PARTE 2 L'echinacoside inibisce il rilascio di glutammato sopprimendo l'ingresso di Ca2 dipendente dalla tensione e la proteina chinasi C nei terminali nervosi cerebrocorticali di ratto

Per maggiori informazioni si prega di contattare:Joanna.jia@wecistanche.com

CLICCA QUI ALLA PARTE 1

3. Discussione

In questo studio, l'echinacoside, un composto attivo inHerba Cistanche, inibiva4-il rilascio di glutammato evocato dall'aminopiridina nei terminali nervosi della corteccia cerebrale di ratto. I possibili meccanismi alla base dell'inibizione mediata da echinacoside del rilascio di glutammato sono ulteriormente studiati e discussi qui.

Cistanche deserticola ha molti effetti, clicca qui per saperne di più

3.1. Meccanismi alla base dell'inibizione del rilascio di glutammato mediata da echinacoside

evocato da 4-aminopiridina comprende due componenti: un componente Ca2 più-dipendente fisiologicamente rilevante, che viene prodotto attraverso l'esocitosi di vescicole sinaptiche contenenti glutammato; e un componente indipendente dal Ca2 più, che ha origine da una prolungata depolarizzazione che causa uno spostamento mediato dal potenziale di membrana dello stato stazionario del trasportatore del glutammato verso l'esterno, influenzando così l'efflusso di glutammato citosolico [31]. Ecco, lo abbiamo osservatoechinacosidenon ha inibito significativamente 4-il rilascio di glutammato evocato dall'aminopiridina in presenza di un mezzo privo di Ca2 plus (rilascio indipendente di Ca2 plus). Inoltre, l'osservatoechinacoside-l'inibizione mediata del 4-rilascio di glutammato evocato dall'aminopiridina è stata efficacemente prevenuta dalla bafilomicina A1 (che esaurisce il contenuto di glutammato delle vescicole sinaptiche), ma non dal DL-TBOA (che inibisce in modo non selettivo tutti i sottotipi di trasportatori di amminoacidi eccitatori). Questi risultati lo suggerisconoechinacosidecolpisce l'esocitosi Ca2 plus -dipendente del rilascio di glutammato senza influenzare l'efflusso citosolico Ca2 plus -indipendente di glutammato attraverso l'inversione del trasportatore del glutammato della membrana plasmatica del nervo terminale. Nei terminali sinaptici, l'inibizione del canale Na più o l'attivazione del canale K più stabilizza l'eccitabilità della membrana e di conseguenza riduce l'ingresso di Ca2 più evocato e il rilascio di neurotrasmettitori [32,33]. Pertanto, il potenziale meccanismo sottostanteechinacoside-l'inibizione del rilascio di glutammato mediata comporta una riduzione dell'eccitabilità sinaptosomiale. Tuttavia, questa possibilità è insostenibile sulla base di due osservazioni: (1) 4-la depolarizzazione del potenziale di membrana evocata dall'aminopiridina, misurata con il colorante sensibile al potenziale di membrana DiSC3(5) non è stata influenzata dall'aggiunta diechinacoside; e (2) l'echinacoside non ha influenzato il 4-rilascio di glutammato Ca2 più-indipendente evocato dall'aminopiridina, un componente del rilascio che dipende solo dal potenziale di membrana [31]. Se l'effetto non è causato dalla soppressione dell'eccitabilità sinaptosomiale, può manifestarsi attraverso una riduzione dell'attività dei canali Ca2.2 (tipo N) e Cav2.1 (tipo P/Q) Ca2 plus accoppiata con esocitosi del glutammato nel terminali nervosi [34–36]. Usando fura-2, lo dimostriamoechinacosideriduce significativamente l'4-aumento della concentrazione di Ca2 più evocato dall'aminopiridina. Inoltre, i nostri dati mostrano che l'effetto inibitorio diechinacosideon 4-il rilascio di glutammato evocato dall'aminopiridina è diminuito dal 42,4% ˘ 2,3% al 12,1% ˘ 3,9% dopo l'esposizione a un bloccante di Cav2.2 (tipo N) e Cav2.1 (tipo P/Q) Ca2 più canali. Inoltre, lo abbiamo osservatoechinacosideha continuato a inibire significativamente 4-il rilascio di glutammato evocato dall'aminopiridina in presenza di Ca2 più inibitori del rilascio intracellulare. Questi risultati indicano che la soppressione simultanea di Cav2.2 (tipo N) e Cav2.1 (tipo P/Q) Ca2 più l'attività del canale è il potenziale meccanismo alla baseechinacoside-inibizione del rilascio di glutammato mediata. Tuttavia, l'attivazione combinata di Cav2.2 (tipo N) e Cav2.1 (tipo P/Q) più l'attività del canale non ha potuto bloccare l'azione diechinacosidecompletamente. Quindi, altri tipi non identificati di canali Ca2 plus o altre vie presinaptiche possono essere coinvolti nell'inibizione. Ad esempio, i recettori GABAA sono presenti a livello presinaptico e la loro attivazione ha dimostrato di inibire l'afflusso di Ca2 più e il rilascio di glutammato [37]. Nel presente studio, gli antagonisti del recettore GABAA SR95531 e la bicucullina non hanno bloccato l'inibizione del rilascio di glutammato mediata da echinacoside, suggerendo che i recettori GABAA non sono coinvolti nella riduzione dell'attività del canale Ca2 più voltaggio-dipendente e nella successiva inibizione del rilascio di glutammato.

