Identificazione di diciassette componenti in Cistanches Herba coltivate nel deserto del Tarim mediante HPLC-MS

NAN Ze-dong1 ,ＲEN Hua-zhong1 ,ZHAO Ming-bo2 ,JIANG Yong2 ,TU Peng-fei2*

(1. Leshan Vocational and Technical College, Leshan 614000, Cina; 2. State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University Health Science Center, Pechino 100191, Cina)

[Astratto]Obiettivo: Identificare i componenti cromatografici dell'estratto di metanolo al 60% inCistanches deserticola Herbacoltivato nel deserto del Tarim mediante HPLC-MS．Metodo: L'analisi HPLC-MS è stata eseguita su una colonna Agilent ZOＲBAX Eclipse Plus C18 (4,6 mm × 250 mm,5 μm) ． La fase mobile era acetonitrile-0. Soluzione acquosa di acido formico all'1% mediante eluizione a gradiente alla portata di 1 mL·min － 1 e la lunghezza d'onda di rilevamento era 254 nm． La temperatura della colonna è stata impostata a 25 gradi e il volume di iniezione era di 10 μL． Ｒrisultato: sedici picchi cromatografici / diciassette componenti sono stati accuratamente identificati confrontando il tempo di ritenzione, i pesi molecolari e gli ioni frammento dei composti che abbiamo isolato e identificato． Questi componenti cromatografici sono stati determinati come coniferina, demetilsiringina, siringina, echinacoside, cistanoside A, verbascoside (tubuloside A), cistanoside B, isoverbascoside, 2'-acetilcistanoside A, cistanoside C, isocistanoside C,2'-acetilverbascoside,tubuloside B,epimeridinoside A, cistanoside K e cistanoside J．

Conclusione: Il metodo HPLC-MS è adatto per l'identificazione dei componenti cromatografici dell'estratto di metanolo al 60% in Cistanches Herba． Questo studio fornirà le prove scientifiche per analizzare in modo completo i costituenti chimici di questa erba medicinale.

［Parole chiave］ Cistanches deserticolaErba; Cistanche; HPLC MS; estratto metanolico

Cistanche deserticola YCMa

Cistanche deserticola, detta anche "ginseng del deserto",è un famoso tonico della medicina cinese, che è distribuito nella Mongolia Interna, Ningxia, Gansu e Xinjiang della Cina [1].Ha l'effetto di tonificare lo yang dei reni, di beneficiare l'essenza del sangue, di inumidire l'intestino e di defecare. È comunemente usato nelle cliniche per trattare l'impotenza maschile, l'infertilità femminile, il dolore da freddo alla vita e al ginocchio, la stitichezza da stasi del sangue, ecc. [2-3].Cistanche deserticola maincluso nella prima parte della Farmacopea cinese (edizione 2015) è il gambo carnoso essiccato di Cistanche deserticola e Cistanche tubulosa (4). Il nostro gruppo di ricerca svolge da molti anni ricerche sistematiche e approfondite sulle piante di Cistanche.I componenti chimici delle piante di Cistanche sono principalmente glicosidi feniletanoidi, oltre a iridoidi e loro glicosidi, lignani e loro glicosidi, glicosidi di alcol benzilico, ecc.[5]. I moderni studi farmacologici mostrano che i glicosidi feniletanolo, i componenti principali del genere, hanno effetti neuroprotettivi, antiossidanti, epatici, antibatterici, antivirali, antitumorali, antinfiammatori e altri [6-11].

