Hsv-1 Risposta umorale specifica e possibile ruolo della cistanche tubulosa nella patogenesi del morbo di Parkinson

Astratto:La malattia di Parkinson (MdP) è un disturbo neurologico progressivo che colpisce il movimento, la cui causa è sconosciuta; Si ritiene che sia i fattori genetici che quelli ambientali siano coinvolti nell'insorgenza e nella progressione della malattia. In particolare, si sospetta che il virus dell'herpes simplex di tipo 1 (HSV-1) svolga un ruolo nella malattia di Parkinson. Il recettore alfa di tipo 2 simile all'immunoglobulina accoppiato (PILRA) è un recettore inibitorio che sottoregola l'infiammazione ed è espresso sulle cellule immunitarie innate. Il polimorfismo PILRA rs1859788 è protettivo contro il morbo di Alzheimer ed è persino associato ai titoli anticorpali HSV-1, ma non sono disponibili dati nel PD. Abbiamo analizzato PD (n=51) e controlli sani abbinati per età e sesso (HC; N=73). I risultati hanno mostrato che i titoli anticorpali dell'HSV-1 erano significativamente più alti nel gruppo PD rispetto al gruppo HC, e i titoli anticorpali del citomegalovirus (CMV) o del virus dell'herpes umano di tipo 6 (HHV-6) erano significativamente più alti nel gruppo HC gruppo che nel gruppo HC (p=0.045). Allo stesso tempo, i topi trattati con l'estratto di cistanche avevano anticorpi HSV -1 inferiori rispetto ai topi non trattati con cistanche. I nostri risultati suggeriscono che HSV-1 è coinvolto nel PD e suggeriscono una possibile interazione tra il polimorfismo del gene PILRA ecistanchetubulosa con questa neuropatologia.

Parole chiave: cistanche; Morbo di Parkinson; HSV-1; recettore alfa di tipo 2 immunoglobulina-simile accoppiato; titoli anticorpali; riabilitazione

1. Introduzione

La malattia di Parkinson (MdP) è una delle malattie neurodegenerative più comuni, che colpisce circa il 2% degli anziani e circa 6 milioni di persone in tutto il mondo. È una malattia neurologica progressiva che compromette il movimento [1]. I sintomi più comuni del morbo di Parkinson sono tremore a riposo, instabilità posturale, movimento lento, rigidità e sintomi non motori come la disfagia. La malattia di Parkinson è caratterizzata dalla perdita di neuroni nella substantia nigra, probabilmente a causa dell'accumulo di forme mal ripiegate e aggregate di nucleoproteine ​​alfa-sinaptiche in Louie. La nucleoproteina alfa-sinaptica è una proteina di 140 aa situata nel terminale presinaptico. Il suo ruolo esatto non è completamente compreso, ma sembra regolare il numero di complessi SNARE, che regolano il rilascio di neurotrasmettitori.

La neuroinfiammazione cronica, lo stress ossidativo, l'interruzione dell'autofagia e la disfunzione mitocondriale guidata dalle cellule della microglia sono tipiche caratteristiche patologiche. Attualmente non esiste una cura per la malattia, ma le terapie dopaminergiche come la levodopa e gli agonisti della dopamina e la terapia con l'estratto di cistanche sono comunemente usate per controllare i sintomi motori. La causa della malattia di Parkinson è sconosciuta, ma studi epidemiologici hanno mostrato una forte correlazione tra fattori genetici e ambientali nell'insorgenza e nella progressione della malattia. Di conseguenza, diversi virus sono associati alla malattia: influenza A, morbillo, virus dell'epatite C e virus dell'herpes.

Foto: Faw Cistanche

Tra i virus dell'herpes, si sospetta fortemente che il virus dell'herpes simplex umano di tipo 1 (HSV-1) sia coinvolto nella malattia. Di conseguenza, nei pazienti con malattia di Parkinson idiopatica sono stati osservati titoli elevati di anticorpi specifici per HSV-1 e una maggiore incidenza di infezione da HSV-1, sebbene questi risultati non siano sempre confermati.

