Metodo per identificare i principi attivi chimici di Cistanche

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Identificazione dei componenti chimici di Cistanche Deserticola utilizzando il sistema QTOF X500R

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, Asia Pacific Application Support Center (Shanghai), Cina

introduzione

Cistanche deserticheè stato registrato per la prima volta nella "Shen Nong Materia Medica"; è anche conosciuto come "Dayun", "Rusong Rong" e "Zong rong". Come medicina tradizionale a base di erbe, ha le proprietà di nutrire lo yang del rene, migliorare il flusso sanguigno, agire come lassativo, stimolare il sistema immunitario e altri effetti[1]. Nel 1983, lo studioso giapponese H. Kobayashi e altri iniziarono a studiare la composizione chimica diCistanche Deserticola[2], e da allora è diventato un argomento popolare nella ricerca sulla medicina cinese che ha suscitato grande interesse sia a livello nazionale che all'estero negli ultimi 30 anni.Cistanche Deserticolaappartiene alla classe delle piante contenenti fenolicoglicosidi, iridoidi e loroglicosidi, e lignani e loroglicosidi.

La spettrometria di massa a tempo di volo quadrupolare (QTOF) è uno strumento sensibile e specifico per l'identificazione dei componenti della medicina cinese che sono diventati gradualmente indispensabili alla ricerca. Questa tecnologia ha superato le sfide tecniche tradizionali con analisi retrospettive di singole iniezioni che consentono l'estrazione di dati importanti e l'acquisizione più completa delle informazioni sui campioni. L'utilizzo di massa esatta e dati TOF-MS e TOF-MS/MS ad alta risoluzione consente un'analisi qualitativa mirata e non mirata simultanea e altamente specifica. Tuttavia, la complessità del funzionamento dello strumento e dell'uso del software ha notevolmente limitato la diffusione e lo sviluppo di questa tecnologia. Qui presentiamo un nuovo sistema QTOF che utilizza un nuovo rivoluzionario percorso TOF basato sulla geometria di tipo N, un software intuitivo e tecniche di peso molecolare accurate che sono più facili da usare nell'identificazione dei componenti della medicina cinese.

I vantaggi di questo metodo sono i seguenti:

1. L'X500R utilizza la sorgente ionica Turbo VTM approvata dal settore e il design dell'interfaccia del gas della cortina d'aria, che ha una forte caratteristica anti-contaminazione;

2. SCIEX OS Software ha integrato le funzioni di acquisizione, elaborazione e reporting su un'unica piattaforma; l'interfaccia è intuitiva, facile da padroneggiare e dispone di una correzione automatica one-touch per garantire che gli analisti con qualsiasi grado di esperienza possano ottenere dati affidabili e di alta qualità;

3. L'utilizzo del software SCIEX OS per elaborare i dati per identificare i componenti della medicina cinese è semplice e consente una rapida estrazione di informazioni utili, quindi;

4. Deriva risultati di identificazione più accurati e affidabili dalle librerie di medicina cinese contenenti spettri MS/MS;

5. I database di medicina cinese MS/MS ad alta risoluzione si basano sui principi attivi MTC Parte 1 della "Farmacopea cinese"; compresi i riferimenti ai componenti nella farmacopea e ai principi attivi nelle erbe, ci sono quasi 900 composti

cistanche deserticola migliorando l'efficacia

Processo sperimentale

1. Utilizzando la modalità TOF-MS-IDA MS/MS, iniettare un campione e ottenere contemporaneamente ioni precursori primari e spettri secondari corrispondenti;

2. L'uso dello screening mirato del software SCIEX OS, della conferma dei composti target e degli spettri secondari insieme allo screening degli standard della medicina cinese e dei metodi di abbinamento può aumentare l'accuratezza e la produttività del lavoro.

3. Il flusso di lavoro di identificazione non mirato di SCIEX OS Software utilizza ricerche nelle librerie e ricerche sconosciute complete in ChemSpider per verificare i risultati, assicurando che più componenti vengano identificati con un flusso di lavoro più semplice.

Campioni e metodo di preelaborazione

Fonte di esempio:

Acquistato dalle farmacie di Shanghai a fette

Metodo di preelaborazione:

1. Le fette sono state schiacciate per formare polvere;

2. 0.9 mg sono stati pesati e immersi in 3 ml di metanolo per 40 minuti;

3. Il campione del passaggio 2) è stato sottoposto a ultrasuoni per 1 ora;

4. È stata eseguita la centrifugazione e la rimozione del surnatante da utilizzare come campione.

Condizioni di cromatografia liquida (LC).

