Indicatori di qualità delle cistanches Herba basati sulla relazione spettro-effetto antiossidante Ⅱ
Mar 19, 2024
3. Risultati
3.1 Creazione della mappa delle impronte digitali
Preparare 10 lotti di soluzioni di prova secondo il metodo di cui al punto 2.1, utilizzare le condizioni cromatografiche di cui al punto 2.2 per il rilevamento, ottenere le impronte digitali di ciascun lotto di campioni (Figura 1) e selezionare il picco n. 11 (C11) come picco di riferimento del impronta digitale. Importare i dati della fase liquida. File AIA dell'impronta digitale del prodotto di prova Cistanche deserticola nel software "Traditional Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System" (versione 2012). Diciassette picchi cromatografici comuni sono stati calibrati nella modalità comune e, rispetto allo spettro standard di riferimento misto (Figura 2), sono stati identificati un totale di 10 picchi comuni.
3.2 Ricerca sull'effetto antiossidante di Cistanche deserticola
3.2.1 Effetto di Cistanche deserticola sulla vitalità delle cellule HEK 293.
Rispetto alle cellule del gruppo normale, Cistanche deserticola non ha prodotto citotossicità a una concentrazione di massa di 50~100 ug·mL–1 e i tassi di sopravvivenza cellulare erano superiori al 90%. All’aumentare della concentrazione di Cistanche deserticola, la vitalità cellulare diminuiva. Pertanto, per la successiva somministrazione è stata selezionata Cistanche deserticola con una concentrazione di massa di 100 µg·mL–1.
3.2.2 Effetto di Cistanche deserticola sui ROS indotti da H2O2 nelle cellule HEK 293
Il ROS IC50 di Cistanche deserticola a diverse concentrazioni è stato calcolato utilizzando il software GraphPad Prism 8. I risultati sono mostrati nella Figura 3 e nella Tabella 2.
Per maggiori conoscenze sulle cisanche, diamo un'occhiata a come distinguere la qualità delle cisanche. La qualità delle cistanche dipende dal contenuto dei principi attivi Echinacoside e Acteoside, un contenuto più elevato significa una funzione più forte, oggi prendiamo come esempio gli integratori Cistanche al 30% di Echinacoside e al 12% di Acteoside per darci una spiegazione, generalmente chiamati cistanche in questo articolo.
QUANTO TEMPO IMPIEGA LE CISTANCHE A FUNZIONARE?
3.2.3 Effetto di Cistanche deserticola sulla SOD indotta da H2O2-delle cellule HEK 293
Come mostrato nella Figura 4, rispetto al gruppo normale, l'attività SOD nelle cellule del gruppo modello era significativamente ridotta e l'attività SOD del gruppo trattato con Cistanche deserticola aumentava a vari livelli (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.
3.2.4 Effetto di Cistanche deserticola sul CAT indotto da H2O2- nelle cellule HEK 293
Come mostrato nella Figura 5, l'H2O2 può causare una significativa diminuzione dell'attività dell'enzima CAT intracellulare (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).
3.3 Cistanche deserticola Screening dei marcatori Q basato sull'analisi di correlazione dell'efficienza spettrale
3.3.1 PCA utilizza l'autovalore > 1 e il tasso di contribuzione della varianza cumulativa > 85% come standard per estrarre 4 componenti principali. Il diagramma del ghiaione (Figura 6) delle prime tre componenti principali ha una curva più ripida, il che significa che il loro tasso di contribuzione è più elevato. grande. Il tasso di contribuzione cumulativa della varianza delle quattro componenti principali è 87,640%, indicando che queste quattro componenti principali possono rappresentare l'87,640% delle informazioni delle variabili originali. Gli autovalori iniziali e i tassi di contributo alla varianza sono mostrati nella Tabella 3. La matrice dei componenti ruotati è ottenuta con il metodo della varianza massima di normalizzazione Kaiser, vedere la Tabella 4. In base al valore di caricamento di ciascun picco cromatografico sui quattro componenti principali, le informazioni riflesse da ciascuno è possibile estrarre la componente principale. Cioè, maggiore è il valore di carico, maggiore è l'influenza del picco cromatografico sul componente principale. Nel componente principale 1, i picchi da 1 a 3, 5, 7, 11 e da 13 a 15 presentano i carichi assoluti maggiori; nella componente principale 2, i picchi 6 e 16 presentano i maggiori carichi assoluti; il picco 17 spiega le informazioni del componente principale 3, il picco 8 ha l'impatto maggiore sul componente principale 4, quindi i 13 componenti chimici dei picchi 1~3, 5~8, 11, 13~17 sono stati selezionati come base materiale principale di Cistanche deserticola per la successiva analisi dell'efficienza spettrale.
3.3.2 PCC
ROS IC50 è un indicatore negativo dell'efficacia del farmaco, quindi un coefficiente di correlazione negativo significa che la variabile dipendente è correlata positivamente con l'efficacia del farmaco. I coefficienti di correlazione dei 13 picchi cromatografici di Cistanche deserticola sono tutti negativi, indicando che sono tutti positivamente correlati alla rimozione di ROS IC50, tra cui i picchi 14 e 3, 7, 11, 1 e 13 erano estremamente fortemente correlati con ROSIC50 (P<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.
Combinando i risultati PCC di ROS IC50, SOD e CAT, i picchi 1~3, 5, 7, 11 e 13~15 sono stati selezionati come gruppo di ingredienti attivi per la Cistanche deserticola per esercitare effetti antiossidanti.
3.3.3 PER FAVORE
In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 sono: 5, 13, 14, 11, 7 (Fig. 7C). I composti rappresentati dai picchi 1~3, 5, 7, 11 e 13~15 sono stati selezionati come potenziali componenti attivi antiossidanti nel modello PLS.
3.4 Verifica dell'attività del Q-marker Cistanche deserticola
3.4.1 Effetto dei principi attivi sulla citotossicità dell'HEK 293
Sulla base dei risultati dell'analisi di correlazione spettro-effetto, 6 ingredienti tra cui acido genipinico, 8-acido epistricnoico, echinaceoside, verbascoside, antocinoside A e isorbascoside sono stati selezionati per la verifica dell'attività. I sei principi attivi di Cistanche deserticola non hanno mostrato citotossicità a concentrazioni comprese tra 0,781 e 3,125 µmol·mL–1 e i tassi di sopravvivenza cellulare erano tutti superiori al 90%. All’aumentare della concentrazione, la vitalità cellulare viene inibita. Pertanto, le concentrazioni di dosaggio successive sono state selezionate come 0,781, 1,563 e 3,125 µmol·mL–1.
3.4.2 Coppie di principi attivi
L'effetto antiossidante delle cellule HEK 293 indotte da H2O2- è stato verificato rilevando l'effetto scavenging di ciascun ingrediente attivo sui ROS intracellulari e la capacità di regolare l'attività degli enzimi SOD e CAT per verificare se ha un effetto antiossidante. Nell'esperimento di eliminazione dei ROS, le differenze tra i gruppi di acido genipinico a dosaggio medio e alto e il gruppo modello erano statisticamente significative (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.