Ginseng del deserto

In Cina,Cistanche deserticolaè distribuito nella Mongolia interna occidentale, nello Xinjiang settentrionale e nel bacino di Qaidam nel Qinghai, ma non nel bacino del Tarim nello Xinjiang meridionale. Alla fine degli anni '90, per proteggere il giacimento petrolifero di Tazhong e controllare il deserto, il quartier generale del giacimento petrolifero ha introdotto un gran numero di Haloxylon ammo dendron attorno al giacimento petrolifero di Tazhong e su entrambi i lati dell'autostrada del deserto e ha inoculato l'Haloxylon ammo dendron con la cistanche, che è stata più di 10 anni. A causa del clima caldo nel sud dello Xinjiang e delle buone condizioni di irrigazione a goccia nella base petrolifera, la resa della cistanche deserticola è molto alta e la resa della cistanche deserticola fresca per mu raggiunge più di 500 kg [8]. Molti componenti chimici in Cistanche deserticola hanno prodotto un gran numero di isomeri a causa delle diverse posizioni di connessione dei sostituenti. Ciò porta grandi difficoltà all'identificazione del picco cromatografico di questo materiale medicinale. È difficile identificare con precisione i componenti del picco cromatografico se ci si basa solo su LC-MS senza composti monomerici come controllo. Pertanto, ci sono pochi rapporti di letteratura su questo lavoro nella fase iniziale. L'autore ha isolato molti composti monomerici [9-11] dalla Cistanche deserticola coltivata nel deserto di Tazhong nella fase iniziale. Attraverso questi composti monomerici ottenuti nella fase iniziale, sono stati accuratamente identificati i picchi cromatografici parziali HPLC dell'estratto di metanolo al 60% di Cistanche deserticola. Ciò non solo eviterà la ripetuta identificazione di alcuni composti noti nei costituenti chimici di Cistanche deserticola, ma fornirà anche qualche riferimento per ulteriori ricerche sul controllo di qualità del materiale medicinale. In questo documento, 17 componenti dell'estratto di metanolo al 60% di Cistanche deserticola sono stati identificati mediante HPLC-MS.

Fetta di cistanche deserticola

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1.Materiale

strumento di risonanza magnetica nucleare Inova-500 (Varian, USA); Spettrometro di massa 6320IonTrap LC-MS, colonna EclipseXDB-C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μ m) (Agilent, USA); Bilancia elettronica QUINTIX313-1tipo CN 1/10000 (Divisione Sedaris); Pulitore a ultrasuoni KQ-500DV (Jiangsu Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); KMUP - Ⅰ Trace Analytical Ultra Pure Water Generation System (Chengdu Haochun Instrument Equipment Co., Ltd.).

Le 39 sostanze di controllo utilizzate in questo esperimento sono state tutte isolate dall'autore nella fase iniziale dalla Cistanche deserticola coltivata nel deserto a Tazhong e le loro strutture sono state determinate mediante NMR e altre tecniche di spettroscopia. Le strutture di 39 campioni di controllo sono state identificate come Cistanche deserticoside J, Cistanche deserticoside K, Cistanche deserticoside L, Cistanche deserticoside M, Cistanche deserticoside N, epimeridinosideA, Isocistancheside C, angiocyanin B, Cistanche heterophyllin, Isocornicin, Cistanche deserticoside D, Cistanche deserticoside C, Cistanche cymosin, 2 '- acetyl Cistanche deserticoside A, 2' - acetyl Cistanche deserticoside A, Cistanche deserticola B, Cistanche deserticola A, Echinoside A, Cistanche deserticola glycoside E, Salidroside, 6 '- acetyl salidroside, saliside B, syringin, demethyl syringin , gineperina, (2E, 6E) - 3, 7-dimetil-8-idrossictadiene-1-O- - D-glucoside, ( plus ) - siringina, ( plus ) - syringin-4 '- O- - D-glucopiranoside, ( plus ) - isoeucomminA, eucomminA, ( plus ) - colofonia monometil etere- - D-glucoside, larvicida-4 ' - O- - D-glucoside, larvicida-4-O- - D-glucoside- - D glucopiranoside, esperidina A, area a lato A, 6-deossicatapolo. La purezza di tutte le sostanze di riferimento di cui sopra è superiore al 98.0 percento. L'acetonitrile è cromatograficamente puro (DikmaPure, USA), l'acqua è acqua ultrapura e altri reagenti utilizzati nel processo di test sono reagenti analitici puri, prodotti da Beijing Chemical Plant.

Il materiale medicinale utilizzato in questo esperimento, Cistanche deserticola, è stato raccolto dall'area desertica di Tazhong, Xinjiang, nel novembre 2010. È stato identificato dal professor Tu Pengfei della School of Pharmacy dell'Università di Pechino come il fusto carnoso essiccato della pianta Leobaceae Cistanche deserticola. Il campione è stato conservato nel Centro di ricerca moderna di medicina tradizionale cinese dell'Università di Pechino (numero del campione: CD201011).

Fetta di cistanche deserticola

2.Metodi e risultati

2.1 Preparazione della soluzione di riferimento

Prelevare circa 1 mg di ciascuno dei 39 campioni di controllo ottenuti da Cistanche deserticola nella fase iniziale, pesarli accuratamente, metterli rispettivamente in un matraccio tarato da 5 ml, scioglierli con metanolo e portarli a volume sulla bilancia, quindi ottenere il singolo controllo soluzione.

