PARTE 2 Antiossidazione e citoprotezione di acteoside e suoi derivati: confronto e chimica meccanicistica
Mar 08, 2022
Parte 2 In che modo l'antiossidante Cistanche Acteoside protegge le cellule?
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3. Discussione
È noto che l'azione antiossidante dei composti fenolici naturali è coinvolta nel trasferimento di elettroni (ET) [18,19]. Pertanto, alcuni test di riduzione dei metalli basati su ET sono stati ampiamente utilizzati per valutare i livelli di antiossidanti di fenoli, come i test FRAP e CUPRAC. Le linee guida per il dosaggio FRAP devono essere soddisfatte con un pH inferiore a 3,6. Un tale ambiente acido ha soppresso con successo la ionizzazione H plus dai fenoli; quindi, il test FRAP è considerato un semplice processo ET [20,21]. L'efficacia diacteosidee i suoi derivati nel test FRAP implicano che, quando l'acteoside ei suoi derivati agiscono come antiossidanti, possono utilizzare la via ET per esercitare la loro azione antiossidante.
Inoltre, abbiamo anche eseguito un test CUPRAC in un tampone a pH 7,4. Come si vede in Suppl. 1,acteosidee i suoi derivati aumentavano in modo dose-dipendente il loro Cu2 più-percentuali di potere riducente, indicando che potrebbero rimanere potenziali ET a pH fisiologico. Tuttavia, i loro potenziali ET sono diminuiti nel seguente ordine:acteoside> forsitoside B > poliumoside (Tabella 1). Questa dinamica suggerisce chiaramente che la parte apiosile nel forsitoside B e la parte ramnosile nel poliumoside hanno abbassato il potenziale ET.
Per testare la possibilità che ET si verifichi durante i loro processi di scavenging dei radicali, nello studio è stato introdotto un PTIO・ di radicali liberi centrati sull'ossigeno. L'evidenza della voltammetria ciclica ha rivelato che il PTIO・-scavenging al di sotto di pH 5.0 è una singola reazione elettrone-redox. L'osservazione cheacteosidee i suoi derivati potrebbero eliminare efficacemente il radicale PTIO・ a pH 4,5, suggerisce la possibilità di ET durante i loro processi di rimozione dei radicali. Ovviamente, questa scoperta supporta ulteriormente i suddetti risultati dei saggi FRAP e CUPRAC e risultati precedenti secondo cui un elettrone donatore (e) è una caratteristica degli antiossidanti fenolici [23].
A pH fisiologico 7,4, tuttavia, il saggio PTIO・-scavenging non è solo un percorso ET, ma include anche un percorso di trasferimento di protoni (H plus). Durante il processo, è stato suggerito a PTIO・ di accettare Hpiùdai fenolici per produrre il picco del prodotto ([PTIO-H]più). Perché Hpiù-il trasferimento è sempre accompagnato da ET in meccanismi graduali o sincroni [24], il prodotto realistico (o finale) è una molecola [PTIO-H] [22]. Il PTIO・-scavenging a pH 7,4 (Suppl. 1) lo implicaacteosidee anche i suoi derivati possiedono un potenziale di trasferimento H plus. I valori IC50 (Tabella 1) indicavano che il relativo Hpiù-i potenziali di trasferimento erano in ordine decrescente diacteoside>forsitoside B > poliumoside. Chiaramente, le frazioni apiosyl e rhamnosyl hanno anche indebolito l'Hpiù-potenziale di trasferimento durante il processo antiossidante.