L'ingresso di Ca2 più attraverso i canali Ca2 più voltaggio-dipendenti attiva diverse protein chinasi associate al rilascio di glutammato nelle terminazioni nervose tra cui la protein chinasi attivata dal mitogeno, la protein chinasi C e la protein chinasi A. Qui, dimostriamo che gli inibitori della protein chinasi C hanno antagonizzato efficacemente ilechinacoside-inibizione mediata del rilascio di glutammato; tuttavia, l'inibitore della proteina chinasi attivata dal mitogeno PD98059 o l'inibitore della proteina chinasi A H89 erano inefficaci. Inoltre, quello. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 di 13 4-la fosforilazione della proteina chinasi C indotta dall'aminopiridina è diminuita nei sinaptosomi dopo il pretrattamento conechinacosidead una concentrazione efficace per inibire il rilascio di glutammato. Pertanto, la via di segnalazione delechinacoside-l'inibizione mediata del rilascio di glutammato può coinvolgere la proteina chinasi C. La proteina chinasi C è un importante sistema di segnalazione intracellulare che è presente a livello presinaptico e ha un ruolo cruciale nell'esocitosi dei neurotrasmettitori. Ad esempio, diverse proteine ​​sinaptiche coinvolte nel traffico o reclutamento delle vescicole sinaptiche e nell'esocitosi, come il substrato della chinasi C miristoilato ricco di alanina, sono fosforilate dalla protein chinasi C [38,39]. Questo processo di fosforilazione può essere aumentato dall'ingresso di Ca2 più stimolato dalla depolarizzazione, che facilita il rilascio di glutammato [40]. Quindi, possiamo ragionevolmente ipotizzare che l'effetto inibitorio diechinacosidesulla voce Ca2 più qui osservata può ridurre l'attività della proteina chinasi C e di conseguenza il rilascio di glutammato.

3.2. Implicazioni terapeutiche

L'eccitotossicità, un processo patologico causato dall'eccessivo rilascio di glutammato e dall'attivazione del recettore del glutammato, è la principale causa di morte neuronale nei disturbi cerebrali acuti e cronici come ictus, lesioni cerebrali traumatiche, morbo di Parkinson e Alzheimer [13,41] e strategie terapeutiche che coinvolgono l'inibizione del rilascio di glutammato possono essere promettenti strategie neuroprotettive per il trattamento di tali malattie.Echinacosideè stato confermato che penetra la barriera ematoencefalica (BBB) ​​e mostra effetti neuroprotettivi in ​​vari modelli di neurotossicità in vivo [8,10–12,42]. Sebbene il meccanismo di questi effetti neuroprotettivi non sia completamente compreso, sono stati segnalati diversi possibili meccanismi tra cui l'inibizione della risposta infiammatoria, la stabilizzazione della funzione mitocondriale, l'antiossidazione, lo scavenging dei radicali liberi e l'imitazione della funzione neurotrofica [5,9,12,42]. Nel presente studio, la capacità dell'echinacoside di ridurre il rilascio di glutammato dai terminali nervosi può anche spiegare in parte il suo meccanismo neuroprotettivo. Tuttavia, se questo effetto contribuisce all'apparente potenziale terapeutico dell'echinacoside nei disturbi cerebrali associati all'eccitotossicità del glutammato merita ulteriori ricerche.

