PARTE 2 Effetti antiossidanti e anticoagulanti dei glicosidi fenilpropanoidi isolati dal succiamele (Orobanche Caryophyllacea, Phelipanche Arenaria e P. Ramosa)

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3. Risultati e discussioni

Dieci precedentemente isolati da noifenilpropanoideglicosidi[8], tra cui 2′-O-acetilacteoside, 2′-O-acetilpoliumoside, 3-O-metil lato podio,acteoside, arena inside, crenatoside, pheliposide, poliumoside, tubuloside A e wiedemannioside D, insieme a tre estratti di succiamele (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche are naria (PA) e P. ramosa (PR)) sono stati attualmente studiati per alleviare l'ossidazione stress e proprietà anticoagulanti in un sistema plasmatico umano. Strutture chimiche delfenilpropanoiditestati sono presentati in Fig. 1 e, come si può vedere, sono tutti costruiti secondo uno schema simile, con le stesse/simili sottounità: idrossitirosolo, monosaccaridi (glucosio, ramnosio e/o xilosio) e idrossicinnamico acido. La maggior parte dei composti PPG esaminati sono sostituiti con acido caffeico, ma questo può essere sostituito con acido cumarico o ferulico. Oltre ai singoli composti PPG, nello studio biologico sono stati inclusi anche tre estratti di succiamele – OC, PA e PR, che sono miscele di diversi PPG e servivano in precedenza come materiale di partenza per l'isolamento dei composti. Un altro motivo per selezionare tre diverse specie è stata la grande differenza nel profilo fitochimico tra di loro, come si può vedere in Fig. 2. Un confronto più dettagliato degli estratti OC, PA e PR, inclusi i dati quantitativi, è presentato nella Tabella 1.Atteosidiera il costituente principale dell'estratto di O. Caryophyllaceae (690 mg/g), teniposide e arena inside dominato in P. Arenaria (insieme 550 mg/g), mentre il poliumoside e il suo derivato acetilato erano i metaboliti più importanti in P. ramosa estratto (insieme 640 mg/g). Gli estratti esaminati differivano anche per il contenuto complessivo di fenilpropanoidi, la quantità più alta è stata trovata in OC (810 mg/g), un po' più bassa in PR (795 mg/g) e più bassa in PA (685 mg/g). Inoltre, è degno di nota che la presenza di PPG con porzioni diverse dal caffeoile, come cummaroile o feruloile, è stata rilevata solo nell'estratto di P. ramosa, dove questi composti costituivano circa un sesto dei PPG totali (circa 120 mg/ g) (Tabella 1). Precedenti studi sull'attività antiradicalica dei glicosidi fenilpropanoidi di Heilmann et al. [19] e Jedrejek et al. [8], inclusi circa 30 diversi PPG comeacteoside, isoacteoside e crenatoside, hanno rivelato la sua forte relazione con la struttura dei gruppi acilici (acido fenolico e tirosolo). In generale, la modifica o la sostituzione della parte catecola dell'unità acilica ha comportato una significativa diminuzione dell'attività di scavenging contro le specie reattive dell'ossigeno (ROS) e il radicale DPPH. Nel presente studio, il potenziale antiradicalico in vitro di tre estratti di succiamele (OC, PA e PR) è stato esaminato con saggi ABTS e DPPH e i risultati sono stati confrontati sia tra loro che con l'attività dei singolifenilpropanoidecomponenti misurati nel nostro studio precedente [8]. I risultati sono stati espressi come valori Trolox equivalenti (TE) e IC50 (Tabella 2). In generale, tutti e tre gli estratti erano buoni spazzini sia dei radicali ABTS che DPPH, ma sono state osservate anche differenze tra i campioni testati (il TE stimato era compreso nell'intervallo 0.5–0.7; 1,0 era l'equivalente di Trolox). L'attività di scavenging antiradicalico dei campioni era nel seguente ordine: Trolox > OC > PA > PR. L'estratto di Orobanche Caryophyllaceae (IC50=155–275 µg/mL) ha avuto un'attività superiore di oltre il 20% rispetto all'estratto di Phelipanche ramosa (IC50=200–320 µg/mL). La più alta attività di scavenging dei radicali segnalata dell'estratto di OC può essere spiegata dal più alto contenuto di PPG in questo campione, nonché dall'input diacteoside, il suo ingrediente dominante, che secondo la ricerca precedente [8,19] è uno dei più potenti scavenger di radicali liberi tra i metaboliti di questo gruppo (TEDPPH=0.87; [4]). Tuttavia, considerando la relazione reciproca dell'attività antiradicale e il contenuto difenilpropanoidinegli estratti OC, PA e PR, non è stata trovata alcuna semplice correlazione tra questi due fattori (r <{0}}.5), indicando="" un="" input="" significativo="" del="" profilo="" qualitativo.="" questo="" è="" principalmente="" legato="">