Come discusso in precedenza, durante il processo antiossidante dei fenoli, ET è solitamente accompagnato da protone (Hpiù) trasferimento per formare diversi meccanismi antiossidanti [24], come il trasferimento di atomi di idrogeno (HAT) [23,25-27], il trasferimento sequenziale di elettroni-protoni (SEPT) [26,27], la perdita sequenziale di protoni a singolo elettrone trasferimento (SPLET) [26] e trasferimento di elettroni accoppiati a protoni (PCET) [24-26,28]. Ad esempio, è stato recentemente dimostrato che anche ABTS plus • -scavenging, una reazione dominata dal trasferimento di un singolo elettrone (SET) [29], è influenzata dai livelli di H plus [30]. ABTS plus • -scavenging è quindi un test antiossidante basato su più percorsi [21,31]. Il fatto cheacteosidee i suoi derivati potrebbero spazzare via i radicali ABTS più ・ indica che la loro azione antiossidante può anche essere mediata attraverso percorsi multipli. Questa ipotesi è ulteriormente confermata dalle prove del test DPPH・-scavenging, una reazione che comprende percorsi multipli HAT, ET, SEPT e PCET [26,32]. Tuttavia, l'analisi quantitativa basata su IC50valori (Tabella 1) hanno rivelato che negli aspetti ABTS basati su più percorsi più --scavenging e DPPH*-scavenging,acteosideera superiore al suo apposito forsythoside B e rhamnoside poliumoside. Pertanto, si può dedurre che le frazioni apiol e rhamnosyl alla fine ostacolano i potenziali a più vie (in particolare ET e Hpiù-transfer) durante il processo di scavenging dei radicali liberi.
Come notato dagli autori e da altri [14,26], durante il processo antiossidante può verificarsi anche una reazione RAF. Per verificare la possibilità di RAF, tuttavia, sono stati studiati tre glicosidi fenilpropanoidi insieme all'acido caffeico utilizzando l'analisi UPLC-ESI-Q—TOF-MS/MS. Si è scoperto che l'acido caffeico produce un prodotto dimero, mentre tre glicosidi fenilpropanoidi non hanno prodotto alcun picco di prodotto RAF. Questa scoperta suggerisce chiaramente che tre glicosidi fenilpropanoidi non possono subire la via RAF per esercitare la loro azione antiossidante. Poiché tre glicosidi fenilpropanoidi possono essere considerati esteri dell'acido caffeico (Figura 1), una tale differenza tra l'acido caffeico e gli esteri dell'acido caffeico indica anche che un'enorme porzione può ostacolare la generazione di RAF.
Presi insieme, da un aspetto di scavenging dei radicali liberi,acteosidee i suoi derivati possono subire molteplici vie per esercitare la loro azione antiossidante. Questi percorsi antiossidanti almeno sono coinvolti in ET e H plus -transfer (ma non RAF). I nostri risultati sono in parte supportati dallo studio teorico cheacteosidepotrebbe esercitare un'azione antiossidante attraverso la via SPLET. Nel processo, l'acteoside potrebbe in primo luogo deprotonare (Hpiù-trasferimento) per produrre anione. Si pensa che la deprotonazione avvenga nelle frazioni catecoliche con debole acidità. Successivamente, l'anione ha donato elettroni per dare origine alla forma radicale fenossi [33]. Tuttavia, i radicali fenossi con coniugazione pn sono stabili in una certa misura. Naturalmente, a questo proposito, in futuro sono necessari ulteriori lavori sperimentali.
Vale la pena ricordare che lo stress ossidativo cellulare può provenire anche dai metalli di transizione (soprattutto Fe2 più). La Fe2 piùione, tuttavia, può trasformare H2O2molecola in radicali •OH più dannosi attraverso la reazione di Fenton (Fe2più più H2O2 T Fe3più più ・OH più OH-). Pertanto, l'attenuazione di Fe2più livelli possono inibire efficacemente i radicali ・OH per rilasciare lo stress ossidativo cellulare. In effetti, il chelante del ferro da parte degli antiossidanti fenolici naturali ora è stato sviluppato in una terapia efficace per alcune malattie da stress ossidativo [34,35].
Nel presente studio, acteoside e suoi derivati sono stati suggeriti come Fe efficaci2 più-chelanti dai cambiamenti nella spettroscopia e nei colori della soluzione (Figura 2). Tuttavia, l'acteoside è inferiore ai due glucosidi nella chelazione del Fe2 piùe il forsitoside B con frazione apiosile è inferiore al poliumoside con frazione ramnosile. Sulla base del confronto delle loro conformazioni preferenziali (Figura 1, a destra), si propone che la parte apiosile (o ramnosile) possa aiutare il ligando principale (gruppo fenilpropanoide) nella chelazione del Fe2 più. Un tale effetto sinergico rafforza indubbiamente il Fe2 più-capacità chelante e allarga i picchi UV-vis. Tuttavia, il rhamnosyl è più efficace dell'apiosyl nel suo Fe2 più-capacità chelante. La differenza può essere attribuita al fatto che il rhamnosyl si presenta in una forma esociclica (cioè, al-rhamnopyranosyl), mentre l'apiosyl è in una forma pentaciclica (cioè, pD-apiofuransyl). Una forma esociclica è nota per essere più grande e più stabile. Quindi, il ramnosile esociclico è più efficace rispetto all'apiosile pentaciclico nel suo Fe2 più-capacità chelante.
