I regimi di vaccinazione multi-componente Prime-boost per Chlamydia Trachomatis inducono risposte di anticorpi e cellule T e accelerano l'eliminazione dell'infezione in un modello di primate non umano
Jul 10, 2023
È una priorità internazionale sviluppare un vaccino contro la trasmissione sessualeInfezioni da Chlamydia trachomatisper combattere la continua diffusione globale dell'infezione. ILimmunizzazione ottimaleLa strategia rimane ancora da chiarire completamente. Lo scopo di questo studio era valutarestrategie di immunizzazionein un modello di primate non umano (NHP). I macachi Cynomolgus (Macaqua fascicularis) sono stati immunizzati seguendo diversi multicomponentiimmunizzazione prime-boostprogrammi e successivamente sfidato con C. trachomatis SvD nel tratto genitale inferiore. Gli antigeni di immunizzazione includevano l'antigene proteico ricombinante CTH522 adiuvato con CAF01 o idrossido di alluminio, antigene DNA MOMP e antigeni vettoriali MOMP (HuAd5 MOMP e MVA MOMP).
Tutti i costrutti dell'antigene erano altamente immunogenici, aumentando significative risposte IgG sistemiche specifiche per C. trachomatis. In particolare, i gruppi vaccinati con proteina CTH522 hanno sollevato una IgG specifica veloce e forte nel siero. La mappatura di specifici epitopi di cellule B all'interno del MOMP ha mostrato che tutti i gruppi vaccinati hanno riconosciuto epitopi vicino o all'interno dei domini variabili (VD) di MOMP, con una risposta VD4 coerente in tutti gli animali. Inoltre, il siero di tutti i gruppi vaccinati potrebbe neutralizzare in vitro sia SvD, SvE e SvF. Le risposte anticorpali si riflettevano sulla mucosa vaginale e oculare, che mostrava livelli rilevabili di IgG. I vaccini hanno anche indotto risposte cellulo-mediate specifiche per C. trachomatis, come dimostrato dalla stimolazione in vitro e dalla colorazione delle citochine intracellulari delle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC). In generale, i gruppi vaccinati con proteina (CTH522) hanno stabilito una risposta multifunzionale delle cellule T CD4, mentre i gruppi vaccinati con DNA e vettore hanno anche stabilito una risposta delle cellule T CD8. A seguito di sfida vaginale con C. trachomatis SvD, molti dei gruppi vaccinati hanno mostratoeliminazione accelerata dell'infezione, ma soprattutto il gruppo DNA, potenziato con CAF01 adiuvato CTH522 per ottenere abilanciato CD4/CD8Risposta delle cellule T combinata con anRisposta IgG, mostratoeliminazione accelerata dell'infezione.
PAROLE CHIAVE vaccino, infezione,immunologia, batteri, linfociti CD4/CD8,Clamidia trachomatis
introduzione
Le infezioni genitali da Chlamydia trachomatis causano ogni anno circa 131 milioni di nuovi casi in tutto il mondo (1) e costituiscono un grave problema di salute globale poiché potenzialmente induconocomplicanze gravicome pelvicomalattia infiammatoria, gravidanze ectopiche, Einfertilità(2, 3). Gli antibiotici offrono ancora un trattamento efficace delle infezioni da C. trachomatis. Tuttavia, poiché l'infezione è asintomatica fino al 75% dei casi, illa maggior parte delle infezioni non viene curata, e la trasmissione non viene interrotta (3). È generalmente accettato che l'arma più efficace contro la continua diffusione delle infezioni da Chlamydia sia un vaccino profilattico (4).
Nonostante diversi anni di ricerca, un vaccino non è ancora sul mercato. Ciò è in parte dovuto al complesso stile di vita bifasico di C. trachomatis. L'esclusivo ciclo di vita bifasico di C. trachomatis, con uno stadio sia intracellulare che extracellulare, sfida il sistema immunitario. Si ritiene che l'immunità protettiva dovrebbe consistere in risposte immunitarie cellulo-mediate (CMI), oltre agli anticorpi specifici del sierotipo (5-13). Inoltre, la generazione dell'immunità della mucosa nel tratto genitale rappresenta un'ulteriore sfida per un vaccino.
