Kaempferol allevia il danno mitocondriale LD promuovendo l'autofagia: implicazioni nella malattia di Parkinson Parte 1

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Astratto:Prove emergenti indicano che la deposizione e la perossidazione inaspettate di goccioline lipidiche (LD) possono accelerare lo stress degli organelli e svolgono un ruolo cruciale nella patogenesi delle malattie neurodegenerative (NDD). Nel nostro studio precedente, abbiamo confermato che il kaempferol (Ka), una piccola molecola di flavonoide naturale , ha mostrato effetti neuroprotettivi sui topi con malattia di Parkinson (PD) indotta da LPS. Inoltre, studi precedenti hanno dimostrato che l'autofagia svolge un ruolo importante nella regolazione della deposizione cellulare di LD. Nel presente studio, abbiamo dimostrato che Ka proteggeva contro TH più perdita neuronale e deficit comportamentali nei topi PD indotti da MPTP/p, accompagnato da un ridotto stress ossidativo lipidico nella substantia nigra pars compacta (SNpc). Nelle cellule neuronali in coltura, Ka ha mostrato un intervallo di concentrazione relativamente sicuro e l'accumulo di LD significativamente soppresso e l'apoptosi cellulare indotta da MPP plus. Ulteriori studi hanno indicato che l'effetto protettivo di Ka dipendeva dall'autofagia, in particolare dalla lipofagia. Fondamentalmente, Ka ha promosso l'autofagia per mediare la degradazione dell'LD nei lisosomi, che ha quindi alleviato la deposizione e la perossidazione lipidica e il conseguente danno mitocondriale, riducendo di conseguenza la morte neuronale. Inoltre, il knockdown di Atg5 mediato da AAV-shAtg5- ha abolito gli effetti neuroprotettivi di Ka contro l'ossidazione dei lipidi nei topi con PD. Questo lavoro dimostra che Ka previene la degenerazione neuronale dopaminergica nel PD attraverso l'inibizione del danno mitocondriale mediato dalla perossidazione lipidica promuovendo l'autofagia labiale e fornisce una potenziale nuova strategia terapeutica per PD e NDD correlati.

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1. Introduzione

Il morbo di Parkinson (PD) è una comune malattia neurodegenerativa (NDD) caratterizzata patologicamente dalla progressiva perdita di neuroni dopaminergici (DA) nella substantia nigra pars compacta (SNpc)[]. Sebbene l'esatta eziologia e il decorso naturale di questa malattia debbano ancora essere completamente chiariti, numerosi processi e disfunzioni a livello di sistema, comprese le funzioni mitocondriali, l'omeostasi della dopamina, la neuroinfiammazione e l'autofagia, sono stati implicati nella patogenesi del PD [1, 2]. Rapporti recenti hanno rivelato che la lipotossicità correlata alle goccioline lipidiche (LD) potrebbe partecipare alla patologia del PD [3,4]. Gli LD sono organelli altamente dinamici che emergono dalla membrana del reticolo endoplasmatico (ER) e normalmente fungono da siti intracellulari di deposito di lipidi neutri [5]. Recentemente è stato dimostrato che gli LD svolgono un ruolo molto più ampio rispetto alla conservazione degli acidi grassi (FA) e partecipano a molte malattie. Ad esempio, le cellule mieloidi, inclusi macrofagi, leucociti ed eosinofili, formano LD in risposta all'infiammazione e allo stress e le LD sono siti di produzione e conservazione di citochine infiammatorie e sono ulteriormente coinvolte nella presentazione dell'antigene e nella clearance dei patogeni [6]. È importante sottolineare che nell'aterosclerosi, è stato dimostrato che le cellule schiumose ricche di LD sono deleterie in tutte le fasi della malattia [7].

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Tuttavia, le LD non sono state studiate in modo approfondito nel sistema nervoso centrale (SNC), con pochi documenti che riportano la presenza istologica di LD nel tessuto cerebrale umano [8,9]. Anche così, le LD possono avere importanti funzioni nel cervello, poiché studi recenti hanno confermato che le LD aggregate nella glia hanno accelerato la neurodegenerazione in un modello di Drosophila [10]. È stato recentemente riportato che nei topi, cellule lipidiche O-positive rosse oleose, inclusi neuroni, proteina acida fibrillare gliale (GFAP) più astrociti e molecola ionizzata dell'adattatore legante il calcio-1 (IBA-1 ) microglia, sono presenti in molte regioni del cervello e hanno dimostrato di partecipare ai processi associati all'età [11]. Il nostro lavoro precedente ha anche dimostrato un aumento dell'accumulo di LD nel cervello in un modello murino PD [12]. Presi insieme, questi studi suggeriscono che gli LD possono essere coinvolti nella patogenesi del PD, così come altri NDD.