Per verificare se l'acteoside e i suoi derivati possono eliminare i ROS, abbiamo condotto un test di autoossidazione del pirogallolo. Come si vede in Suppl. 1, tutti potrebbero eliminare efficacemente il — radicale, un tipico ROS che si trova nelle cellule. Tuttavia, la bioattività relativa è diminuita nell'ordine poliumoside > forsytoside B >acteoside. Questo ordine è anche parallelo a quello degli effetti citoprotettivi (Tabella 2). Questa scoperta indica che l'effetto generale della parte rhamnosyl o della parte apiosyl è quello di migliorare gli effetti di scavenging o citoprotettivi dei ROS.
4. Materiali e metodi
4.1. Prodotti chimici e animali
Acteoside (numero CAS: 61276-17-3, 97 percento), forsitoside B (numero CAS: 81525-13-5, 97 percento) sono stati ottenuti da BioBioPha (Kunming, Cina, Suppl. 3). Il poliumoside (numero CAS: 94079-81-9, 97 percento) è stato isolato dal nostro team dall'erba tradizionale cineseCallicarpa periHT Chang (Suppl. 3). L'acido carbossilico DPPH・,(±)-6-idrossile-2,5,7,{5}}tetrametilcromano{6}}(Trolox), 2,9-dimetil{{ 9}},10-fenantrolina (neocuproina), 2,4,{13}}tripyridiltriazina (TPTZ) e pirogallolo sono stati acquistati da Sigma-Aldrich Shanghai Trading Co. (Shanghai, Cina). (NHq'ABTS [2,2'-azino-bis (3-etilbenzene-tiazolino-6-sale diammonio dell'acido solfonico)] è stato ottenuto da Amresco Chemical Co. (Solon, OH, USA). PTIO・il radicale è stato acquistato da TCI Development Co., Ltd. (Shanghai, Cina).L'acido caffeico è stato acquistato dall'Istituto nazionale per il controllo dei prodotti farmaceutici e biologici (Pechino, Cina).Mezzo d'aquila modificato di Dulbecco (DMEM), siero bovino fetale (FBS) e tripsina sono stati acquistati da Gibco (Grand Island, NY, USA).Il kit di analisi AnnexinV/propidium ioduro (PI) è stato acquistato da Invitrogen (Carlsbad, CA, USA).Tutti gli altri reagenti erano di grado analitico.
Ratti Sprague-Dawley (SD) di 4 settimane di età sono stati ottenuti dall'Animal Center dell'Università di Medicina Cinese di Guangzhou. Il protocollo di questo esperimento è stato eseguito sotto la supervisione del Comitato istituzionale per l'etica degli animali dell'Università cinese di Guangzhou (numero di approvazione 20170306A).
4.2. Saggi di riduzione dei metalli (FRAP& CUPRAC)
I test di riduzione dei metalli includono il Fe3 più-test del potere riducente e Cu2 più-test del potere riducente. La Fe3 più-il saggio di riduzione è stato stabilito da Benzie e Strain ed è formalmente chiamato FRAP [20]. Il protocollo sperimentale di questo test è stato descritto in un precedente rapporto [9]. In breve, il reagente FRAP è stato preparato di fresco mescolando TPTZ 10 mM, FeCl 20 mM3,e {{0}}.25 M tampone acetato in un rapporto di 1:1:10 a pH 3,6. Il campione di prova (x=4-20 L, 0,05 mg/mL) è stato aggiunto a (20 — x) di etanolo al 95% seguito da 80 RL di reagente FRAP. Dopo un 30-min di incubazione a temperatura ambiente, l'assorbanza è stata misurata a 595 nm utilizzando un lettore di micropiastre (Multiskan FC, Thermo Scientific, Shanghai, Cina). Il potere riducente relativo del campione è stato calcolato utilizzando la seguente formula:
dove unmaxera l'assorbanza massima della miscela di reazione con il campione e Aminè l'assorbanza minima nel test. A è l'assorbanza del campione.
