Estratto etanolico di foglie di Neem (Azadirachta Indica A. Juss) sulla funzione del fegato e dei reni dei ratti

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introduzione

lo sviluppo di medicinali a partire da prodotti naturali ha oggi l'attenzione del mondo. i prodotti naturali hanno una struttura chimica unica, producono una diversità di attività biologiche e hanno proprietà simili a farmaci [1]. inoltre la pratica della medicina che utilizza prodotti naturali è presente fin dalla preistoria nella prevenzione e nella cura di varie malattie. I prodotti naturali offrono molti vantaggi in termini di efficienza e selettività della molecola bersaglio in modo che possano essere utilizzati ripetutamente per soddisfare efficacemente l'urgente necessità di farmaci [2]. I prodotti naturali contengono composti attivi con impianto [8, 9], antiiperglicemici, antiulcera, antimicotici, antibatterici, antinfiammatori, immunomodulatori, antimutageni, antitumorali, antimalarici, antivirali, antiossidanti [10-12], antifertilità [13, 14] e contraccezione [9, 11]. Varie parti della pianta del neem sono state isolate con successo, contengono più di 140 composti chimici [10] e sono state usate come medicinali a base di erbe per migliaia di anni [14]. Il neem contiene vari composti primari tra cui derivati ​​dei grassi, carboidrati e proteine ​​e composti secondari come flavonoidi, steroidi, saponine, terpenoidi, alcaloidi, glicosidi e tannini [7-15]. Le piante di Neem sono un interesse mondiale per la loro efficacia senza mostrare effetti collaterali. inoltre, l'uso della pianta di neem tradizionalmente è abbastanza sicuro e oltre il 75% della medicina tradizionale utilizza l'estratto di foglie di neem. inoltre la storia del suo utilizzo, dai rapporti esistenti, non indica alcun effetto collaterale delle foglie di neem. Tuttavia, non è mai stata effettuata una valutazione completa della sicurezza dell'uso di formulazioni di foglie di neem [11].

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Lo studio precedente riporta che l'estratto di foglie di neem ha effetti tossici sul fegato erene [4, 11]; tuttavia, altri rapporti mostrano che l'estratto di foglie di neem può proteggere il fegato erenedal danno [16–18]. Ad Aceh Besar Regency, provincia di Aceh, Indonesia, la popolazione locale ha usato le foglie di neem come verdure e le ha usate per prevenire la gravidanza senza conoscerne gli effetti collaterali. inoltre la sicurezza delle foglie di neem fino ad oggi non è ancora chiara. Finora, a nostra conoscenza, ci sono ancora limitati studi che valutano l'effetto dell'estratto etanolico di foglie di neem sul fegato efunzione renale. Nel presente studio, l'obiettivo era di indagare l'effetto della somministrazione dell'estratto etanolico di foglie di neem sul fegato efunzione renaleattraverso l'esame della concentrazione di AST, ALT, urea e creatinina e fegato istopatologico erenenei ratti maschi.

Parole chiave:funzione renale; tessuti renali; insufficienza renale; Malattie renali; Renale

Materiali e metodi

Collezione di campioni di foglie di Neem.Le foglie di neem sono state raccolte nel villaggio di Kajhu, Aceh Besar Regency, Aceh Province, Indonesia, nel settembre 2019. L'identificazione delle foglie di neem è stata effettuata presso l'erbario Bogoriense, Biology Research Center, Indonesian Institute of Sciences (LIPI), Bogor, Indonesia (1454 /IPH.1.01/If.07/VII/2019), ed è indicato come Azadirachta indica A. Juss.Preparazione dell'Estratto Etanolico della Foglia di Neem.Le foglie di neem fresche sono state raccolte, lavate, asciugate all'aria e schiacciate per produrre una polvere grezza. Inoltre, la polvere grezza è stata macerata con etanolo al 70% per 7 giorni. più en, il filtrato è stato evaporato utilizzando un evaporatore rotante a 50 gradi per produrre estratti viscosi.Esperimento sugli animali.Gli animali da esperimento erano 24 ratti Wistar maschi con 150–250 g di peso corporeo. I ratti sono stati acclimatati per 7 giorni e divisi casualmente in quattro gruppi (T0, T1, T2 e T3) poiché ogni gruppo conteneva 6 ratti. T0 è il gruppo di controllo senza trattamento e T1, T2 e T3 sono i gruppi di trattamento che lo erano

somministrato l'estratto etanolico di foglie di neem rispettivamente con 100, 200 e 300 mg/kg di peso corporeo. l'estratto è stato somministrato per via orale utilizzando una sonda gastrica per 48 giorni e il 49° giorno sono stati prelevati campioni di sangue per determinare le concentrazioni di AST, ALT, urea e creatinina, quindi fegato erenei tessuti sono stati raccolti per valutare l'istopatologia. Durante lo studio, ai ratti è stato somministrato mangime standard e acqua ad libitum.

