Sfondo.Acutodanno renale(AKI) è una frequente complicanza della cirrosi scompensata con aumento della mortalità. I biomarcatori tradizionali come la creatinina sierica non sono sensibili per rilevare lesioni senza cambiamento funzionale. Ipotizziamo che gli esosomi urinari potenzialmente portino marcatori che differenziano il tipo didanno renalenei pazienti cirrotici.

Metodi.Questo è uno studio prospettico, monocentrico e osservazionale di pazienti adulti con cirrosi. I gruppi di pazienti includevano controlli normali sani, cirrosi compensata con normalifunzione renale, cirrosi scompensata con normalefunzione renale, e cirrosi scompensata con AKI. I dati sono stati estratti dalla cartella clinica elettronica, inclusa l'eziologia della malattia del fegato, il punteggio MELD, la storia di scompenso, il punteggio Child-Turcotte-Pugh, la storia di AKI e l'esposizione ai farmaci. I campioni di urina sono stati raccolti al momento del consenso. Il contenuto proteico dell'esosoma urinario è stato analizzato e i dati proteomici sono stati convalidati mediante immunoblotting. L'analisi statistica includeva un'analisi parziale dei minimi quadrati discriminante unita a un'importanza variabile nell'identificazione della proiezione.

Risultati.Sono stati arruolati diciotto soggetti cirrotici e sei soggetti sani di controllo sono stati estratti dal nostro biorepository. Sono stati isolati esosomi urinari e sono state identificate 1572 proteine. La maltasi-glucoamilasi era la principale proteina discriminante confermata dal western blotting.

Conclusioni. I pazienti con cirrosi e AKI hanno una sovraregolazione della disaccaridasi renale a spazzola, MGAM, negli esosomi urinari che possono differenziare il tipo didanno renalenella cirrosi; tuttavia, il significato clinico di ciò richiede un'ulteriore convalida.

Per maggiori informazioni si prega di contattare:joanna.jia@wecistanche.com

Lesione renale acutaessere trattato dacistanche

1. Introduzione

Acutodanno renale(AKI) si verifica in circa il 20 per cento dei pazienti ospedalizzati con cirrosi [1, 2]. L'AKI nei pazienti cirrotici ospedalizzati è spesso progressivo, grave e un predittore negativo indipendente di mortalità [3]. *La causa più comune di AKI nella cirrosi è l'emodinamica, che rappresenta il 70% dei casi. La necrosi tubulare acuta (ATN) rappresenta il 30% dei casi e le cause postrenali sono rare e rappresentano meno dell'1% dei casi. La sindrome epatorenale (HRS) è emodinamica senza un identificabiledanno renaleo malattia e si verifica in circa il 20% dei pazienti con cirrosi [4, 5].

La creatinina sierica (Scr) è il biomarcatore più utilizzato da valutarefunzione renalee identificaredanno renale. Tuttavia, l'SCR non è ottimale nei pazienti cirrotici per Hindawi Critical Care Research and Practice Volume 2019, per numerose ragioni tra cui diminuzione della produzione epatica, atrofia muscolare con riserve ridotte, aumento del volume di distribuzione e malnutrizione proteico-calorica. I valori medi di Scr sono più bassi nei pazienti cirrotici rispetto alla popolazione generale, con conseguente ritardo nella diagnosi di AKI sulla base dell'attuale definizione di AKI [6]. Inoltre, Scr è un biomarcatore difunzione renalee non è un marcatore di lesione sensibile. Sono emersi nuovi biomarcatori di danno renale per migliorare il rilevamento dell'AKI e aiutare a differenziare l'eziologia dell'AKI.Danno ai renibiomarcatori compresidanno renalemolecola-1 (KIM-1), lipocalina associata alla gelatinasi neutrofila (NGAL), interleuchina-18, proteina legante gli acidi grassi del fegato (L-FABP), proteina legante il fattore di crescita simile all'insulina -7 (IGFBP-7) ​​e l'inibitore tissutale della metalloproteinasi-2 (TIMP-2) possono essere elevati prima di un aumento del rilevamento del potenziamento di Scr didanno ai renisenza cambiamento funzionale [7]. Gli studi hanno dimostrato che questi biomarcatori possono differenziare l'eziologia dell'AKI [8, 9]. I biomarcatori migliorati per rilevare e differenziare l'AKI rappresentano importanti esigenze cliniche non soddisfatte nei pazienti con cirrosi.