Normalmente, le LD intracellulari sono degradate nei lisosomi e forniscono FA ai mitocondri per il loro consumo come fonte di energia alternativa durante i periodi di esaurimento dei nutrienti [13]. Tuttavia, i neuroni hanno una bassa capacità di consumo di FA mitocondriale per la produzione di energia [14]. Questa caratteristica rende i neuroni particolarmente sensibili all'accumulo di LD e alla perossidazione. Inoltre, l'accumulo di LD aumenta il tasso di ossidazione degli FA e impone una pressione persistente sulla catena di trasporto degli elettroni mitocondriali, che aumenta la produzione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) da parte dei complessi della catena di trasporto degli elettroni I e II[15] per amplificare lo stress ossidativo. Il sovraccarico lipidico porta anche alla produzione di ROS da parte di fonti extramitocondriali come le ossidasi della nicotinamide adenina dinucleotide fosfato (NADPH) e altri enzimi ossidativi. In combinazione con la ridotta espressione di enzimi antiossidanti e la bassa capacità di consumo di AF nei neuroni, l'accumulo di LD media lo stress ossidativo e può ulteriormente portare a danno mitocondriale, disfunzione lisosomiale, autofagia difettosa e attivazione di risposte infiammatorie [16,17]. A meno che le LD accumulate non possano essere inibite o rimosse, i neuroni altamente attivi vanno incontro a fisiopatologia, dando origine alla neurodegenerazione [17]. L'evidenza indica che il processo catabolico mediato dal lisosoma chiamato autofagia gioca un ruolo fondamentale nel mantenimento dell'omeostasi cellulare della LD in più tessuti [17,18]. In dettaglio, le LD possono essere sequestrate selettivamente negli autofagosomi e consegnate ai lisosomi per la degradazione da parte delle lipasi acide lisosomiali, un processo specificamente noto come lipofagia [19]. Pertanto, prendere di mira gli LD e il loro percorso di rimozione autofagica potrebbe rappresentare un nuovo approccio alla gestione della neurodegenerazione.

Lo studio di prodotti naturali e agenti dietetici come fonti per potenziali trattamenti e strategie NDD ha suscitato enorme interesse negli ultimi anni [20]. Kaempferol (Ka) è una piccola molecola polifenolica naturale che può essere trovata in un certo numero di erbe medicinali cinesi e fonti alimentari [21]. È stato riportato che Ka esercita effetti antibatterici, antietà e immunomodulatori, nonché attività antiossidanti e neuroprotettive [20,22,23]. In precedenza, è stato riportato che Ka inibisce l'infiammazione nelle cellule microgliali BV2 in vitro [24] e aumenta la resistenza dei neuroni DA alla neuroinfiammazione in vivo [25]. Tuttavia, l'effetto di Ka sulle LD nel PD non è stato ancora studiato.

Data l'importanza delle LD e l'intima connessione tra LD, mitocondri e autofagia [16], che sono tutti coinvolti nel PD, ipotizziamo che Ka inibisca la perossidazione LD e prevenga la neurodegenerazione DA nel PD. Nel presente studio, abbiamo dimostrato che Ka proteggeva significativamente dalla neurodegenerazione in un modello murino di PD inibendo l'accumulo di LD. Ulteriori studi hanno rivelato che Ka ha innescato l'autofagia e ridotto l'accumulo di LD ossidati per alleviare la disfunzione mitocondriale e la produzione di ROS mitocondriali (mtROS), prevenendo così la morte apoptotica neuronale. I risultati ottenuti in questo studio possono aiutare a prendere decisioni cliniche dirette per quanto riguarda l'uso della molecola naturale Ka in NDD come PD.

2. Materiali e metodi

2.1. Animali sperimentali

I topi C57BL/6J (maschio, di 4-mese di età) sono stati ottenuti dalla Nanjing Medical University Animal Core (Nanchino). I topi sono stati allevati e allevati nel Centro per le risorse animali della Facoltà di Medicina dell'Università di medicina di Nanchino e nella struttura per animali del Nanjing Drum Tower Hospital. I topi sono liberi di accedere al cibo e all'acqua in una stanza con una temperatura ambiente di 22 gradi ± 2 gradi e un ciclo luce/buio di 12:12 h. Tutte le procedure sugli animali sono state eseguite in stretta conformità con le linee guida della Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio del National Institutes of Health Guide.