Nel presente studio, abbiamo testato diverse strategie vaccinali in un modello di infezione da clamidia NHP. Le strategie miravano a indurre anticorpi, cellule T CD4 e/o una risposta delle cellule T CD8. Inoltre, alcuni dei vaccini miravano a generare una risposta della mucosa. Gli antigeni scelti per questo studio erano basati sulla Major Outer Membrane Protein. In primo luogo, è stato generato un consenso MOMP Antigen (Con E) basato su circa 1500 sequenze serovar E ompA per fornire un'elevata copertura epitopica contro i ceppi più diffusi di C. trachomatis (14). In secondo luogo, è stata utilizzata una proteina di fusione sintetica, CTH522. CTH522 è una versione ricombinante e ingegnerizzata del MOMP, che comprende immunoripetizioni eterologhe delle regioni VD4 da quattro sierotipi Ct genitali (D, E, F e G) (11). La strategia alla base della proteina di fusione ricombinante è quella di indurre risposte amplificate agli epitopi protettivi e indurre protezione cross-serovar (11).
Un'altra caratteristica chiave dell'attuale esperimento è stata una valutazione parallela di CTH522 in due sistemi adiuvanti marcatamente diversi (AlOH e CAF01), combinati con un booster intranasale. Questa combinazione è stata testata su topi e maialini dove si è dimostrata altamente immunogenica inducendo titoli elevati di anticorpi neutralizzanti, cellule T CD4 più produttrici di IFN-g e eliminazione accelerata di un'infezione genitale da C. trachomatis (11-13 , 15). Inoltre, questo confronto rispecchiava un recente primo studio clinico sull'uomo in cui entrambe le formulazioni si sono dimostrate immunogeniche e in cui CAF01 era superiore nell'indurre anticorpi sierici neutralizzanti e risposte immunitarie mediate da cellule Th1 (16). Per indurre forti risposte immunitarie cellulari, e in particolare risposte di cellule T CD8 combinate con risposte di cellule T CD4, una parte degli animali è stata potenziata con l'immunogeno CT522/CAF01 dopo il priming con un adenovettore pAL1112 (HuAd5-MOMP), un vettore del vaiolo MVA o un DNA plasmidico pcDNA3.1 che fornisce l'antigene MOMP Con E (14, 17). Tutti e tre i vettori si sono dimostrati immunogenici negli NHP ed è stato recentemente dimostrato che una strategia di immunizzazione che combina questi tre vaccini e la vaccinazione di richiamo finale con risposte immunitarie superiori indotte dall'antigene proteico adiuvato e ha costantemente migliorato la clearance di C. trachomatis intravaginale in un topo C. modello di infezione da trachomatis (14).
Nel presente studio, dimostriamo che diverse combinazioni di strategie di immunizzazione multicomponente con vaccini proteici, vaccini a DNA e vaccini vettoriali virali ricombinanti in un modello di primate non umano (NHP), si traducono in risposte immunitarie distinte. Inoltre, osserviamo che un regime che utilizza il priming del DNA e la proteina (CTH522/CAF01) ha potenziato l'eliminazione batterica accelerata a seguito di una sfida genitale con Chlamydia trachomatis.
Risultati
Tutti i regimi di vaccinazione si sono dimostrati sicuri e hanno indotto significative risposte anticorpali sistemiche
Un totale di 30 macachi cynomolgus sono stati vaccinati seguendo diversi regimi di vaccinazione prime-boost inclusi sia vaccini proteici, DNA e vettori e diverse vie di somministrazione, come mostrato nella Figura 1 e nelle Figure supplementari 6-10). Tutti gli animali sono rimasti sani durante lo studio e non hanno sviluppato effetti avversi misurabili alle vaccinazioni. Inoltre, non abbiamo osservato fluttuazioni significative nel peso o nella temperatura degli animali (figure supplementari 1, 2).