4. Materiali e metodi

4.1. Sostanze chimiche

Fura-2-acetossimetil estere (Fura-2-AM) e 3',3',3'-dipropiltiadicarbocianina ioduro [DiSC3(5)] sono stati acquistati da Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). ω-conotossina MVIIC, rottler,2-[1-(3-dimetilamminopropil)indolo-3-il]-3-(indolo-3-il) maleimmide ( GF109203X), 5,6,7,13-tetraidro-13-metil-5-osso-12H-indolo[2,3-a]pirrolo[3,{ {27}}c]carbazolo-12-propanenitrile (Go6976) e N-[2-(p bromocinnamylamino)ethyl]-5-isochinolinesulfonamide (H89) sono stati acquistati da TocrisBioscience (Bristol, Regno Unito). Echinacoside, dantrolene, DL-treo-beta-benzil-ossiaspartato (DL-TBOA),7-cloro-5-(2-clorofenia)-1,5-diidro -4,1-benzotiazepina-2(3H)-one (CGP37157), 2-(2-ammino-3-metossifenile)-4 Sono stati acquistati H-1-benzopirano-4-one) (PD98059), acido tetraacetico (EGTA) e tutti gli altri reagenti da Sigma-Aldrich Co.(St. Louis, MO, USA).

4.2. Animali

Sono stati utilizzati ratti Sprague-Dawley maschi di due mesi. Gli animali sono stati alloggiati in condizioni ambientali standardizzate (22 ˘ 1 ˝C; 50% di umidità relativa; 12 ore di ciclo luce/buio) e hanno consentito l'accesso illimitato a cibo e acqua. Gli animali sono stati uccisi per decapitazione e la corteccia cerebrale è stata rapidamente rimossa a 4 ˝C. Le procedure sperimentali sono state approvate dal Fu Jen InstitutionalAnimal Care and Utilization Committee (A10259), in conformità con la National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Sono stati compiuti tutti gli sforzi per ridurre al minimo la sofferenza degli animali e per utilizzare un numero minimo di animali necessario per produrre risultati affidabili.

4.3. Preparazioni sinaptosomiche

I sinaptosomi sono stati purificati dalla corteccia cerebrale di ratti su gradienti di Percoll discontinui come descritto in precedenza [43,44]. In breve, il tessuto è stato omogeneizzato in un mezzo contenente 0.32 M di saccarosio (pH 7,4), l'omogeneizzato è stato centrifugato per 10 min a 3000ˆ g (5{{25 }}00 rpm in un rotore JA 25,5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, USA) e 4 ˝C, e il supernatante è stato nuovamente centrifugato per 12 minuti a 14.500ˆ g ( 11,{64}} giri/min in un rotore JA 25.5). Il pellet è stato risospeso delicatamente in 0,32 M di saccarosio (pH 7,4) e un'aliquota di questa sospensione sinaptosomiale (2 mL) è stata posta su un gradiente discontinuo Percoll da 3 mL contenente 0,32 M di saccarosio, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-ditiotreitolo e 3 percento, 10 percento e 23 percento Percoll (pH 7,4). Dopo centrifugazione a 32.500ˆ g (16.500 rpm in un rotore JA 20,5) per 7 minuti a 4 ˝C, i sinaptosomi sono stati recuperati da bande Percoll tra il 10% e il 23% e sono stati diluiti in un volume finale di 30 ml di mezzo tampone HEPES (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2¨ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glucosio e 10 mM HEPES (pH 7,4)). Dopo un'ulteriore centrifugazione a 27,{66}}ˆ g (15.000 rpm in un JA 25,5) per 10 minuti, il pellet di sinaptosoma è stato risospeso in 3 mL di mezzo tampone HEPES e il contenuto proteico è stato determinato utilizzando un test Bradford. Infine, 0,5 mg della sospensione di sinaptosomi sono stati diluiti in 10 ml di mezzo tampone HEPES e centrifugati a 3000 g (5000 rpm in un rotore JA 20.1) per 10 minuti. Il supernatante è stato scartato e i pellet contenenti i sinaptosomi sono stati conservati su ghiaccio e utilizzati entro 4-6 ore.

