Effetto preventivo dei glicosidi feniletanoidi della salsa di Cistanche sui ratti con edema cerebrale d'alta quota

Contatto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Astratto

Obiettivo Osservare l'effetto e il meccanismo dei glicosidi feniletanoidi da Cistamnche Salsa su ratti con edema cerebrale d'alta quota. Metodi I glicosidi feniletanoidi sono stati somministrati a scopo profilattico per stabilire il modello di ratto di edema cerebrale d'alta quota utilizzando una camera ipobarica in un ambiente simulato a 5000 m di altitudine. Sono state misurate le alterazioni patologiche nel tessuto polmonare del ratto, il contenuto di acqua, IL-6, TNF-a, MDA e l'attività enzimatica di SOD e GSH-Px nell'omogenato polmonare. Risultati Rispetto al gruppo di controllo, i ratti con edema cerebrale d'alta quota hanno mostrato il carattere notevole dell'edema cerebrale e l'alto contenuto di acqua nel polmone. Il contenuto di IL-6, TNF-a e MDA nell'omogenato polmonare è stato aumentato mentre l'attività enzimatica di SOD e GSH-Px è stata significativamente ridotta. I glicosidi feniletanoidi potrebbero migliorare i cambiamenti patologici nel tessuto polmonare, diminuire il contenuto di acqua, IL-6, TNF-a e MDA, aumentando al contempo l'attività enzimatica di SOD e GSH-Px nell'omogenato polmonare, Concision I glicosidi feniletanoidi possono prevenire l'edema cerebrale d'alta quota. il cui meccanismo può essere correlato allo stress antinfiammatorio e antiossidante del tessuto polmonare.

Parole chiave: Salsa di Cistanche; glicoside feniletanoide; edema cerebrale d'alta quota

Cistanche glicosidi feniletanoidi

L'edema cerebrale d'alta quota (HACE) si verifica generalmente quando l'altitudine supera per la prima volta i 3000 m. Si tratta di una grave malattia pericolosa per la vita causata dall'inadattabilità del corpo all'altitudine, all'ambiente a bassa pressione ea basso contenuto di ossigeno. È legato al mal di montagna. , L'edema polmonare d'alta quota è le tre manifestazioni del mal di montagna acuto. Sebbene ci siano meno studi sull'HACE rispetto all'edema polmonare d'alta quota, studi correlati hanno dimostrato che lo stress ossidativo e l'infiammazione svolgono un ruolo importante nella patogenesi dell'HACE (P-3).

Cistanche glicosidi feniletanoidi(glicosidi feniletanoidi da Cistanche Salsa, PhGCs) sono estratti da Xinjiang Cistanche cistanche e studi correlati hanno isolato con successo una varietà di glicosidi feniletanoidi, principalmente inclusi echinacoside e verbascoside 1. La ricerca sugli effetti farmacologici dei PhGC nel corso degli anni ha dimostrato che ha simili effetti farmacologici al salidroside, il principio attivo del mal di montagna. Ha anti-ipossia, anti-radiazioni, scavenging dei radicali liberi, ecc. P-7]. In questo esperimento, una rete modello HACE di ratto 91 è stata stabilita in una camera sperimentale artificiale in un ambiente speciale nella regione nord-occidentale e sono stati somministrati PhGCs preventivamente per osservarne l'effetto preventivo su HACE e il suo possibile meccanismo d'azione.

Cistanche alle erbe:Cistanche glicosidi feniletanoidi

1 materiale

1.1 Animali

Animale sperimentale Ratto Wistar, grado SPF, metà maschio e metà maschio, peso 180-220g [Experimental Animal Center of Xinjiang Medical University, numero di licenza di produzione animale SCXK (nuovo) 2011-0004, numero di licenza per uso animale SYXK ( nuovo) 2011- 0004].