A tempi fissi dopo le immunizzazioni, il siero è stato raccolto e i livelli di IgG specifica per CTH522 nel siero sono stati valutati mediante ELISA. Tutti e 5 i gruppi vaccinati hanno stabilito una risposta IgG sierica CTH522 significativa (Figura 2). Tuttavia, la cinetica era leggermente diversa nei 5 gruppi vaccinati. Tutti gli animali nei gruppi CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 e CTH522/CAF01 plus IN hanno sollevato un titolo IgG significativo dopo solo 1 immunizzazione intramuscolare (IM) e il titolo IgG è rimasto significativo fino all'ultimo punto di campionamento (Figure 2A- C). I livelli sierici di IgG sono aumentati leggermente più lentamente nei gruppi DNA più CTH522 e vettori più CTH522, in cui tutti gli animali sono stati sieroconvertiti rispettivamente alla settimana 8 e alla settimana 4 (Figure 2D, E).
I gruppi CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 plus IN e CTH522/CAF01 hanno aumentato significativamente le IgG sieriche dopo il terzo vaccino di richiamo IM nella settimana 16 (Figure 2A C). Il DNA più CTH522 e i vettori più i gruppi CTH522 hanno aumentato significativamente i livelli sierici di IgG dopo il booster IM proteina/CTH522/CAF01 nella settimana 20 (Figure 2D, E). Non sono state osservate differenze significative nelle risposte anticorpali sieriche dopo tre vaccinazioni IM con CTH522 formulato con l'adiuvante CAF01 o AlOH (Figure 2A, B) e le vaccinazioni di richiamo non adiuvate intranasali (IN) nel CTH522/AlOH più IN e I gruppi CTH522/CAF01 plus IN non hanno indotto alcun aumento significativo dei titoli anticorpali IgG sierici (Figure 2A, B).
La cinetica della risposta sierica delle IgG rifletteva la cinetica/i livelli nei fluidi vaginali, indicando che gli anticorpi rilevati sulla superficie vaginale erano probabilmente derivati dalla circolazione. Allo stesso modo, i livelli oculari di IgG seguivano anche i livelli sierici di IgG e, come osservato nel siero, mostravano che il booster IM nei gruppi DNA/vettore aumentava il titolo oculare di IgG (Figura 3 supplementare).
Le risposte anticorpali sieriche sono dirette contro i domini variabili 1, 3 e 4 nella sequenza MOMP
Successivamente è stata valutata un'ulteriore delucidazione del riconoscimento dell'epitopo specifico da parte degli anticorpi sierici, in seguito ai diversi regimi di vaccinazione. Il siero è stato analizzato alla settimana 24, cioè dopo i vaccini di richiamo intranasali nei gruppi 1 e 2, e dopo i vaccini di richiamo IM nei gruppi DNA e vettore (gruppi 4 e 5). Queste analisi sono state eseguite con un array di peptidi che copre CTH522, costituito da 15 peptidi mer con sovrapposizione di 14 amminoacidi
FIGURA 1 Disegno dello studio. La figura mostra i gruppi, i vaccini e le vie di somministrazione (intramuscolare, IM, o intranasale, IN) utilizzate
FIGURA 2 (A–F) Risposte anticorpali IgG CTH522 nel siero. I macachi Cynomolgus sono stati immunizzati seguendo diversi regimi di prime-boost (n=5 per gruppo) e il siero è stato raccolto ogni due settimane. Gli specifici anticorpi IgG CTH522 nel siero sono stati valutati mediante ELISA ed espressi qui come titolo su una scala log10. Le frecce grigie indicano le vaccinazioni. Ogni linea rappresenta un animale. La significatività statistica è indicata con asterischi *p < 0.05 e **p < 0.01.
In generale, i peptidi riconosciuti si trovavano vicino e all'interno dei domini variabili (VD 1,3,4) del MOMP. Il gruppo CTH522/AlOH ha anche mostrato un certo riconoscimento della regione VD2. Tutti gli animali hanno stabilito una forte risposta contro la regione VD4 che contiene l'epitopo VD4 neutralizzante conservato (11). Il gruppo del DNA ha mostrato il riconoscimento più ristretto all'interno dei VD (Figura 3), mentre il gruppo del vettore ha mostrato un modello di riconoscimento leggermente più ampio. I gruppi CTH522/CAF01 e CTH522/AlOH hanno mostrato il riconoscimento più ampio, in particolare contro SvF e SvG.