Estratto di P. ramosa, che nonostante l'alto livello di PPG ({{0}}.8 g/g) era caratterizzato dall'attività biologica più bassa tra i campioni testati (TE ~ 0.5) . L'estratto di PR, come accennato in precedenza, era l'unico campione a possedere i fenilpropanoidi con acidi cumarico o ferulico, sostanze prive di una parte catecola dell'anello B, che è stato segnalato per avere un potenziale antiossidante ridotto. Quattro composti PPG con acido caffeico modificato, tra cui 3- O-metilpoliumoside, ramoside A e wiedemaannioside D, testati da noi in precedenza avevano un TEDPPH di circa 0,3 [8]. Pertanto, i risultati attuali sono in accordo e confermano i risultati dei precedenti esperimenti antiradicali in vitro sui fenilpropanoidi. Come Chen et al. [20] descritto, è associato a una maggiore capacità di donare H o stabilizzazione del radicale da parte di vari gruppi funzionali di una miscela di composti. Sono stati identificati diversi elementi strutturali che potenziano l'attività antiossidante diretta dei polifenoli, in particolare quelli associati al numero e alla posizione dei gruppi idrossilici. Si ritiene che l'attività di scavenging dei radicali liberi aumenti con l'aumento del numero di gruppi -OH. Tuttavia, la posizione di questi gruppi, in una molecola, ha un impatto ancora maggiore sull'attività esercitata. I composti potenti relativamente stabili sono quelli che possiedono la parte 3,{14}}diidrossi nelle loro strutture, così come quelli che possiedono più di due gruppi ossidrile [21]. La struttura chimica della sostanza antiossidante consente di comprendere il meccanismo di reazione antiossidante. Lopez-Munguía et al. [22] sulla base dei calcoli della teoria del funzionale della densità (DFT) hanno determinato che il meccanismo antiossidante dei PPG procede attraverso un trasferimento sequenziale di un singolo elettrone a perdita di protoni (SPLET). Tuttavia, Li et al. [23] tentando di esplorare i meccanismi degli antiossidanti fenolici fenilpropanoidi, hanno concluso che i PPG (acteosidi, forsitoside B e poliumoside) possono essere coinvolti in molteplici vie per esercitare l'azione antiossidante, rafforzando il ruolo dei residui di zucchero. Gli studi hanno dimostrato che gli antiossidanti di origine vegetale sono efficaci modulatori dell'emostasi nelle malattie cardiovascolari [24-26]. Varie piante utilizzate nella medicina tradizionale contengono livelli significativi di PPG [27,28]. Inoltre, è noto che i PPG hanno una gamma di biologici

attività, comprese le proprietà antinfiammatorie, antinefritiche e antiepatotossiche [29-33]. Nel loro recente studio, Jedrejek et al. [8] hanno descritto l'isolamento dei PPG da tre succiamele polacchi e hanno valutato la loro attività antiossidante mediante il test DPPH. Sulla base di ciò, il presente studio valuta se i dieci PPG selezionati isolati da queste piante potrebbero ridurre lo stress ossidativo nel plasma umano trattato con un forte ossidante biologico, ovvero il donatore di radicali ossidrile H2O2/Fe, e modulare le proprietà di coagulazione del plasma in vitro. Le proprietà antiossidanti di dieci