Cu2 più-il potere riducente può anche caratterizzare il livello di antiossidante e per questo è chiamato CUPRAC. Questo test è stato eseguito secondo un metodo precedentemente pubblicato [36]. In breve, 12 RL di soluzione acquosa di CuSOq (10 mmol/L), 12 RL di soluzione etanolica di neocuproina (7,5 mmol/L) e (75 — x) RL di CH3COONH4la soluzione tampone ({{0}},1 mol/L, pH 7,5) è stata aggiunta a pozzetti con diversi volumi di campione (0,05 mg/mL, 4-20 |^L). L'assorbanza a 450 nm dopo 30 minuti è stata misurata utilizzando il suddetto lettore di micropiastre. La relativa potenza CUPRAC è stata calcolata utilizzando la formula per FRAP. UNmaxera l'assorbanza massima della miscela di reazione con il campione e Aminè l'assorbanza minima nel test. A è l'assorbanza del campione.
4.3. PTI0・-Saggio di scavenging
I test PTIO*-scavenging (a pH 4,5 o pH 7,4) sono stati condotti sulla base del nostro metodo [16]. In breve, la soluzione del campione di prova (x=0-20 ^L, 1 mg/mL per pH 4,5 e {{10}},5 mg/mL per pH 7,4) è stata aggiunta a (20 — x) rL di etanolo al 95%, seguito da 80 RL di una soluzione acquosa di PTIO*. La soluzione acquosa di PTIO* è stata preparata utilizzando una soluzione di burro fosfato (0,1 mM, pH 4,5 o pH 7,4). La miscela è stata mantenuta a 37 gradi per 2 ore e l'assorbanza è stata quindi misurata a 560 nm utilizzando il suddetto lettore di micropiastre. La percentuale di inibizione del PTIO* è stata calcolata come segue:
dove A è l'assorbanza del controllo senza il campione e A è l'assorbanza della miscela di reazione con il campione.
4.4. ABTSpiù*- Scavenging e DPPH*-Saggi di scavenging
L'ABTS*più-l'attività di scavenging è stata valutata secondo il metodo [37]. L'ABTS plus * è stato prodotto miscelando 0,2 mL di sale di diammonio ABTS (7,4 mmol/L) con 0,2 mL di persolfato di potassio (2,6 mmol/L). La miscela è stata tenuta al buio a temperatura ambiente per 12 h per consentire il completamento della generazione di radicali prima di essere diluita con acqua distillata (in un rapporto di circa 1:20) in modo che la sua assorbanza a 734 nm fosse { {16}}.35 土 0.01 utilizzando il suddetto lettore di micropiastre. Per determinare l'attività di scavenging, il campione di prova (x=4-20 RL, 0,05 mg/mL) è stato aggiunto a (20 — x) RL di acqua distillata seguito da 80 RL di reagente ABTS plus * e l'assorbanza a 734 nm è stato misurato 3 minuti dopo la miscelazione iniziale, utilizzando acqua distillata come bianco.
L'attività di scavenging dei radicali DPPH* è stata determinata come descritto in precedenza [18]. In breve, 75 RL di soluzione di DPPH* (0.1 rM) sono stati miscelati con le concentrazioni indicate del campione (0.025 mg/mL, 5-25 RL) sciolto in metanolo. La miscela è stata mantenuta a temperatura ambiente per 30 minuti e l'assorbanza è stata misurata a 519 nm utilizzando il suddetto lettore di micropiastre.
Le percentuali di ABTS più •-attività di scavenging e DPPH*-attività di scavenging sono state calcolate in base alla formula presentata nella Sezione 4.3.