Gli esosomi sono nanovescicole che vengono rilasciate dalle cellule viventi come meccanismo di comunicazione intercellulare [10]. *È stato dimostrato che il contenuto proteico degli esosomi è notevolmente modificato in condizioni patologiche o di stress [11–13]. Nelrene,gli esosomi vengono consegnati all'urina da tutti i tipi di cellule [14, 15] e gli esosomi urinari possono potenzialmente essere considerati come la firma biochimica del soggetto. Poiché gli esosomi urinari non vengono analizzati di routine, possono fornire ulteriori informazioni non riconosciute sui biomarcatori proteici dell'AKI nei pazienti con cirrosi.

Lo scopo di questo studio era di valutare la proteomica dell'esosoma urinario in pazienti con cirrosi e AKI rispetto a soggetti sani. Abbiamo ipotizzato che il contenuto proteico dell'esosoma urinario differisca nei pazienti con cirrosi compensata o scompensata che manifestano AKI rispetto ai normali soggetti sani di controllo. Inoltre, abbiamo postulato che il contenuto proteico esosomiale urinario differenziale offrirebbe informazioni sui meccanismi didanno renalenella cirrosi.

2. Materiali e metodi

Questo è uno studio prospettico, monocentrico e osservazionale di pazienti adulti con cirrosi. Tutti i pazienti per lo studio sono stati reclutati dal sistema sanitario della UC San Diego tra il 1 luglio 2013 e il 1 giugno 2014 e hanno fornito il consenso informato. I pazienti erano eleggibili per l'inclusione se avevano una diagnosi di cirrosi e se erano in grado di fornire un campione di urina. La cirrosi è stata determinata mediante biopsia epatica, imaging della sezione trasversale o clinicamente (tramite l'identificazione di un evento di scompenso determinato da un epatologo). I dati sono stati estratti da cartelle cliniche elettroniche tra cui dati demografici, antropometrici, segni vitali, problemi medici di comorbidità, eziologia della cirrosi, complicanze della cirrosi (ascite, varici, encefalopatia epatica e carcinoma epatocellulare), storia di AKI omalattia renale cronicae l'esposizione ai farmaci entro 30 giorni dall'iscrizione. Solo i pazienti con dati clinici completi e test di laboratorio entro 30 giorni dall'arruolamento erano idonei per l'inclusione in questo studio. I pazienti sono stati classificati in gruppi come segue:

(1) Gruppo 0: controlli sani normali

(2) Gruppo 1: cirrosi compensata (Child-Turcotte-Pugh classe A, MELD 10) senza storia di AKI e normalefunzione renale

(3) Gruppo 2: cirrosi scompensata (classe B o C Child-Turcotte-Pugh) senza storia di AKI e normalefunzione renale

(4) Gruppo 3: cirrosi scompensata (classe Child-Turcotte-Pugh B o C) e AKI

Normalefunzione renaleè stata definita come una GFR stimata > 60 ml/min/1,73 m2 (formula MDRD), nessuna albuminuria e nessuna storia di AKI. L'AKI è stato definito secondo i criteri AKIN: aumento di Scr di 0,3 mg/dl in 48 ore o aumento del 50% di Scr rispetto al basale [16]. I pazienti con AKI sono stati reclutati durante i ricoveri e le consultazioni dal servizio di epatologia ospedaliera se avevano campioni di sangue e urina ottenuti durante l'episodio di AKI. Il quarto gruppo di controlli sani è stato estratto da un biorepository sano e normale presso l'UCSD O'Brien Center for AKI Research presso la UC San Diego School of Medicine. *questo lavoro è stato approvato dall'Institutional Review Board dell'Università della California, San Diego.

2.1. Campionamento ed elaborazione delle urine per l'isolamento dell'esosoma.

L'urina è stata centrifugata a 3000 × g per 30 min. Il pH del surnatante è stato regolato a 7, aliquotato e congelato a -80 gradi C. Gli esosomi sono stati preparati utilizzando la precipitazione indotta da polietilenglicole (PEG-) [17]. *e I campioni di urina miscelati con PEG sono stati mantenuti a temperatura ambiente per 2 ore e centrifugati a 10.000 × g per 30 minuti. *e il pellet è stato risospeso in Tris 10 mM con sale EDTA-Na 1 mM. *questo passaggio è stato ripetuto due volte per rimuovere le impurità. La PAGINA SDS unidimensionale delle proteine ​​dell'esosoma è stata condotta prima della tripsinizzazione in gel per prevenire il confondimento [18].