1.2 Apparecchio

Cabina per esperimenti artificiali in ambiente speciale nord-ovest (Guizhou Fenglei Aviation Ordnance Co., Ltd., DY{{0}}); microscopio ottico (azienda giapponese Nikon, E 200); affettatrice per tessuti (azienda tedesca Mecang, HM340E); bilancia elettronica (Mettler-Toledo Instrument Co., Ltd., AL204, precisione; 0,1 mg); lettore di micropiastre (Bio-RAD, XMark 7M, USA): spettrofotometro UV (Shanghai Lens Optical Technology Co., Ltd., SpectrumLab 22); forno di essiccazione a temperatura costante con riscaldamento elettrico (Huangshi, Hubei) City Medical Equipment Co., Ltd., SKHG-01).

1.3 Testare il farmaco

PhGCs (Professore Tu Pengfei dell'Università di Pechino, contenuto: 90,70 percento, preparato con acqua distillata per ottenere una soluzione di concentrazione corrispondente); Liquido orale di Rhodiola Rosea (Tibet Tibetan Medicine Group Co., Ltd., numero di lotto: 120503, specifica: 10 ml); kit fattore di necrosi tumorale- (fattore di necrosi tumorale- , TNF-) (numero di lotto: ZJAGBZAB01), kit di interleuchina-6 (interleuchina-6, IL-6) (numero di lotto: ZIBIBZAB 02) (Società di prodotti biologici Co., Ltd. di Shanghai Yikesai); Sodio Pentobarbital (American Amresco Company, Numero di lotto: 20110612); paraformaldeide (fabbrica di reagenti chimici Chengdu Kelon, numero di lotto: 20110901); Kit di superossido dismutasi (SOD) (numero di lotto: 20130812), kit di malondialdeide (MDA) (numero di lotto: 20130812), kit di glutatione perossidasi (GSH-Px) (numero di lotto: 20130814) (Nanjing Jiancheng Institute of Bioengineering); Polvere tampone fosfato PBS (Fuzhou Maixin Biotechnology Development Co., Ltd., numero di lotto: 13061716).

erba cistancia

2 metodo

2.1 Raggruppamento e medicazione

I ratti Wistar sono stati divisi casualmente in 6 gruppi: gruppo di controllo normale, gruppo modello, gruppo di Rhodiola Rosea soluzione orale (1,78 mL·kg-'), gruppo PhGCs a basso dosaggio (75 mg·kg-), gruppo PhGCs a dosaggio medio (15 0mg ·Kg-'), gruppo ad alto dosaggio di PhGC (300mg·kg-), 12 ratti in ciascun gruppo. Ogni gruppo è stato allevato in un ambiente SPF. Il gruppo di controllo normale e il gruppo modello sono stati somministrati per via intragastrica con acqua distillata (1,0 ml/100 g). Gli altri gruppi sono stati somministrati per via intragastrica secondo la dose corrispondente per 10 giorni consecutivi. L'8° giorno, il resto tranne il normale gruppo di controllo Ciascun gruppo è stato tenuto per 72 ore in una cabina sperimentale artificiale che simulava un ambiente di altopiano a un'altitudine di 5 000 m. L'altezza nella cabina sale ad una velocità costante di 10 m·s-' fino a 5000 m di altitudine (la pressione atmosferica è 54,1 kPa, la pressione parziale dell'ossigeno è 11,52 kPa), durante la quale gli animali entrano liberamente in acqua e mangiano, e la cabina è aperta per 0,5 h ogni 24 h. Medicina, aggiungere mangime e acqua potabile.

2.2 Manipolazione degli animali

I ratti in ciascun gruppo sono stati anestetizzati mediante iniezione intraperitoneale di sodio pentobarbital (2 percento, 0.2 ml/100 g) subito dopo aver lasciato la cabina, il sangue è stato prelevato dall'aorta addominale, la cavità cranica è stata aperta, il tessuto cerebrale è stato prelevato e la metà superiore del cervello sinistro è stata estratta e pesata. Il pacchetto viene utilizzato per determinare il contenuto di acqua e la metà inferiore del cervello sinistro viene fissata con paraformaldeide al 4% per la colorazione HE. Pesare il cervello destro, aggiungere la soluzione di PBS per preparare un omogeneizzato al 10 percento, centrifugare a 3 000 r·min-' per 10 min, aliquotare il supernatante e conservarlo in frigorifero a 80 gradi per la determinazione del TNF- a, IIL-6, SOD, MDA, GSH-Px.

