I risultati dello studio tedesco sulla malattia renale cronica (GCKD) supportano l'associazione della lunghezza relativa dei telomeri con la mortalità in un'ampia coorte di pazienti con malattia renale cronica moderata
Mar 12, 2022
Contatto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Federica Fazzini1, Claudia Lamina1, Julia Raschenberger & et al.
Kidney International (2020) 98, 488–497; https://doi.org/10.1016/j.kint.2020.02.034
Copyright ª 2020, Società Internazionale di Nefrologia. Pubblicato da Elsevier Inc. Questo è un articolo ad accesso aperto con licenza CC BY
È noto che la lunghezza dei telomeri è inversamente associata all'invecchiamento ed è stata proposta come marker per le malattie legate all'invecchiamento. L'attrito dei telomeri può essere accelerato dallo stress ossidativo e dall'infiammazione, entrambi comunemente presenti nei pazienti con malattia renale cronica. Qui, abbiamo studiato se la lunghezza relativa dei telomeri è associata alla mortalità in un'ampia coorte di pazienti con malattia renale cronica in stadio G3 e A1-3 o G1-2 con proteinuria conclamata (A3) al momento dell'arruolamento. La lunghezza relativa dei telomeri è stata quantificata nel sangue periferico mediante un metodo PCR quantitativo in 4.955 pazienti dello studio GCKD, una coorte osservazionale prospettica in corso. Il follow-up completo di quattro anni era disponibile da 4.926 pazienti nei quali abbiamo registrato 354 decessi. La lunghezza relativa dei telomeri era un predittore forte e indipendente di mortalità per tutte le cause. Ogni diminuzione di 0.1 unità di lunghezza relativa dei telomeri era altamente associata a un aumento del rischio di morte del 14% (hazard ratio1,14 [intervallo di confidenza 95% 1.06-1.22]) in un modello aggiustato per età, sesso, eGFR basale, rapporto albumina/creatinina urinaria, diabete mellito, malattia cardiovascolare prevalente, colesterolo LDL, colesterolo HDL, fumo, indice di massa corporea, pressione arteriosa sistolica e diastolica, proteina C-reattiva e albumina sierica. Ciò si è tradotto in un rischio maggiore del 75% per quelli nel quartile più basso rispetto al quartile più alto della lunghezza relativa dei telomeri. L'associazione è stata determinata principalmente da 117 decessi cardiovascolari (1,20 [1.05-1.35]) e da 67 decessi dovuti a infezioni (1,27 [1.07-1.50]). Pertanto, i nostri risultati supportano un'associazione tra la lunghezza dei telomeri più corta e la mortalità per tutte le cause, la mortalità cardiovascolare e la morte dovuta a infezioni in pazienti con malattia renale cronica moderata.
PAROLE CHIAVE:malattia renale cronica; infezioni; mortalità; lunghezza relativa del telomero
Malattia renale cronica(CKD) è una malattia complessa e la sua ereditabilità è stata stimata tra il 30 e il 70%.
Tuttavia, i polimorfismi a singolo nucleotide dell'indice nei loci identificati spiegano solo una parte minore dell'ereditabilità e potrebbero mancare ulteriori contributori genetici. Ad oggi, solo pochi piccoli studi hanno indagato l'associazione tra TL e malattie renali. Alcuni studi hanno rilevato che un TL breve è correlato con una funzionalità renale compromessa nella popolazione generale,18,19 così come nei pazienti con insufficienza cardiaca.20 Recentemente abbiamo descritto un TL relativo (RTL) significativamente più breve in pazienti con insufficienza renale cronica moderatamente grave che hanno una malattia cardiovascolare prevalente ( CVD),21 nonché un'associazione con la durata22 e la progressione della CKD.23 I pazienti che hanno raggiunto un'insufficienza renale trattati mediante emodialisi sono descritti come aventi un TL ridotto rispetto ai controlli sani,24-27 e un TL ridotto è inversamente associato alla mortalità. 28 Sono state condotte solo poche indagini su pazienti renali non dipendenti dalla dialisi.21–23,29,30 A nostra conoscenza, il presente studio è il primo studio prospettico che indaga l'associazione tra RTL leucocitaria e cause di mortalità in un ampio coorte di insufficienza renale cronica non dipendente dalla dialisi.
