Parte 4: Conoscenza dettagliata dei radicali liberi antiossidanti---Valutazione degli antiossidanti

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Metodo di valutazione

ORACORAC è l'abbreviazione di Oxygen Radical Absorption Capacity (capacità di assorbimento dei radicali ossidativi), che è un metodo di valutazione per il testcapacità antiossidante. Ora che l'importanza degli antiossidanti per il corpo umano è stata scientificamente provata, quantificare gli effetti antiossidanti è un problema urgente. Solo quando l'effetto antiossidante può essere quantificato, le aziende possono sviluppare prodotti migliori, ottenere l'approvazione del governo e dimostrare ai consumatori l'efficacia antiossidante dei loro prodotti. Prima del lancio del metodo ORAC, a causa della natura estremamente complessa dei test antiossidanti, il mondo commerciale (protocolli sperimentali estremamente complicati non potevano essere applicati dal mondo commerciale. A quel tempo, un rigoroso esperimento antiossidante richiedeva spesso diversi mesi ed era molto costoso È inaccettabile per il mondo degli affari) non può testare in modo efficace e completo la capacità antiossidante dei campioni, ma il business è la forza trainante dell'innovazione tecnologica, proprio come Apple. Il test antiossidante ORAC include radicali liberi perossidativi (compresi idrofili e lipofili), radicali idrossilici, gruppi perossinitrito, ossigeno singoletto e anione superossido, i cinque radicali liberi dell'ossigeno attivo più importanti nel corpo umano. Un'analisi completa può ottenere efficacemente l'effettiva capacità antiossidante e la distribuzione del campione. Il test biologico antiossidante ORAC è una soluzione di test di livello superiore rispetto al normale test antiossidante. Utilizzo di cellule umane per testare efficacemente la capacità antiossidante (biodisponibilità) del campione.

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ORAC è stato valutato come il metodo standard per i test sugli antiossidanti dall'AOAC degli Stati Uniti ed è il metodo di test tradizionale internazionale. Altri metodi di valutazioneAntiossidazionenon è solo un concetto, l'effetto dell'antiossidazione sugli organismi può essere quantificato. Come esperimento sugli animali, dopo aver assunto antiossidanti per un certo periodo di tempo, vengono misurati i cambiamenti della malondialdeide, un prodotto della perossidazione degli esteri nel sangue. E l'attività cambia della superossido dismutasi SOD e della glutatione perossidasi GSH-PX nell'omogenato del fegato. La forza e l'effetto dell'antiossidazione sono stati determinati dai cambiamenti dei due enzimi sopra e dell'MDA. Poiché è impossibile misurare l'omogenato del fegato nel corpo umano, l'MDA nel sangue o nelle urine e la SOD e GXH-PX nel sangue possono essere misurati per determinare l'effetto antiossidante. Gli ossidanti negli alimenti hanno attirato a lungo l'attenzione degli studiosi in patria e all'estero perché ① Gli antiossidanti negli alimenti possono proteggere il cibo dal danno ossidativo e dal deterioramento. ② Ha un effetto antiossidante sul tubo digerente umano e previene il danno ossidativo al tubo digerente. ③ Dopo l'assorbimento, può svolgere un ruolo in altri tessuti e organi del corpo. ④ Alcuni estratti con effetti antiossidanti dagli alimenti possono essere utilizzati come farmaci terapeutici. Il meccanismo d'azione degli antiossidanti include la chelazione degli ioni metallici, l'eliminazione dei radicali liberi, l'estinzione dell'ossigeno singoletto, l'eliminazione dell'ossigeno e l'inibizione dell'attività ossidasi. Sebbene esistano molti metodi di valutazione in vitro, si basano principalmente su due categorie. Uno consiste nel valutare la capacità antiossidante della sostanza in esame misurando la capacità del campione di inibire l'ossidazione delle sostanze lipidiche. attività antiossidante della sostanza. L'attività antiossidante degli antiossidanti negli alimenti e nei sistemi biologici è influenzata da molti fattori, tra cui l'effetto di ripartizione degli antiossidanti tra la fase acquosa e la fase oleosa, le condizioni di ossidazione e l'ambiente e lo stato fisico del substrato ossidato.

