportate come mg/dL, UAC e UPC sono state espresse senza unità.
analisi statistica
La distribuzione gaussiana è stata studiata utilizzando il test di Kolmogorov-Smirnov. I rapporti UPC e UAC non erano normalmente distribuiti, quindi nei confronti è stato utilizzato il test di Mann-Whitney. Per l'analisi statistica è stato utilizzato il pacchetto software SigmaStat 3.1 (Chicago, IL, USA). Le differenze con P .05 sono state considerate statisticamente significative.
Risultati
L'albumina anti-canina IgG di coniglio era specifica per l'albumina canina purificata basata sul Western blotting (Figura 1), perché in tutte le corsie è stata trovata solo 1 banda proteica di massa molecolare relativa simile a quella dell'albumina canina. Il protocollo ELISA utilizzato per misurare la concentrazione di albumina nei campioni di urina era estremamente sensibile, con un limite di rilevamento di circa 0,5 ng/mL.
Il rapporto UPC in cani normotesi clinicamente sani (n {{0}}; intervallo, 0.04–{9}}.29; mediana, 0 .10) era significativamente inferiore (P o.0{{30}}01) rispetto ai cani con insufficienza renale cronica (n=40; range, 0,13–25,08 ; mediana, 1.86). Il 65% (26/40) dei cani con CKD aveva UPC 4 1.0, il 20% (8/40) aveva un UPC compreso tra 0,5 e 1,0 e il 15% (6/40) aveva un UPC o 0,5 (Tabella 1). La maggior parte (38/40, 95%) dei cani con insufficienza renale cronica aveva un rapporto UPC Z0,2.
Il rapporto UAC nei cani clinicamente sani (intervallo, {{0}}.0005–0.01; mediana, 0,002) era anche significativamente inferiore (P o,0001) rispetto ai cani con insufficienza renale cronica (intervallo, 0,002–7,99; mediana, 0,38) (Figura 2). Il rapporto UAC variava da 0,03 a 0,3 (microalbuminuria) nel 32,5% (13/40) dei cani con CKD ed era 4 0,3 (macroalbuminuria) nel 50% (20/40) dei cani con CKD (Tabella 1 ).
L'ipertensione è stata rilevata in 24/40 (60%) cani con insufficienza renale cronica. I cani con ipertensione avevano un'età compresa tra 2 e 18 anni (media più -SD, 9,1 più - 3,7 anni), mentre i cani normotesi avevano un'età compresa tra 2 e 12 anni (7,9 più - 3,3 anni ).
Considerando la microalbuminuria come l'intervallo UAC definito per l'uomo ({{0}}.03–0,3), la microalbuminuria è stata rilevata più frequentemente nei normotesi (7/16, 43,7%) che negli ipertesi (6 /24, 25%) cani con insufficienza renale cronica. Al contrario, la macroalbuminuria è stata osservata più frequentemente nei cani ipertesi (15/24, 62,5%) rispetto a quelli normotesi (5/16, 31,3%) con insufficienza renale cronica. Non è stata osservata albuminuria in 3/24 (12,5%) ipertesi e in 4/16 (25,0%) cani normotesi con insufficienza renale cronica (Tabella 1).
Il rapporto UAC nei cani ipertesi con CKD (n {{0}}; intervallo, {{10}}.006–7,99; mediana, 1,72 ) era significativamente più alto (P =.0183) rispetto ai cani normotesi con CKD (n=16; intervallo, 0,002–4,83; mediana, 0,10) (Figura 3). L'ipertensione è stata osservata in 6/13 (46,1%) cani microalbuminurici e in 15/20 (75%) cani macroalbuminurici con cani con insufficienza renale cronica. Non è stata osservata alcuna differenza significativa (P =.062) nel rapporto UPC tra ipertesi (n=24; intervallo, 0,20–25,08; mediana, 3,07) e normotesi (n=16; intervallo, 0,13–4,70; mediana, 1,10) cani con insufficienza renale cronica.
Discussione
I rapporti UAC ottenuti in cani clinicamente sani utilizzando la nostra tecnica ELISA a cattura quantitativa erano simili a quelli riportati per le persone sane36,37e gatti.38L'entità dell'albuminuria nei cani con insufficienza renale cronica, valutata dall'UAC, era statisticamente superiore a quella dei cani sani di controllo. Considerando che i cani con insufficienza renale cronica sono stati classificati come aventi gli stadi 3 e 4 della malattia, la maggiore entità dell'albuminuria in questo gruppo potrebbe essere correlata al tasso di progressione della malattia renale, come è stato dimostrato in precedenza nei ratti e nell'uomo.3,4
La metà dei cani con insufficienza renale cronica aveva concentrazioni di albumina nelle urine nell'intervallo macroalbuminurico come ci si aspetterebbe, ma il 32,5% dei cani con insufficienza renale cronica era microalbuminurico e il 17,5% normoalbuminurico. Pertanto, in quest'ultimo gruppo, l'uso di metodi di routine per rilevare la microalbuminuria potrebbe essere di qualche beneficio. Inoltre, i test per rilevare la microalbuminuria potrebbero essere utilizzati per monitorare il trattamento e seguire la progressione della malattia non solo nei cani microalbuminurici ma anche nei cani normoalbuminurici con insufficienza renale cronica. L'uso di questi test nei cani normoalbuminurici potrebbe aiutare i medici a riconoscere l'esordio precoce dell'albuminuria e introdurre adeguate misure terapeutiche non appena viene rilevata; d'altra parte, nei cani microalbuminurici, l'obiettivo sarebbe aggiungere nuovi farmaci al regime di trattamento e/o aumentare il dosaggio dei farmaci attuali per ridurre l'entità dell'albuminuria e quindi ritardare la sua progressione alla macroalbuminuria.