Beneficio Cistanche: migliora la funzionalità renale
RISULTATI
Caratteristiche di base della popolazione in studio
RTL è stato quantificato nel sangue periferico mediante un metodo di reazione a catena della polimerasi quantitativa in 4955 pazienti tedeschiMalattia renale cronicastudia. Un follow-up completo di {{0}}anno era disponibile da 4926 pazienti. Le caratteristiche di base di questi 4926 pazienti in base ai quartili dell'RTL sono fornite nella Tabella 1. L'RTL variava da un minimo di {{10}}.40 a un massimo di 2,31 (Figura supplementare S1 ), con una media ± DS di 0.95 ±{22}}.19 e una mediana di 0.92 (1° quartile ¼ 0.82; 3° quartile ¼ 1 .05). RTL era correlato negativamente con l'età (r ¼ –{{30}}.36, P < 0,001)="" e="" positivamente="" correlato="" con="" la="" velocità="" di="" filtrazione="" glomerulare="" stimata="" (egfr;="" r="" ¼="" 0,17,="" p="">< 0,001)="" e="" l'albumina="" urinaria–="" rapporto="" della="" creatinina="" (r="" ¼="" 0,05,="" p="">< 0,001).="" quando="" abbiamo="" aggiustato="" l'rtl="" per="" età="" e="" sesso,="" non="" abbiamo="" più="" osservato="" una="" correlazione="" significativa="" con="" egfr="" e="" rapporto="" albumina-creatinina="" nelle="">
Follow-up prospettico e mortalità
Un totale di 354 decessi si è verificato durante un periodo di follow-up mediano di 4 anni (1483 giorni). Le cause di morte sono state malattie cardiovascolari tra cui infarto miocardico, malattia coronarica, morte cardiaca improvvisa, insufficienza cardiaca congestizia, embolia polmonare, malattia della valvola cardiaca e ictus ischemico (117 pazienti, 33,1 per cento), infezioni (67 pazienti, 18,9 per cento), cerebrovascolare non ischemico cause (9 pazienti, 2,5 percento), malattie vascolari periferiche (7 pazienti, 2,0 percento), insufficienza renale (8 pazienti, 2,3 percento), varie altre cause (103 pazienti, 29,1 percento) e cause sconosciute ( 43 pazienti, 12,1 per cento).
I grafici di incidenza cumulativa mostrano che l'incidenza della mortalità per tutte le cause (Figura 1a) aumenta con un RTL più breve, con l'incidenza più alta con il quartile RTL più basso. Nelle curve della funzione di incidenza cumulativa della mortalità cardiovascolare (Figura 1b) e per infezione (Figura 1c), la differenza tra i quartili era meno pronunciata, ma l'ordine dei quartili era lo stesso.
Figura 1|Funzione di incidenza cumulativa per (a) mortalità per tutte le cause, (b) mortalità per malattie cardiovascolari (CVD) e (c) morte per infezioni, per quartili (Q) di lunghezza relativa dei telomeri (RTL). Q1 è il quartile che include i pazienti con l'RTL più breve.
I risultati dei modelli di regressione di Cox che applicano diversi aggiustamenti sono forniti nella Tabella 2 e hanno mostrato un'associazione significativa tra RTL più breve e rischio di mortalità per tutte le cause. Valutata continuamente, ogni diminuzione di 0.1 unità RTL era associata a un aumento del rischio di morte del 16% in un modello aggiustato per età e sesso (hazard ratio [HR], 1,16; intervallo di confidenza al 95% [CI], 1.08–1,24; P ¼ 1,7e-05). L'associazione è rimasta significativa dopo un aggiustamento esteso per eGFR, rapporto albumina-creatinina nelle urine, diabete mellito e malattia cardiovascolare prevalente (modello 2: HR, 1,16; IC 95%, 1,08-1,24) nonché i fattori di rischio CVD aggiuntivi a bassa densità colesterolo lipoproteico, colesterolo lipoproteico ad alta densità, fumo, indice di massa corporea, pressione arteriosa sistolica, pressione arteriosa diastolica, proteina C-reattiva e albumina sierica al basale (modello 3: HR, 1,14; IC 95%, 1,06–1,22; P ¼ 3,5e-04). Le analisi della spline P non lineari sono riportate nella Figura 2 e hanno rivelato un'associazione quasi lineare di RTL con mortalità per tutte le cause. I pazienti con l'RTL più breve (1° quartile) avevano un rischio maggiore del 75% di mortalità per tutte le cause rispetto a quelli del quartile con l'RTL più lungo (Tabella Supplementare S1, modello completamente aggiustato: HR, 1,75; IC 95%, 1,22–2,50 ; P ¼ 0,0024).
Successivamente, abbiamo analizzato ciò che sta guidando l'associazione di RTL con mortalità per tutte le cause (Tabella 2). Abbiamo valutato le 2 cause specifiche di morte più frequenti e osservato che ogni diminuzione di 0.1 unità RTL era associata a un rischio aumentato del 20 di morte per CVD nel modello completamente aggiustato (HR, 1,2 0; IC 95%, 1.05–1,35; P ¼ 0,0052). La riduzione dell'RTL era anche significativamente inversamente associata alla morte per infezioni. Ogni riduzione di 0,1 unità di RTL era associata a un rischio di morte per infezioni 1.27-più alto (HR, 1,27; IC 95%, 1,07–1,50; P=0,0051). Osservando le stime per i vari quartili nella Tabella Supplementare S1 è emerso per la morte per infezioni che le stime per ciascuno dei quartili 1, 2 e 3 erano similmente elevate rispetto a quelle per il quartile 4. L'analisi con altre cause di morte come così come le cause sconosciute di morte era ovviamente troppo eterogenea e non rivelava alcuna associazione con RTL (dati non mostrati).
Il grafico dei residui di Schoenfeld in scala e il test sulle ipotesi di rischio proporzionale non hanno suggerito alcun effetto variabile nel tempo per RTL su nessuno dei risultati studiati. Gli HR di sottodistribuzione per morte cardiovascolare e per infezione, riportati nella Tabella Supplementare S2, sono solo leggermente attenuati rispetto agli HR specifici per causa.