2.2. Analisi proteomica.

Il gel è stato tagliato a 1 mm × 1 mm e decolorato 3 volte utilizzando 100 µL di bicarbonato di ammonio 100 mM per 15 minuti, seguito da 100 µL di acetonitrile (ACN) per 15 minuti [19 ]. *Il supernatante è stato liofilizzato e il pellet risultante è stato ridotto con 200 µL di bicarbonato di ammonio 100 mM-10 DTT mM e incubato a 56 gradi per 30 minuti. Dopo aver rimosso il liquido, i pezzi di gel sono stati aggiunti a 200 µL di bicarbonato di ammonio 100 mM-55 mM di iodoacetammide. *è stato incubato a temperatura ambiente per 20 minuti al buio. *Il supernatante è stato rimosso e lavato con bicarbonato di ammonio 100 mM per 15 minuti. *it, sono stati aggiunti 100 µL di ACN per disidratare i pezzi di gel e la soluzione è stata liofilizzata. È stata quindi aggiunta tripsina ghiacciata (0,01 µg/µL) in una soluzione di bicarbonato di ammonio 50 mM per coprire i pezzi di gel per il processo di digestione e fissata su ghiaccio per 30 minuti. Una volta completata la reidratazione, è stato aggiunto bicarbonato di ammonio fresco 50 mM per sostituire l'eccesso. tripsina e lasciato per una notte a 37 gradi. L'estrazione dei peptidi è stata eseguita due volte mediante l'aggiunta di 50 pi di acido formico allo 0,2 percento e ACN al 5 percento e agitata su vortice per 30 minuti a temperatura ambiente. Dopo aver rimosso il surnatante, al campione sono stati aggiunti 50 µl di acido formico al 50 percento di ACN-0, 2 percento, agitato nuovamente per 30 minuti a temperatura ambiente. *è stato rimosso il supernatante e combinato con il precedente supernatante della prima estrazione. I campioni sono stati analizzati utilizzando Eksigent nano-LC-Ultra® 2D con il sistema cHiPLC-nano flex (Eksigent, AB SCIEX Dublin, CA, USA) in modalità trap-elute in combinazione con la spettroscopia di massa tandem utilizzando lo spettrometro di massa QExactive (Thermo Fisher Scientific, San Jose´, CA, USA) con ionizzazione elettrospray [17].

2.3. Gestione dati.

Nell'analisi è stato utilizzato il motore di ricerca SEQUEST (software Thermo Scientific Proteome Discoverer, versione 1.4). * Per confrontare i nostri spettri MS/MS sperimentali è stato utilizzato un database proteico per le sequenze di peptidi triptici per l'Homo sapiens del National Center for Biotechnology Information (NCBI). Per identificare le sequenze peptidiche e le relative proteine, abbiamo utilizzato criteri precedentemente pubblicati [17]. Per valutare la significatività statistica, sono state utilizzate ricerche separate di bersaglio e esca e il calcolo dei tassi di falsa scoperta (FDR) basati sul punteggio classico. Infine, abbiamo filtrato i dati di SEQUESToutput per assegnare un punteggio finale alle proteine. I valori minimi del punteggio di correlazione (Xcorr) di 1,5, 2.{7}}, 2,25 e 2,5 sono stati scelti rispettivamente per ioni a carica singola, doppia, tripla e quadrupolare. I parametri precedentemente pubblicati sono stati utilizzati per garantire un'elevata severità [20] e il rapporto peptidi falsi positivi era inferiore al 3%.