Analisi biochimica.I campioni di sangue (2-3 ml) sono stati prelevati dal cuore utilizzando una siringa sterile. più it, il sangue è stato trasferito nella provetta Eppendorf e lasciato a temperatura ambiente (30 gradi) per 10 minuti. Il sangue è stato centrifugato per 10 minuti a 3000 rpm. più e il siero è stato separato e conservato in frigorifero (0 20 gradi). Inoltre, AST, ALT, urea e creatinina ematica sono stati esaminati utilizzando un analizzatore chimico (Rayto RT-1904C). più e la procedura di determinazione delle concentrazioni di AST, ALT, urea e creatinina è stata eseguita secondo il protocollo del produttore.

Esame di istopatologia. The fegato erenedei ratti sono stati fissati in una soluzione di formalina tamponata neutra al 10% per 24 ore, disidratati in una serie di alcol e chiariti in una soluzione di xilolo seguita da incorporazione sul blocco di paraffina. I tessuti incorporati nel blocco di paraffina sono stati tagliati utilizzando un microtomo rotante in 4 µm di spessore, montati su vetrini, colorati con ematossilina ed eosina ed esaminati al microscopio ottico con un ingrandimento di 10 × 10.Analisi statistica.I dati vengono analizzati utilizzando l'analisi della varianza (ANOVA unidirezionale) seguita dal test posthoc di Duncan utilizzando SPSS 24. Un valore p<0.05 was="" considered="" statistically="">

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Risultati e discussione

6e Concentrazione di AST e ALT. più la concentrazione e AST di T0, T1, T2 e T3 era 290,9 ± 202,5 U/L, 277,2 ± 167,2 U/L, 421,3 ± 2{ {28}}1,5 U/L e 366,3 ± 276,9 U/L, rispettivamente. più la concentrazione e di AST nei gruppi T2 e T3 tendeva ad aumentare rispetto a T{{30}} (gruppo di controllo). Tuttavia, le concentrazioni di AST nei gruppi T1, T2 e T3 non hanno mostrato differenze significative rispetto al gruppo T0 (p > 0,05). più la concentrazione di ALT di T0, T1, T2 e T3 era rispettivamente di 108,6 ± 23,1 U/L, 116,3 ± 51,9 U/L, 105,9 ± 15,2 U/L e 95,9 ± 36,2 U/L. più e la concentrazione di ALT nei gruppi T2 e T3 tendeva a diminuire rispetto a T0 (gruppo di controllo).

Tuttavia, le concentrazioni di ALT nei gruppi T1, T2 e T3 non hanno mostrato differenze significative rispetto al gruppo T0 (p > 0.05) (Tabella 1). L'enzima AST è un marker che è stato utilizzato per valutare la presenza di danno epatico. Inoltre, l'enzima ha svolto un ruolo nel processo di gluconeogenesi per catalizzare la conversione del gruppo amminico dell'acido aspartico in acido chetoglutarico per produrre acido ossalacetico. L'enzima AST si trova negli isoenzimi citosolici e mitocondriali del fegato, nei muscoli scheletrici, nei muscoli del cuore,reni,cervello, pancreas, polmoni, leucociti e globuli rossi. Tuttavia, questo enzima AST è meno sensibile e specifico per la valutazione del danno epatico [19]. Sebbene non vi fossero differenze significative nelle concentrazioni di AST nei gruppi di trattamento (T1, T2 e T3) rispetto al gruppo di controllo (T0), la concentrazione di AST tendeva ad aumentare nei gruppi T2 e T3 rispetto a T 0 (gruppo di controllo). più e l'aumento è stato probabilmente in ritardo a causa dei composti attivi degli estratti di foglie di neem come flavonoidi, tannini, saponine, alcaloidi e steroidi, ma i composti attivi dell'estratto di foglie di neem non sono identificati per aumentare l'AST. Un aumento dell'enzima AST non è necessariamente seguito da un danno epatico perché questo enzima non è solo specifico nel fegato ma anche in altri tessuti del corpo.