We also evaluated whether the effect of RTL on the 3 different outcomes differed between men and women and for patients with and without diabetes mellitus, but we did not detect a significant interaction for these variables, or for age (all P values of interaction >0.1 nei modelli completamente modificati). Dato che abbiamo recentemente osservato un'associazione a forma di U tra durata di CKD e RTL,22 abbiamo eseguito un'analisi di sensitività aggiustando ulteriormente la durata di CKD al basale definita come inferiore a 6 mesi, tra 6 mesi e 5 anni e più di 5 anni. Questo ulteriore aggiustamento ha comportato solo modifiche marginali degli HR ottenuti per tutti e 3 gli endpoint (Tabella Supplementare S3).
Beneficio Cistanche: migliora la funzionalità renale
DISCUSSIONE
I risultati di questo studio hanno mostrato un'associazione significativa di RTL con mortalità per tutte le cause in una coorte di CKD non dipendente dalla dialisi. Un RTL più breve era associato a un rischio più elevato di mortalità indipendentemente dalla funzionalità renale e dai tradizionali fattori di rischio CVD. Questa associazione è stata guidata dalla morte per CVD e dalla morte per infezioni.
Associazione con la mortalità per tutte le cause
Studi precedenti,5,6,31–35con poche eccezioni,36,37 hanno dimostrato un'associazione negativa tra RTL e mortalità per tutte le cause nella popolazione generale. Lo studio più ampio finora (n=64.637) è stato condotto da Rode et al., con un HR aggiustato per la mortalità di 1,40 per il decile con il più corto rispetto al decile con il RTL più lungo.35Conformemente a questi risultati, il nostro studio ha mostrato con ogni diminuzione di 0.1 unità RTL un rischio maggiore del 14% di mortalità per tutte le cause, che si traduce in un rischio maggiore del 75% per coloro che si trovano nella posizione più bassa rispetto a quella più alta quartile di RTL. A nostra conoscenza, solo Carrero et al.28hanno studiato la relazione tra RTL e rischio di mortalità nei pazienti con insufficienza renale cronica. Hanno studiato 175 pazienti con malattia renale allo stadio terminale trattati mediante emodialisi, di cui 70 sono morti durante una mediana di 31 mesi di osservazione. Gli autori hanno osservato che TL prediceva in modo indipendente la sopravvivenza del paziente dopo un ulteriore aggiustamento per età, sesso e infiammazione. Il presente studio estende queste osservazioni al gruppo molto più ampio di individui con insufficienza renale cronica che non necessitano di dialisi.
Figura 2|Spline non lineari aggiustate (e bande di confidenza al 95%) per l'associazione tra l'aumento della lunghezza relativa dei telomeri (RTL) e l'hazard ratio (HR) di (a) mortalità per tutte le cause, (b) morte cardiovascolare e (c) morte per infezioni . Le risorse umane sono indicate come scala logaritmica delle tasse. Grayline: modello di regolazione 1 (adattato per età e sesso). Blueline: modello di aggiustamento 3 (aggiustato per età, sesso, stima [continua]
Associazione con mortalità per CVD
Finora nessuno studio ha studiato l'associazione tra RTL e mortalità per CVD nei pazienti con insufficienza renale cronica, sebbene questa sia la principale causa di morte in questi pazienti. A seconda dell'etnia studiata e dei modelli di aggiustamento dei dati, alcuni, ma non tutti, gli studi sulla popolazione generale hanno riportato un'associazione tra bassi risultati di RTL e CVD.33,38–41Un forte supporto per un'associazione causale è venuto da uno studio di randomizzazione mendeliana in cui è stato riscontrato che varianti genetiche associate a RTL più brevi sono associate a cardiopatia ischemica.40Nel presente studio, abbiamo identificato un'associazione significativa di RTL con decessi cardiovascolari, con un rischio maggiore del 20 per ogni diminuzione di RTL di 0.1 unità, o un rischio maggiore del 75% per quelli pazienti nel quartile con il TL più corto rispetto al quartile con il TL più lungo. Questo risultato è in linea con il nostro precedente rapporto di un'associazione con eventi cardiovascolari prevalenti in questa popolazione di pazienti: ogni diminuzione di RTL di 0,1 unità era significativamente associata a una probabilità maggiore del 6% per CVD prevalente in un modello aggiustato per età, sesso, attuale fumo, ipertensione, stato di diabete, colesterolo lipoproteico a bassa densità, alta densità
colesterolo lipoproteico, proteina C-reattiva, eGFR e indice di massa corporea.21Il follow-up prospettico in questi pazienti nella presente indagine ha rivelato che soprattutto il quartile più basso di RTL era associato a un rischio notevolmente aumentato, mentre gli altri 3 quartili hanno mostrato stime molto simili (Figura 1b).
Associazione con la morte per infezioni
Sebbene l'evidenza sperimentale supporti un ruolo della senescenza cellulare e del breve TL nella risposta immunitaria compromessa, gli studi epidemiologici sono scarsi, specialmente nei pazienti con insufficienza renale cronica. Helby et al. ha condotto il più ampio (n=75.309) studio prospettico basato sulla popolazione che ha indagato la RTL e il rischio di ospedalizzazione per malattie infettive e il rischio di morte correlata all'infezione. Durante 7 anni di follow-up, hanno osservato un rischio più elevato di qualsiasi infezione nel quartile con il più breve rispetto al quartile con il RTL più lungo.42 Studi precedenti con campioni di dimensioni inferiori hanno riportato risultati contrastanti.32,43,44I nostri risultati nei pazienti con insufficienza renale cronica descrivono per la prima volta l'associazione tra RTL breve e rischio più elevato di morte per infezioni in questa popolazione ad alto rischio.
