Meccanismi Molecolari Della Gedunina Anti-Melanogenica Derivata Dall'Albero Di Neem

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Hwang-Ju Jeon 1, Kyeongnam Kim 1, Chaeeun Kim 2, Myoung-Jin Kim 1, Tae-Oh Kim 3,4,5,† eSung-Eun Lee 1,2,*,†

Astratto:La melanogenesi rappresenta una serie di processi che producono melanina, un pigmento cutaneo protettivo (contro i raggi ultravioletti), e determina il colore della pelle umana. I prodotti chimici che riducono la produzione di melanina sono sempre stati richiesti nel mercato cosmetico a causa degli interessi della cura della pelle, come lo sbiancamento. Il principale meccanismo per inibire la produzione di melanina è l'inibizione della tirosinasi (TYR), un enzima chiave per la melanogenesi. Qui, abbiamo valutato genuino (Ged), un limonoide rappresentativo, per la sua azione anti-melanogenesi. La produzione di melanina in vitro è stata stimolata dall'ormone stimolante gli alfa-melanociti (-MSH) nelle cellule di melanoma di topo B16F10. Ged ha ridotto la produzione di melanina stimolata dall'MSH, inibendo l'attività del TYR e la quantità di proteine. Abbiamo confermato questo risultato in un modello di pesce zebra in vivo per la melanogenesi. Non vi era alcun segno di tossicità e malformazione degli embrioni di pesce zebra durante lo sviluppo in tutte le concentrazioni trattate. Ged ha ridotto il numero di punti di pigmento dell'embrione di pesce zebra prodotto e il contenuto di melanina degli embrioni. La concentrazione altamente attiva di Ged (100 µM) era molto inferiore al controllo positivo, l'acido cogico (8 mM). Quindi, Ged potrebbe essere un candidato affascinante per i reagenti anti-melanogenesi.

Parole chiave: MITF; fattore di trascrizione associato alla microftalmia; TYR; tirosinasi; DQ; dopachinone;TRP-1; proteina 1 correlata alla tirosinasi; TRP-2; proteina 2 correlata alla tirosinasi; MC1R; recettore della melanocortina 1; -MSH; -ormone stimolante i melanociti; ACT; ormone adrenocorticotropo; ASP; proteina di segnalazione agoutinale; campo; adenosina monofosfato ciclico; CREB; Elemento di risposta cAMP

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1. Introduzione

La melanina è sintetizzata nel melanosoma, organelli simili a lisosomi del melanocita. Nel melanosoma, la melanina è prodotta in due pigmenti, eumelanina e feomelanina, che rappresentano rispettivamente il marrone-nero e il rosso-giallo [1]. La sintesi di questi pigmenti melanici parte dal precursore, L-tirosina, con reazione di ossidazione della L-tirosina in un composto chiamato dopachinone (DQ), e L-DOPA [2]. In questa fase di ossidazione, la tirosinasi (TYR) agisce come un enzima limitante la velocità complessiva del percorso di biosintesi della melanina [2,3]. TRP-1e TRP-2, strettamente correlati alle proteine ​​della melanogenesi, catalizzano la via di biosintesi dell'eumelanina e stabilizzano e inducono l'attività TYR [1]. Il processo di produzione dei pigmenti melanici (chiamato melanogenesi) avviene nel melanosoma dei melanociti, un sito di sintesi e immagazzinamento della formelanina [4]. Nella via di segnalazione della melanogenesi, il recettore della melanocortina1 (MC1R) è un membro dei recettori accoppiati alla proteina G. MCIR è un punto di partenza per la segnalazione della melanogenesi ed è attivato da agonisti MC1R come un ormone stimolante i melanociti (-MSH), l'ormone adrenocorticotropo (ACTH) e la proteina di segnalazione agouti (ASP) [1,2]. L'attivazione della via di segnalazione -MSH-MC1R aumenta la concentrazione di adenosinamonofosfato ciclico (cAMP) e fosforila l'elemento di risposta cAMP (CREB). Il CREB fosforilato induce il livello proteico del fattore di trascrizione associato alla microftalmia (MITF), un fattore di trascrizione che regola i geni correlati alla sintesi della melanina, il TYR, la proteina correlata alla tirosinasi-1 (TRP-1) e la proteina correlata alla tirosinasi -2 (TRP-2) legando la M-box di questi geni [1,5,6]. Tra i cinque recettori della melanocortina, MC1R ha i melanociti più abbondanti. Regola principalmente la produzione di eumelanina (pigmento nero-marrone) attivando MC1R quando gli agonisti di questo recettore, come a-MSH e ACTH, passano a questo recettore [2,4,7].