Questo studio ha anche rilevato che l'enzima ALT tendeva a diminuire nel gruppo di trattamento (T1, T2 e T3) rispetto al gruppo di controllo (T0), ma la diminuzione dell'enzima ALT non era statisticamente significativa. Gli enzimi ALT erano un miglior predittore di danno epatico rispetto agli enzimi AST perché questo enzima citosolico si trovava nelle più alte concentrazioni nel fegato ed era più specifico nella valutazione del danno della funzionalità epatica [20]. inoltre, l'enzima ha svolto un ruolo nella gluconeogenesi catalizzando il trasferimento di gruppi amminici dall'alanina all'acido chetoglutarico per produrre acido piruvico [19]. ALT consisteva di 496 aminoacidi ed è stato trovato negli epatociti del citosol. L'attività dell'enzima ALT nel fegato era circa 3000 volte quella sierica, quindi in caso di danno epatocellulare o morte, l'ALT rilasciata dalle cellule epatiche danneggiate aumenterà l'attività misurata dell'enzima ALT nel siero [21].

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Mohamed et al. [22] hanno scoperto che l'estratto di etanolo della foglia di neem ha causato una diminuzione degli enzimi AST e ALT di ratto. L'estratto di etanolo della foglia di neem non ha avuto effetti collaterali sul fegato e funge anche da protezione del fegato. Lo studio condotto da Haque et al. [23] hanno anche scoperto che l'estratto di foglie di neem non ha causato cambiamenti nella normale attività sierica degli enzimi AST e ALT nei ratti maschi. Bhangra et al. [24] hanno riportato che la somministrazione di 500 mg/kg di peso corporeo dell'estratto di foglie di neem in ratti indotti da paracetamolo ha ridotto il danno epatico, come indicato dalle normali concentrazioni di AST e ALT e dalle osservazioni istopatologiche. I risultati dello studio condotto da Dkhil et al. [17] hanno indicato un effetto protettivo dell'estratto metanolico di foglie di neem con una dose di 500 mg/kg di peso corporeo al fegato sul ratto indotto dal cisplatino. Mallick et al. [25] hanno riferito che l'estratto metanolico della foglia di neem non ha avuto effetti tossici sul fegato di ratto anche a dosi elevate. Il contenuto di antiossidanti dell'estratto di foglie di neem ha conferito un effetto epatoprotettivo. Lo studio condotto da Hartono e Prabowo [26] ha rilevato che l'estratto etanolico della foglia di neem somministrato ai ratti inducendo alte dosi di paracetamolo per dieci giorni potrebbe anche diminuire l'attività dell'enzima ALT negli animali da esperimento. La diminuzione dell'enzima ALT era dovuta al composto attivo dell'estratto di foglie di neem, che fungeva da epatoprotezione inibendo il danno ossidativo al fegato. Gli antiossidanti potrebbero ridurre la formazione di radicali liberi mediante lo scavenging diretto che sta riducendo la formazione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) che hanno effetti tossici sui fosfolipidi di membrana e causano un ampio spettro di danni cellulari. Gli antiossidanti possono ridurre lo stress ossidativo alle cellule del fegato e l'attività dell'enzima ALT nel sangue diminuirà.