Beneficio Cistanche: migliora la funzionalità renale
Potenziale meccanismo
Il meccanismo biologico alla base della relazione tra RTL e mortalità non è ancora chiaro. L'associazione identificata dal nostro studio non chiarisce se l'accorciamento dell'RTL sia causalmente correlato a malattie e infezioni cardiovascolari. Tuttavia, uno studio di associazione sull'intero genoma seguito da un'analisi del punteggio di rischio genetico che combinava varianti di piombo in 7 loci genetici ha mostrato un'associazione degli alleli associati a RTL più breve con un aumentato rischio di malattia coronarica. Questa scoperta fornisce un possibile supporto per un potenziale ruolo causale di RTL nelle CVD.45,46Inoltre, la senescenza cellulare indotta dall'attrito dei telomeri potrebbe essere un fattore scatenante dell'aterosclerosi e dell'arteriosclerosi. L'accumulo di cellule senescenti nel vaso contribuisce alla formazione di placche aterosclerotiche e alle calcificazioni dei media con conseguente aumento della rigidità arteriosa come caratteristica dominante della malattia arteriosa uremica.47La maggior parte degli studi ha misurato l'RTL nel DNA dei leucociti periferici. Tuttavia, è stata dimostrata una stretta correlazione tra leucociti e tessuto della parete aortica TL.48Pertanto, la senescenza cellulare potrebbe influenzare le cellule endoteliali portando a disfunzioni della parete vascolare e favorendo l'adesione delle cellule immunitarie, un evento primario nell'aterosclerosi. Inoltre, i telomeri corti attivano la p53 e l'autofagia nelle cellule progenitrici cardiache, destabilizzando l'equilibrio di quiescenza e proliferazione verso la differenziazione e la senescenza, portando a un esaurimento delle cellule progenitrici cardiache.49È stato dimostrato che la disfunzione dei telomeri induce una profonda repressione p53-dipendente dei principali regolatori della biogenesi e della funzione mitocondriale, che porta a un compromesso bioenergetico dovuto alla ridotta fosforilazione ossidativa e alla generazione di adenosina trifosfato.50,51
Esistono anche diversi collegamenti tra RTL e infezioni. La perdita di telomeri è stata osservata durante la differenziazione dei linfociti T,52nelle infezioni virali croniche,53e con l'età.54Inoltre, il TL a leucociti corti è stato segnalato come fattore di rischio in varie malattie immuno-correlate55e diabete.56Il TL più corto dei leucociti provoca la senescenza cellulare che è seguita da una riduzione della capacità proliferativa delle cellule immunitarie. TL può anche essere coinvolto nel declino correlato all'età della funzione immunitaria correlata all'insufficiente risposta ai vaccini e alle infezioni acute.57–59Un potenziale ruolo di TL nelle infezioni è supportato anche da un recente studio di associazione sull'intero genoma in una popolazione cinese. Dorjee e colleghi hanno osservato un'associazione tra un allele TL-riduttore e la morte per infezione respiratoria.60L'attrito RTL potrebbe essere fortemente innescato dalla presenza di un elevato stress ossidativo, una condizione comune nella CKD.61 Diversi studi in vitro e in vivo hanno dimostrato che lo stress ossidativo accelera l'attrito dei telomeri.62,63Infatti, i telomeri, con il loro alto contenuto di guanina, sono altamente suscettibili al danno ossidativo,64e le rotture del DNA a filamento singolo indotte dallo stress ossidativo potrebbero essere un fattore importante per l'accorciamento dei telomeri durante la replicazione del DNA.65
Beneficio Cistanche: migliora la funzionalità renale
Punti di forza e limiti
I punti di forza di questa indagine includono l'ampia dimensione del campione di una popolazione ben definita con un follow-up mediano di 4 anni senza quasi nessuna perdita al follow-up, l'omogeneità della popolazione in studio e una valutazione centralizzata di TL e misure di esito. La misurazione di RTL in particolare è della massima importanza perché la standardizzazione tra laboratori non è facile da realizzare e quindi il processo dovrebbe essere eseguito nello stesso laboratorio esattamente nelle stesse condizioni in termini di protocollo, gene di riferimento, strumento, personale66 e DNA procedura di estrazione.67
Ci sono alcune limitazioni a questo studio. Innanzitutto, l'RTL è stato misurato nei leucociti periferici. È noto che il tasso di progressione alla senescenza differisce tra i sottogruppi di linfociti. 59Sfortunatamente, in tedesco non erano disponibili dati sulla composizione del tipo di cellule del sangueMalattia renale cronicastudio e quindi non è stato possibile approfondire questo aspetto. Sarebbe interessante conoscere l'RTL da vari tipi di cellule renali, ma non è possibile ottenerlo in un ampio studio epidemiologico poiché ciò richiederebbe materiale tissutale da biopsie. La seconda limitazione include il disegno osservazionale dello studio, che non consente di chiarire la causalità o il meccanismo biologico. In terzo luogo, lo studio ha reclutato principalmente pazienti con insufficienza renale cronica in stadio G3 o A3 e i risultati potrebbero non essere generalizzabili ad altri stadi di insufficienza renale cronica. In quarto luogo, l'associazione con specifiche cause di morte potrebbe essere stata limitata dal potere statistico ma era ancora presente per le 2 principali cause di morte specifiche. Infine, sebbene le nostre analisi siano state aggiustate per i tradizionali fattori di rischio cardiovascolare e per i parametri di funzionalità renale, non possiamo escludere la possibilità di un confondimento residuo dovuto a fattori sconosciuti o non misurati.