Sebbene ci siano differenze tra mammiferi e pesci, il pesce zebra ha un'extracopia di MC5R e MC3R, che il pesce palla non possiede [7], e questa via di segnalazione esiste ancora nel pesce zebra e funziona esattamente come nei melanociti dei mammiferi [7]. Inoltre, il numero di studi sull'inibizione della formazione del pigmento di melanina è aumentato a causa dei suoi vantaggi di ricerca, come il rapido sviluppo negli embrioni in fase iniziale e la facilità di osservazione [8-11]. In questi fenomeni, molti studi precedenti hanno scoperto che l'inibizione di questa via di segnalazione riduce la produzione di melanina e hanno trovato diversi inibitori, tra cui bisabololo-Angelone, 4-idrossi{9}}metossi cinnamaldeide e difenil-metilen-idrazina carbo tiamina [12 –14].

La gedunina (Ged), un noto inibitore della proteina 90 da shock termico, è un limonoide, che si trova nei generi della pianta delle Meliaceae. Questo limonoide è abbondante principalmente nell'epicarpo dei giovani frutti dell'albero di neem indiano (Azadirachta indica) e ha diverse attività biologiche, tra cui antitumorale, antimalarico, antinfiammatorio, antidiabetico, antiallergico, insetticida, erbicida e antimicotico [15-18]. Non vi è alcuna relazione sul meccanismo dell'effetto anti-melanogenico di Ged.

Come farmaco medicinale o agente cosmetico candidato per il trattamento di malattie legate alla melanina o cambiamenti di colore della pelle, Ged potrebbe avere vantaggi a causa delle sue proprietà vegetali sicure e naturali [19]. L'effetto anti-melanogenico di Ged è stato valutato in vitro e in vivo utilizzando cellule di melanoma di topo B16F10 ed embrioni di pesce zebra, rispettivamente, per trovare un candidato appropriato per il merlano, una delle parti più grandi del mercato cosmetico commerciale. Contemporaneamente, attraverso il pesce zebra, una tossicità acuta è stato anche eseguito un test per mostrare come Ged possa influenzare gli animali.

2. Materiale e metodi

2.1. Sostanze chimiche e reagenti

Ged è stato acquistato da Microsource Discovery Systems, Inc. (Gayloardville, CT, USA). Stimolatore della melanogenesi, -MSH, composto anti-melanogenico e acido kojico sono stati acquistati da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Tutti gli altri reagenti erano di grado superiore al grado di biologia molecolare.

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2.2. Coltura cellulare

La linea cellulare di melanoma-carcinoma di topo, B16F10, è stata ottenuta dall'American TypeCulture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) e coltivata con il 10% di siero bovino fetale (v/v) e la penicillina ha fornito il terreno Eagle's Dulbecco-modificato (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) in atmosfera umidificata con il 5% di CO2. Le cellule sono state coltivate fino a raggiungere la confluenza dell'80% e divise tre volte a settimana con un rapporto di divisione di 1:8. Le cellule sono state osservate ogni 12 ore e sono stati controllati i cambiamenti morfologici. Il numero di passaggi delle celle usate è stato mantenuto piccolo.

2.3. Test di vitalità cellulare

Per valutare l'effetto proliferativo di Ged sulla linea cellulare di melanoma di topo B16F10, il test MTS è stato eseguito secondo il protocollo precedentemente riportato [20] utilizzando il kit CellTiter96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay (Promega, Madison, WI, USA). In breve, 1 × 103 cellule sono state seminate in ciascun pozzetto della 96-piastra a pozzetti e incubate per 24 ore per il recupero. Dopo l'incubazione, Ged è stato trattato con varie concentrazioni: 0, 3,12, 6,25,12.5 25, 50 e 75 µM. Dopo 48 ore, sono stati aggiunti 20 µL di soluzione di test MTS a ciascun pozzetto contenente 100-µL di media con Ged e senza Ged. Dopo un'ulteriore incubazione per 4 ore, l'assorbanza è stata misurata a 490 nm utilizzando uno spettrofotometro Multiskan GO (ThermoScientific, Waltham, MA, USA). I dati di assorbanza sono stati normalizzati con il controllo e rappresentati come rapporto di inibizione percentuale.