The data reported herein that all dogs with CKD and macroalbuminuria also had a UPC>1.0 può suggerire che quando la macroalbuminuria si è già manifestata, i valori UPC possono essere utilizzati per gli scopi menzionati in precedenza poiché i cani sono progrediti verso la proteinuria conclamata; non sarebbe necessario utilizzare test sensibili come l'ELISA. La maggior parte dei cani con insufficienza renale cronica con rapporti UPC compresi tra 0,5 e 1.0 presentava microalbuminuria e la maggior parte di quelli con UPC< 0.5="" were="" no="" albuminuria.="" these="" findings="" suggest="" that="" upc="" values="" between="" 0.5="" and="" 1.0="" reflect="" the="" presence="" of="" microalbuminuria.="" for="" upc=""><0.5, the="" specific measurement="" of="" albuminuria="" would="" be="" recommended to="" detect="" the="" initial="" development="" of="">
L'ipertensione è stata diagnosticata nel 60% dei cani con insufficienza renale cronica, un risultato in accordo con studi precedenti.20,39,40Un'alta percentuale (62,5%) di cani con ipertensione aveva insufficienza renale cronica macroalbuminurica. L'elevata pressione arteriosa sistolica era presente nel 46,1% dei cani con insufficienza renale cronica microalbuminurica. Poiché la proteinuria è associata a un rischio maggiore di sviluppo della crisi uremica, progressione dell'insufficienza renale cronica e morte,5 i trattamenti progettati per ridurre l'ipertensione potrebbero rallentare la progressione dell'insufficienza renale e prolungare la sopravvivenza nei cani ipertesi con insufficienza renale cronica. Il confronto tra i valori UAC in cani normotesi vs cani ipertesi con insufficienza renale cronica si è rivelato statisticamente significativo, dimostrando sia la probabile relazione tra questi parametri sia gli effetti avversi che un'elevata pressione arteriosa sistolica potrebbe avere nello sviluppo dell'albuminuria, simile a quanto dimostrato per umani.41–43
Potrebbero essere sollevate domande riguardo alle differenze nei valori UAC tra cani ipertesi e normotesi con CKD in questo studio poiché potrebbero essere attribuiti a una distribuzione ineguale degli animali; tuttavia, tutti i cani erano negli stadi 3 e 4 della malattia e la gravità dell'anemia e dell'azotemia erano simili per entrambi i gruppi, coerenti con gli stadi avanzati della malattia.
In medicina umana, il riscontro concomitante di microalbuminuria e ipertensione generalmente richiede l'adozione di strategie terapeutiche specifiche. L'uso di inibitori dell'enzima di conversione dell'angiotensina nell'uomo con diabete mellito di tipo 1, ipertensione e microalbuminuria può diminuire il decorso progressivo della proteinuria massiva.44Questo stesso trattamento è utile anche nei diabetici normotesi microalbuminurici.45,46Nei ratti ipertesi con restireni,il trattamento con enalapril ha mantenuto la pressione arteriosa sistemica a livelli normali e ha limitato drasticamente lo sviluppo di proteinuria e lesioni glomerulari.47I nostri risultati indicano che il test per la microalbuminuria può essere utilizzato come strumento di follow-up per valutare la progressione della malattia e stabilire approcci terapeutici e preventivi nei pazienti canini, specialmente quando la microalbuminuria peggiora gradualmente a causa dell'ipertensione.
In conclusione, i rapporti UAC nei cani ipertesi con CKD nel nostro studio erano superiori a quelli nei cani normotesi, suggerendo che un'elevata pressione sistolica potrebbe essere associata a cambiamenti nella struttura glomerulare. I test progettati per rilevare la microalbuminuria possono essere utili nei cani ipertesi con insufficienza renale cronica e UPC 1.0 per rilevare l'insorgenza di albuminuria o per monitorare il dosaggio dei farmaci antiipertensivi. Una volta che la macroalbuminuria è conclamata, lo stesso rapporto UPC può essere utilizzato per lo stesso scopo.
Cistanche per migliorarefunzione renale
Ringraziamenti
Sostenuto da una sovvenzione (#03/10,426-3) della Fundaca˜o de Amparo a` Pesquisa do Estado de Sa˜o Paulo – FAPESP.
Divulgazione: gli autori hanno indicato di non avere affiliazioni o coinvolgimento finanziario con alcuna organizzazione o entità con un interesse finanziario o in concorrenza finanziaria con l'argomento o i materiali discussi in questo documento.
Da: 'Valutazione dell'albuminuria e del suo rapporto con la pressione sanguigna nei cani con malattia renale cronica' diAngela Bacic1, Marcia M. Kogika1, et al
-----Vetrina Clin Pathol39/2 (2010) 203–209 c 2010 Società americana di patologia clinica veterinaria DOI:10.1111/j.1939-165X.2009.00207.x
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