2.3 Osservazione della patologia del tessuto cerebrale

Dopo che il tessuto cerebrale è stato completamente fissato in paraformaldeide al 4%, disidratato, incorporato, affettato e colorato con HE, i cambiamenti patologici vengono osservati al microscopio ottico con ingrandimenti diversi e vengono scattate le immagini.

2.4 Determinazione del contenuto idrico cerebrale e determinazione dei relativi indici di infiammazione omogenata del tessuto cerebrale e stress ossidativo

Cuocere il tessuto cerebrale avvolto in carta stagnola in un forno (80 gradi, 72 h) a un peso costante, pesare il peso secco e calcolare il contenuto d'acqua: contenuto d'acqua=(peso del tessuto-peso del tessuto secco) / peso del tessuto × 100 percento. Utilizzare il kit di test immunoenzimatico per misurare il contenuto di TNF-, IL-6, lo spettrofotometro UV per misurare MDA, SOD, GSH-Px, i passaggi specifici seguono le istruzioni.

2.5 Analisi statistica

Per l'analisi è stato utilizzato il software SPSS 16.{1}}, i dati di misurazione erano tutti rappresentati dai più bassi, i dati sono stati prima testati per la normalità, è stato utilizzato il test del campione indipendente 1 per il confronto tra i gruppi conformi e la trasformazione logaritmica è stata eseguita per il gruppo non conforme. Il livello di ispezione è =0.05.

estratto di cistanche

3. Risultati

3.1 L'effetto dei PhGC sui cambiamenti patologici del tessuto cerebrale nei ratti HACE

L'osservazione delle fette patologiche dei tessuti cerebrali dei ratti in ciascun gruppo al microscopio ottico ha mostrato che lo strato molecolare, lo strato cellulare granulare esterno, lo strato cellulare dello strato del corpo vertebrale, lo strato cellulare granulare interno e la struttura dello strato cellulare a più file del tessuto cerebrale del gruppo di controllo normale erano evidenti e non sono state riscontrate lesioni. Nel gruppo modello, i tessuti cerebrali dei ratti erano iperemia ed edema dei capillari e l'edema delle cellule nello strato molecolare e nello strato del corpo vertebrale era evidente. PhGCs a basso dosaggio gruppo di ratti tessuto cerebrale strato molecolare parte della vasodilatazione e congestione edema, lieve edema cellulare, edema inferiore al gruppo modello: PhGCs a dose media gruppo di ratti tessuto cerebrale parte della vasodilatazione e congestione sottomeningea, occasionalmente edema cellulare , edema rispetto al gruppo modello Il gruppo è stato significativamente ridotto; lo strato molecolare del gruppo ad alto dosaggio di PhGC non presentava edema evidente e vi era un lieve edema perivascolare, che era significativamente ridotto rispetto al gruppo modello. Lo strato molecolare del tessuto cerebrale dei ratti nel gruppo Rhodiola Rosea presentava edema diffuso e i vasi sanguigni sparsi avevano un edema molto lieve. L'edema è stato significativamente ridotto rispetto al gruppo modello. Si può vedere che il tessuto cerebrale dei ratti nel gruppo modello è ovviamente edema e il modello è stabilito. PhGC e Rhodiola Rosea possono ridurre il grado di edema cerebrale nei ratti modello HACE. I risultati sono mostrati nella Figura 1.