2.4. Determinazione del contenuto di melanina

Il contenuto di melanina extracellulare e intracellulare è stato determinato seguendo un metodo modificato precedentemente riportato [21]. -Le cellule di melanoma pretrattate con MSH (200 nM) sono state incubate per 72 ore con e senza acido cogico (200 µM) e Ged (25 e 50 µM). Dopo l'incubazione, sono stati raccolti terreni di coltura privi di rosso fenolo e le cellule coltivate sono state raccolte con tampone di lisi RIPA. Le cellule raccolte sono state centrifugate a 4 ◦C, 13,{10}} rpm per 15 minuti e i pellet sono stati sciolti in NaOH 1 M, soluzione di DMSO al 10% a 95 ◦C per 2 ore. L'assorbanza dei mezzi raccolti e della melanina disciolta è stata misurata a 470 nm utilizzando uno spettrofotometro. Tutti i campioni sono stati normalizzati con la concentrazione proteica determinata secondo il metodo BCA.

2.5. Saggio di attività della tirosinasi intracellulare

L'attività della tirosinasi cellulare è stata determinata misurando il tasso di ossidazione della L-diidrossifenilalanina (L-DOPA) come riportato in precedenza, con lievi modifiche [22]. Le cellule di melanoma di topo B16F10 sono state pretrattate con 200 nM di -MSH per 1 ora seguito da un trattamento con 200 µM acido cogico, con e senza Ged (25 e 50 µM), e incubato per 72 h. Dopo l'incubazione, le cellule sono state raccolte con tampone di lisi contenente un inibitore della proteinasi e il campione è stato centrifugato a 13,000 × g, 4 ◦C per 15 min. Il supernatante è stato trasferito in una nuova provetta. Ciascun campione (20 µL) e 80 µL di 40 mM L-DOPA sono stati miscelati in una 96-piastra a pozzetti e incubati a 37 ◦C per 2 ore. L'assorbanza a 475 nm mediante L-DOPA ossidata è stata determinata utilizzando un lettore di micropiastre. Il valore di assorbanza è stato normalizzato con la concentrazione proteica di ciascun campione.

Beneficio dell'estratto di Cistanche: inibisce l'espressione della tirosinasi.

2.6. Isolamento dell'RNA e qRT-PCR

L'isolamento totale dell'RNA e la qRT-PCR sono stati eseguiti secondo un metodo precedentemente descritto da [18]. L'RNA totale è stato brevemente estratto da ciascun campione utilizzando il reagente Trizol (Ambion, Austin, TX, USA). La concentrazione di RNA totale estratto è stata determinata mediante assorbanza a 260 nm e la qualità dell'RNA totale è stata verificata con un rapporto di assorbanza di 260:280 e 260:230 nm utilizzando un lettore di micropiastre Multiskan GO (Thermo Scientific). L'RNA totale (5 µg) è stato sintetizzato in cDNA con il kit di sintesi del cDNA del primo filamento Maxima (Thermo Scientific) e il cDNA sintetizzato. I livelli di espressione dell'mRNA di Mitf, Tyr, Trp-1 e Trp{10}} sono stati determinati utilizzando Luna Universal qPCR Master Mix (New England Biolabs, Ipswich, MA, USA) e lo strumento QuantStudio 3 Real-Time PCR ( Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) secondo il protocollo dell'istruttore. Il livello di espressione dei geni è stato normalizzato con la gliceraldeide 3-fosfato deidrogenasi (GAPDH).

2.7. Analisi immunoblot

L'analisi dell'immunoblot è stata eseguita secondo i metodi precedentemente descritti [23]. Le proteine ​​delle cellule B16f10 sono state raccolte utilizzando il tampone di lisi Ceti (Translab, Daejeon, Corea) e la concentrazione è stata determinata con un kit di analisi delle proteine ​​Pierce BCA (Thermo Scientific). Una quantità uguale di proteine ​​(30 µg) di ciascun campione è stata caricata su un gel di sodiododecil solfato-poliacrilammide e sottoposta a elettroforesi. Dopo la separazione, le proteine ​​sono state trasferite su una membrana di nitrocellulosa e la membrana è stata bloccata in una soluzione di latte scremato al 10% per 2 ore. Le membrane bloccate sono state incubate con l'anticorpo primario durante la notte a 4 ◦C, seguita da un'altra incubazione con l'anticorpo secondario a 26 ◦C per 2 ore. Gli anticorpi primari e secondari sono stati diluiti rispettivamente in un rapporto di 1:1000 e 1:3000. Infine, le membrane blotted sono state documentate utilizzando ChemiDoc (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) con il reagente ECL (SuperSignal, Thermo Scientific). Gli anticorpi primari e secondari sono stati acquistati da Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, USA).