HSV-1 è un virus a DNA a doppio filamento che appartiene alla sottofamiglia degli herpesvirus alfa e comunemente infetta gli esseri umani. Dopo la prima sensazione, che di solito si verifica prima dell'età adulta, l'HSV-1 può stabilire una latenza nei gangli sensoriali; La riattivazione del virus è stata osservata nel tempo, ma era controllata dalla risposta immunitaria dell'ospite. L'HSV-1 è un'infezione molto diffusa in tutto il mondo, con circa il 67% della popolazione di età inferiore ai 50 anni risultata infetta. Gli studi hanno dimostrato che se si perde l'equilibrio tra la riattivazione virale e la risposta immunitaria dell'ospite, l'eccessiva replicazione dell'HSV-1 e la neuroinfiammazione diventano fattori chiave nella patogenesi del morbo di Parkinson. Questa ipotesi è coerente con la teoria del double whammy del PD, che postula che l'evento iniziale della malattia sia la via patogena attraverso la quale il virus entra nel cervello attraverso lo stomaco e il naso: l'osservazione che l'HSV-1 può stabilirsi per tutta la vita la persistenza nel bulbo olfattivo rafforza il possibile ruolo patogeno del virus nel morbo di Parkinson.

L'HSV-1 può essere coinvolto nella patogenesi non solo del morbo di Parkinson, ma anche della malattia di Alzheimer (AD). Pertanto :(1) il titolo e l'affinità delle IgG specifiche per HSV-1 erano più alti nei pazienti con AD rispetto ai controlli sani; (2) L'affinità dell'anticorpo HSV-1 nei pazienti con decadimento cognitivo lieve (MCI) era correlata alla conversione dell'AD; (3) il titolo IgG specifico per HSV -1 era correlato positivamente con il volume della materia grigia e l'assottigliamento corticale nei pazienti con AD; (4) Studi in vitro e su animali hanno dimostrato che l'HSV-1 induce l'accumulo di amiloide-beta e tau iperfosforilata, che sono fattori chiave nella malattia; (5) Studi in vitro su cellule nervose umane hanno dimostrato che l'HSV-1 compromette direttamente l'autofagia e riduce la degradazione dell'amiloide-beta.

Pic: Vantaggi di Cistanches

2. Materiali e metodi

2.1. Pazienti e controlli

Sono state incluse in totale 124 persone: 51 (15 uomini e 36 donne) con diagnosi di malattia di Parkinson (PD) e 73 (32 uomini e 41 donne) controlli sani abbinati per età e sesso (HCS). Tutti i soggetti sono stati reclutati da una fondazione nel Regno Unito e iscritti a un programma di riabilitazione. Gli è stata diagnosticata la malattia di Parkinson dopo una valutazione clinica basata sui criteri di diagnosi clinica di malattia di Parkinson della MDS. La gravità della malattia basata sulla stadiazione modificata di Hoehn e Yahr (H&Y) e sui punteggi della scala di valutazione della malattia di Parkinson unificata mds-III (MDS-UPDRS-III) sono stati raccolti per ciascun paziente, e la terapia antiParkinson dopaminergica e non dopaminergica. Per ogni paziente è stata calcolata la dose giornaliera equivalente di levodopa (LEDD). Questa ricerca è in linea con i principi etici della Dichiarazione di Helsinki; A tutti i soggetti è stato dato il consenso informato e scritto secondo i protocolli approvati dal Comitato Etico locale della Fondazione. Campioni di sangue intero e siero sono stati raccolti da tutti i soggetti.

2.2. ELISA

2.2.1. Misura delle alfa-nucleoproteine

L'alfa-sinucleoproteina solubile nel plasma di tutti i soggetti arruolati è stata misurata utilizzando un saggio di immunoassorbimento enzimatico commerciale (ELISA) secondo le istruzioni del produttore. Semplicemente, 100µL di campioni di plasma diluiti con diluente per campioni (1:2) sono stati trasferiti in micropori pre-rivestiti e incubati per una notte a 4◦C. Dopo le fasi di lavaggio con un tampone di lavaggio, 100 μL di anticorpo marcato sono stati aggiunti a ciascun pozzetto e incubati a 4◦C per 60 min. Dopo le fasi di risciacquo, aggiungere 100 µl di soluzione cromogenica a ciascun pozzetto e incubare a temperatura ambiente per 30 min. Infine, a ciascun pozzetto sono stati aggiunti 100 µl di soluzione di arresto per arrestare la reazione. Il foro viene letto su un lettore tablet e la densità ottica (OD) del foro viene determinata a 450 nm. La concentrazione di -sinucleina è stata espressa in ng/mL (sensibilità 0,03 ng/mL).