4.4. Rilascio di glutammato

Il rilascio di glutammato è stato saggiato mediante fluorimetria in linea come descritto in precedenza [45,46]. I pellet sinaptosomiali sono stati risospesi nel mezzo tampone HEPES (0.5 mg/mL) e preincubati a 37 ˝C per 10 minuti in presenza di 16 µM di albumina di siero bovino per legare eventuali acidi grassi liberi rilasciati dai sinaptosomi durante la preincubazione. Un'aliquota di 2-mL dei sinaptosomi è stata trasferita in una cuvetta agitata contenente 2 mM NADP plus, 50 unità di glutammato deidrogenasi e 1,2 mM CaCl2, e la fluorescenza FL di NADPH è stata misurata in un Perkin-Elmer LS{{ 14}} spettrofluorimetro (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) a lunghezze d'onda di eccitazione ed emissione rispettivamente di 340 e 460 nm. Poiché i sinaptosomi non sono suscettibili di stimolazione elettrica, l'aminopiridina 4-antagonista dei canali del potassio è stata utilizzata per stimolare il rilascio di glutammato. 4-l'aminopiridina destabilizza il potenziale di membrana e si pensa che causi una depolarizzazione spontanea ripetitiva dipendente dal canale Na più che si avvicina molto alla depolarizzazione in vivo del terminale sinaptico che porta all'attivazione dei canali Ca2 più voltaggio-dipendenti e al rilascio di neurotrasmettitori [47] ]. I dati sono stati ottenuti a intervalli di 2 s. Alla fine di ogni esperimento è stato aggiunto uno standard di glutammato esogeno (5 nmol). Il valore della variazione di fluorescenza FL prodotta dall'aggiunta standard è stato utilizzato per calcolare il glutammato rilasciato come nanomoli di glutammato per milligrammo di proteina sinaptosomiale (nmol/mg). I valori di rilascio citati nel testo sono livelli raggiunti allo stato stazionario dopo 5 min di depolarizzazione (nmol/mg/5 min). I dati cumulativi sono stati analizzati utilizzando fogli di calcolo Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, USA) e MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.5. Potenziale della membrana plasmatica

Il potenziale della membrana plasmatica è stato determinato con un colorante sensibile al potenziale di membrana, DiSC3(5) [48]. I sinaptosomi sono stati risospesi nel mezzo tampone HEPES e aliquote di 2 ml sono state trasferite in una cuvetta agitata contenente 5 µM di DiSC3(5) a 37 ˝C in uno spettrofluorimetro Perkin-Elmer LS{10}} (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). Dopo aver consentito alla miscela di equilibrarsi per 3 minuti, la fluorescenza FL è stata determinata a lunghezze d'onda di eccitazione ed emissione rispettivamente di 646 e 674 nm. I dati sono stati raccolti a intervalli di 2 s. I dati cumulativi sono stati analizzati utilizzando MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) ed espressi in unità di fluorescenza FL.

4.6. Citosolico Ca2 più Concentrazione ([Ca2 più ]C)

Il [Ca2 plus ]C è stato misurato con l'indicatore Ca2 plus fura-2. I sinaptosomi (0.5 mg/mL) sono stati preincubati in un mezzo tampone HEPES contenente 5 µM di fura-2 e 0.1 mM CaCl2, per 30 minuti a 37 ˝C in un test agitato tubo. Dopo il caricamento di fura-2, i sinaptosomi sono stati centrifugati in una microcentrifuga per 30 s a 3000ˆ g (5000 rpm). I pellet sinaptosomiali sono stati risospesi in un mezzo tampone HEPES e la sospensione sinaptosomiale è stata agitata in una cuvetta termostatata in uno spettrofluorimetro Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). CaCl2 (1 mM) è stato aggiunto dopo 3 minuti e sono state fatte ulteriori aggiunte dopo altri 10 minuti. I dati sulla fluorescenza sono stati accumulati a lunghezze d'onda di eccitazione di 340 e 380 nm (lunghezza d'onda di emissione 505 nm) a intervalli di 2 s. [Ca2 più ]C (nM) è stato calcolato utilizzando le procedure di calibrazione [49] e le equazioni descritte in precedenza [50]. I dati cumulativi sono stati analizzati utilizzando MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.7. macchia occidentale