L'urea e la concentrazione di creatinina.La concentrazione di urea di T{{0}}, T1, T2 e T3 era 51,1 ± 7.0 mg/dl, 55,6 ± 8,5 mg/dl, 44,5 ± 5,4 mg/dl e 48,4 ± 3,4 mg/dl, rispettivamente. Le concentrazioni di urea nei gruppi T1, T2 e T3 hanno mostrato differenze significative rispetto al gruppo T0 (p < 0.{{30}}5).="" la="" concentrazione="" di="" creatinina="" di="" t0,="" t1,="" t2="" e="" t3="" era="" 0,22="" ±="" 0.{{40}}4="" mg/dl,="" {{44="" }}.24="" ±="" 0.03="" mg/dl,="" 0,21="" ±="" 0,03="" mg/dl="" e="" 0,25="" ±="" 0,03="" mg/dl,="" rispettivamente.="" le="" concentrazioni="" di="" creatinina="" nei="" gruppi="" t1,="" t2="" e="" t3="" non="" hanno="" mostrato="" differenze="" significative="" rispetto="" al="" gruppo="" t0="" (p=""> 0,05) (Figura 1). Ilreneha un ruolo importante nell'escrezione di prodotti di scarto e tossine come urea, creatinina e acido urico; ha anche una funzione nella regolazione del volume del fluido extracellulare, dell'osmolalità, delle concentrazioni di elettroliti e della produzione di ormoni. plus e unità funzionale delreneè il nefrone costituito dal glomerulo, dai tubuli prossimali, dai tubuli distali e dai dotti collettori [27]. plus e risultati hanno mostrato che c'erano differenze significative nelle concentrazioni di urea nei gruppi di trattamento (T1, T2 e T3) rispetto al gruppo di controllo (T0) e la concentrazione di urea è diminuita nei gruppi T2 e T3 confrontati a T0 (gruppo di controllo). L'urea è un composto contenente azoto formato nel fegato come prodotto finale del metabolismo delle proteine ​​e del ciclo dell'urea. Circa l'85 per cento dell'area viene espulso attraverso ilreni, e il resto viene escreto attraverso il tubo digerente. L'urea sierica aumenta nelle condizioni di pulizia dei reni come in acuto e cronicoinsufficienza renale. L'urea può aumentare anche in altre condizioni come sanguinamento del tratto gastrointestinale superiore, disidratazione, processo catabolico e una dieta ricca di proteine ​​[27].In questo studio, c'è stata una diminuzione della concentrazione di urea nel gruppo di trattamento rispetto al gruppo di controllo. è indicato che l'estratto di etanolo della foglia di neem non ha influenzato ilfunzione renaledel topo maschio. Secondo Guyton e Hall [28], l'urea totale nel sangue è stata determinata dalle proteine ​​alimentari e dalla capacità delreniper espellere l'urea. Se i reni fossero danneggiati, l'urea si accumulerebbe nel sangue. Indicato aumento dell'urea nel plasmainsufficienza renalenello svolgimento della sua funzione di filtrazione. più e condizione diinsufficienza renale, che è caratterizzata da livelli di urea plasmatica molto elevati, è nota come uremia.

L'urea è il prodotto finale dell'azoto derivato dal catabolismo delle proteine ​​e degli aminoacidi, prodotto dal fegato e distribuito a tutti i fluidi intracellulari ed extracellulari. Nelrene, l'urea viene filtrata dal sangue dai glomeruli e parzialmente riassorbita dall'acqua. L'aumento dell'urea è un indicatore che la velocità di filtrazione glomerulare è scarsa. L'aumento della concentrazione di urea è associato amalattie renalio insufficienza, ostruzione delle vie urinarie darenecalcoli, insufficienza cardiaca congestizia, disidratazione, febbre, shock e sanguinamento nel tratto digestivo.Lo studio ha anche rilevato che non vi erano differenze significative nelle concentrazioni di creatinina nei gruppi di trattamento (T1, T2 e T3) rispetto al gruppo di controllo (T0). è indicato che l'estratto di etanolo di foglie di neem non ha causato danni al rattorene.La creatinina è comunemente usata come misura difunzione renale. La concentrazione di creatinina non è influenzata solo dal prodotto della massa muscolare, ma anche dalla funzione muscolare, dalla composizione muscolare, dall'attività, dalla dieta e dallo stato di salute. L'aumento delle concentrazioni di creatinina si trova anche nella distrofia muscolare, nell'anemia, nella leucemia e nell'ipertiroidismo [29]. La creatinina è il marker più comunemente usato per la valutazionefunzione renale.la concentrazione di creatinina fornisce un indicatore dell'azione del glomerulo. La creatinina è un sottoprodotto della creatina fosfato nei muscoli ed è prodotta a velocità costante dal corpo. Per la maggior parte, la creatinina viene eliminata completamente dal sangue dalreni. L'aumento della creatinina mostra una diminuzione della pulizia da parte delreni. Il siero della creatinina è una valutazione più accurata difunzione renalerispetto all'urea [27].

Monim et al. [16] hanno scoperto che la somministrazione dell'estratto di foglie di neem a una dose di 500 mg/kg di peso corporeo per cinque giorni nei ratti non ha causato variazioni nelle concentrazioni di urea e creatinina nel ratto. Kepal et al. [30] hanno anche scoperto che il ratto alimentato con l'estratto di foglie di neem alla dose di 500 mg/kg di peso corporeo per 14 giorni ha causato una diminuzione delle concentrazioni di urea e creatinina nel ratto indotta dal cisplatino perdanno ai reni. L'estratto di etanolo della foglia di neem ha agito come nefroprotezionedanno ai reni.Lo studio condotto da Somsak et al. [18] hanno scoperto che l'estratto di acqua di foglie di neem a dosi di 1000 e 2000 mg/kg di peso corporeo non ha effetti tossici sui ratti. L'estratto di foglie di neem può essere utilizzato come candidato per la nefroprotezione contro i danni alreni.