4.5. UPLC—ESI—Q-TOF—Analisi MS/MS di PPH* Prodotti di reazione
Questo metodo era basato sul nostro studio precedente [25]. La soluzione metanolo di acteoside è stata miscelata con una soluzione di radicali DPPH* in metanolo in un rapporto molare di 1:2 e la miscela risultante è stata incubata per 24 ore a temperatura ambiente. La miscela del prodotto è stata quindi filtrata attraverso un filtro 0.{5}}Rm e analizzata utilizzando un sistema UPLC dotato di una colonna C18 (2.0 mm id x 100 mm, 1,6 Rm, Phenomenex, Torrance, CA, USA). La fase mobile è stata utilizzata per l'eluizione del sistema ed è costituita da una miscela di metanolo (fase A) e acqua (fase B). La colonna è stata eluita a una portata di 0,3 mL/min con il seguente programma di eluizione a gradiente: 0-10 min, 60-100 percentuale A; 10-15 min, 100 percento A. Il volume di iniezione del campione è stato impostato a 1 RL per la separazione dei diversi componenti. L'analisi ESI-Q-TOF-MS/MS è stata eseguita utilizzando un Triple TOF 5600piùSpettrometro di massa (AB SCIEX, Framingham, MA, USA) dotato di una sorgente ESI, che è stata eseguita in modalità di ionizzazione negativa. L'intervallo di scansione è stato impostato su 100-2000 Da. Il sistema è stato eseguito con i seguenti parametri: tensione di spruzzatura ionica, —4500 V; riscaldatore a sorgente ionica, 550 gradi C; gas per tende (CUR, N2), 30 psi; gas di nebulizzazione (GS1, aria), 50 psi; È gas (GS2, aria), 50 psi. Il potenziale di declustering (DP) è stato fissato a -100 V, mentre l'energia di collisione (CE) è stata fissata a -40 V con una dispersione dell'energia di collisione (CES) di 20 V. I prodotti RAF
sono stati quantificati estraendo la corrispondente formula molecolare dal cromatogramma ionico totale (Suppl. 2).
L'esperimento di cui sopra è stato ripetuto usando il forsitoside B, il lato del podio e l'acido caffeico. Il corrispondentem/zi picchi sono stati estratti dalla corrispondente formula molecolare dal cromatogramma ionico totale (Suppl. 2).
4.6. Analisi degli spettri UV-Vis del Fe2 più-Prodotti chelanti
La Fe2 più-prodotti di reazione chelanti dell'acteoside-Fe2 piùsono stati valutati utilizzando la spettroscopia UV-Vis [13]. Per l'esperimento, è stato aggiunto 300 di una soluzione metanolica di acteoside (0,24 mM) a 700 rL di una soluzione acquosa di FeCl? 4H2O (168 mM). La soluzione è stata quindi miscelata energicamente. Successivamente, la miscela risultante è stata scansionata utilizzando uno spettrofotometro UV-Vis dopo un'ora (Unico 2600A, Shanghai, Cina) da 200-850 nm.
L'esperimento di cui sopra è stato ripetuto utilizzando il forsitoside B, o lato del podio, invece dell'acteoside.
4.7. Test di autoossidazione del pirogallolo per l'anione superossido (•O2~) Scavenging
La misurazione dell'attività di scavenging dell'anione superossido (・.{0}}) era basata sul nostro metodo [17]. In breve, il campione è stato sciolto in etanolo a 1 mg/mL. La soluzione del campione (x rL) è stata miscelata con tampone Tris-HCl (980 — x rL, 0,05 M, pH 7,4) contenente EDTA (1 mM). Quando sono stati aggiunti 20 RL di pirogallolo (60 mM in 1 mM HCl), la miscela è stata agitata immediatamente a temperatura ambiente. L'assorbanza a 325 nm della miscela è stata misurata (Unico 2100, Shanghai, Cina) rispetto al tampone Tris-HCl come bianco ogni 30 s per 5 minuti. La — capacità di scavenging è stata calcolata come segue:
4.8. Effetto citoprotettivo verso bmMSC stressati ossidativamente (test MTT)
Le bmMSC sono state coltivate secondo i nostri precedenti rapporti [38] con lievi modifiche. In breve, il midollo osseo è stato ottenuto dal femore e dalla tibia di un ratto. I campioni di midollo sono stati diluiti con DMEM (basso livello di glucosio) contenente l'10 percento di FBS. I bmMSC sono stati preparati mediante centrifugazione in gradiente a 900 g per 30 minuti a 1,073 g/mL Percoll. Le cellule preparate sono state staccate mediante trattamento con 0,25% di tripsina e passate in flaconi di coltura a 1 x 104/cm2. I bmMSC al passaggio 3 sono stati valutati per l'omogeneità delle cellule in coltura utilizzando il rilevamento di CD44 utilizzando il test MTT [39].