variabili. Tuttavia, è stato molto interessante vedere che le stime aggiustate per età e sesso di RTL per vari risultati erano molto stabili con ulteriori aggiustamenti per le altre variabili, indicando che RTL è relativamente indipendente da altre variabili quando i dati sono aggiustati per età e sesso.
Conclusioni
Il breve TL relativo quantificato dai leucociti del sangue periferico è stato associato indipendentemente alla mortalità per tutte le cause durante 4 anni di follow-up in pazienti con insufficienza renale cronica moderatamente grave. Questa associazione è stata guidata dalla morte per CVD e dalla morte per infezioni.
Beneficio Cistanche: migliora la funzionalità renale
METODI
Popolazione di studio
Il tedescoMalattia renale cronica study is an ongoing prospective multicenter observational cohort. A detailed description of the study has been published previously.68 Briefly, 5217 patients under regular care by nephrologists were enrolled. Inclusion criteria were moderately reduced kidney function defined as eGFR of 30–60 ml/min per 1.73 m2 (stage G3, A1–A3) or an eGFR >60 ml/min per 1,73 m2 in presenza di proteinuria conclamata (stadio G1–G2, A3). I criteri di esclusione erano etnia non caucasica, trapianto di organi solidi o di midollo osseo, tumore maligno attivo entro 24 mesi prima dello screening, insufficienza cardiaca allo stadio IV della New York Heart Association e presenza legale o impossibilità di fornire il consenso. I parametri di laboratorio presentati sono stati tutti misurati da campioni biologici raccolti in un laboratorio centrale come descritto in precedenza.68 Le informazioni su fattori sociodemografici, storia medica e familiare, farmaci e qualità della vita correlata alla salute sono state ottenute da personale qualificato attraverso questionari standardizzati. La malattia cardiovascolare prevalente al basale è stata definita come una storia di infarto miocardico non fatale, bypass coronarico, angioplastica coronarica percutanea transluminale, ictus e interventi alle arterie carotidi (endoarterectomia carotidea e/o angioplastica carotidea con palloncino o impianto di stent).
Tutti i partecipanti hanno fornito il consenso informato scritto e lo studio è stato approvato dai comitati etici di tutte le istituzioni partecipanti e registrato nel registro nazionale degli studi clinici (DRKS 00003971). Tutti i metodi sono stati eseguiti in conformità con le linee guida approvate e la Dichiarazione di Helsinki. I dati vengono raccolti e gestiti utilizzando Askimed (https://www.askimed.com) come piattaforma web basata su cloud per la raccolta e la gestione di moduli di case report e dati di laboratorio.
Endpoint clinici durante il follow-up prospettico
Come descritto di recente,69 pazienti sono seguiti annualmente da personale formato che alterna visite faccia a faccia a visite telefoniche. Durante queste visite, i dati su ricoveri, eventi esiti e anamnesi vengono aggiornati come parte di un'intervista strutturata. Eventuali rapporti di dimissione ospedaliera vengono raccolti dai medici curanti e/o dagli ospedali. Gli endpoint vengono continuamente estratti da questi report da un comitato di endpoint formato e supervisionato composto da 3 medici indipendenti secondo un catalogo di endpoint prespecificato. Le informazioni sulla causa del decesso sono tratte da questi rapporti così come dai certificati di morte raccolti dagli uffici dello stato civile ogni volta che il personale dello studio viene informato della morte di un partecipante allo studio.
L'analisi corrente include tutti gli endpoint che si sono verificati fino al 4-anno di follow-up. Se un paziente ha saltato la visita di follow-up di 4-anno, abbiamo incluso tutti gli endpoint fino a 4,5 anni dopo la rispettiva visita di riferimento. Pertanto, il tempo di censura era il 4-anno di follow-up della data o 4,5 anni dopo il basale. L'outcome primario era la mortalità per tutte le cause. Per valutare se le associazioni identificate potessero essere attribuite a una specifica causa di morte, sono stati considerati esiti secondari la morte per cause cardiovascolari e malattie infettive. Il gruppo di morte per CVD includeva infarto miocardico, malattia coronarica, morte cardiaca improvvisa, insufficienza cardiaca congestizia, embolia polmonare, malattia della valvola cardiaca e ictus ischemico. Sono state registrate anche altre cause di morte, ma questi sottogruppi non erano abbastanza grandi per condurre ulteriori analisi causa-specifiche.