2.8. Test dell'embrione di pesce zebra

Wild-type zebrafish were thankfully obtained from Professor Tae-Lin Huh, the School of Life Science and Biotechnology, Kyungpook National University, Daegu, Republic of Korea. The strain was kept for more than eight generations in a laboratory condition of 26 ◦C ± 1 ◦C, and a day-to-night ratio of 8:16. General fish care and breeding conditions, as previously described, were followed [24]. Ten groups of zebrafish were mated to obtain embryos with a mating ratio (male: female, 1:2), and among obtained embryos, healthy embryos had >80 per cento di tasso di fecondazione e sono stati selezionati e utilizzati per l'esperimento. Dodici embrioni sani in ciascun gruppo trattato si trovavano in ciascun pozzetto di un 96-pozzetto con e senza Ged (25, 50, 75 e 100 µM) e acido cogico (8 mM) in un mezzo E3 allo stadio di protezione. 24 h dopo la fecondazione (h/pf), gli embrioni sono stati dechorionati e l'anomalia è stata controllata ogni 24 h fino a 72 h/pf. Il fenotipo degli embrioni è stato fotografato in una visione laterale e dorsale per confrontare le differenze tra i gruppi utilizzando un microscopio verticale BX53 con DP80CCD (Olympus Life Science Solutions, Waltham, MA, USA). Dopo l'immagine, gli embrioni sono stati omogeneizzati con tampone di lisi Ceti (TransLab) ed è stata eseguita la determinazione della concentrazione di melanina, che era uguale alla determinazione del contenuto di melanina delle cellule B16F10.

2.9. Analisi statistica

Tutte le analisi statistiche presentate in questo studio sono state eseguite utilizzando GraphPad Prismv.8.0 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). L'ANOVA unidirezionale con il test di Tukey è stato utilizzato per confronti multipli. Tutti i dati sono rappresentati come la media ± le deviazioni standard. Differenze significative sono state considerate statisticamente significative a p <>

3. Risultati

3.1. Effetto citotossico della piperlongumina nelle cellule B16F10

Prima di studiare l'effetto anti-melanogenico di Ged, abbiamo eseguito un test di vitalità nella linea cellulare B16F10 per impostare l'intervallo di dose in questo studio. Nell'intervallo di concentrazione da 3,12 a 50 µM, le cellule non hanno mostrato alcun effetto inibitorio sulla crescita e la loro proliferazione relativa era dal 91,0% al 118,7% (Figura 1). Al contrario, sebbene non vi fosse alcun significato statistico, i gruppi trattati con 75 µM avevano la loro crescita leggermente inibita (89,3 percento; Figura 1). Pertanto, la concentrazione più alta è stata impostata su 50 µM nei restanti esperimenti sulla linea cellulare.

Figura 1. Citotossicità della gedunin (Ged) nelle cellule B16F10

3.2. La gedunina inibisce la produzione di melanina e l'attività intracellulare della tirosinasi nelle cellule di melanoma del topo B16F10

Abbiamo valutato l'effetto anti-melanogenico di Ged nelle cellule di melanoma di topo B16F10. L'agonista dell'MC1R, -MSH, ha indotto efficacemente la produzione di melanina intracellulare ed extracellulare (Figura 2a-c). Il colore dei media raccolti era scuro con -MSH (Figura 2a). Il colore è sbiadito con l'aggiunta di Ged e l'effetto era dose-dipendente (Figura 2a). Nei risultati del contenuto totale di melanina, -MSH ha aumentato la produzione di melanina nei melanociti di circa sette volte superiore rispetto al gruppo di controllo e ha stimolato la diminuzione della melanina aggiungendo acido cogico, un noto controllo positivo nella melanogenesi (Figura 2d). Ged ha anche ridotto la produzione di melanina che induce stimoli nei melanociti a tutte le concentrazioni testate in questo studio (Figura 2d). Inoltre, nel test di attività della tirosinasi, Ged ha mostrato un forte effetto inibitorio sull'enzima limitante la tirosinasi, nella melanogenesi (Figura 2e). L'attività relativa della tirosinasi in un gruppo trattato con 50 µM di Ged è diminuita rispettivamente del 20% e del 12,24% rispetto al gruppo di controllo e al gruppo stimolato con a-MSH.