Il test MTT è stato utilizzato per valutare l'effetto citoprotettivo dell'acteoside e dei suoi derivati nei confronti delle bmMSC [40]. Il modello di lesione è stato stabilito sulla base dello studio precedente [41]. Il protocollo sperimentale è brevemente illustrato nella Figura 3.
4.9. Analisi statistica
Ciascun esperimento nelle sezioni 4.2-4.4 e 4.7 è stato eseguito in triplicato e l'esperimento del test MTT è stato eseguito in pentaplicato. I dati sono stati registrati come media土SD (deviazione standard). Le curve dose-risposta sono state tracciate utilizzando il software professionale Origin 6.0 (OriginLab, Northampton, MA, USA). Il valore IC50 è stato definito come la concentrazione finale del 50 percento di inibizione dei radicali (potere riducente relativo) [42]. I confronti statistici sono stati effettuati da ANOVA unidirezionale per rilevare differenze significative utilizzando SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) per Windows.p< 0.05 è stato considerato statisticamente significativo.
5. Conclusioni
Tre glicosidi fenilpropanoidi naturali, vale a dire, acteoside, forsytoside B e lato del podio, possono essere coinvolti in molteplici percorsi per esercitare un'azione antiossidante, tra cui ET, H plus -transfer; e Fe2 più-chelante, ma non RAF. L'ET e Hpiù-le vie di trasferimento possono essere ostacolate dalla parte ramnosile o dalla parte apiosile; tuttavia, il Fe2 più-la via chelante può essere potenziata dai residui di zucchero (soprattutto dalla frazione ramnosile). L'effetto generale della parte rhamnosyl o della parte apiosyl è quello di migliorare la capacità di scavenging dei ROS coinvolti in percorsi multipli. Pertanto, il forsitoside B e il poliumoside sono superiori all'acteoside negli effetti citoprotettivi.
Materiali supplementari:I materiali supplementari sono disponibili online. 1. Curve dose-risposta; 2. Spettri HPLC-MS; 3. Certificati di analisi di acteoside, forsytoside B e poliumoside.
Ringraziamenti:Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Science Foundation of China (81573558, 81603269), dal Guangdong Science and Technology Project (2017A050506043) e dalla Natural Science Foundation of the Guangdong Province (2 017A030312009, 2015A030310491).
Contributi dell'autore:Xian Li e Dongfeng Chen hanno concepito e progettato gli esperimenti; Aichi Wu ha preparato il poliumoside; Yulu Xie, Qian Guo e Penghui Xue hanno eseguito gli esperimenti sugli antiossidanti; Ke Li e Wei Zhao hanno eseguito gli esperimenti MTT; Hong Xie ha analizzato i dati; Jiasong Guo ha condotto l'esperimento di Figura 2D; Xian Li ha scritto il giornale. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
Conflitto di interessi:Gli autori dichiarano assenza di conflitto di interesse.
acteosideincistance
A abbreviazioni
ABTS plus • radicale 2,2'-azino-bis (3-etilbenzo-tiazolino-6-acido solfonico)
bmMSCs cellule staminali mesenchimali derivate dal midollo osseo
CUPRAC rameico riduce la capacità antiossidante
Radicale dAMP 2'-deossiadenosina-5'-monofosfato
DMEM Mezzo di Eagle modificato da Dulbecco
dGMP 2/-deossiguanosina-5'-radicale monofosfato
DPPHe 1,1-difenil-2-radicale picril-idrazina
trasferimento di elettroni ET; FBS: siero fetale bovino
FRAP ione ferrico riducente il potere antiossidante;
Trasferimento di atomi di idrogeno HAT
MTT 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenile
Trasferimento di elettroni accoppiato a protoni PCET
PTIOe 2-fenile-4,4,5,5-tetrametilimidazolina-1-ossile 3-ossido radicale
Formazione di addotti radicali RAF
Specie reattive dell'ossigeno ROS
Trasferimento nucleare di cellule somatiche SCNT
Trasferimento sequenziale elettrone-protone SEPT
SPLET trasferimento sequenziale di un singolo elettrone a perdita di protoni
TPTZ 2,4,6-tripiridil triazina
Trolox (±)-6-idrossile-2,5,7,{4}}tetrametlicromano{5}}acido carbossilico
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Disponibilità del campione: un campione del composto poliumoside è disponibile presso gli autori.
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