Parte 2 Effetti preventivi dei glicosidi di feniletanolo da Cistanche tubulosa sul siero bovino Fibrosi epatica indotta da albumina nei ratti
Mar 06, 2022
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Espressione di NF-κB p65 e collagene I dopo l'intervento farmacologico nelle cellule HSC-T6 Al fine di caratterizzare i segnali di fibrosi epatica, sono stati determinati due geni regolatori chiave nel fegato mediante test RT-PCR. I dati hanno mostrato che le cellule tHSC-T6 del gruppo di controllo avevano livelli più bassi di NF-κB e di collagene di tipo I mRNA. Al contrario, il TGF- 1 ha indotto le cellule HSC-T6 a sovraregolare notevolmente l'mRNA di NF-κB (P <0.01) e="" col-i="" (p=""><0,01), con="" livelli="" superiori="" a="" quelli="" del="" gruppo="" di="" controllo.="" in="" presenza="" di="" diverse="" concentrazioni="" di="">glicoside feniletanoide da cistanche) , i risultati di NF-κB p65 [P NF-κB=0.001 per 100 ug/ml, P NF-κB=0.002 per 75 ug/ml, P NF-κB {{ 11}}.007 per 50 ug/ml e P NF-κB=0.012 rispettivamente per 25 ug/ml] e Col-I [P Col-I=0.006, P Col -I=0.009, P Col-I=0.014, P Col-I=0.019, rispettivamente] hanno mostrato espressioni ridotte di questi mRNA (Fig. 7).
Analisi Western blot del livello di collagene I dopo l'intervento farmacologico nelle cellule HSC-T6 La Figura 8 mostra i livelli di espressione della proteina del collagene I nelle cellule HSC-T6 dei diversi gruppi sperimentali. Il livello di espressione della proteina del collagene I è stato significativamente ridotto nei vari gruppi di dosaggio di CPhG(glicoside feniletanoide da cistanche)(100 ug/ml, 75 ug/ml, 50 ug/ml e 25 ug/ml) rispetto al gruppo TGF- 1
Discussione
CPhG(glicoside feniletanoide da cistanche)è un glicoside feniletanoide isolato e purificato dal rizoma di Cistanche, che viene utilizzato come erboristeria tradizionale cinese. Negli ultimi anni, i CPhG hanno dimostrato di possedere una potente capacità di prevenire danni al fegato [20]. Pertanto, abbiamo mirato a indagare se i CPhG hanno effetti inibitori sulla fibrosi epatite da fibrosi epatica indotta da BSA nei ratti. BJRG è comunemente usato come farmaco terapeutico per la fibrosi epatica in Cina. È fatto di guscio di tartaruga. Radix Paeonia rubra, Cordyceps Sinensis, Radix isatidis e così via hanno l'effetto di ricostituire Qi e sangue, alleviare la fatica, ammorbidire i nodi. Inoltre, studi precedenti mostrano che ha l'ovvia funzione di bloccare la fibrosi epatica precoce, inibendo la proliferazione delle cellule che immagazzinano grasso e riducendo la sintesi del collagene [21]. Pertanto, BJRG è stato utilizzato come farmaco positivo in questo studio.
I cambiamenti patologici della fibrosi epatica nei ratti indotti dalle iniezioni di BSA sono simili a quelli della cirrosi portale umana [22]. CPhG(glicoside feniletanoide da cistanche)ha alleviato in modo dose-dipendente il grado di fibrosi epatica e ha inibito la trasformazione delle HSC in cellule simili a miofibroblasti, ha ridotto i livelli sierici elevati di ALT, AST, HA, LN, CIV, TGF- 1 e l'indice epatico e ha notevolmente soppresso l'espressione di collagene I, collagene III e TGF- 1 nel tessuto epatico. Gli stadi della fibrosi epatica sono correlati con i livelli sierici di HA, LN e IV-C, che come marker possono svolgere un ruolo nel rilevare il grado di fibrosi epatica [23]. È stato riportato che l'HA è la principale risorsa della matrice extracellulare. IV-C come elemento essenziale della membrana basale sarà sintetizzato in abbondanza e depositato pesantemente nelle prime fasi della cirrosi epatica. I livelli sierici di LN e IV-C sono gli indici del tasso di turnover della membrana basale e mostrano il grado di fibrosi nell'area portale e nei capillari sinusoidali [24]. Il PC III è un marker nella diagnosi di fibrosi epatica e cirrosi precoce, ma la sua sensibilità e specificità non sono elevate e non vi è alcuna differenza significativa tra i vari stadi della fibrosi in molti riferimenti [24, 25].