Gli anticorpi sierici sono stati in grado di neutralizzare SvD, SvE, SvF in vitro
Per valutare la capacità degli anticorpi indotti dal vaccino di inibire l'infezione da C. trachomatis delle sue cellule bersaglio, è stato eseguito un saggio di neutralizzazione in vitro. Usando questo test, abbiamo esaminato la neutralizzazione di SvD, SvE e SvF. Il siero della settimana 24 è stato utilizzato per il test e il siero del gruppo naïve è stato utilizzato come controllo. Tutti e cinque i gruppi vaccinati hanno mostrato una capacità di neutralizzare tutti e tre i sierotipi (Figura 4). Contro SvD il gruppo CTH522/AlOH più IN ha mostrato il più alto titolo di neutralizzazione del 50%, mentre contro SvE il gruppo DNA/CTH522, seguito da vicino dal gruppo CTH522/AlOH più IN, ha mostrato i più alti titoli di neutralizzazione. Anche se tutti i gruppi sono stati in grado di neutralizzare SvF, i titoli di neutralizzazione del 50% erano leggermente inferiori per tutti i gruppi contro questo serovar, rispetto a SvD e SvE. I vettori più il gruppo CTH522 hanno mostrato i titoli di neutralizzazione del 50% più bassi di tutti i gruppi vaccinati.
Diversi regimi di vaccinazione hanno indotto distinti profili di cellule T
Per valutare le risposte delle cellule T indotte dalla vaccinazione, i PBMC sono stati raccolti durante il periodo di studio e criopreservati. Le PBMC dalla settimana 0/basale e dalla settimana 22 sono state nuovamente stimolate con pool di peptidi (MOMP) e valutate per le citochine intracellulari mediante colorazione delle citochine intracellulari (ICS) e citometria. Le PBMC sono state colorate per i seguenti marcatori cellulari: CD3, CD4, CD8, CD154, CD137 e citochine: IFN-g, IL-2, TNF-a, IL-22, IL{{14} }UN. La strategia di gating è mostrata nelle figure supplementari 4, 5. La stimolazione dei PBMC con il pool di peptidi MOMP ha indotto una risposta significativa. La percentuale di CD154 antigene specifico più CD4 più cellule T che esprimono combinazioni di IL2, IFN-g e TNF-a è aumentata 2 settimane dopo l'ultima immunizzazione (W22) in tutti i gruppi vaccinati (Figura 5). La maggior parte di queste cellule T era multifunzionale, nel senso che esprimeva diverse citochine. La percentuale di cellule T CD137 più CD8 specifiche per l'antigene che producono citochine è stata aumentata solo nel gruppo DNA e vettore (W22), (Figura 6, che mostra la multifunzionalità delle cellule CD137 più CD8 più T). In
FIGURA 3 Mappatura dell'epitopo del siero alla settimana 24. I macachi Cynomolgus sono stati immunizzati seguendo diversi regimi prime-boost (n=5 per gruppo) e il siero è stato raccolto alla settimana 24. Risposte IgG dell'array di peptidi al CTH522 15mer sovrapposte i peptidi sono presentati come segnale mediano per ciascun gruppo con i peptidi VD1 (arancione), VD2 (verde), VD3 (blu) e VD4 di SvD, E, F e G (rosso) evidenziati a colori.
FIGURA 4 Neutralizzazione sierica in vitro di C. trachomatis SvD, SvE e SvF. I macachi Cynomolgus sono stati immunizzati seguendo diversi regimi di primo potenziamento (n =5 per gruppo) e il siero è stato raccolto dopo aver terminato il programma di immunizzazione (settimana 24). C. trachomatis SvD, SvE e SvF sono stati incubati con siero di ciascun animale e la capacità degli anticorpi del siero di inibire l'infezione è stata valutata incubando la miscela di anticorpi-batteri su cellule HaK e colorazione per le inclusioni. La linea nera mostra SvD, la linea grigia mostra SvE e la linea tratteggiata grigio scuro mostra SvF. La linea rossa tratteggiata indica il titolo di neutralizzazione reciproco del 50% di ciascun sierotipo.