Fig 1 Osservazione istopatologica del cervello di ratto in diversi gruppi (HE × 400)

3.2 L'effetto dei PhGC sul contenuto di acqua nel cervello dei ratti HACE

Rispetto al gruppo di controllo normale, il contenuto di acqua nel tessuto cerebrale del gruppo modello è aumentato e la differenza è risultata statisticamente significativa (P<0.01), indicating="" that="" the="" model="" was="" established.="" the="" brain="" tissue="" water="" content="" of="" rats="" in="" the="" low,="" medium,="" and="" high="" doses="" of="" phgcs="" and="" the="" rhodiola="" rosea="" group="" was="" lower="" than="" that="" of="" the="" model="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" tissue="" water="">

3.3 L'effetto dei PhGC su TNF-a e IL-6 nel tessuto cerebrale dei ratti HACE

Rispetto al gruppo di controllo normale, il contenuto di TNF-a e IIL-6 nel tessuto cerebrale omogeneo del gruppo modello è aumentato significativamente (P<0.01). the="" contents="" of="" tnf-α="" and="" iil-6="" in="" the="" brain="" tissue="" homogenate="" of="" phgcs="" low,="" medium,="" and="" high="" dose="" groups="" and="" rhodiola="" rosea="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" model="" group=""><0.05), and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant.="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" brain="" tissue="" tnf-a="" and="" iil-6="" levels="" between="" the="" phgcs="" dose="" groups="" and="" the="" rhodiola="" rosea="">

3.4 L'effetto dei PhGC sullo stress ossidativo nel tessuto cerebrale dei ratti HACE

Rispetto al gruppo di controllo normale, le attività degli enzimi SOD e GSH-Px nel tessuto cerebrale del gruppo modello sono state significativamente ridotte e il contenuto di MDA è stato significativamente aumentato (P<0.01). the="" sod="" and="" gsh-px="" enzyme="" activities="" in="" the="" brain="" tissue="" of="" the="" phgcs="" low,="" medium,="" and="" high="" dose="" groups="" and="" rhodiola="" rosea="" group="" were="" higher="" than="" the="" model="" group,="" and="" the="" mda="" content="" was="" lower="" than="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" difference="" was="" statistically="" significant=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" sod,="" gsh-px,="" and="" mda="" in="" the="" brain="" tissue="" between="" the="" phgcs="" groups="" and="" the="" rhodiola="" rosea="">

integratore di cistanche: migliora l'immunità

4. Discussione

Negli ultimi anni, la ricerca nazionale sulla prevenzione e il trattamento del mal di montagna con la medicina tradizionale cinese ha ottenuto importanti risultati innovativi e sono stati sviluppati con successo medicinali tradizionali cinesi con diritti di proprietà intellettuale indipendenti per la prevenzione e il trattamento del mal di montagna. Ad esempio, le capsule di Rhodiola sviluppate dalla regione militare del Tibet hanno ottenuto il numero di approvazione dei medicinali militari necessari e sono utilizzate nelle forze di difesa del confine dell'altopiano come medicinali speciali per la prevenzione e il trattamento delle malattie dell'altopiano. Il liquido orale Rhodiola Rosea lanciato dalle aziende farmaceutiche locali del Qinghai e del Tibet ha ottenuto il numero di approvazione ufficiale delle varietà della medicina cinese nazionale ed è clinicamente adatto per la prevenzione e il trattamento del mal di montagna acuto e cronico10. Gli effetti farmacologici dei PhGC sono simili al salidroside, quindi abbiamo scelto il liquido orale Rhodiola Rosea, che viene venduto e utilizzato sul mercato e ha uno standard farmacologico, come farmaco di controllo positivo.

Un gran numero di studi [1H12 ha dimostrato che i livelli di TNF- e IL-6 nei pazienti con HACE sono elevati, Zhou Qiquan et al. [3 Gli studi hanno dimostrato che il TNF- gioca un ruolo importante nel modificare la permeabilità della barriera ematoencefalica. Un fattore importante per una maggiore permeabilità della barriera. La secrezione di TNF aumenta durante l'ipossiemia. Quando il TNF- aumenta in modo anomalo nel sangue, può danneggiare le cellule endoteliali vascolari, causando cambiamenti nella morfologia delle cellule endoteliali vascolari, danni alla membrana cellulare e agli organelli, ecc., e il TNF-a può anche essere usato come apoptosi Il segnale intracellulare dell'apoptosi induce l'apoptosi delle cellule endoteliali vascolari, promuove la produzione di endotelina (ET-1) e aggrava il danno della parete dei vasi sanguigni e ha l'effetto di promuovere la secrezione di IIL-614.