2.2. Reagenti

MPTP (M0896),3-MA (M9281), penicillin-streptomycin (V900929), sodium pentobarbital, and probenecid were purchased from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Kaempferol (HPLC>95%)for in vivo treatment was purchased from Nanjing Jingzhu Biotechnology Co., Ltd (Nanjing, China), kaempferol(HPLC>99.0 percento ,96.353) per esperimenti in vitro è stato ottenuto da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). BODIPY 493/503 (D3922), BODIPY 581/591 C11 (D3861), DHE (D11347) sono stati acquistati da Thermo Fisher Scientific. Per gli esperimenti sugli animali, Ka è stato sciolto in una soluzione al 10% di DMSO in 16% di SBE- -CD in soluzione fisiologica sterile. Per esperimenti cellulari, Ka è stato preparato in DMSO (Sigma-Aldrich) e PBS (la concentrazione finale di DMSO è 0,01 percento), pH 7,4.

2.3. Induzione e trattamento del modello murino PD indotto da metil-4-fenil-1,2,3,{6}}tetraidropiridina (MPTP)

Per valutare gli effetti di Ka nel modello PD di tossicità da MPTP/p, i topi (maschi, di età 4-5 mesi) sono stati divisi casualmente nel gruppo trattato con soluzione fisiologica, gruppo trattato con MPTP, gruppo trattato con MPTP più Ka gruppo e il gruppo trattato da solo Ka. Nel gruppo trattato con MPTP, i topi hanno ricevuto la somministrazione cronica di MPTP con un protocollo simile a quello descritto in precedenza [26]: MPTP è stato sciolto in soluzione fisiologica e iniettato per via sottocutanea a 25 mg/kg seguito da 250 mg/kg di probenecid (sciolto in dimetilsolfossido) iniezione intraperitoneale (ip) a intervalli di 1 ora ogni 3,5 giorni per un periodo di 5 settimane. I topi di controllo hanno ricevuto un'iniezione di soluzione salina e probenecid. Nel gruppo trattato con MPTP più Ka, i topi hanno ricevuto Ka (50 mg/kg, una singola iniezione/giorno durante gli esperimenti, Jingzhu Biotechnology, Nanchino, Cina) per via intraperitoneale (p) ogni giorno 3 giorni prima del trattamento con MPTP e oltre i 5 Settimane di iniezione MPTP. Una settimana dopo l'ultima iniezione di MPTP, i topi sono stati sottoposti a test comportamentali in cieco rispetto ai gruppi. Dopo, tutti i topi sono stati anestetizzati con 40 mg/kg di pentobarbital di sodio e sacrificati per il rilevamento delle proteine ​​cerebrali e l'analisi immunoistochimica o qPCR.

2.4. Chirurgia stereotassica in vivo e trattamenti sperimentali

La chirurgia stereotassica in anestesia con pentobarbital di sodio (40 mg/kg, ip) è stata eseguita come descritto [25]. Il mouse Atg5 e lo shRNA di controllo sono stati trasfettati con vettori di confezionamento (AAV-U6-CMV-shR-NA-EGFP) per generare AAV. Per la microiniezione, i topi anestetizzati vengono posti in un apparato stereotassico. Sono stati iniettati con 1μLAAV mediante elettrodo di vetro puntando a DG(AP:-0.3 mm; ML:±0.13 mm; DV:-0.45 mm） a una velocità di 0,25 μL/min. Quindi l'ago è stato trattenuto per ulteriori 2-min.2 settimane dopo la microiniezione del virus, i topi sono stati sottoposti a conduzione del modello PD indotta da MPTP e (o) trattamento con Ka.

Atg5 shRNA è stato ottenuto da Hanbio Biotechnology (Shanghai, Cina) Co., Ltd. Per il silenzio Atg5, i primer sono stati mostrati nella Tabella supplementare 1.