FIGURA 5 Risposte delle cellule T CD4. Analisi multifunzionali settimana 22. Produzione di citochine da CD4 più cellule T analizzate da ICS. Sono rappresentate le risposte multifunzionali dopo la stimolazione con pool di peptidi sovrapposti da MOMP. La dimensione di ogni torta è proporzionale alla percentuale di cellule CD154 più CD4 più T che esprimono almeno una citochina, inclusi IFN-g, TNF-a e IL-2, e alle proporzioni di cellule che esprimono IFN-g e /o le citochine TNF-a e/o IL-2 sono visualizzate in ogni torta.
Eliminazione accelerata indotta dalla vaccinazione di un'infezione vaginale da C. trachomatis SvD
Per valutare l'efficacia protettiva delle risposte immunitarie indotte dal vaccino, gli animali sono stati esposti a un'infezione vaginale con 5x107 IFU C. trachomatis SvD. Dopo l'inoculazione, il carico vaginale di clamidia è stato determinato mediante rilevazione PCR del DNA di clamidia nei tamponi vaginali (Figura 7). L'infezione è stata eliminata in tutti gli animali entro la settimana 5 nel gruppo DNA plus CTH522/CAF01 e nel gruppo Vector plus CTH522, entro la settimana 6 nel gruppo CAF01/CTH522 e entro la settimana 8 nel gruppo CTH522/Alum plus IN gruppo (Figura 7). Nel gruppo di controllo, alla settimana 8, l'80% degli animali aveva eliminato l'infezione e 1 animale è rimasto positivo alla PCR alla settimana 9. Il booster IN nel gruppo CTH522/CAF01 plus IN non ha aumentato la protezione (Figura 7). Un test Log-rank (Mantel-Cox), confrontando tutti i gruppi ha mostrato un valore P di 0,0994, e confrontando ciascuno dei gruppi individualmente con i gruppi di controllo, solo il gruppo DNA-CTH522 ha mostrato un valore P inferiore a 0,05 (P valore=0.0257).
Discussione
Il presente studio è stato progettato per indurre l'immunità cellulare (CD4 e CD8) combinata con l'immunità umorale e per adattare il fenotipo dell'immunità adattativa con i vaccini per Chlamydia basati su MOMP. Valutiamo l'immunogenicità e l'efficacia protettiva delle strategie combinate di immunizzazione multicomponente con entrambi i vaccini proteici (CTH522, Con E), il vaccino a DNA e il vettore virale ricombinante (MVA MOMP) e i vaccini a base di adenovettore, in un primate non umano ( modello NHP).
I dati hanno mostrato che tutti i regimi di immunizzazione erano immunogenici e inducevano una risposta sia cellulare che umorale costituita da anticorpi neutralizzanti (Figure 2-4). Il vaccino proteico CTH522 formulato con CAF01 o AlOH ha mostrato una rapida induzione di IgG antigene-specifiche sistemiche (Figura 2). Non abbiamo osservato alcuna differenza significativa tra le risposte indotte dai vaccini adiuvati AlOH e CAF01, il che è in accordo con le risposte osservate nell'uomo con questi adiuvanti (16). I regimi di vaccinazione del DNA e del vettore hanno anche indotto titoli significativi di anticorpi sistemici antigene-specifici, che sono aumentati notevolmente in seguito all'immunizzazione di richiamo proteico (Figura 2). In accordo con i nostri risultati, uno studio precedente sui topi ha anche mostrato che i regimi di vaccinazione proteica inducevano livelli di anticorpi antigene-specifici più elevati rispetto al DNA e agli antigeni del vaccino vettore e aumentavano anche in modo efficiente i titoli per questi gruppi (15).