L'ipossia è considerata un fattore chiave che porta all'insorgenza del mal di montagna acuto. La risposta allo stress ossidativo indotta dall'ipossia gioca un ruolo importante nell'ipertensione arteriosa cerebrale e nella perdita vascolare. I radicali liberi locali sono coinvolti nel causare danni vascolari. Il danno cerebrovascolare e l'aumento della perdita di liquidi possono causare edema cerebrale 13i4. Zhou Qiquan et al. [7 Gli studi hanno dimostrato che i radicali liberi dell'ossigeno svolgono un ruolo importante nella formazione di HACE e sono un fattore importante per aumentare la permeabilità della barriera ematoencefalica in ambienti di alta quota. In un ambiente ipossico, i radicali liberi e l'MDA saranno significativamente aumentati, mentre la funzione degli enzimi antiossidanti è sottoregolata. Pertanto, la bassa funzione degli enzimi antiossidanti e l'aumento del danno da perossidazione lipidica possono avere un significato importante nella patogenesi del mal di montagna acuto. L'MDA è prodotto dalla scomposizione dei perossidi di acidi grassi ed è il prodotto di perossidazione lipidica più comunemente misurato nei sistemi biologici. Gli enzimi antiossidanti nel corpo includono SOD, GSH-Px, ecc., Che eliminano direttamente i radicali liberi superossido e il perossido di idrogeno o li convertono in sostanze meno attive per svolgere un ruolo difensivo. Quindi abbiamo rilevato SOD, MDA, GSH-Px nell'omogeneizzato del tessuto cerebrale.

In questo esperimento, rispetto al gruppo di controllo normale, la quantità di TNF-a e IIL-6 nell'omogenato di tessuto cerebrale del gruppo modello HACE è aumentata in modo significativo, l'attività degli enzimi SOD, GSH-Px è diminuita e il il contenuto di MDA è aumentato in modo significativo Mostra che la disfunzione e l'infiammazione da stress ossidativo indotte dall'ipossia nei ratti sono coinvolte nella formazione di HACE. La somministrazione preventiva di PhGC può ridurre il contenuto di acqua del tessuto cerebrale nei ratti con edema cerebrale e migliorare significativamente i cambiamenti patologici dell'edema del tessuto cerebrale, indicando che ha l'effetto di prevenire l'insorgenza di HACE. I PhGC possono aumentare SOD e GSH-Px nel tessuto cerebrale di ratto durante l'ipossia. L'attività enzimatica riduce il contenuto di MDA nel tessuto cerebrale causato dall'ipossia. Il contenuto di TNF- e IL-6 nel tessuto cerebrale dei ratti nel gruppo di somministrazione preventiva di PhGC è significativamente inferiore a quello del gruppo modello, suggerendo che il nostro stress antiossidante e antinfiammatorio possono essere la prevenzione e il trattamento di PhGCs Uno dei meccanismi del mal di montagna. Sulla base dei risultati di questo esperimento, l'effetto dei PhGC nel gruppo a dose media è leggermente migliore rispetto a quello a dose elevata, ma la differenza non è statisticamente significativa. Nessun rapporto di letteratura correlato I PhGC sono induttori degli enzimi dei farmaci epatici, il che può escludere la possibilità che i farmaci inducano un aumento dell'attività degli enzimi dei farmaci epatici e accelerino l'autometabolismo. Si ipotizza che la possibile ragione sia che all'aumentare della concentrazione del farmaco, la concentrazione del farmaco nell'organismo superi l'intervallo della relazione dose-effetto. Alla dose media, i recettori nel corpo sono tutti occupati e i recettori sono saturi, quindi non c'è un aumento continuo dell'effetto di dosi elevate e il farmaco È un glicoside, che può idrolizzare lo zucchero nello stomaco, e il l'aumento della viscosità limiterà l'assorbimento effettivo del farmaco quando la concentrazione è troppo alta.

integratore di cistanche: migliora l'immunità

Riferimento

[1] John B. West, traduzione inglese di "nomenclatura, classificazione e criteri diagnostici delle malattie d'alta quota in Cina"[J]. High Altitude Med Biol, 2010, 11(2): 169-172.