Questo studio ha ottenuto un risultato simile. Inoltre, le osservazioni della sezione colorata con tricromi di H&E e Masson mostrano tessuti epatici normali con lobuli epatici distinti e sinusoidi epatici. La struttura del tessuto epatico nel gruppo modello era disordinata e il tessuto epatico e la sinusoide epatica sono stati sostituiti da una grande quantità di tessuto connettivo. Tuttavia, è stato osservato un miglioramento significativo nei gruppi di trattamento rispetto al gruppo modello. È importante sottolineare che l'espressione del collagene di tipo I e del collagene di tipo III gioca un ruolo essenziale nello sviluppo della fibrosi epatica, il cui blocco può prevenire e curare la fibrosi epatica. Pertanto, la generazione e la deposizione nel tessuto epatico di collagene di tipo I e di collagene di tipo III potrebbe fungere da importante determinante dell'efficacia della fibrosi antiepatica. Il TGF- 1 è anche un'importante citochina profibrogenica nel danno epatico ed è biologicamente attivo con molteplici azioni farmacologiche [26]. È necessario un equilibrio tra queste azioni per mantenere l'omeostasi dei tessuti. L'espressione aberrante del TGF- 1 è coinvolta nella patogenesi delle malattie del fegato [27, 28]. È noto che il TGF- 1 è una citochina cruciale coinvolta nelle prime fasi della fibrosi epatica.
Lo stress ossidativo innesca il TGF- 1, con il risultato che quest'ultimo stimola la produzione e la deposizione di ECM [29]. Pertanto, una delle strategie efficaci per produrre un farmaco anti-fibrosi epatica è identificare agenti anti-TGF- 1. L'analisi immunoistochimica ha mostrato che le espressioni di collagene di tipo I, collagene di tipo III e TGF- 1 potrebbero rilevare il processo patologico della fibrosi epatica. Le espressioni del collagene di tipo I, del collagene di tipo III e del TGF- 1 nei gruppi di trattamento sono diminuite, che erano significativamente inferiori nei CPhG ad alte dosi(glicoside feniletanoide da cistanche)gruppo di trattamento in particolare, e ha suggerito che i CPhG sono un efficace inibitore del collagene di tipo I, del collagene di tipo III e del TGF- 1. Presumibilmente, i CPhG possono migliorare l'attività della collagenasi, mantenendo l'equilibrio dinamico della sintesi e della degradazione dell'ECM, ritardando e prevenendo così la formazione della fibrosi epatica. CPhG(glicoside feniletanoide da cistanche)non solo potrebbe migliorare la fibrosi epatica indotta da BSA nei ratti, ma potrebbe anche essere associata all'inibizione dell'attivazione delle HSC in vitro. Si ritiene che l'attivazione dell'HSC rappresenti la fase cruciale della fibrogenesi. In questo studio, i risultati hanno illustrato che la somministrazione di CPhG da 25 a 100 ug/ml ha notevolmente attenuato la diminuzione di NF-κB p65, l'espressione dell'mRNA del collagene I e l'espressione della proteina del collagene I nelle HSC. NF-κB svolge un ruolo importante nel modulare la risposta immunitaria alle infezioni o agli stimoli [30]. L'accumulo di NF-κB nelle cellule del fegato può comportare il reclutamento di citochine/mediatori infiammatori, inducendo così lo sviluppo della fibrosi [31, 32]. Inoltre, il collagene è anche un indice sensibile che riflette il livello di fibrosi e rappresenta circa il 50 percento della proteina totale nel fegato fibroso [33].
Di conseguenza, abbiamo postulato che il meccanismo molecolare contro l'epatofibrosi è legato ai CPhG(glicoside feniletanoide da cistanche)-inattivazione mediata dell'espressione di NF-κB, in cui il beneficio contribuisce a ruoli sinergici di attenuazione dell'immunotossicità e dello stress infiammatorio nel tessuto epatico lesionato da BSA, correggendo ulteriormente il dismetabolismo per migliorare le funzioni epatiche.