MOMP contiene quattro VD che sono esposti sulla superficie della forma infettiva di Ct. Queste regioni sono il bersaglio principale dell'immunità dipendente dagli anticorpi, sia attraverso gli anticorpi neutralizzanti che attraverso l'immunità mediata dal recettore Fc (18). Precedenti studi hanno dimostrato che il trasferimento adottivo del siero neutralizzante indotto dal vaccino riduceva notevolmente la diffusione precoce dei batteri a seguito di un'infezione da C. trachomatis (6, 11, 19-21). Pertanto, gli anticorpi sembrano svolgere un ruolo nella neutralizzazione/controllo dell'inoculo iniziale, probabilmente in collaborazione con l'immunità cellulare. Mediante mappatura dettagliata dell'epitopo delle cellule B, abbiamo trovato il riconoscimento delle regioni VD 1, 3, 4 in tutti i gruppi di vaccini. I gruppi DNA e vettori hanno anche riconosciuto le regioni VD1, 3 e 4. Tuttavia, questi gruppi hanno mostrato un riconoscimento leggermente più ristretto all'interno di questi VD rispetto ai gruppi CAF01 e AlOH, probabilmente riflettendo che l'antigene Con E nei gruppi vettoriali non contiene la regione VD4 di SvF e G (Figura 3). Il riconoscimento della regione VD4 era correlato alla capacità di tutte le strategie vaccinali di indurre anticorpi neutralizzanti contro SvD, SvE e SvF.
L'immunizzazione parenterale con CTH522 in CAF01 e AlOH ha indotto livelli significativi di anticorpi della mucosa (IgG) nel tratto genitale e nell'occhio e livelli correlati ai titoli sierici (Figura supplementare 3, settimana 18). I vaccini a DNA e vettori da soli non hanno indotto IgG della mucosa, il che riflette i titoli sierici più bassi rispetto alle sole proteine. Tuttavia, a seguito del booster IM CTH522/CAF01, questi gruppi aumentano significativamente gli anticorpi sierici. livelli e di IgG sia vaginali che oculari, alla pari con la sola proteina (Figura 3 supplementare, settimana 18). La valutazione parallela di CTH522 nei diversi sistemi adiuvanti di priming (AlOH e CAF01) seguita da due volte il potenziamento intranasale con l'antigene non ha avuto alcun effetto di potenziamento sui livelli di anticorpi della mucosa (Figura supplementare 3, settimana 22). Pertanto i livelli sierici complessivi di IgG si riflettono sulla mucosa per tutti i gruppi. Un recente studio di fase I sull'uomo ha anche valutato la valutazione parallela di CTH522 in AlOH e CAF01, seguita da due volte il potenziamento intranasale. Anche qui i titoli di IgG della mucosa si correlavano bene con le concentrazioni sieriche di IgG (16). Tuttavia, contrariamente ai risultati del modello NHP, la sperimentazione umana ha mostrato l'effetto del potenziamento di IN nel gruppo CAF01, con conseguenti livelli elevati sia di IgG che di IgA. Sfortunatamente, la valutazione delle IgA non è stata possibile nel presente studio, a causa del materiale limitato e dei falsi segnali positivi risultanti da un anticorpo secondario a reazione incrociata utilizzato nel test. Entrambi gli studi hanno utilizzato il dispositivo VaxINator, progettato per atomizzare i farmaci nasali per l'assorbimento della mucosa. Tuttavia, la cavità nasale degli esseri umani è molto più spaziosa rispetto agli NHP e si potrebbe ipotizzare che ciò possa influenzare la distribuzione e l'assorbimento uniformi dell'antigene.