2.4. Analisi statistica.

Il fattore di abbondanza spettrale normalizzato (NSAF) è stato utilizzato per calcolare l'abbondanza relativa dei polipeptidi [21]. La trasformazione logaritmica e il ridimensionamento della conta dei peptidi sono stati eseguiti prima dell'analisi statistica. Il portale Web MetaboAnalyst 2.{2}} è stato utilizzato per eseguire il test t di Student, l'analisi discriminante dei minimi quadrati parziali (PLS-DA) e l'importanza variabile nella proiezione (VIP) con un a priori p < 0.="" 05="" [22].="" *il="" rapporto="" tra="" la="" singola="" proteina="" e="" la="" concentrazione="" totale="" è="" stato="" valutato="" utilizzando="" il="" test="" t="" di="" student="" accoppiato="" per="" ciascun="" gruppo.="" pls-da="" e="" vip="" sono="" stati="" utilizzati="" per="" identificare="" proteine="" ​​discriminatorie="" [23].="" abbiamo="" selezionato="" proteine="" ​​con="" un="" tasso="" di="" falsa="" scoperta="" (fdr)="" inferiore="" o="" uguale="" al="" 10="" percento="" da="" convalidare="" utilizzando="" il="" western="">

2.5. Western Immunoblotting e quantificazione.

L'anticorpo contro MGAM è stato acquistato da Proteintech Group, Inc., (Chicago, IL, USA) ed è stato utilizzato per risolvere 100 ug di proteine ​​dagli esosomi urinari di ciascun soggetto. Dopo la separazione, le proteine ​​sono state trasferite su carta nitrocellulosica, bloccate, incubate con l'anticorpo primario durante la notte prima del lavaggio con soluzione salina tamponata con Tris, incubate per 1 ora con coniugato di anticorpi secondari HRP e visualizzate sviluppando come descritto in precedenti pubblicazioni del nostro laboratorio. 24, 25]. Il software ImageJ (NIH) è stato utilizzato per quantificare le bande di immunoblot occidentali [24] e tracciato (GraphPad Prism, San Diego, CA, USA).

3. Risultati

3.1. Caratteristiche cliniche di cirrosi e soggetti sani di controllo.

Sei pazienti in ciascun gruppo con dati clinici completi sono stati analizzati e confrontati con sei controlli sani. I dati demografici e l'eziologia della malattia epatica sono riassunti nella Tabella 1. Come anticipato secondo il disegno dello studio, i punteggi di Child Turcotte-Pugh e MELD variavano significativamente tra i gruppi di pazienti.

3.2. Analisi proteomiche di esosomi urinari da pazienti cirrotici e controlli sani.

In totale, in tutti e 4 i gruppi, sono state identificate 1572 proteine ​​uniche. C'erano 360 proteine ​​comuni a tutti i gruppi. Abbiamo trovato 83 proteine ​​esosomiali uniche per il gruppo 0 (controlli), 250 per il gruppo 1, 84 per il gruppo 2 e 212 per il gruppo 3 (Figura 1). Abbiamo inoltre condotto PLS-DA multivariato su proteine, che hanno mostrato una chiara separazione tra il gruppo di controllo sano e diversi sottogruppi di soggetti cirrotici, come mostrato nella Figura 2. Soggetti cirrotici compensati e scompensati senzadanno renale(gruppi 1 e 2) hanno mostrato una notevole sovrapposizione mentre i soggetti cirrotici con AKI (gruppo 3) hanno mostrato una chiara separazione dagli altri soggetti cirrotici e dai soggetti di controllo sani. Un'ANOVA separata di proteine ​​tra i quattro gruppi ha mostrato che 126 proteine ​​erano significativamente alterate (p <{4}}.05), di="" cui="" 13="" hanno="" raggiunto="" il="" cutoff="" del="" tasso="" di="" falsa="" scoperta="" (fdr)=""><10% (table="" 2).="" maltase-glucoamylase="" (mgam)="" was="" the="" top="" discriminant="" protein="" with="" a="" vip="" score="" of="" 4.35="" for="" the="" entire="" study="">

3.3. La proteina maltasi-glucoamilasi è aumentata negli esosomi urinari cirrotici scompensati.

I dati proteomici hanno mostrato una maggiore concentrazione di MGAM negli esosomi urinari di pazienti cirrotici scompensati, con e senzadanno renale(gruppi 2 e 3). Questa era la singola proteina più discriminante tra tutti e quattro i gruppi con un punteggio VIP di 4,35 (Figura 3). Il western blotting di conferma di questi esosomi ha dimostrato proteine ​​rilevabili solo nei pazienti cirrotici condanno renale(gruppo 3) (figura 4).