2.5. Analisi comportamentale

Una settimana dopo l'iniezione finale di MPTP o soluzione salina, sono stati eseguiti il ​​test rotarod e il test del palo come descritto in precedenza [27]. Per il test del rotarod, i topi sono stati acclimatati al rotarod in due prove (6 min con una velocità accelerata di 12-20 rpm) al giorno per 2 giorni consecutivi prima dell'inizio dell'esperimento. Quindi, i topi sono stati testati a 20 rpm per 300 s per altri 3 giorni consecutivi. La latenza alla caduta è stata registrata utilizzando il sistema di analisi Rotarod (Jiliang, Shanghai, Cina). Per il test del palo, i topi sono stati posti a testa alta sulla sommità di un palo verticale di legno (superficie ruvida, altezza 50 cm, diametro 1 cm). Tutti i topi sono stati abituati all'apparato 2 giorni prima del test e quindi testati per tre volte nel terzo giorno. Sono stati registrati il ​​tempo totale (T-totale, fino a quando il mouse non ha raggiunto il pavimento con le sue quattro zampe) e il tempo di rotazione (T-turn, affinché il mouse si giri completamente a testa in giù). L'esperimento è stato accecato ai gruppi di topi per ogni test comportamentale e il test è stato eseguito tre volte.

2.6. Raccolta di campioni di cervello

Dopo i test comportamentali finali, i topi sono stati anestetizzati con sodio pentobarbital (40 mg/kg, ip). Per l'analisi qPCR, western blotting e cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), l'intero cervello è stato rapidamente estratto dagli animali, quindi il mesencefalo e i tessuti dello striato sono stati rapidamente sezionati, pre-congelati con azoto liquido. Tutti i campioni sono stati conservati a -80 gradi fino all'analisi.

Per l'analisi immunoistochimica, i topi sono stati perfusi a livello transcardiaco con paraformaldeide (PFA) al 4%. I cervelli sono stati estratti, post-fissati, disidratati, incorporati in OCT (Tissue-Tek) e sezioni seriali del cervello sono state criosezionate (30 um per fetta) attraverso ogni intero strato e mesencefalo utilizzando un microtomo congelante (Leica CM1950, Nussloch, Germania ). Tutte le sezioni sono state raccolte in sei serie separate e le fette di cervello sono state conservate nel 50% di glicerina e congelate a-20 gradi fino all'analisi.

Per TEM, i topi sono stati perfusi con 2,5% di glutaraldeide e 2% di paraformaldeide come descritto 【12】. Una piccola porzione （<1 mm³）="" of="" the="" mesencephalon="" was="" carefully="" sectioned="" and="" incubated="" in="" the="" same="" fixative="" for="" 2="" h="" at="" 4°c.="" specimens="" were="" postfixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide,="" stained="" in="" aqueous="" uranyl="" acetate,="" and="" then="" dehydrated="" and="" embedded="" in="" epoxy="" resin.="" ultrathin="" sections="" were="" stained="" using="" lead="" citrate="" and="" examined="" with="" a="" transmission="" electron="" microscope(jem-1010,="" tokyo,="">

2.6. Analisi immunoistochimica

Le fette di cervello sono state risciacquate in PBS seguite da H2O2 al 3% per 10 min, quindi incubate con 0,3% Triton X-100 in PBS integrato con BSA al 5% per 1 ora. Successivamente, i vetrini sono stati incubati con gli anticorpi primari a 4 gradi durante la notte in PBS contenente il 5% di BSA a 4 gradi durante la notte, quindi lavati e incubati in anticorpi secondari per 1 ora a temperatura ambiente, seguiti da incubazione con diaminobenzidina (DAB) o montaggio in DAPI (Life Technologies, Cat P36931) come colorazione immunofluorescente per 5 min. Per la colorazione Nissl, i vetrini sono stati fusi in una soluzione di cresil violetto (CV) (0,1 g di cresil violetto, 99 ml di H2O e 1% di acido acetico 1 ml) per 30 minuti a temperatura ambiente, quindi disidratati con alcol e xilene. Le immagini sono state osservate e le fotografie sono state catturate al microscopio Olympus BX52 (Olympus America Inc., Melville, NY, Stati Uniti). Il numero totale di neuroni TH-positivi e Nissl-positivi nell'SNpc è stato ottenuto sierologicamente utilizzando il metodo del frazionatore ottico con il software MicroBrightField Stereo-Investigator (MicroBrightField, Williston, VT, USA).