1. Determinazione della resistenza alla perossidazione lipidica I lipidi comprendono un'ampia gamma e sono i componenti principali dei biofilm. Gli acidi grassi insaturi nei lipidi possono essere perossidati e i radicali liberi come L, LO e LOO- saranno generati nel processo di perossidazione lipidica. Oltre a LOOH, questi prodotti possono danneggiare le cellule biologiche. Pertanto, la capacità di inibire la perossidazione lipidica ha un importante significato biologico. A Metodo del tiocianato ferrico FTC: il metodo colorimetrico del tiocianato ferrico (FTC) si basa sull'ossidazione di Fe2 plus in Fe3 plus da parte di perossidi formati dall'ossidazione dei lipidi in condizioni acide, quindi gli ioni Fe3 plus e tiocianato possono formare un complesso rosso con un massimo assorbimento a 480-515 nm. Solitamente, il valore di assorbanza a 500 nm viene utilizzato per indicare la capacità di una sostanza di resistere alla perossidazione lipidica. Minore è il valore di assorbimento, maggiore è la capacità della sostanza di resistere alla perossidazione lipidica. B Metodo TBAR reagente acido tiobarbiturico: è un metodo comune per valutare il grado di ossidazione degli oli. Il prodotto finale dopo l'ossidazione dell'olio o dell'acido linoleico è principalmente la malondialdeide. Questi prodotti di perossidazione reagiscono con l'acido tiobarbiturico per formare composti colorati, che assorbono a circa 530 nm.

2. La DP determinata dal lato della capacità di scavenging di DPPH è un radicale organico sintetizzato nella fase iniziale, che viene spesso utilizzato per valutare la capacità di donare idrogeno degli antiossidanti. È molto stabile nei solventi organici, ha un colore viola e ha un caratteristico picco di assorbimento a Quando raggiunge lo scavenger di radicali liberi, la coppia solitaria di elettroni di DPPH viene accoppiata per farlo sbiadire, cioè il valore di assorbimento al la lunghezza d'onda massima di assorbimento diventa più piccola. Pertanto, l'effetto di scavenging del campione sui radicali DPPH può essere valutato misurando la variazione del valore di assorbanza.

3. Determinazione del potere riducente La determinazione del potere riducente è un metodo per verificare se il campione è un buon donatore di elettroni. Il campione con un forte potere riducente dovrebbe essere un buon fornitore di elettroni. Gli elettroni che fornisce non solo possono ridurre Fe3 plus a Fe2 plus, ma possono anche essere combinati con elettroni liberi. reazione di base. La determinazione del potere riducente è un metodo comune utilizzato per valutare l'attività antiossidante.

4. Inibizione dell'esperimento dell'enzima LOX La lipossigenasi LOX è ampiamente distribuita nelle piante ed è una ferritina non eme con un peso molecolare di 90-100KD. Questa proteina enzimatica è composta da più catene polipeptidiche ed è attivo il gruppo protesico metallico contenente ioni ferrici, mentre il gruppo protesico metallico contenente ioni ferro bivalenti è inattivo. La funzione principale nel corpo vivente è quella di catalizzare in modo specifico la reazione di ossigenazione degli acidi grassi polinsaturi contenenti strutture cis e cis-pentadiene per generare idroperossidi di acidi grassi polinsaturi con doppi legami coniugati. I principali substrati negli organismi sono gli acidi grassi insaturi liberi rilasciati dai glicerolipidi (come i fosfolipidi). Tra questi, i principali substrati negli animali sono l'acido arachidonico e i principali substrati nelle piante sono l'acido linoleico e l'acido linolenico. Il prodotto principale è un acido grasso di tipo perossiacetile.

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