4. Discussione

Abbiamo condotto un'analisi proteomica del contenuto di esosoma urinario da pazienti con cirrosi compensata, cirrosi scompensata e cirrosi scompensata con AKI e li abbiamo confrontati con controlli sani. L'analisi proteomica degli esosomi urinari nei pazienti cirrotici ha identificato diversi biomarcatori potenzialmente importanti didanno renale, in particolare MGAM, un enzima bifunzionale. Abbiamo trovato le più alte concentrazioni di MGAM negli esosomi urinari dei pazienti con cirrosi e AKI. Inoltre, MGAM è stato aumentato nei pazienti con cirrosi, ma non nella misura in cui in quelli con AKI. MGAM era assente nel gruppo di controllo sano, evidenziando il suo potenziale ruolo come biomarcatore di malattia critica.

Questo studio ha molti altri risultati importanti. Innanzitutto, a nostra conoscenza, questo è il primo rapporto sull'analisi descrittiva del contenuto proteico dell'esosoma urinario in soggetti cirrotici ben caratterizzati. In secondo luogo, questo è il primo studio a riportare un aumento della disaccaridasi epiteliale tubulare neldanno cirrotico-renaleparadigma. I dati proteomici dell'esosoma delle urine dei 4 diversi gruppi hanno mostrato che la sovraregolazione di MGAM nel gruppo AKI con cirrosi è robusta e coerente. La maltasi è la principale disaccaridasi nelle membrane del bordo dello spazzolino renale [26, 27], ma la precisa funzione di questo enzima non è chiaramente chiarita; tuttavia, è stato postulato un possibile ruolo per le relative disaccaridasi, sucrasi-isomaltasi e trealasi nel trasporto dello zucchero [28]. In dieci specie di mammiferi, disaccaridi correlati a MGAM sono stati trovati nel bordo della spazzola renale [27]. Farquhar e colleghi hanno dimostrato che la maltasi è presente nei microvilli del tubulo contorto prossimale, forse funzionante nel riassorbimento e nel trasporto del glucosio; e questa capacità di assorbimento diminuisce verso porzioni più distali del nefrone [29]. È stato dimostrato che MGAM è presente negli esosomi e nelle microparticelle in un modello murino di steatoepatite non alcolica (NASH) [30], una causa comune di cirrosi. Poiché i pazienti cirrotici hanno diverse condizioni sottostanti che contribuiscono a una diminuzione di Scr, l'individuazione di AKI è problematica. Inoltre, l'eziologia della lesione è spesso sconosciuta ed è difficile differenziare tra sindrome epatorenale e altre eziologie di AKI. Inoltre, la fisiopatologia della cirrosi scompensata con AKI non è chiara in quanto può riflettere cambiamenti emodinamici o mediatori infiammatori nel caso di insufficienza epatica acuta o cronica [31]. Abbiamo ragionato sul fatto che i cambiamenti strutturali e funzionali provocati dalla cirrosi e dall'ipertensione portalefunzione renalevariano in gravità a seconda della gravità della cirrosi. Queste differenze tra la malattia epatica compensata e scompensata condanno renalepuò essere compreso studiando i prodotti a valle delrene, come l'urina. Dato il carico specifico dello stato delle cellule del nefrone dell'esosoma urinario, abbiamo ipotizzato che l'analisi dell'esosoma dell'urina contenga informazioni chiave rilevanti per la differenziazione dell'AKI nella cirrosi. Questo rapporto è il primo passo verso la verifica di questa ipotesi.

Questo disegno di studio aveva diversi limiti. In primo luogo, il numero di soggetti analizzati per gruppo è piccolo. Una dimensione del campione più ampia potrebbe aver aumentato ulteriormente la robustezza di questi dati e proteine ​​​​addizionali potrebbero aver raggiunto la soglia di un FDR accettabile di<10%. however,="" despite="" this="" small="" sample,="" these="" data="" demonstrating="" mgam="" as="" a="" unique="" exosomal="" protein="" in="" cirrhotic="" patients="" with="" aki="" is="" robust.="" second,="" we="" used="" 1d="" gel="" electrophoresis="" to="" resolve="" the="" exosome="" proteins="" prior="" to="" lc/ms-ms="" analysis="" that="" resulted="" in="" the="" identification="" of="" 1572="" proteins="" overall.="" if="" we="" had="" conducted="" direct="" exosome="" protein="" trypsinization="" instead="" of="" following="" this="" method,="" perhaps="" the="" number="" of="" identified="" proteins="" might="" have="" increased.="" in="" our="" experience,="" exosomes="" are="" packaged="" with="" nonfull="" length="" peptides="" from="" proteolytic="" action="" as="" well="" as="" endogenous="" peptides="" and="" may="" have="" con-founded="" the="" analysis.="" by="" following="" the="" gel="" electrophoresis="" method,="" we="" ensured="" that="" we="" only="" compared="" full-length="" protein="" differences="" between="">