2.2 Preparazione della soluzione di prova

Facendo riferimento alla Farmacopea cinese, edizione 2015, prelevare circa 1 g di prodotto in polvere (attraverso il quarto setaccio), pesarlo accuratamente, metterlo in un flacone marrone da 100 ml, aggiungere con precisione 50 ml di metanolo al 60%, tamponare scuoterlo bene, pesare la massa, immergerla per 30 minuti, trattamento a ultrasuoni per 40 minuti, raffreddarla, pesare di nuovo la massa, aggiungere il 50% di metanolo per compensare la massa ridotta, agitarla bene, farla riposare, prendere il supernatante, e utilizzare la filtrazione a membrana microporosa da 0,45 μ M, prendere il filtrato continuo per ottenere la soluzione di prova.

2.3 Condizioni cromatografiche

Colonna cromatografica AgilentEclipse XDB-C18 (4,6 mm × 25 0 mm, 5 μ m), lunghezza d'onda di rilevamento 254 nm, temperatura della colonna 25 gradi; Utilizzando acetonitrile (A) - 0.1% di soluzione acquosa di acido formico (B) come fase mobile, gradiente di eluizione (0 - 20min, 5% - 15% A; 20 - 50 min, 15 percento - 30 percento A; 50 - 60min, 30 percento - 50 percento A; 60 - 70min, 50 percento - 95 percento A); Flusso: 1,0 ml · min-1, volume di iniezione: 10 μL.

2.4 Condizioni dello spettro di massa

Temperatura capillare 350 gradi; Tensione capillare 3500V; Portata del gas di rivestimento (azoto) 12,0 L · min-1; Pressione del gas ausiliario (azoto) 206,8 kPa; L'intera gamma di scansione della spettrometria di massa è m/z 50~1000; Elio gas di collisione, l'energia di collisione viene selezionata automaticamente durante il test; Raccogliere 1 ago per ogni modalità di ioni positivi e negativi.

2.5 Test di una sostanza di riferimento

Le 39 soluzioni di riferimento preparate in 2.1 sono state testate in 2.3 condizioni cromatografiche e 2.4 condizioni spettrometriche di massa, e sono stati registrati il ​​loro tempo di ritenzione e il relativo peso molecolare (Tabella 1).

2.6 Determinazione della soluzione di prova

Prendere il materiale medicinale Cistanche deserticola raccolto dalla zona desertica di Tazhong, Xinjiang, e preparare la soluzione di prova secondo il metodo descritto in 2.2. Quindi, eseguire la determinazione secondo le condizioni cromatografiche descritte in 2.3 e le condizioni di spettrometria di massa descritte in 2.4, e determinare il suo cromatogramma HPLC e la spettrometria di massa nella modalità di ioni positivi e negativi (Figure 1-3).

Fico. 1 cromatogramma HPLC di estratto di metanolo al 60% di Cistanches Herba

Fico. 2 Cromatogramma TIC MS positivo dell'estratto di Cistanches Herba con metanolo al 60%.

Fico. 3 Cromatogramma TIC MS negativo dell'estratto con metanolo al 60% di Cistanches Herba

2.7 Identificazione del cromatogramma HPLC di materiali medicinali

Nelle stesse condizioni (2.3 condizioni cromatografiche e 2.4 condizioni spettrometriche di massa), i componenti sono stati identificati confrontando il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo del campione in esame e del campione di controllo. Il processo di identificazione specifico del picco del cromatogramma del campione in esame (Figura 1) è il seguente.

2.7.1 Identificazione del picco cromatografico 1

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 1 è di 16,67 minuti. Nella modalità ioni positivi, il picco degli ioni eccimeri m/z365 è dato come [M plus Na] plus , mentre nella modalità ioni negativi, il picco degli ioni eccimeri m/z387 [M plus COOH] - è dato. Il peso molecolare relativo del picco 1 è determinato essere 342. Viene anche dato il frammento ione m/z179, che ha origine dalla perdita di 1 molecola di glucosio 163 Da dovuta alla scissione del legame glicosidico. In base al tempo di ritenzione e al peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 1 è stato identificato come coniferina.