i PPG isolati sono stati determinati in base a parametri selezionati di stress ossidativo: il livello di TBARS come marker di perossidazione lipidica, insieme ai livelli di gruppo carbonile e tiolo, come marker di danno ossidativo alle proteine. Sia la perossidazione lipidica plasmatica che i livelli di carbonilazione proteica nel plasma indotti da H2O2/Fe sono stati significativamente ridotti in presenza di otto composti testati, vale a dire. acteoside, crenatoside, 2'-O-acety lacteoside, pheliposide, arena inside, tubuloside A, poliumoside e 3- O-metilpolimuoside, a tutte le concentrazioni testate (1, 5 e 50 µg/ml); tuttavia, nessuno dei due effetti è stato osservato per due dei composti testati, vale a dire. 2′-O-acetilpoliumoside e wiedemaannioside D, o uno qualsiasi degli estratti testati a qualsiasi concentrazione (1, 5 e 50 µg/mL). Inoltre, nessuno dei composti testati o degli estratti testati è risultato in grado di proteggere il plasma dall'ossidazione del gruppo tiolo indotta da H2O2/Fe nelle proteine ​​(Figg. 3–5). Tuttavia, gli estratti testati possono essere la fonte di composti con diverse proprietà biologiche. Per la prima volta, i risultati del presente studio indicano che otto dei PPG testati dimostrano un potenziale antiossidante nel plasma umano in presenza di specie esogene reattive dell'ossigeno inibendo la perossidazione lipidica e la carbonilazione proteica nel plasma trattato con H2O2/Fe. Inoltre, il 2'-O-acetilpoliumoside e il wiedemaannioside D non hanno presentato alcun effetto del genere. In generale, i nostri risultati sono coerenti con i precedenti esperimenti in vitro sui PPG. Heilmann et al. [19] e Jedrejek et al. [8] riportano una correlazione tra la struttura chimica dei PPG e le loro attività. Le proprietà antiossidanti dei PPG sembrano essere principalmente legate alla struttura dei loro gruppi acilici, cioè l'acido fenolico efenilpropanoideunità, compresa la presenza e/o la modifica della parte catecola. Ad esempio, è stato riscontrato che il wiedemannioside D perde il suo potenziale antiossidante nei confronti del plasma trattato con H2O2/Fe in seguito alla sostituzione della sua parte caffeoile con una parte feruloile. I cambiamenti nel processo di coagulazione spesso derivano da stress ossidativo; questi cambiamenti possono modulare le funzioni del sistema cardiovascolare e possono portare allo sviluppo di malattie cardiovascolari [1]. Dei dieci composti vegetali e tre estratti vegetali testati nel presente studio, tubuloside, poliumoside e 3- O-metilpoliumoside e tutti gli estratti testati hanno dimostrato di prolungare significativamente il tempo di trombina a tutte le concentrazioni testate, vale a dire. 1, 5 e 50 µ g/mL (Fig. 6B). Tuttavia, nessuno di questi estratti, né nessuno dei composti testati, ha modificato PT o APTT (Fig. 6A e C). La tabella 3 confronta gli effetti dei PPG (5 µg/mL) sui biomarcatori dello stress ossidativo nel plasma trattato con H2O2/Fe e la loro influenza sulla coagulazione. Otto dei PPG testati hanno dimostrato un potenziale antiossidante solo nel plasma umano trattato; tuttavia, è stato riscontrato che tre PPG testati possiedono sia proprietà antiossidanti che potenziale anticoagulante. È interessante notare che i risultati del test DPPH non coincidono con quelli ottenuti nel modello biologico utilizzando plasma umano trattato con H2O2/Fe: il potenziale antiossidante degli estratti testati può essere bloccato da alcuni composti presenti nel plasma. In conclusione, i nostri risultati attuali gettano nuova luce sul potenziale antiossidante e sulle proprietà anticoagulanti dei PPG. Sembra che la struttura dei PPG, in particolare la presenza di gruppi acilici e catecolici, sia principalmente correlata alle loro proprietà antiossidanti e anticoagulanti. PPG selezionati potrebbero avere il potenziale per il trattamento di malattie cardiovascolari associate allo stress ossidativo. Tuttavia, sono necessari ulteriori esperimenti per determinare le concentrazioni di questi composti necessari per i modelli in vivo.

Dichiarazione di conflitto di interessi

Gli autori dichiarano di non avere conosciuto concorrenti finanziari

interessi o relazioni personali che avrebbero potuto sembrare influenzare

il lavoro riportato in questo lavoro.

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