L'istopatologia del fegato e dei reni.Le osservazioni istopatologiche del fegato nel gruppo di controllo (Figura 2(a) e il gruppo di trattamento a dosi di 100 mg/kg (Figura 2(b)), 200 mg/kg (Figura 2(c)) e 300 mg/kg (Figura 2 (d)) ha mostrato che il fegato, le vene centrali e le cellule degli epatociti sembravano normali (Figura 2).reneosservazioni istopatologiche nel gruppo di controllo (Figura 3(a)) e nel gruppo di trattamento a dosi di 100 mg/kg (Figura 3(b)), 200 mg/kg (Figura 3(c)) e 300 mg/kg ( La Figura 3 (d)) mostrava un aspetto normale del glomerulo e dei tubuli prossimali e distali. inoltre non c'era alcun cambiamento istologico nelrene(Figura 3).

Il fegato erenisono organi che svolgono un ruolo importante nel metabolismo e nell'escrezione di farmaci o altre sostanze. Nello studio, è stato dimostrato che la somministrazione dell'estratto etanolico di foglie di neem a dosi di 100, 200 e 300 mg/kg non ha causato anomalie e danni al fegato di ratto. plus e fegato nei ratti trattati ha mostrato la normale struttura generale del fegato e il normale aspetto delle vene centrali e delle cellule degli epatociti. plus L'istopatologia epatica sta seguendo i risultati dell'analisi degli enzimi AST e ALT che hanno mostrato che non vi era alcuna differenza significativa tra il gruppo di controllo e quello di trattamento. Sebbene vi fosse un aumento dell'enzima AST nel gruppo 200 e 300 mg/kg rispetto al gruppo di controllo, l'istopatologia epatica appariva normale. L'enzima AST non è specifico per il danno epatico. L'AST si trova principalmente nei globuli rossi, nei muscoli cardiaci e scheletrici ereni. L'AST è meno sensibile al fegato rispetto all'ALT [19].

Ilrenele osservazioni istopatologiche dopo la somministrazione dell'estratto etanolico di neem leave con dosi di 100, 200 e 300 mg/kg non hanno mostrato differenze rispetto al controllo. Ilrenenei ratti trattati ha mostrato il normale generalestruttura delrenee aspetto normale del glomerulo e dei tubuli. Questo risultato è supportato dall'analisi dell'urea e della creatinina nel sangue di ratto che non ha mostrato differenze significative tra il gruppo di controllo e quello di trattamento. Urea e creatinina sono parametri biochimici che sono i principali indicatori difunzione renale. Tuttavia, la creatinina è una valutazione più accurata difunzione renalerispetto all'urea [27]. Ciò è in linea con alcuni dei precedenti rapporti secondo cui l'estratto di foglie di neem ha potenziali effetti epatoprotettivi e nefroprotettivi [31]. Kusum et al. [32] hanno scoperto che l'estratto di etanolo con foglie di neem non ha influenzato il diametro degli epatociti, il diametro dei lobuli epatici e il peso del fegato nel ratto. Al contrario, lo studio di Katsayal et al. [33] hanno scoperto che la somministrazione dell'estratto di metanolo di foglie di neem a dosi di 500, 1000 e 2000 mg/kg causava anomalie nel fegato e nei reni dei ratti trattati rispetto ai controlli. Questa differenza nei risultati era probabilmente dovuta ai diversi dosaggi di estratto delle foglie di neem. Ili risultati di questo studio indicano che l'estratto di etanolo di foglie di neem di Kajhu non ha causato danni al fegato erenidi ratti maschi. plus è dovuto al composto attivo dell'estratto etanolico delle foglie di neem che è un antiossidante. Gli studi precedenti mostrano che l'estratto di etanolo di foglie di neem di Kajhu contiene flavonoidi, alcaloidi, tannini, saponine e steroidi [34]. inoltre i composti attivi che agiscono come antiossidanti sono i flavonoidi. inoltre l'estratto di etanolo di foglie di neem ha una forte attività antiossidante [35]. oltre a noi, l'estratto di etanolo di foglie di neem di Kajhu è sicuro per il fegato ei reni dei ratti maschi.

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Conclusioni

L'estratto etanolico di foglie di neem non ha causato danni al fegato erenedel ratto maschio come indicato dall'analisi di AST, enzimi ALT, concentrazione di urea e creatinina e fegato istopatologico erene. Tuttavia, sono necessarie ulteriori indagini per una valutazione completa della sicurezza dell'estratto di foglie di neem a varie dosi per ottenere un quadro chiaro della sicurezza delle foglie di neem per la medicina.