2.7.2 Identificazione del picco cromatografico 2

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 2 è di 17,36 min. Nella modalità ioni negativi, vengono forniti i picchi degli ioni eccimeri m/z357 [M – H] -, 393 [M più Cl] - e il peso molecolare relativo del picco 2 è determinato in 358. Allo stesso tempo, il il frammento ione m/z195 deriva dalla perdita di 1 molecola di glucosio 163 Da a causa della rottura del legame glicosidico. Il picco cromatografico 2 è stato identificato come demetilsiringina in base al tempo di ritenzione e al peso molecolare relativo della sostanza di riferimento.

2.7.3 Identificazione del picco cromatografico 3

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 3 è 19,04 min, il picco dello ione eccimero m/z395 [M più Na] più è dato nella modalità ioni positivi, e il picco dello ione eccimero m/z417 [M più HCOO] - è dato nella modalità ioni negativi, e il peso molecolare relativo del picco 3 è determinato in 372. Allo stesso tempo, il frammento ione m/z209 è derivato dalla perdita di 1 molecola di glucosio 163 Da a causa della rottura del legame glicosidico. Il picco cromatografico 3 è stato identificato come siringina in base al tempo di ritenzione e al peso molecolare relativo della sostanza di riferimento.

2.7.4 Identificazione del picco cromatografico 4

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 4 è di 27,66 min. Il picco dello ione eccimero m/z804 [M plus NH4] plus è dato in modalità ioni positivi, e il picco degli ioni eccimeri m/z785 [M – H] - è dato in modalità ioni negativi. Il peso molecolare relativo del picco 4 è determinato essere 786. Allo stesso tempo, lo ione frammento m/z623 è derivato dalla perdita per rottura del legame estere di 1 molecola di caffeina 163 Da. In combinazione con il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 4 è stato identificato come echinacea.

2.7.5 Identificazione del picco cromatografico 5

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 5 è di 31,48 min, il picco dello ione eccimero m/z818 [M più NH4] plus è dato nella modalità ioni positivi, e il picco dello ione eccimero m/z799 [M – H] - è dato nella modalità ioni negativi, e il peso molecolare relativo del picco 5 è determinato essere 800. Allo stesso tempo, il frammento ione m/z637 è derivato dalla perdita di rottura del legame estere di 1 molecola di caffeina 163Da. Combinando il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, è stato confermato che il picco cromatografico 5 era il glicoside cistanche A.

Tabella 1 Peso molecolare e tempo di ritenzione( tＲ ) di 39 composti standard

2.7.6 Identificazione del picco cromatografico 6

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 6 è di 34,17 minuti. Due picchi di ioni eccimeri m/z846642 [M più NH4] plus sono dati nella modalità ioni positivi, e due picchi di ioni eccimeri m/z827623 [M – H] sono anche dati nella modalità ioni negativi. Si ipotizza che il picco 6 possa contenere due composti con un peso molecolare relativo di 828624. Allo stesso tempo, il frammento ione m/z665461 è derivato dalla rottura del legame estere di 1 molecola di caffeina 163 Da, e il frammento ione m /z622 deriva dalla rottura del legame estere acetilico. Questi due composti sono stati isolati e combinati con il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 6 era una miscela di cimicifugarina e antocianina A.

2.7.7 Identificazione del picco cromatografico 7

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 7 è di 35,34 min. Il picco dello ione eccimero m/z832 [M plus NH4] plus , 837 [M plus Na] plus è dato in modalità ioni positivi, e il picco degli ioni eccimeri m/z813 [M – H] - è dato in modalità ioni negativi , e il peso molecolare relativo del picco 7 è 814. Allo stesso tempo, lo ione frammento m/z637 è derivato dalla perdita per rottura del legame estere di 1 molecola di acido ferulico 177Da. In combinazione con il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 7 è stato identificato come cistanche glicoside B.

2.7.8 Identificazione del picco cromatografico 8

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 8 è di 36,17 minuti, il picco dello ione eccimero m/z647 [M più Na] plus è dato nella modalità ioni positivi, e il picco dello ione eccimero m/z623 [M – H] - è dato nella modalità ioni negativi, e il peso molecolare relativo del picco 8 è determinato in 624. Allo stesso tempo, viene dato il frammento ione m/z461, che ha origine dalla rottura del legame estere e dalla perdita di 1 molecola del gruppo caffeina 163 Da. In combinazione con il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 8 è stato identificato come eterocenoside.