2.7. Analisi di cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC).

Campioni striatali di topi sono stati omogeneizzati con {{0}}.1 M di acido perclorico (1 mg di tessuti in 100 μL di acido perclorico) e 0,1 mM di EDTA, trattati con

2.17. Citometria a flusso

Le cellule sono state digerite e risciacquate con D-hank, quindi colorate con Annexin V-FITC （5 ul diluito in 50 0ul PBS）/PI（0,1 ul diluito in 500 ul PBS) kit per apoptosi (CA1020, Solarbio, Pechino, Chian) secondo il protocollo del produttore. Successivamente, le cellule apoptotiche sono state analizzate mediante citometria a flusso (guava easyCyteTM 8, Millipore, USA). Le misurazioni del ROS mitocondriale e del potenziale di membrana mitocondriale sono state eseguite come pubblicato 【12】. Le cellule SH-SY5Y sono state colorate con MitoSOX （2,5 μM, Invitrogen, USA） o con JCl（10 ug/ml, T-3168, Invitrogen, USA ） a 37 ·C per 30 min. Dopo il lavaggio con PBS due volte, le cellule sono state quindi risospese in PBS freddo contenente l'1% di FBS per l'analisi citofluorimetrica. I dati sono stati analizzati con il software FCS Express (Guava Easy CyteTM8, Millipore, Hayward, CA, USA).

2.18. Test di respirazione del cavalluccio marino

La funzione respiratoria mitocondriale nelle cellule SH-SY5Y vive è stata misurata utilizzando l'analizzatore del flusso extracellulare Seahorse (XFe96) (Agi-lent, Santa Clara, USA) attraverso i cambiamenti nel tasso di consumo di ossigeno (OCR). Le cellule SH-SY5Y seminate a 3 × 103 cellule/pozzetto sono state lasciate aderire alle piastre di coltura cellulare di cavalluccio marino e raggiungere circa l'80 percento di confluenza al momento dell'esperimento. Il giorno seguente, le cellule sono state pretrattate con Ka e quindi esposte a MPP plus per altre 24 ore. L'OCR è stato rilevato in condizioni basali seguite dall'aggiunta sequenziale di 1 μM di oligomicina, 1 μM di FCCP, nonché 1 μM di rotenone e antimicina A.

2.19. analisi statistica

I dati sono stati presentati come media ± SEM. Il significato della differenza è stato determinato dal test t di Student, dall'analisi della varianza a due vie o dall'analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) seguito dal test post hoc di Tukey. La differenza è stata considerata significativa in P<>

3. Risultati

Risultato 1. Ka ripristina la disfunzione motoria e aumenta i livelli di dopamina nello striato dei topi modello MPTP/p PD

Per studiare l'effetto neuroprotettivo della patogenesi di Kaon PD, 4- topi maschi C57BL/6 di un mese sono stati iniettati con la neurotossina MPTP per stabilire il modello MPTP/p PD e sono stati trattati con Ka (Fig. la). Dopo l'induzione del modello, il test rotarod e il test del polo sono stati utilizzati per valutare le prestazioni motorie e comportamentali dei topi nei diversi gruppi. Come mostrato, il tempo di prestazione del rotarod è stato notevolmente ridotto nei topi trattati con MPTP e questo effetto è stato prevenuto da Ka (Fig.1b). Ka ha anche ripristinato i deficit comportamentali indotti da MPTP, come indicato dalle riduzioni del tempo di svolta e del tempo totale nel test del polo (Fig.lc e d), senza influire sul peso corporeo dei topi (Fig.1e). Inoltre, l'analisi HPLC ha mostrato che il livello di dopamina nello striato era significativamente ridotto nei topi con MPTP/p-sfidati e questo livello è stato ripristinato dal trattamento con Ka (Fig. 1f). Il trattamento con Ka ha anche alleviato la riduzione indotta da MPTP/p dei livelli di acido diidrossi-fenilacetico (DOPAC, un metabolita della dopamina) nello striato (Fig.1g). Questi risultati suggeriscono che Ka ripristina la disfunzione motoria e aumenta i livelli di dopamina nello striato nei topi PD indotti da MPTP.

Risultato 2. Ka allevia la perdita di neuroni DA nel SNpc di topi modello MPTP/p PD

Successivamente, per valutare ulteriormente l'effetto neuroprotettivo del danno neuronale DA indotto da Kaon MPTP/p, abbiamo esaminato la tirosina idrossilasi (THD più neuroni nell'SNpc murino mediante immunocolorazione. Come mostrato in Fig. 2a e b, MPTP/p ha indotto una riduzione significativa nel numero di neuroni TH più, che è stato alleviato dal trattamento con Ka. Inoltre, i conteggi stereologici dei neuroni totali nel SNpc, come definito da Nissl

Fig. 1. Il trattamento con Ka allevia la disfunzione motoria e aumenta i livelli di dopamina nello striato dei topi modello MPTP/p PD.