Misura di RTL
Il DNA genomico è stato estratto dal sangue intero in un laboratorio centrale con il Chemagic Magnetic Separation Module I (PerkinElmer chromagen Technologie GmbH, Baesweiler, Germania). L'analisi corrente era basata su 4926 pazienti per i quali erano disponibili misurazioni di RTL nei campioni di sangue di base e dati sulla mortalità. L'RTL è stato misurato in quadruplicato utilizzando un test quantitativo basato sulla reazione a catena della polimerasi sviluppato da Cawthon70 e modificato come descritto in precedenza.71 campioni di DNA sono stati analizzati in 15-ml di reazioni contenenti 1x master mix Quantifast TM SYBR Green PCR (Qiagen, Hilden, Germania), 10 ng di DNA, 1 mM di primer telomerico o 250 nm di primer 36B4 del gene housekeeping. Abbiamo determinato il rapporto relativo tra il numero di copie ripetute dei telomeri (T) e il numero di copie del gene a copia singola (gene 36B4, codificante per la fosfoproteina ribosomiale PO, situata sul cromosoma 12; S). I rapporti T/S sono proporzionali all'RTL individuale. L'automazione di questa procedura ad alto rendimento ha portato a misure di controllo della qualità molto buone con un basso coefficiente di variazione tra i saggi dei rapporti T/S. Un DNA disponibile in commercio incluso in tutte le piastre di reazione a catena della polimerasi quantitativa è stato utilizzato per verificare le prestazioni del test durante l'intero studio. Il coefficiente di variazione tra i test dei rapporti T/S di questo campione analizzato in 112 esperimenti indipendenti era del 9,6 percento prima della normalizzazione e diminuiva al 4,0 percento dopo la normalizzazione (Figura supplementare S2).
analisi statistica
Abbiamo confrontato le caratteristiche di base dei partecipanti (Tabella 1) utilizzando il test di Kruskal-Wallis per le variabili continue e i test del chi quadrato per le variabili categoriali. Le curve della funzione di incidenza cumulativa sono state utilizzate per stimare l'incidenza cumulativa delle diverse cause di morte tenendo conto del rischio concorrente.72 Sono stati eseguiti modelli di regressione dei rischi proporzionali di Cox per valutare le associazioni di RTL con 3 esiti: (i) mortalità per tutte le cause, ( ii) morte per CVD e (iii) morte per infezioni. Per entrambi gli endpoint specifici della causa (ii e iii), i pazienti venivano censurati se la morte si verificava per qualsiasi altra causa. Inoltre, le associazioni con questi endpoint specifici per causa sono state esaminate utilizzando la regressione della sopravvivenza a rischi concorrenti, considerando tutti i decessi per altre cause come eventi concorrenti. Pertanto, sia gli HR specifici per causa che gli HR di suddivisione sono segnalati per decessi dovuti a CVD o infezioni. I modelli a rischio proporzionale di Cox sono stati adattati utilizzando 3 diversi livelli di regolazione: modello 1 adattato per età e sesso; il modello 2 ulteriormente aggiustato per eGFR basale, rapporto albumina-creatinina nelle urine, CVD prevalente e diabete; modello 3 ulteriormente aggiustato per i tradizionali fattori di rischio CVD di colesterolo lipoproteico a bassa densità, colesterolo lipoproteico ad alta densità, indice di massa corporea, fumo, pressione sanguigna sistolica e diastolica, proteina C-reattiva e albumina. La selezione delle variabili aggiustate per i vari modelli si è basata sulle differenze nelle caratteristiche cliniche tra i quartili di RTL forniti nella Tabella 1. Nei modelli di regressione, RTL è stato analizzato continuamente e come predittore categoriale (in quartili di RTL). Dato che i risultati iniziali indicavano un rischio più elevato, soprattutto per bassi valori di RTL, l'HR (causa-specifico) è riportato anche per i quartili 1, 2 e 3 rispetto al quartile 4 come riferimento (Tabella Supplementare S1). Un'ulteriore analisi a valle si è basata sull'ispezione visiva della P-spline per ricavare la forma della relazione tra RTL e rischio di mortalità. Abbiamo utilizzato il coefficiente di correlazione del rango di Spearman per valutare l'associazione tra le variabili di studio. Tutte le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando R 3.3.2 (https://www.r-project.org); P-valori<0.05 were="" considered="" statistically="">
RIFERIMENTI
1. Moyzis RK, Buckingham JM, Cram LS, et al. Una sequenza di DNA ripetitiva altamente conservata, (TTAGGG)(n), presente ai telomeri dei cromosomi umani. Proc Natl Acad Sci US A. 1988;85:6622–6626.
2. Baird DM. Dinamica dei telomeri nelle cellule umane. Biochimie. 2008;90:116–121.
3. von Zglinicki T, Martin-Ruiz CM. I telomeri come biomarcatori per l'invecchiamento e le malattie legate all'età. Curr Mol Med. 2005;5:197–203.
4. Forero DA, González-Giraldo Y, López-Quintero C, et al. Lunghezza dei telomeri nella malattia di Parkinson: una meta-analisi. Esp Gerontolo. 2016;75:53–55.
5. Mons U, Müezzinler A, Schöttker B, et al. Lunghezza dei telomeri dei leucociti e mortalità per tutte le cause, malattie cardiovascolari e cancro: risultati della meta-analisi dei dati dei singoli partecipanti di 2 ampi studi di coorte prospettici. Sono J Epidemia. 2017;185:1317–1326.