In sintesi, abbiamo caratterizzato le differenze proteiche dell'esosoma urinario nei controlli sani e soggetti cirrotici compensati e scompensati con e senza AKI con metodi proteomici. Il lavoro del gruppo Knepper mostra che molte importanti proteine ​​renali (p. es., acquaporine, policistine e podocina) vengono eliminate nell'esosoma urinario [32, 33]. Il nostro attuale rapporto aggiunge MGAM a questo gruppo di proteine ​​renali funzionalmente importanti identificate negli esosomi delle urine. I nostri risultati suggeriscono che l'MGAM può differenziare la lesione tubulare prossimale da altri tipi di AKI nei pazienti cirrotici. Tuttavia, il significato clinico della sovraregolazione di MGAM nei soggetti con cirrosi con AKI deve essere stabilito in studi futuri.

Disponibilità dei dati

I dati clinici e proteomici utilizzati per supportare i risultati di questo studio sono limitati dal comitato di revisione istituzionale dell'UCSD al fine di proteggere la privacy dei pazienti.*i dati sono disponibili dalla dott.ssa Linda Awdishu (lawdishu@ucsd.edu) per i ricercatori che soddisfano il criteri per l'accesso ai dati riservati.

Conflitto di interessi

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

Ringraziamenti

Ricerca supportata attraverso il NIH NIDDK UAB/UCSD O'Brien Center Grant DK0793337.

Autore

Linda Awdishu,^1,2 Shirley Tsunoda,¹ Michele Pearlman,³ Chantel Kokoy-Mondragon,²Majid Ghassemian,⁴Robert K. Naviaux,⁵Heather M. Patton,³Ravindra L. Mehta,²Bhavya Vijay,⁶e Satish P.Ramachandra Rao ^2,6,7

1UC San Diego Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, San Diego, USA

2Biomarkers Laboratory, O'Brien Center forLesione renale acutaRicerca, Nefrologia-Ipertensione, UC San Diego, Dipartimento di Medicina, San Diego, USA

3UC San Diego, Dipartimento di Medicina, Divisione di Gastroenterologia, San Diego, USA

4UC San Diego, Dipartimento di Chimica e Biochimica, Struttura di spettrometria biomolecolare e proteomica, San Diego, USA

5UC San Diego, Dipartimenti di Medicina, Pediatria e Patologia, San Diego, USA

6I-AIM Biomarkers Laboratory, Re University of Trans-Disciplinary Health Sciences and Technology (TDU), Bangalore, India

7UC San Diego, Dipartimento di Medicina, Divisione Malattie Infettive, San Diego, USA

La corrispondenza dovrebbe essere indirizzata a Satish P. Ramachandra Rao; Ricevuto il 30 ottobre 2018; Revisionato il 31 dicembre 2018; Accettato il 19 febbraio 2019; Pubblicato il 16 aprile 2019 Redattore accademico: Antonio Artigas

Copyright © 2019 Linda Awdishu et al. Questo è un articolo ad accesso aperto distribuito sotto il,che consente l'uso, la distribuzione e la riproduzione illimitati con qualsiasi mezzo a condizione che l'opera originale sia adeguatamente citata.

Riferimenti

[1] F. Fabrizi e P. Messa, "Sfide nel trattamento dell'insufficienza renale prima del trapianto di fegato",Cliniche in Fegato Patologia, vol. 21, n. 2, pagg. 303–319, 2017.

[2] P. Tandon, MT James, JG Abraldes, CJ Karvellas, F. Ye e N. Pannu, "Relevance of new definitions to incidenza e prognosi didanno renalein pazienti ospedalizzati con cirrosi: uno studio di coorte retrospettivo basato sulla popolazione,"PLoS uno, vol. 11, n. 8, ID articolo e0160394, 2016.