I sinaptosomi sono stati omogeneizzati in un tampone di lisi (tampone HEPES 10 mM, pH 7,4), 1 percento di Triton X-100 e una miscela di inibitore della proteasi. I lisati sono stati chiarificati mediante centrifugazione e la concentrazione proteica è stata determinata utilizzando un kit di analisi delle proteine ​​(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Uguali quantità di proteine ​​sono state separate mediante elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide (SDS-PAGE) e trasferite alla membrana di nitrocellulosa. Le membrane sono state bloccate con soluzione salina tamponata con Tris che conteneva il 5% di latte scremato e incubate con un anticorpo primario appropriato (fosfo-proteina chinasi C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) durante la notte a 4°C. Dopo tre lavaggi in soluzione fisiologica tamponata con Tris, la membrana è stata quindi trattata con l'anticorpo secondario coniugato con perossidasi di rafano (1:3000) per 1 ora a temperatura ambiente. Le membrane sono state quindi lavate almeno tre volte con soluzione salina tamponata con Tris e visualizzate utilizzando il sistema di chemiluminescenza potenziato (Amersham, Buckinghamshire, Regno Unito). Un'aliquota di campioni è stata caricata e sondata con un anticorpo anti-PKC per il rilevamento di PKC come controllo di caricamento. Il livello di espressione o fosforilazione è stato valutato dalla densità di banda, che è stata quantificata mediante densitometria. La quantificazione densitometrica delle bande è stata analizzata utilizzando il software Syngene (Synoptics, Cambridge, Regno Unito).

4.8. Analisi statistica

I dati sono stati ottenuti da una singola preparazione sinaptosomiale e non erano indipendenti l'uno dall'altro. Per testare il significato dell'effetto di un farmaco rispetto al controllo, è stato utilizzato il test t di Student a due code. Quando è stato richiesto un ulteriore confronto (ad esempio se un secondo trattamento ha influenzato l'azione dell'echinacoside), è stato utilizzato un ANOVA unidirezionale seguito dal test di Tukey. L'analisi è stata completata tramite il software SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). I dati sono espressi come media ˘ SEM; la significatività è stata valutata a p < 0.05="" per="" tutte="" le="" misure="">

5. Conclusioni

Questo è il primo studio che lo dimostraechinacosideinibisce il rilascio di glutammato dai sinaptosomi cerebrocorticali di ratto riducendo l'afflusso di Ca2 più attraverso i canali Cav2.2 e Cav2.1 e questa inibizione del rilascio è probabilmente dipendente dalla soppressione della via della proteina chinasi C, almeno in parte. La presente scoperta è preziosa perché fornisce una nuova visione dei meccanismi d'azione dell'echinacoside nel cervello.

Ringraziamenti:Questo lavoro è stato sostenuto da una sovvenzione del Ministero della Scienza e della Tecnologia (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Contributi dell'autore:Tzu Yu Lin e Su Jane Wang hanno ideato e progettato gli esperimenti; Cheng Wei Lu ha eseguito gli esperimenti; Cheng Wei Lu e Shu Kuei Huang hanno analizzato i dati; Su Jane Wang ha scritto il giornale.

Conflitto di interessi:Gli autori non dichiarano conflitti di interesse.

Conflitti di interesse: Gli autori non dichiarano alcun conflitto di interessi.