6. Wang Q, Zhan Y, Pedersen NL, et al. Lunghezza dei telomeri e mortalità per tutte le cause: una meta-analisi. Aging Res Rev. 2018;48:11–20.
7. Wills LP, Schnellmann RG. Telomeri e telomerasi nella salute renale. J Am Soc Nephrol. 2011;22:39–41.
8. Kordinas V, Tsirpanlis G, Nicolaou C, et al. Esiste una connessione tra infiammazione, attività della telomerasi e stato trascrizionale della trascrittasi inversa della telomerasi nell'insufficienza renale? Cell Mol Biol Lett. 2015;20:222–236.
9. Cañadas-Garre M, Anderson K, Cappa R, et al. Suscettibilità genetica alle malattie renali croniche: altri tasselli per il puzzle dell'ereditarietà. Genetta anteriore. 2019;10:453.
10. Satko SG, Freedman BI. Il raggruppamento familiare di malattie renali e fenotipi correlati. Med Clin Nord Am. 2005;89:447–456.
11. Regele F, Jelencsics K, Shiffman D, et al. Studi sull'intero genoma per identificare i fattori di rischio per le malattie renali con particolare attenzione ai pazienti con diabete. Trapianto di quadrante di nefrolo. 2015;30:iv26–iv34.
12. Wuttke M, Köttgen A. Approfondimenti sulle malattie renali da studi di associazione sull'intero genoma. Nat Rev Nephrol. 2016;12:549–562.
13. Böger CA, Gorski M, Li M, et al. Associazione di loci correlati a eGFR identificati da GWAS con CKD incidente ed ESRD. PLoS Genet. 2011;7: e1002292.
14. Chambers JC, Zhang W, Lord GM, et al. Loci genetici che influenzano la funzione renale e la malattia renale cronica. Nat Genet. 2010;42:373–375.
15. Köttgen A, Pattaro C, Böger CA, et al. Nuovi loci associati alla funzione renale e alla malattia renale cronica. Nat Genet. 2010;42:376–384.
16. Pattaro C, Teumer A, Gorski M, et al. Le associazioni genetiche in 53 loci evidenziano i tipi cellulari e le vie biologiche rilevanti per la funzione renale. Nat Comune. 2016;7:10023.
17. Wuttke M, Li Y, Li M, et al. Un catalogo di loci genetici associati alla funzione renale dalle analisi di un milione di individui. Nat Genet. 2019;51:957–972.
18. Bansal N, Whooley MA, Regan M, et al. Associazione tra funzione renale e lunghezza dei telomeri: lo studio del cuore e dell'anima. Sono J Nephrol. 2012;36:405–411.
19. Eguchi K, Honig LS, Lee JH, et al. La breve lunghezza dei telomeri è associata a insufficienza renale nei soggetti giapponesi a rischio cardiovascolare. PLoS uno. 2017;12:e0176138.
20. Wong LSM, Van Der Harst P, De Boer RA, et al. La disfunzione renale è associata a una minore lunghezza dei telomeri nell'insufficienza cardiaca. Clin Res Cardiol. 2009;98:629–634.
21. Raschenberger J, Kollerits B, Titze S, et al. Associazione della lunghezza relativa dei telomeri con le malattie cardiovascolari in un'ampia coorte di malattie renali croniche: lo studio GCKD. Aterosclerosi. 2015;242:529–534.
22. Raschenberger J, Kollerits B, Titze S, et al. I telomeri hanno una plasticità maggiore del pensiero? Risultati dello studio tedesco sulle malattie renali croniche (GCKD) come popolazione ad alto rischio. Esp Gerontolo. 2015;72: 162–166.
23. Raschenberger J, Kollerits B, Ritchie J, et al. Associazione della lunghezza relativa dei telomeri con la progressione della malattia renale cronica in due coorti: modifica dell'effetto da fumo e diabete. Rep. Sci. 2015;5:1–8.
24. Betjes MGH, Langerak AW, Van Der Spek A, et al. Invecchiamento prematuro delle cellule T circolanti in pazienti con malattia renale allo stadio terminale. Rene int. 2011;80:208–217.
25. Hirashio S, Nakashima A, Doi S, et al. Lunghezza della coda G telomerica e ricovero per eventi cardiovascolari in pazienti in emodialisi. Clin J Am Soc Nephrol. 2014;9:2117–2122.
26. Ramirez R, Carracedo J, Soriano S, et al. Senescenza prematura indotta da stress nelle cellule mononucleate di pazienti in emodialisi a lungo termine. Sono J Kidney Dis. 2005;45:353–359.
27. Tsirpanlis G, Chatzipanagiotou S, Boufidou F, et al. L'attività della telomerasi è ridotta nelle cellule mononucleate del sangue periferico dei pazienti in emodialisi. Sono J Nephrol. 2006;26:91–96.
28. Carrero JJ, Stenvinkel P, Fellström B, et al. L'attrito dei telomeri è associato a infiammazione, bassi livelli di fetuina-A e alta mortalità nei pazienti in emodialisi prevalente. J Stagista Med. 2008;263:302–312.
29. Mazidi M, Rezaie P, Covic A, et al. Logoramento dei telomeri, funzionalità renale e malattia renale cronica prevalente negli Stati Uniti. Obiettivo. 2017;8:80175–80181.