Colonna cromatografica: XSel HSS T3, 2,1*150 mm, 3,5 µm;

Fase mobile: è stata utilizzata l'eluizione a gradiente

Fase mobile: A è 0,1 percento di acqua di acido formico-2mM NH4FA

B è il 95 percento di acetonitrile-5 percento di acqua-2 mM NH4FA

Portata: 0,5 ml/min

Temperatura della colonna: 40ºC

Quantità inserita: 5µL

Metodo di spettrometria di massa:

Metodo di scansione: screening qualitativo TOF MS-IDA-15 MS/MS

Parametri della sorgente di ionizzazione ESI:

Cortina d'aria CUR gas: 35psi; Tensione IS: 5500 V/-4500V

Temperatura sorgente: 600ºC

Gas di nebulizzazione GAS1: 55psi; Gas ausiliario GAS2: 60 psi

Ricerca modalità strumentazione:

Le modalità di correzione TOF-MS e TOF-MS/MS con un solo tocco (selezionare MS Check in basso a destra) garantiscono che gli analisti di qualsiasi livello di competenza possano ottenere dati accurati, affidabili e riproducibili.

BPC in modalità ionica positiva e negativa:

Procedura di identificazione del composto

1. Flusso di lavoro mirato per l'identificazione dei componenti

1.1: Ricerca di formule molecolari

Sono richiesti solo il nome del composto chimico e la formula molecolare; questi possono essere inseriti direttamente o importati utilizzando la funzione di copia e incolla di Excel per creare un metodo di elaborazione

Una volta creata una tabella dei risultati, i risultati quantitativi e qualitativi possono essere visualizzati nella stessa finestra. Un sistema di indicatori rosso/verde viene utilizzato per indicare l'accuratezza della massa, il tempo di ritenzione, il tipo di isotopo e la sicurezza nell'identificazione mediante la corrispondenza del database.

Il software SCIEX OS consente agli utenti di filtrare i risultati e visualizzare solo i composti che soddisfano i criteri di accettazione e rientrano negli intervalli di confidenza definiti dall'utente. Può trovare rapidamente risultati mirati in database di grandi dimensioni.

Il database TCM degli spettri MS/MS consente la corrispondenza secondaria e fornisce risultati più affidabili (il colore grigio nel database indica i dati MS/MS)

La letteratura contiene nomi e formule molecolari di fenolicoglicosideingredienti attivi. Utilizzando il processo di cui sopra per l'identificazione dei componenti target, è stato determinato che il campione contiene 39 tipi di glicosidi fenolici:

Oltre al fenolicoglicosidecomponenti attivi, Cistanche contiene anche un gran numero di composti come iridoidi, glicosidi e lignani. I risultati dell'identificazione sono i seguenti:

L'elenco di identificazione di iridoidi, glicosidi e lignani:

1.2: Ricerca nel database:

53 composti sono stati ottenuti dall'identificazione corrispondente nel database TCM: 43 ioni positivi, 22 ioni negativi e 12 ripetizioni, elencati di seguito. Oltre al fenolico attivoglicosidi, iridoidi, glicosidi e lignani, contiene anche Cistanche

2. Analisi dei componenti non mirati

L'identificazione dei componenti non mirati può essere eseguita con la funzione di ricerca integrata di ChemSpider per determinare la classificazione e il tipo di incognite. Per l'identificazione dei componenti non mirati, è sufficiente scegliere la modalità "non mirata" e la ricerca della formula molecolare svilupperà un metodo di elaborazione. Il flusso di lavoro è il seguente:

Per le incognite complete, i risultati della ricerca della formula molecolare vengono mostrati in una finestra del browser di picco nella parte inferiore dello spettro di massa TOF MS; con la ricerca nel database di ChemSpider, i risultati sono elencati per priorità e le informazioni strutturali ottenute in ChemSpider vengono confrontate automaticamente con lo spettro MS/MS ottenuto, fornendo un feedback secondario per una rapida identificazione.

Riepilogo

1. Acquisizione rapida dei dati ad alta risoluzione; una singola iniezione ha prodotto dati TOF MS e MS/MS ad alta risoluzione, con 39 componenti attivi del glicoside fenolico identificabili e 16 iridoidi, lignani e glicosidi;

2. Un database TCM di spettri secondari fornisce informazioni aggiuntive sulla corrispondenza e il software fornisce automaticamente un punteggio di corrispondenza del database. Utilizzando il punteggio, è possibile identificare facilmente, rapidamente e accuratamente i componenti della medicina cinese;

3. Il dispositivo è semplice e dispone di una correzione automatica one-touch per garantire che analisti con qualsiasi grado di esperienza possano ottenere dati affidabili e di alta qualità;

4. La nuova versione del software SCIEX OS integra l'acquisizione, l'elaborazione (quantitativa e qualitativa), la visualizzazione, il reporting e la gestione del database dei dati. Risolve le difficoltà che molti utenti devono affrontare con un'interfaccia intuitiva e facile da usare;

5. Sia i flussi di lavoro di screening mirati che quelli non mirati sono semplici e la guida ai metodi integrata aiuta gli utenti a creare metodi in modo accurato e rapido.

Riferimenti

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, farmacopea della RPC [S]. Pechino: Commissione nazionale di farmacopea, 2015

2. Lei, Song Zhihong, Tu Pengfei; Progressi della ricerca nella composizione chimica delle piante del genere Cistanche, "Chinese Herbal Medicine", volume 34, n. 5, maggio 2003,473-476.