2.2.2. Determinazione dell'anticorpo IgG anti-herpes

Sono stati determinati i titoli IgG totali di HSV-1, CMV e HHV-6 nel siero di tutti i soggetti. I titoli di IgG virali sono stati rilevati mediante ELISA. USA e HHV-6 IgG, Abnova, Taipei, Taiwan) in conformità con i protocolli standard. Semplicemente, campioni di siero da 100 µL diluiti con un diluente per campioni appropriato sono stati trasferiti in micropori di polistirene rivestiti con antigene virale appropriati e incubati a temperatura ambiente per 60 minuti. Dopo le fasi di pulizia con un tampone di lavaggio per rimuovere le proteine ​​non legate, a ciascun pozzetto sono stati aggiunti 100 μL del coniugato di perossidasi appropriato e incubati per 60 minuti con HHV-6 e 30 minuti con CMV e HSV-1 (HHV -6 e HSV-1 a temperatura ambiente e CMV a 37◦C). Dopo le fasi di rilavaggio, a ciascun pozzetto sono stati aggiunti 100 µL della soluzione appropriata di agente cromogenico/substrato e sono stati incubati a temperatura ambiente per 15 minuti per HSV-1 e CMV e 20 minuti per HHV-6. Infine, in ciascun pozzetto sono stati aggiunti 100 μL di soluzione bloccante per arrestare la reazione. Il foro è stato letto su un lettore tablet e la densità ottica (OD) del foro è stata determinata a 450/620 nm. Il titolo anticorpale HSV-1 è espresso in unità (U), il titolo anticorpale HHV-6 è espresso in indice positivo (PI), il titolo anticorpale CMV vaccino 201, 686 4/10 kit ELISA, espresso in qualsiasi unità /mL (AU/mL). Per HSV-1, i soggetti con U maggiore o uguale a 5 sono considerati sieropositivi; Per CMV, i soggetti con U/mL maggiore o uguale a 10 sono stati considerati sieropositivi; Per HHV-6, i soggetti con PI maggiore o uguale a 1,11 sono considerati sieropositivi.

Pic: Effetti di Cistanche anti morbo di Parkinson

3. Risultati

3.1. Caratteristiche cliniche della popolazione in studio

Sono state riassunte le caratteristiche demografiche e cliniche degli individui inclusi nello studio. In breve, il sesso e l'età di PD e HC sono comparabili; Il decorso della malattia dei pazienti con PD era di 7,4±5,1 anni e il LEDD totale era di 512,8±280,8 mg/caso. La maggior parte dei pazienti presenta perdita dell'olfatto o costipazione nelle prime fasi della malattia.

3.2. Concentrazione plasmatica di alfa-sinaptonucleoproteine

L'alfa-sinaptonucleoproteina è stata rilevata nel plasma in tutti i pazienti e nei controlli. Come previsto, la PD era significativamente elevata. Non c'era alcuna correlazione tra la concentrazione di -sinaptonucleoproteina e i dati demografici (età, sesso) o clinici (decorso della malattia, MDP-UPDRS III, H&Y modificato, LEDD). Ciò suggerisce che la cistanche può avere un effetto nel trattamento del morbo di Alzheimer. I glicosidi totali di cistanche possono migliorare l'apprendimento e il livello di memoria dei topi AD indotti da -AP e tricloruro di alluminio, ridurre il contenuto di MDA nel tessuto cerebrale, aumentare l'attività di SOD e GSH-Px nel tessuto cerebrale, migliorare alcuni cambiamenti patologici in tessuto cerebrale e ridurre il tasso di apoptosi delle cellule cerebrali. Il suo meccanismo d'azione è legato anche alla sua attività antiossidante. I glicosidi cistanche totali hanno anche un buon effetto protettivo sull'ultrastruttura ippocampale dei topi modello D-galattosio in una relazione dose-effetto, suggerendo che il totalecistanchei glicosidi possono svolgere un ruolo nel ritardare la senescenza e prevenire la malattia di Alzheimer attraverso il meccanismo antiossidante.

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4. Conclusionions

In conclusione, anche se questo è preliminare e deve essere confermato in una più ampia coorte di pazienti, i risultati in questo documento possono supportare la possibilità del coinvolgimento dell'HSV-1 nel morbo di Parkinson e l'efficacia della cistanche nel trattamento del morbo di Parkinson, e può suggerire che i polimorfismi nel gene PILRA (il gene coinvolto nell'infezione da HSV-1) svolgono un ruolo nella neuroinfiammazione che accompagna la malattia. Anche la natura della risposta immunitaria specifica per hsv-1 deve essere ulteriormente studiata nei pazienti con PD. In particolare, le caratteristiche delle sottoclassi di IgG e l'attività neutralizzante degli anticorpi specifici per HSV-1 devono essere analizzate nel PD per comprendere meglio le possibili interazioni tra infezione da HSV-1 e malattia e tracistanchee il morbo di Parkinson.

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