2.7.9 Identificazione del picco cromatografico 9

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 9 è di 38,20 minuti. I picchi degli ioni eccimeri m/z860 [M plus NH4] plus , 865 [M plus Na] plus sono dati in modalità ioni positivi, e i picchi degli ioni eccimeri m/z841 [M – H ] -, 877 [M più Cl] - sono dati in modalità ioni negativi. Il peso molecolare relativo del picco 9 è determinato essere 842. Allo stesso tempo, lo ione frammento m/z679636 è derivato dalla perdita per rottura del legame estere di 1 molecola di caffeina 163 Da e 1 molecola di acetil 43 Da. Il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento sono coerenti e il picco di identificazione 9 è 2'-acetyl cistanche glicoside A.

2.7.10 Identificazione del cromatografico pagogni 10

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 10 è di 39,04 min. Il picco dello ione eccimero m/z656 [M più NH4] più , 661 [M più Na] più è dato nella modalità ioni positivi, e il picco dello ione eccimero m/z637 [M – H] -, 673 [M più Cl] - è dato in modalità ioni negativi. Il peso molecolare relativo del picco 10 è determinato essere 638. Allo stesso tempo, lo ione frammento m/z475 è derivato dalla perdita per rottura del legame estere di 1 molecola di caffeina 163 Da. Il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento sono coerenti e il picco di identificazione 10 è Cistanche C.

2.7.11 Identificazione del picco cromatografico 11

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 11 è di 40,82 min. Il picco dello ione eccimero m/z661 [M più Na] più , 677 [M più K] più è dato nella modalità ioni positivi, e il picco dello ione eccimero m/z637 [M – H] -, 673 [M più Cl] - è dato in modalità ioni negativi. Si può determinare che il peso molecolare relativo del picco 11 è 638. Allo stesso tempo, il frammento ione m/z475 è derivato dalla perdita per rottura del legame estere di 1 molecola di caffeina 163 Da. Combinando il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 11 è stato identificato come isocistanche glicoside C.

2.7.12 Identificazione del picco cromatografico 12

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 12 è di 41,48 min. Il picco dello ione eccimero m/z684 [M più NH4] più , 689 [M più Na] più è dato in modalità ioni positivi, e il picco degli ioni eccimeri m/z665 [M – H] - è dato in modalità ioni negativi . Si può determinare che il peso molecolare relativo del picco 12 è 666. Allo stesso tempo, si dimostra che il frammento ione m/z503460 proviene dalla rottura del legame estere di 1 molecola di caffeina 163 Da e 1 molecola di acetil 43 Da. In base al tempo di ritenzione e al peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 12 è stato identificato come 2'-acetil celiaoside.

Esperimento Cistanche deserticola

2.7.13 Identificazione del picco cromatografico 13

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 13 è di 44,29 min, il picco dello ione eccimero m/z689 [M più Na] plus è dato nella modalità ioni positivi, e il picco dello ione eccimero m/z665 [M – H] - è dato nella modalità ioni negativi, e il peso molecolare relativo del picco 13 è 666. Allo stesso tempo, è dimostrato che il frammento ione m/z503460 proviene dalla perdita di rottura del legame estere di 1 molecola di caffeina 163 Da e 1 molecola di acetil 43 Da. In combinazione con il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 13 è stato identificato come antocianina B.

2.7.14 Identificazione del picco cromatografico 14

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 14 è di 46,67 min. Il picco dello ione eccimero m/z675 [M plus Na] plus è dato in modalità ioni positivi, e il picco degli ioni eccimeri m/z651 [M – H] - è dato in modalità ioni negativi. Il peso molecolare relativo del picco 14 è 652. Allo stesso tempo, lo ione frammento m/z475 è derivato dalla perdita per rottura del legame estere di 1 molecola del gruppo di acido ferulico 177Da. In combinazione con il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 14 è stato identificato come epimeridinosideA.

2.7.15 Identificazione del picco cromatografico 15

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 15 è di 49,90 min. Il picco dello ione eccimero m/z698 [M più NH4] più , 703 [M più Na] più è dato nella modalità ioni positivi, e il picco dello ione eccimero m/z679 [M – H] -, 715 [M più Cl] - è dato in modalità ioni negativi. Il peso molecolare relativo del picco 15 è 680. Allo stesso tempo, il frammento ione m/z517474 è derivato dalla perdita per rottura del legame estere di 1 molecola di caffeina 163 Da e 1 molecola di acetil 43 Da. Il picco cromatografico 15 è stato identificato come cistanche glicoside K in base al tempo di ritenzione e al peso molecolare relativo della sostanza di riferimento.