Conclusioni
In conclusione, i nostri studi indicano che i CPhG(glicoside feniletanoide da cistanche)attenuare significativamente l'entità della fibrosi epatica indotta da BSA nei ratti. Il suo meccanismo può essere dovuto almeno in parte all'effetto inibitorio dei CphG sulla composizione dell'ECM e alla stimolazione della degradazione dell'ECM e/o all'inibizione diretta della sintesi del collagene di tipo I, del collagene di tipo III e dell'espressione di TGF{ {0}}. Pertanto, ci aspettavamo che i CPhG potessero essere utilizzati nei prodotti sanitari o nei farmaci clinici per la prevenzione della fibrosi epatica umana. Sono necessari studi futuri per stabilire l'efficacia dei CPhG come potente farmaco anti-fibrosi epatica.
Abbreviazioni
CPhG:Glicosidi feniletanolo da cistanche; BSA: sieroalbumina bovina; HSC-T6: cellule stellate epatiche; Hyp: idrossiprolina; BJRG: Compresse Biejiarangan composte; TGF- 1: Trasformazione del fattore di crescita 1; ALT: Alanina aminotransferasi; AST: aspartato aminotransferasi; HA: acido ialuronico; LN: Laminina; PC III: procollagene di tipo III; IV-C: collagene di tipo IV; NF-κB: fattore nucleare potenziatore della catena leggera kappa dei linfociti B attivati; RT-PCR: reazione a catena della trascrittasi-polimerasi inversa; SDS-PAGE: Elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide.
Interessi in competizione Gli autori dichiarano di non avere interessi in competizione. Contributi degli autori TL, JZ, SPY, LM, MT e SLZ hanno ideato e progettato gli esperimenti. SPY, TL e JZ hanno analizzato i dati. SPY e JZ hanno scritto il manoscritto. TL, LM e JZ hanno esaminato il manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale. Riconoscimento Questa ricerca è stata supportata dalla National Natural Science Foundation of China (81260624). Gli autori desiderano esprimere i loro sinceri ringraziamenti al professor Tao Liu per i miglioramenti suggeriti per la stesura di questo articolo. Dettagli dell'autore 1 Dipartimento di Tossicologia, School of Public Health, Xinjiang Medical University, No. 393 Xinyi Road, Urumqi 830011Xinjiang Uyghur Autonomous
Regione, Cina. 2 Key Laboratory for Uighur Medicine, Institute of Materia Medica of Xinjiang, Urumqi 830004, China. 3 No. 140 Xinhua South Road, distretto di Tianshan, Urumqi 830000 Regione autonoma uigura dello Xinjiang, Cina. Ricevuto: 6 agosto 2015 Accettato: 24 novembre 2015
Riferimenti
Cohen-Naftaly M, Friedman SL. Stato attuale delle nuove terapie antifibrotiche nei pazienti con malattia epatica cronica. Ther Adv Gastroenterol. 2011;4(6):391–417.
Puche JE, Saiman Y, Friedman SL. Cellule stellate epatiche e fibrosi epatica. Compr Physiol. 2013;3(4):1473–92.
Hernandez-Gea V, Friedman SL. Patogenesi della fibrosi epatica. Annu Rev Pathol. 2011;6:425–56.
Sohrabpour AA, Mohamadnejad M, Malekzadeh R. Articolo di revisione: la reversibilità della cirrosi. Aliment Pharmacol Ther. 2012;36(9):824–32.
Raven PH, Zhang LB, Ventenat O. Accademia cinese delle scienze. 23a ed. Cina: Comitato Editoriale di Flora of China; 2013. pag. 1–16.
Commissione per la Farmacopea Cinese del Ministero della Sanità della Repubblica Popolare Cinese. Farmacopea cinese, parte 1. Cina: casa editrice dell'industria chimica; 2010. pag. 126.
Yan GH, Tian JH, Long BW, Li N. Progressi della ricerca sui glicosidi feniletanoidi da Cistanche tubulosa. Farma centro sud. 2012;10:692–5.
Li J, Huang D, He L. Effetto di Rou Cong Rong(Herba Cistanches Deserticola) sulla tossicità riproduttiva nei topi indotta dal glicoside di Leigongteng (Radix et Rhizoma Tripterygii). J Tradit Mento Med. 2014;34(3):324–32.
Xing Y, Liao J, Tang Y, Zhang P, Tan C, Ni H, et al. ACE e inibitori dell'aggregazione piastrinica da Tamarix Hojnacki Bunge (pianta ospite di Herba Cistanches) che crescono nello Xinjiang. Farmacogna Mag. 2014;10(38):111–7.
Jia Y, Guan Q, Jiang Y, Salh B, Guo Y, Tu P, et al. Miglioramento della colite indotta da sodio destrano solfato nei topi mediante estratto arricchito con echinacoside di Cistanche tubulosa. Phytother ris. 2014;28(1):110–9.