(a) Diagramma schematico del disegno sperimentale. (b) Il tempo sull'asta è stato misurato per il test del rotarod in tre giorni consecutivi. (cd) Il tempo impiegato per girare (tempo di svolta) e scendere un palo (tempo di salita) è stato registrato per la prova del palo. (e) Il peso corporeo del topo è stato misurato alla fine dello studio, (fg) la dopamina (DA) e l'acido diidrossi-fenil acetico (DOPAC) nello striato sono stati analizzati mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni. I dati sono espressi come media ± SEM.n =9-10 per ciascun gruppo in (b, C, d); n=6-8 per ogni gruppo in(f,g).ns, non significativo,*P<><><0.001, by="" one-way="" anova="" followed="" by="" tukey's="" post="" hoc="" test.="" mptp,="" 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine;="" ka,="">

colorazione, ha verificato che la perdita di cellule THt rifletteva la morte cellulare ma non la sottoregolazione dell'espressione di TH e ha mostrato che il trattamento con Ka ripristinava la diminuzione del numero di neuroni Nissl-positivi nell'SNpc dei topi trattati con MPTP dal 43,3% al 25,4% ( Fig.2c e d). Inoltre, Ka ha migliorato significativamente la riduzione indotta da MPTP nell'espressione della proteina TH e DAT, misurata mediante Western blotting (Fig.2e-g). Questa evidenza conferma l'effetto neuroprotettivo di Ka sul modello murino PD.

Risultato 3. Ka riduce l'accumulo di vacuoli LD e lo stress ossidativo nell'SNpc dei topi trattati con MPTP/p

Prove crescenti hanno mostrato il coinvolgimento delle LD nelle NDD [10], in modo coerente, il nostro lavoro precedente ha identificato un aumento delle LD nell'SNpc dei topi PD indotti da MPTP [12]. Le LD possono essere facilmente identificate e mostrano strutture rotonde a bassa densità con contenuti amorfi omogenei [28]. Normalmente, gli LD possono essere degradati tramite autofagia per evitare l'accumulo [29]. Per indagare se Ka potesse regolare gli LD nel PD, l'accumulo di LD è stato analizzato mediante microscopia elettronica a trasmissione (TEM) nei topi SNpc di controllo, MPTP/p e MPTP/p più Ka. Come mostrato nel nostro lavoro precedente [12], il numero e la dimensione delle LD sono aumentati nei topi MPTP/p rispetto ai controlli trattati con soluzione salina (Fig. 3a e b) e sono stati significativamente ridotti nei topi trattati con Ka (Fig. 3c- e). Inoltre, nei topi trattati con Ka, le LD sono state osservate più frequentemente vicino, racchiuse o degradate dagli autolisosomi, che sono stati definiti come granuli di lipofuscina ad alta densità di elettroni. Un'ulteriore colorazione istologica dei neuroni TH più con BODIPY, un colorante che etichetta specificamente i lipidi neutri ed è comunemente usato per rilevare LDs [30], ha mostrato che sia il numero che la dimensione di BODIPY più LDs nel SNpc erano più alti nei topi PD rispetto ai controlli , e sono stati significativamente ridotti dal trattamento con Ka (Fig. 3f-h).

Se le LD non possono essere degradate in modo tempestivo, le LD accumulate possono subire perossidazione e contribuire allo stress mitocondriale mediato dai ROS [4], che amplifica la neurotossicità e la progressione della malattia. Quindi, abbiamo ulteriormente esaminato i profili di espressione dei geni associati alla protezione contro la tossicità dell'AF libero (Gpx8), neutralizzando le specie ossidanti, i radicali superossido (Sod3) e il perossido di idrogeno (Cat) e il metabolismo degli FA (Acsbg1 e Dbi) come riportato [31] , che erano tutti sorprendentemente ridotti nell'SNpc dei topi trattati con MPTP rispetto ai controlli, e questi effetti sono stati migliorati nei topi PD trattati con Ka (Fig. 3i). Allo stesso modo, MPTP/p ha anche aumentato i livelli di espressione dell'mRNA

di subunità NADPH ossidasi come Nox1, Nox2 e Nox4 nel SNpc di topi MPTP/p, che sono stati ulteriormente smussati dal trattamento con Ka (Fig.3j). Presi insieme, questi dati suggeriscono che Ka allevia l'accumulo di LD indotto da MPTP/p, la perossidazione e lo stress mediato da ROS.

Questo articolo è estratto dagli elenchi dei contenuti disponibili nella homepage del giornale ScienceDirect Redox Biology: www.elsevier.com/locate/redox