[2] Bailey DM, Evans KA, James PE, et al. Metabolismo alterato dei radicali liberi nel mal di montagna acuto: implicazioni per l'autoregolazione dinamica cerebrale e la funzione della barriera ematoencefalica [J]. J Physiol, 2009, 587(1): 73-85.

[3] Tang YP, Wu P, Su JJ, et al. Effetti dell'acquaporina-4 sulla formazione di edemi a seguito di emorragia intracerebrale [J]. Neurologia sperimentale, 2010, (223): 485-495.

[4] Cai Hong, Bao Zhong, Jiang Yong, ecc. Ingredienti efficaci in Cistanche cistanche di diverse origini Analisi quantitativa di [J]. Erboristeria cinese, 2007, 38(3): 452-455.

[5] Muhebuli • Abuliz, Mao Xinmin, Rena • Kasmu, ecc. PhGCs Attività antiossidante nelle cellule HL-60 [J]. Bollettino farmacologico cinese, 2008, 3 (24): 362-364.

[6] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan, et al. PhGCs contro un peptide -amiloide L'effetto e il meccanismo sull'apprendimento e la memoria del modello murino di Alzheimer [J]. Bollettino scientifico della farmacologia cinese, 2006, 22(5): 595-599.

[7] Liu Zhiqin, Chen Quieting, Li Yan, et al. Effetti di Cistanche sull'emopoiesi e sugli effetti ematopoietici della chemioterapia nei topi portatori di tumore L'impatto della funzione immunitaria [J]. Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine, 2010, 33 (11): 758-761.

[8] Xu Yonghua, Zhang Qiong, Cao Jinjun, ecc. Creare una camera a bassa pressione composta su larga scala per espandere la medicina Tipi di piattaforme sperimentali [J]. Rivista cinese di medicina comparata, 2012, 22(7): 60-63.

[9] Tao Yicun, Shi Wen Hui, Xu Yonghua, et al. Edema polmonare d'alta quota in ambiente simulato di plateau L'istituzione del modello murino [J]. Rivista cinese di animali sperimentali, 2014, 22 (1): 76-78.

[10] Wang Hai. Farmacoterapia per il mal di montagna professionale [M]. Pechino: Casa editrice di scienze mediche militari, 2010: 131-148.

[11] Chen Yuntian, Hu Ying. Cambiamenti dell'interleuchina plasmatica-6 in pazienti con HACE [J] acuto. Giornale cinese di medicina preventiva, 2006, 24 (2): 92-94.

[12] Colleen Glyde JL, Andrew WS, Megan JW, et al. Mal di montagna acuto, infiammazione e permeabilità: nuove intuizioni da uno studio sui biomarcatori del sangue [J]. J Appl Physiol, 2011, 111: 392-399.

[13] Zhou QQ, Tan XL, Wang J. L'aumento della permeabilità della barriera ematoencefalica causata da mediatori dell'infiammazione è coinvolto nell'edema cerebrale d'alta quota [J]. Sci Res e saggi, 2011, 6 (3): 607-615.

[14] Ohga E, Matsuset. La relazione tra molecole di adesione e ipossia [J]. Nippon Rinsho, 2000, 59 (8): 1587-1591.

[15] Bakonyi T, Radak Z. Alta quota e radicali liberi [J]. J Sport Sci Med, 2004, 3(2): 64-69.

[16] Bailey DM, Evans KA, James PE, et al. Metabolismo alterato dei radicali liberi nel mal di montagna acuto: implicazioni per l'autoregolazione dinamica cerebrale e la funzione della barriera ematoencefalica [J]. J Physiol, 2009, 587(1): 73-85.

[17] Zhou Qiquan, Wang Jing, Wang Yunli, et al. Ematoencefalo esposto ad alta quota ai radicali liberi dell'ossigeno Il ruolo della permeabilità della barriera cambia e la sua relazione con HACE [J]. Microcircolazione in Cina, 2007, 11(3): 149-153.