30. Kidir V, Aynali A, Altuntas A, et al. Attività della telomerasi in pazienti con malattia renale cronica in stadio 2-5D. Nefrologia. 2017;37:592–597.
31. Batsis JA, Mackenzie TA, Vasquez E, et al. Associazione di adiposità, lunghezza dei telomeri e mortalità: dati dal NHANES 1999-2002. Int J Obes. 2018;42:198–204.
32. Fitzpatrick AL, Kronmal RA, Kimura M, et al. Lunghezza e mortalità dei telomeri dei leucociti nello studio sulla salute cardiovascolare. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2011;66A:421–429.
33. Needham BL, Rehkopf D. Lunghezza e mortalità dei telomeri dei leucociti nel National Health and Nutrition Examination Survey, 1999–2002. Epidemiologia. 2015;26:528–535.
34. Pusceddu I, Kleber M, Delgado G, et al. Lunghezza e mortalità dei telomeri nello studio sul rischio di Ludwigshafen e sulla salute cardiovascolare. PLoS uno. 2018;13:e0198373.
35. Rode L, Nordestgaard BG, Bojesen SE. Lunghezza dei telomeri dei leucociti nel sangue periferico e mortalità tra 64 637 individui della popolazione generale. J Natl Cancer Inst. 2015;107:djv074.
36. Loprinzi PD, Loenneke JP. Lunghezza dei telomeri dei leucociti e mortalità negli adulti statunitensi: modifica dell'effetto dal comportamento dell'attività fisica. J Sport Sci. 2018;36:213–219.
37. Gao X, Zhang Y, Mons U, et al. Lunghezza dei telomeri dei leucociti e punteggio di rischio di mortalità basato sull'epigenetica: associazioni con mortalità per tutte le cause tra gli anziani. Epigenetica. 2018;13:846–857.
38. D'Mello MJJ, Ross SA, Briel M, et al. Associazione tra la lunghezza ridotta dei telomeri dei leucociti e gli esiti cardiometabolici: revisione sistematica e meta-analisi. Circ Cardiovasc Genet. 2015;8:82–90.
39. Haycock PC, Heydon EE, Kaptoge S, et al. Lunghezza dei telomeri dei leucociti e rischio di malattie cardiovascolari: revisione sistematica e meta-analisi. Bmj. 2014;349:g4227.
40. Madrid AS, Rode L, Nordestgaard BG, et al. telomero corto e
cardiopatia ischemica: studi osservazionali e genetici in 290.022 individui. Clin Chem. 2016;62:1140–1149.
41. Mwasongwe S, Gao Y, Griswold M, et al. Lunghezza dei telomeri dei leucociti e malattie cardiovascolari negli afroamericani: The Jackson Heart Study. Aterosclerosi. 2017;266:41–47.
42. Helby J, Nordestgaard BG, Benfield T, et al. Una minore lunghezza dei telomeri dei leucociti è associata a un rischio più elevato di infezioni: uno studio prospettico su 75.309 individui della popolazione generale. Ematologica.2017;102:1457–1465.
43. Cawthon RM, Smith KR, O'Brien E, et al. Associazione tra lunghezza dei telomeri nel sangue e mortalità nelle persone di età pari o superiore a 60 anni. Lancetta. 2003;361:393–395.
44. Njajou OT, Hsueh WC, Blackburn EH, et al. Associazione tra lunghezza dei telomeri, cause specifiche di morte e anni di vita sana in salute, invecchiamento e composizione corporea: uno studio di coorte basato sulla popolazione. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2009;64:860–{5}}.
45. Codd V, Nelson CP, Albrecht E, et al. Identificazione di sette loci che influenzano la lunghezza media dei telomeri e la loro associazione con la malattia. Nat Genet. 2013;45:422–427.
46. Zhan Y, Hägg S. Lunghezza dei telomeri e rischio di malattie cardiovascolari. Curr Opin Cardiol. 2019;34:270–274.
47. Stenvinkel P, Luttropp K, McGuinness D, et al. L'espressione di CDKN2A/p16INK4a è associata alla progeria vascolare nella malattia renale cronica.
Invecchiamento (Albany. NY). 2017;9:494–507.
48. Wilson WRW, Herbert KE, Mistry Y, et al. Il contenuto di DNA dei telomeri dei leucociti nel sangue predice il contenuto di DNA dei telomeri vascolari negli esseri umani con e senza malattie vascolari. Eur Heart J. 2008;29:2689–2694.
49. Matsumoto C, Jiang Y, Emathinger J, et al. I telomeri corti inducono p53 e autofagia e modulano i cambiamenti associati all'età nel destino delle cellule progenitrici cardiache. Cellule staminali. 2018;36:868–880.
50. Lai L, Leone TC, Zechner C, et al. I coattivatori trascrizionali PGC-la e PGC-lb controllano i programmi di sovrapposizione richiesti per la maturazione perinatale del cuore. Geni Dev. 2008;22:1948–1961.
51. Moslehi J, Depinho RA, Sahin E. Telomeres e mitocondri nel cuore che invecchia. Ris. Circo 2012;110:1226–1237.
52. Rufer N, Brümmendorf TH, Kolvraa S, et al. Le misurazioni della fluorescenza dei telomeri nei granulociti e nei sottoinsiemi di linfociti T indicano un livello elevato.