[3] JM Belcher, G. Garcia-Tsao, AJ Sanyal et al., "Associazione di AKI con mortalità e complicanze nei pazienti ospedalizzati con cirrosi,"Epatologia, vol. 57, n. 2, pp. 753–762, 2013.

[4] G. Garcia-Tsao, CR Parikh e A. Viola, "Danno renale acutonella cirrosi,"Epatologia, vol. 48, n. 6, pagg. 2064–2077, 2008.

[5] R. Moreau e D. Lebrec, "Insufficienza renale acuta in pazienti con cirrosi: prospettive nell'età della MELD,"Epatologia, vol. 37, n. 2, pp. 233–243, 2003.

[6] F. Wong, JG O'Leary, KR Reddy, et al., "Nuova definizione di consenso didanno renale acutopredice accuratamente la 30-mortalità giornaliera nei pazienti con cirrosi con infezione,"Gastroenterologia, vol. 145, n. 6, pagg. 1280.e1–1288.e1, 2013.

[7] PT Murray, RL Mehta, A. Shaw, et al., "Utilizzo potenziale di biomarcatori indanno renale acuto: relazione e sintesi delle raccomandazioni della 10a conferenza di consenso dell'iniziativa per la qualità della dialisi acuta,"ReneInternazionale, vol. 85, n. 3, pagg. 513–521, 2014.

[8] WK Han, V. Bailly, R. Abichandani, R. Thadhani e JV Bonventre, "Lesione renalemolecola-1 (KIM-1): un nuovo biomarcatore per la lesione del tubulo prossimale renale umano",Rene Internazionale, vol. 62, n. 1, pp. 237–244, 2002.

[9] SG Coca, GN Nadkarni, AX Garg, et al., "Prima urinaria post-operatoriadanno renalebiomarcatori e associazione con la durata dell'AKI nella coorte TRIBE-AKI",PLoS uno, vol. 11, n. 8, ID articolo e0161098, 2016.

[10] C. Looze, D. Yui, L. Leung, et al., "Il profilo proteomico degli esosomi del plasma umano identifica il PPARc come proteina associata all'esosoma",Comunicazioni di ricerca biochimica e biofisica, vol. 378, n. 3, pp. 433–438, 2009.

[11] J. Conde-Vancells, E. Rodriguez-Suarez, N. Embade, et al., "Caratterizzazione e profilazione completa del proteoma degli esosomi secreti dagli epatociti",Giornale di ricerca sul proteoma, vol. 7, n. 12, pagg. 5157–5166, 2008.

[12] GI Lancaster e MA Febbraio, "Traffico Exosome-dependent di HSP70",Giornale di chimica biologica, vol. 280, n. 24, pagg. 23349–23355, 2005.

[13] GI Lancaster e MA Febbraio, "Meccanismi di rilascio di HSP72 cellulare indotto da stress: implicazioni per aumenti indotti dall'esercizio in HSP72 extracellulare,"Immunologia dell'esercizioRevisione, vol. 11, pp. 46–52, 2005.

[14] JPJJ Hegmans, PJ Gerber e BN Lambrecht, "Exosomes", inProteomica Funzionale, vol. 484, pp. 97–109, Humana Press, New York City, NY, USA, 2008.

[15] R. Zhan, X. Leng, X. Liu, et al., "La proteina 70 da shock termico è secreta dalle cellule endoteliali da un percorso non classico che coinvolge gli esosomi",Comunicazioni di ricerca biochimica e biofisica, vol. 387, n. 2, pagg. 229–233, 2009.

[16] RL Mehta, JA Kellum, SV Shah, et al., "Danno renale acutorete: relazione di un'iniziativa per migliorare i risultati in caso di danno renale acuto",Critico Cura, vol. 11, n. 2, pag. R31, 2007.

[17] SP Ramachandra Rao, MA Matthias, C. Kokoy-Mon-dragonet al., "L'analisi proteomica degli esosomi urinari rivela la risposta del tubulo renale alla colonizzazione leptospirale nei ratti infettati sperimentalmente"PLoS ha trascurato le malattie tropicali, vol. 9, n. 3, articolo e0003640, 2015.

[18] HC Christianson, KJ Svensson, TH van Kuppevelt, J.-P. Li e M. Belting, "Gli esosomi delle cellule tumorali dipendono dai proteoglicani eparan solfato sulla superficie cellulare per la loro interiorizzazione

e attività funzionale",Atti di il Nazionale Accademia delle Scienze, vol. 110, n. 43, pagg. 17380–17385, 2013.