Riferimenti

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analisi dei glicosidi feniletanoidi diErba cistada RP-HPLC. Acta Farm. Peccato. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Effetti antiossidanti sinergici di alcamidi, derivati ​​dell'acido caffeico e frazioni polisaccaridiche di Echinacea purpurea sull'ossidazione in vitro delle lipoproteine ​​​​a bassa densità umane. J. Agric. Chimica alimentare. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostino, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Immunomodulazione mediata da uno sciroppo a base di erbe contenente un estratto di radice di Echinacea standardizzato: uno studio pilota in soggetti umani sani sull'espressione genica delle citochine. Fitomedicina 2014, 21,1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Lui, WJ; Zanna, TH; Tu, PF Avanzamento della ricerca sulle attività farmacologiche dell'echinacoside. Cina J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside salva le cellule neuronali SHSY5Y dall'apoptosi indotta da TNFalfa. Euro. J. Pharmacol. 2004, 505,{5}}. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Cantato, SH; Parco, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Attività neuroprotettive in vitro dei glicosidi feniletanoidi da Callicarpa dichotoma. Pianta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Echinacoside protegge dalla 6-disfunzione mitocondriale indotta da idrossidopamina e dalle risposte infiammatorie nelle cellule PC12 riducendo la produzione di ROS. Evidente. Complemento a base. alternativo. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. L'esposizione transitoria all'echinacoside è sufficiente per attivare la segnalazione di Trk e proteggere le cellule neuronali dal rotenone. J. Neurochimica. 2013,124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Effetti neuroprotettivi dell'echinacoside nel modello murino MPTP del morbo di Parkinson. Euro. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Effetti dell'echinacoside sui livelli istiocentrali di massa attiva nei ratti con occlusione dell'arteria cerebrale media. Biomed. Ambiente. Sci. 2012, 25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Reversal da estratti acquosi diCistanche tubuloseda deficit comportamentali nel modello di ratto simile al morbo di Alzheimer: rilevanza per la deposizione di amiloide e la funzione del neurotrasmettitore centrale. Complemento BMC. alternativo. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Effetti neurotrofici e di neurorescue dell'Echinacoside nel modello murino MPTP subacuto del morbo di Parkinson. Cervello Ris. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Il glutammato come neurotrasmettitore nel cervello: una rassegna di fisiologia e patologia. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Spessore, SM; Kim, KY; No, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Il coenzima Q10 inibisce l'eccitotossicità del glutammato e l'alterazione mitocondriale mediata dallo stress ossidativo in un modello murino di glaucoma. Indagare. Oftalmolo. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Calcio e danno neuronale eccitotossico. Anna. NY Accad. Sci. 1994, 747,162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Recettori del glutammato, neurotossicità e neurodegenerazione. Pfluger. Arco. 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Meccanismi molecolari della morte delle cellule neuronali eccitotossiche mediata dal recettore del glutammato. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107-129. [Rif incrociato]

18. Schauwecker, PE Neuroprotezione da parte di antagonisti del recettore del glutammato contro la morte cellulare eccitotossica indotta da convulsioni nel cervello che invecchia. esp. Neurolo. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Effetti neuroprotettivi di NMDA e antagonisti del recettore metabotropico del glutammato di gruppo I contro la neurodegenerazione indotta dall'omocisteina nell'ippocampo di ratto: studio in vivo. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Il ruolo dell'eccitotossicità nelle malattie neurodegenerative: implicazioni per la terapia. Farmaco. Là. 1999, 81,163-221. [Rif incrociato]