Figura 2. Effetto anti-melanogenico di genuino (Ged) sulla produzione di melanina stimolata dall'ormone alfa-melanocita-stimolante (-MSH) nelle cellule B16F10.

3.3. La gedunina riduce l'espressione genica correlata alla melanogenesi indotta da MSH

-MSH (200nM) indotto livello di mRNA di Mitf; un fattore di trascrizione della melanogenesi e i geni bersaglio Tyr, Trp-1 e Trp-2 (Figura 3). Il trattamento di Ged ha ridotto il livello di mRNA di tutti i geni in modo dose-dipendente alla concentrazione di 25 e 50 µM (Figura 3). Rispetto al controllo positivo, l'acido cogico (200 µM), Ged è stato più efficace nel ridurre l'mRNA livello di geni correlati alla melanogenesi nelle cellule B16F10. Inoltre, il livello di Mitfand Tyr è diminuito di 0.10- e 0.26- volte inferiore rispetto alle cellule indotte da -MSH, rispettivamente, a una concentrazione di 50 µM (Figura 3a, b). I livelli di mRNA down-regolati di questi geni hanno rallentato il livello di Tyr e ridotto la quantità di produzione di melanina TYR in meno rispetto al gruppo di controllo.

Figura 3. Effetto della riduzione sui geni correlati alla melanogenesi.

3.4. Gedunin TYR ridotto e importo TYR-1

TYR svolge un ruolo cruciale nella melanogenesi e il livello proteico di questo enzima influenza direttamente la melanogenesi. Abbiamo cercato di confermare l'alterazione della quantità di proteina, TYR, causata dalla riduzione del livello di mRNA attraverso l'analisi immunoblot. TYR è stato notevolmente ridotto rispetto al controllo e -MSH è stato trattato in modo dose-dipendente (Figura 4a). Inoltre, TRP-1, un fattore di trascrizione essenziale di TYR, è stato leggermente ridotto (Figura 4a). I risultati sono stati più evidenti quando la banda di ciascuna proteina è stata normalizzata dalla proteina di mantenimento, GAPDH (Figura 4b, c).

Figura 4. Western blotting di cellule B16F10 indotte dall'ormone stimolante gli alfa-melanociti (-MSH) con un trattamento genuino.

3.5. Tossicità di Gedunin contro Zebrafish in fase di sviluppo iniziale

È stata eseguita la valutazione tossicologica di Ged sullo sviluppo della fase iniziale del pesce zebra prima di valutare un test anti-melanogenico di Ged in vivo. L'anomalia morfologica degli embrioni di pesce zebra non è stata osservata in nessuna concentrazione trattata di Ged (Figura 5a). Concentrazioni testate di Ged, 25, 50, 75 e 100 µM, il tasso di sopravvivenza dei gruppi trattati con Ged non presentava differenze significative a 72 ore del periodo trattato con sostanze chimiche (Figura 5b).

Figura 5. Tossicità di genuino (Ged) sullo sviluppo della fase iniziale del pesce zebra.

3.6. Gedunina ha ridotto il contenuto di melanina negli embrioni di pesce zebra

Poiché Ged non ha tossicità per lo sviluppo negli embrioni di pesce zebra, abbiamo esaminato l'effetto anti-melanogenico a una serie di concentrazioni di Ged, 25, 50, 75 e 100 µM. Nell'osservazione teottica, abbiamo controllato i punti del pesce zebra pigmentato; la vista laterale dall'alto degli embrioni di pesce zebra è mostrata nella Figura 5a. L'acido kojico ha un effetto inibitorio sulla produzione di pigmenti degli embrioni di pesce zebra. Gli embrioni di pesce zebra trattati con Ged avevano anche meno pigmentdot sulla testa (Figura 6a). Inoltre, il contenuto totale di melanina estratto dall'intero corpo degli embrioni di pesce zebra è diminuito dopo l'esposizione a Ged per 72 ore in entrambi i gruppi trattati con acido cogico, controllo apositivo e Ged (Figura 6b, c)

Figura 6. Effetto di genuine sulla produzione di melanina in vivo.