2.7.16 Identificazione del picco cromatografico 16

Il tempo di ritenzione del picco cromatografico 16 è di 55,36 minuti. Nella modalità ioni positivi, viene fornito il picco degli ioni eccimeri m/z717 [M più Na] più, mentre nella modalità ioni negativi, i picchi degli ioni eccimeri m/z693 [M – H] -, 729 [M più Cl] - sono dati, risultando in un peso molecolare relativo di 694 per il picco 16. Allo stesso tempo, è mostrato che il frammento ione m/z517474 proviene dalla perdita di rottura del legame estere di 1 molecola di acido ferulico gruppo 177 Da e 1 molecola di gruppo acetile 43 Da. In combinazione con il tempo di ritenzione e il peso molecolare relativo della sostanza di riferimento, il picco cromatografico 16 è stato identificato come cistanche glicoside J. I picchi cromatografici dell'estratto di Cistanche deserticola con metanolo al 60% sono stati identificati mediante HPLC-MS combinati con il peso molecolare relativo, ritenzione tempo e frammento ione della sostanza di riferimento separata. I risultati hanno mostrato che 17 componenti dei 16 picchi cromatografici sono stati accuratamente identificati (Tabella 2).

Tabella 2 Picchi cromatografici identificati di Cistanches Herba e composti standard di riferimento

3 .Discussione

3.1 Selezione del metodo di preparazione dell'articolo di prova

Lo scopo principale di questo studio è identificare i picchi HPLC di Cistanche deserticola. Pertanto, la selezione del solvente di estrazione e del metodo di estrazione si basa sulla capacità di ottenere più picchi HPLC. Il gruppo di ricerca ha svolto ricerche a lungo termine su Cistanche deserticola e ha svolto molto lavoro nell'analisi della qualità. In questo documento, il solvente di estrazione e il metodo di estrazione di Cistanche deserticola sono stati selezionati anche sulla base del precedente lavoro di analisi del gruppo di ricerca e della Farmacopea cinese (edizione 2015). Infine, come metodo di estrazione è stata selezionata l'estrazione ultrasonica con solvente al 60% di metanolo per 40 minuti.

3.2 Selezione delle condizioni HPLC-MS

La selezione della colonna cromatografica in questo documento si basa sull'analisi della qualità di Cistanche deserticola nella fase iniziale del gruppo di ricerca e sull'analisi di AgilentZORBAXEclipsePlusC18 (4,6 mm × 250 mm,5 μ m), DionexC18 (4,6 mm × 250 mm,5 μ m), Colonna cromatografica ThermoC18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μ m), infine selezionare Colonna cromatografica AgilentZORBAXEclipsePlusC18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μ m) Ha un buon effetto di separazione su Cistanche deserticola; Le 39 sostanze di riferimento includono feniletanoidi, lignani e fenilpropanoidi, quindi la lunghezza d'onda di rilevamento è di 254 nm; Allo stesso tempo, gli effetti della fase mobile come metanolo-acqua, acetonitrile-acqua, metanolo-0.1 percento acido fosforico acqua, acetonitrile-0.1 percento acido formico acqua sulla separazione cromatografica e massa sono stati studiati i rilevamenti spettrometrici e l'acetonitrile-0,1% di acqua di acido formico è stata infine selezionata come fase mobile.

3.3 Sommario

Il metodo stabilito in questo studio ha identificato accuratamente 17 componenti da 16 picchi cromatografici del 60% di metanoloestrattoDiCistanche deserticola. 

Estratto di cistanche in polvere

I risultati della ricerca non solo hanno un certo valore di riferimento per l'ulteriore analisi della qualità del materiale medicinale, ma possono anche evitare alcuni lavori ripetitivi sull'identificazione della struttura dei composti noti del materiale medicinale. Tuttavia, in generale, vi sono relativamente pochi picchi cromatografici identificati e molti picchi cromatografici non sono stati identificati perché non sono stati assegnati alla sostanza di riferimento. La maggior parte dei componenti identificati sono glicosidi feniletanoidi, mentre i lignani sono rari. Ciò può essere dovuto al fatto che il metodo di estrazione a cui si fa riferimento nell'edizione 2015 della Farmacopea cinese è rivolto principalmente ai glicosidi feniletanoidi, o perché il contenuto di echinacosidi e composti simili ai coliformi nell'estratto di questo medicinale è troppo elevato, il che rende difficile per rilevare altri composti con contenuto ridotto. Le ragioni specifiche devono essere ulteriormente chiarite.

[Riferimenti]

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