21. Muir, KW Approcci terapeutici a base di glutammato: studi clinici con antagonisti NMDA. Corr. Opin. Farmaco. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; Garcia, AG; Giordano, J.; Hernandez-Guijo, JM Neuroprotectant La minociclina deprime la neurotrasmissione glutamatergica e la segnalazione di Ca2 più nei neuroni dell'ippocampo. Euro. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantine deprime il rilascio di glutammato attraverso l'inibizione del Ca2 voltaggio-dipendente più ingresso e protein chinasi C nei terminali nervosi della corteccia cerebrale di ratto: un meccanismo indipendente dal recettore NMDA. Neurochimica. int. 2010, 57,168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Antagonista del recettore metabotropico del glutammato 5 non competitivo (E)-2-metil-6- stiril-piridina (SIB1893) deprime il rilascio di glutammato attraverso l'inibizione del Ca2 voltaggio-dipendente più l'ingresso nei terminali nervosi cerebrocorticali del ratto (sinaptosomi). J. Pharmacol. esp. Là. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR.; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Un metodo rapido per l'isolamento dei sinaptosomi sui gradienti di Percoll. Cervello Ris. 1986, 372,115-129. [Rif incrociato]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, rilascio di glutammato dipendente dalla proteina PG SNARE dagli astrociti. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Approcci terapeutici basati sul glutammato: mirare al sistema di trasporto del glutammato. Corr. Opin. Farmaco. 2006, 6,{4}}. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Il reticolo sarcoplasmatico Ca2 più recettore canale/rianodina: modulazione da effettori endogeni, farmaci e stati patologici. Farmaco. Rev. 1997, 49,1-51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Protein chinasi C delta citotossicità mediata dal 6-idrossidopamina tramite l'attivazione prolungata della chinasi 1/2 regolata dal segnale extracellulare nelle cellule PC12. Neurolo. ris. 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Müller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, un nuovo inibitore della protein chinasi. Biochimica. Biofis. ris. Comune. 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, ST; Sanchez-Prieto, J. Rilascio di glutammato dipendente dal calcio e indipendente dai sinaptosomi monitorato mediante fluorometria continua. J. Neurochimica. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA L'accoppiamento dei recettori dei neurotrasmettitori ai canali ionici nel cervello. Scienza 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Inibizione presinaptica del rilascio di neurotrasmettitori suscitato. Tendenze Neurosci. 1997, 20, 204-212. [Rif incrociato]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Caratterizzazione farmacologica dei canali del calcio presinaptici utilizzando misurazioni biochimiche subseconda della neurosecrezione sinaptosomiale. Neurofarmacologia 1995, 34, 1469-1478. [Rif incrociato]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Accoppiamento differenziale dei canali del calcio di tipo N e P/Q all'esocitosi del glutammato nella corteccia cerebrale del ratto. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29-32. [Rif incrociato]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. La modulazione presinaptica del rilascio di glutammato mira a diversi canali del calcio nei terminali nervosi cerebrocorticali di ratto. Euro. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Lungo, P; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, ST; I recettori GABAA del terminale nervoso di Jovanovic, JN attivano la segnalazione dipendente dal Ca2 più /Calmodulina per inibire il Ca2 più afflusso e rilascio di glutammato a tensione regolata. J. Biol. Chimica. 2009.284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Angolo, JM; Oscurato; Joyal, JL; Sacchi, DB; Madara, JL Regolazione della resistenza transepiteliale dipendente dalla PKC: ruoli della chinasi MLC e MLC. Sono. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peters, C. La regolazione della secrezione di neurotrasmettitori da parte della protein chinasi C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, ST; Nicholls, DG; Pocock, JM La fosforilazione della sinapsina I e MARCKS nei terminali nervosi è mediata dall'ingresso di Ca2 più tramite un canale Ca2 più sensibile all'Aga-GI che è accoppiato all'esocitosi del glutammato. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [Rif incrociato]

41. Obrenovitch, TP; Urenjak, J. Trasmissione glutamatergica alterata nei disturbi neurologici: dall'alto glutammato extracellulare all'eccessiva efficacia sinaptica. prog. Neurobiol. 1997, 51, 39-87. [Rif incrociato]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB L'echinacoside inibisce la fibrillazione amiloide di HEWL e protegge dalla neurotossicità indotta da Ap. int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin inibisce il rilascio di glutammato nei terminali nervosi cerebrocorticali di ratto. Tossico. appl. Farmaco. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ L'esperidina inibisce il rilascio di glutammato ed esercita una neuroprotezione contro l'eccitotossicità indotta dall'acido kainico nell'ippocampo dei ratti. Neurotossicologia 2015,2015,157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Sihra, TS Synaptosomes possiede un pool esocitotico di glutammato. Natura 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, un farmaco antistaminico, inibisce il rilascio di glutammato nei terminali nervosi cerebrocorticali di ratto. Euro. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Bari, AP; van Mieghem, FJ; Mc Mahon, HT; Nicholls, DG Potenziali d'azione ripetitivi in ​​terminali nervosi isolati in presenza di 4-aminopiridina: effetti sul rilascio di Ca2 plus e glutammato libero dal citosolico. J. Neurochimica. 1989,53,{6}}. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Dipendenza ionica del potenziale di membrana e delle risposte legate al recettore del glutammato nei sinaptoneurosomi misurati con un colorante alla cianina, DiSC2(5). J. Neurochimica. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, ST; Bogonez, E.; Nicholls, DG Ca2 localizzato più l'ingresso influenza preferenzialmente la defosforilazione, la fosforilazione e il rilascio di glutammato delle proteine. J. Biol. Chimica. 1992, 267,1983-1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Una nuova generazione di indicatori Ca2 plus con proprietà di fluorescenza notevolmente migliorate. J. Biol. Chimica. 1985, 260,3440-3450. [PubMed]