4. Discussione

In questo studio sono state valutate le proprietà di inibizione di Ged contro la produzione di melanina. Sulla base dei nostri risultati, la capacità di inibizione di Ged era di circa 11.98- volte superiore a quella dell'acido cogico (Figura 2) e la concentrazione di Ged ( 50 µM) era inferiore a quella dell'acido cogico (200 µM), il controllo positivo. È stato abbinato a un'attività intracellulare della tirosinasi indebolita, un enzima che converte la L-dopa in DQ, il precursore primario dell'eumelanina e della feomelanina. La diminuzione dell'attività di Tyr comporta il rallentamento dei processi di produzione dell'intera melanina e la carenza di entrambi i prodotti finali, eumelanina e feomelanina [1–3]. I livelli di trascrizione e TYR sono stati regolati da una serie di fattori di trascrizione: Mitf, Trp-1 e Trp-2 [1,2]. Una quantità ridotta di proteine ​​​​e livello di mRNA significa che l'MC1R attivato tramite l'asse di segnalazione -MSH–MC1R–PKA–CREB da parte di -MSH è stato sottoregolato con il trattamento di Ged a una concentrazione di 25 e 50 µM, dose-dipendente sia nella PCR quantitativa che nel Western blotting. Come descritto in precedenza, la diminuzione della quantità di MITF porta a una carenza di Tyr, Trp-1 e Trp-2 a causa del minor legame con la regione del promotore di questi geni [25–27]. La riduzione di questi fattori di trascrizione porta il TYR a un livello inferiore e inibisce la produzione di pigmento di melanina nelle cellule B16F10. Inoltre, i risultati attuali dimostrano l'effetto inibitorio TYR di Ged, un altro punto critico della produzione di melanina nel melanocita. Ged ha anche mostrato un effetto di inibizione sulla produzione di pigmento durante lo sviluppo della fase iniziale del pesce zebra nei modelli in vitro e in vivo. I nostri risultati hanno mostrato che il trattamento con Ged per 72 ore ha ridotto notevolmente l'embriopigmentazione del pesce zebra. Il contenuto totale di melanina e i livelli di mRNA dei geni correlati sono stati ridotti con la presenza di Ged e la tendenza di questi risultati ha fortemente supportato la proprietà anti-melanogenesi in vitro di Ged.

Inoltre, la capacità di inibizione di Ged era molto più forte dell'acido cogico, uno dei composti più comunemente conosciuti come reagente sbiancante nell'industria cosmetica [6,28]. La concentrazione alla quale agiva Ged era relativamente inferiore a quella dell'acido cogico. Inoltre, un precedente rapporto ha mostrato che un altro comune reagente sbiancante, l'arbutina, aveva un effetto anti-melanogeno simile a quello dell'acido cogico [2]. Pertanto, Ged dovrebbe essere considerato come un reagente sbiancante in sostituzione dell'arbutina o dell'acido kojico attualmente utilizzati e come anti-melanomadrug per quanto riguarda le sue proprietà promettenti.

Le proprietà anti-melanogeniche di Ged erano state suggerite prima [29,30], ma questi studi non erano focalizzati sui meccanismi specifici dell'effetto, e osservavano semplicemente un'alterazione degli effetti citotossici e della quantità di produzione di melanina in vitro, mentre l'attività anti-proliferativa e gli effetti inibitori su L'espressione HSP 90 è stata evidenziata [31–33]. È stata segnalata la possibilità di Ged come agente anti-melanogenetico; tuttavia, questi studi non erano incentrati sui meccanismi specifici dell'effetto e si limitavano a osservare l'alterazione degli effetti citotossici e della quantità di produzione di melanina in vitro. Abbiamo provato a determinare il meccanismo a livello cellulare confermando il livello di mRNA e la quantità di proteine ​​dei geni correlati alla produzione di melanina. Insieme ai rapporti precedenti, questo studio ha mostrato una nuova prospettiva di Gedas, un componente degli ingredienti cosmetici per due benefici, eccezionale antitumorale e anti-melanogenesi, che potrebbe essere applicato sia al melanoma indotto dai raggi UV che all'accumulo di pigmento, in particolare, allo stesso tempo.

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5. Conclusioni

In conclusione, tutti questi risultati hanno mostrato che un nuovo composto, Ged, può essere utilizzato come reagente di adepigmentazione per la biosintesi della melanina, che ha accorciato le proteine ​​a valle TYR, TRP-1 e TRP-2 di una quantità ridotta rispetto al master proteina di regolazione,MITF, in sistemi sia in vitro che in vivo del modello di zebrafish.

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