Diversi studi sia sull'uomo che sui roditori hanno dimostrato l'importanza dell'immunità delle cellule T Th1 e della citochina effettrice IFN-g (8, 22-27). Al contrario, si sa meno sul ruolo protettivo delle cellule T CD8 (28-33). Tutti i gruppi vaccinali hanno indotto le cellule T CD4, ma solo i gruppi DNA e Vector hanno mostrato una risposta delle cellule T CD8 (Figure 6 e 7). Sulla base delle citochine misurate, le cellule T CD8 erano composte da un numero limitato di sottoinsiemi rispetto alle cellule T CD4, che potevano essere suddivise in 6 o più sottoinsiemi, la maggior parte dei quali produceva diverse citochine (Figura 7). Le cellule T CD4 hanno mostrato più sottoinsiemi che esprimono IL-2- rispetto alle cellule T CD8, che includevano principalmente solo un sottoinsieme che esprimeva IL-2-, quello che esprimeva IL-2 insieme a IFN-g e TNF- a (figura 6). Le cellule T CD8 erano dominate da una vasta popolazione che produceva solo IFN-g, mentre l'altro sottogruppo dominante di cellule T CD8 produceva sia IFN-g che TNF-a. Questo pattern di citochine tra cellule T CD4 e cellule T CD8 non è dissimile da quanto osservato nei topi, durante la sperimentazione di strategie vaccinali in grado di indurre sia cellule T CD4 che CD8 (34).
Una strategia simile che coinvolge la vaccinazione del DNA seguita dal potenziamento con complessi immunostimolanti (ISCOM) della proteina MOMP (35) ha indotto una forte protezione contro l'infezione polmonare da Chlamydia muridarum. In quello studio, DNA MOMP (o MOMP/ISCOMS) ha indotto una protezione significativamente inferiore (35). Un altro studio ha dimostrato che la vaccinazione di topi con plasmidi DNA MOMP, senza un vaccino a subunità, non è riuscita a proteggere contro un attacco genitale di C. trachomatis (36), indicando che la strategia del DNA trae vantaggio dall'essere integrata con un vaccino a subunità che induce cellule T CD4 e anticorpi . Va notato che i vaccini a DNA hanno mostrato profili di immunogenicità relativamente bassi negli studi clinici sull'uomo, che potrebbero dover essere affrontati in studi futuri (37).
Sebbene la dose di infezione Ct utilizzata in questo studio sia superiore alla dose sperimentata dall'infezione naturale nell'uomo, è stata selezionata per garantire che tutti gli animali fossero infetti, il che è importante considerando il numero ridotto di animali in ciascun gruppo. La dose è in linea con la dose utilizzata negli studi precedenti, che variava da 106 a 108 (38, 39). L'abbassamento della dose nel nostro modello ha portato a una maggiore variazione per quanto riguarda l'assunzione di infezione (dati non mostrati). Sono state utilizzate anche dosi più basse somministrate ripetutamente (40, 41). Tuttavia, questo non è un protocollo ottimale quando l'obiettivo è testare l'efficacia protettiva dei vaccini, specialmente se l'immunità naturale sta mediando la protezione prima che il protocollo di infezione sia stato completato. Si può ipotizzare che l'uso di una dose elevata possa richiedere una risposta immunitaria che contenga tutte le braccia del sistema immunitario, come le cellule T CD4 specifiche per l'antigene, le cellule T CD8 e gli anticorpi neutralizzanti, al fine di poter ridurre la carica batterica livelli. Ciò spiegherebbe anche perché gli anticorpi neutralizzanti indotti in tutti i gruppi non hanno portato a una protezione significativa in tutti i gruppi [sebbene abbiamo notato una tendenza alla protezione precoce nella maggior parte dei gruppi, in cui si ritiene che gli anticorpi svolgano un ruolo (Figura 7)] . Attualmente stiamo cercando di sviluppare un modello fisicamente più rilevante.
Presi insieme, i nostri dati hanno mostrato che l'antigene CTH522 formulato nell'adiuvante CAF01 o AlOH può indurre sia cellule T multifunzionali che anticorpi neutralizzanti negli NHP. Inoltre, i nostri risultati hanno suggerito che una strategia vaccinale eterologa costituita da un vaccino a DNA e un vaccino a subunità CTH522/CAF01 rappresenta una promettente strategia vaccinale per l'induzione di una risposta immunitaria multiforme con un alto livello di anticorpi neutralizzanti combinato con forti risposte delle cellule T CD4 e CD8 che può accelerare significativamente la clearance di un'infezione da C. trachomatis.
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