[19] A. Shevchenko, M. Wilm, O. Vorm e M. Mann, "Sequenziamento spettrometrico di massa di proteine ​​da gel di poliacrilammide color argento,"Chimica analitica, vol. 68, n. 5, pagg. 850–858, 1996.

[20] F. Brambilla, F. Lavatelli, D. Di Silvestre, et al., "Profilo proteico fucile del tessuto adiposo umano e suoi cambiamenti in relazione alle amiloidosi sistemiche",Giornale di ricerca sul proteoma, vol. 12, n. 12, pagg. 5642–5655, 2013.

[21] AC Paoletti, TJ Parmely, C. Tomomori-Sato, et al., "Analisi proteomica quantitativa di complessi mediatori di mammiferi distinti utilizzando fattori di abbondanza spettrale normalizzati"Atti dell'Accademia Nazionale delle Scienze, vol. 103, n. 50, pagg. 18928–18933, 2006.

[22] J. Xia, R. Mandal, IV Sinelnikov, D. Broadhurst, e

DS Wishart, "MetaboAnalyst 2.0--un server completo per l'analisi dei dati metabolomici,"Ricerca sugli acidi nucleici, vol. 40, n. W1, pagg. W127–W133, 2012.

[23] J. Xia, N. Psychogios, N. Young e DS Wishart, "MetaboAnalyst: un server web per l'analisi e l'interpretazione dei dati metabolomici",Ricerca sugli acidi nucleici, vol. 37, n. S2, pagg. W652–W660, 2009.

[24] SPR Rao, R. Wassell, MA Shaw e K. Sharma, "La profilazione dei subproteomi delle cellule mesangiali umane rivela un ruolo della calmodulina nell'assorbimento del glucosio",Giornale americanodiFisiologia-renale Fisiologia, vol. 292, n. 4, pagg. F1182–F1189, 2007.

[25] SP Ramachandra Rao, Y. Zhu, T. Ravasi, et al., "Pirfenidone è renoprotettivo inmalattia renale diabetica," Journal of the American Society of Nephrology, vol. 20, n. 8, pp. 1765–1775, 2009.

[26] U. Reiss e B. Sacktor, "Renemaltasi della membrana del bordo della spazzola: purificazione e proprietà", Archives of Biochemistry and Biophysics, vol. 209, n. 2, pp. 342–348, 1981.

[27] B. Sacktor, "Trealasi e trasporto del glucosio nei mammiferirenee intestino", Atti dell'Accademia Nazionale delle Scienze, vol. 60, n. 3, pp. 1007–1014, 1968.

[28] SJ Berger e B. Sacktor, "Isolamento e caratterizzazione biochimica dei bordi del pennello dal conigliorene," Giornale di biologia cellulare, vol. 47, n. 3, pp. 637–645, 1970.

[29] D. Kerjaschki, L. Noronha-Blob, B. Sacktor e

MG Farquhar, "Microdomini di composizione glicoproteica distintiva nelrenebordo prossimale della spazzola del tubulo",Giornale di biologia cellulare, vol. 98, n. 4, pp. 1505–1513, 1984.

[30] D. Povero, A. Eguchi, H. Li et al., "Vescicole extracellulari circolanti con proteoma specifico e microRNA epatici sono potenziali biomarcatori per il danno epatico nella steatosi epatica sperimentale",PLoS uno, vol. 9, n. 12, ID articolo e113651, 2014.

[31] R. Hernaez, E. Sola`, R. Moreau e P. Gine`s, "Insufficienza epatica acuta su cronica: un aggiornamento,"Intestino, vol. 66, n. 3, pagg. 541–553, 2017.

[32] T. Pisitkun, R.-F. Shen e MA Knepper, "Identificazione e profilazione proteomica degli esosomi nell'urina umana",Atti dell'Accademia Nazionale delle Scienze, vol. 101, n. 36, pagg. 13368–13373, 2004.

[33] PA Gonzales, T. Pisitkun, JD Hoffert, et al., "Proteomica su larga scala e fosfoproteomica degli esosomi urinari",rivista di il americano Società di Nefrologia, vol. 20, n. 2, pp. 363–379, 2009.