Contatto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

YANG Jian-hua1' 2, HU Jun-ping2, RENA • Kasimu2 ,〔DU Nian-sheng

(1. Ospedale oncologico affiliato, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Cina; 2. College of Pharmacy, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, Cina)

Astratto:Obiettivo: Studiare le relazioni struttura-attività dei glicosidi feniletanoidi nelle piante di salsa Cistanche ad attività antiossidante. Metodi: Con i sistemi di dosaggio di DPPH •, l'attività antiossidante di sei glicosidi feniletanoidi da piante diCistanchesalsa è stata determinata per studiare la relazione tra le attività antiossidanti e le caratteristiche strutturali dei glicosidi feniletanoidi zs. L'attività antiossidante dei glicosidi feniletanoidi era variante con un effetto dose-dipendente. La sequenza della forza dell'attività antiossidante dei sei componenti ha dimostrato di essere2 ^ Acetilacteoside > Acteoside Tubuloside BN Isoacteoside > Echinacoside > Cistanoside A. Conclusione: L'attività antiossidante dei glicosidi feniletanoidi è correlata al numero di idrossili fenolici, all'ostacolo sterico, al 2-acetil sulla glucopiranosio medio e alla posizione dell'idrossile fenolico. Inoltre, può essere correlato al chetone j3-insaturo di fenolo-2-propenile.

Parole chiave: Cistanche salsa ( C. A. Mey. ) G, Beck; Glicosidi feniletanoidi; Attività antiossidante; Struttura-attività; DPPH

Echinacoside

La medicina tradizionale cineseCistancheè la salsa Cistanche (CA Mey.) G. Beck, un gambo carnoso essiccato con squame e foglie. È stato pubblicato per la prima volta in "Shen Nong's Materia Medica". La frequenza di occorrenza è la più alta, seconda solo al ginseng nelle prescrizioni di medicina cinese anti-invecchiamento e anti-invecchiamento, e ha la reputazione di "ginseng del deserto". I glicosidi feniletanolici sono componenti caratteristici diCistanchegenere piante. Allo stato attuale, più di 30 di questi composti sono stati isolati da questo genere. Studi farmacologici hanno sostanzialmente chiarito che questi composti sono la principale base materiale perCistancheesercitare attività farmacologiche).

Il radicale dibenzopiryl (DPPH •) è un radicale libero relativamente stabile con un elettrone libero sul suo N. La soluzione di metanolo di DPPH-è viola con un picco di assorbimento massimo a 517nm. Quando c'è uno spazzino di radicali liberi, il suo assorbimento scompare gradualmente a causa del suo accoppiamento di un elettrone. Il suo grado di scolorimento è quantitativamente correlato al numero di elettroni che accetta. Pertanto, l'uso della spettrofotometria per rilevare il cambiamento nell'assorbanza del DPPH dopo la reazione con la soluzione campione può essere utilizzato per testare la capacità del campione di rimuovere i radicali liberi e resistere all'ossidazione (3). Allo stato attuale, ci sono state segnalazioni sulla ricerca antiossidante dei glicosidi dell'alcol fenetilico nella purea di melanzane nello scavenging dei radicali liberi, ma non esiste un'analisi del rapporto struttura-attività tra le sue proprietà antiossidanti e le sostanze attive. In questo articolo, il metodo di analisi dei radicali liberi DPPH • viene utilizzato per la prima volta per testare l'attività antiossidante di 6 monomeri glicosidici dell'alcol fenetilico a Rouhuanrong. Sulla base delle caratteristiche strutturali e dei risultati della determinazione dell'attività di questi composti, i componenti glicosidici dell'alcol fenetilico sono dedotti preliminarmente. Rapporto struttura-attività dell'attività antiossidante.

1 Apparecchi e materiali

Echinacoside, glicoside cistanche A,verbascoside, glicoside isoverbasin, 2,-acetil verbascoside, sostanza di riferimento antocianina B in tubo (isolata e preparata da salsa Cistanche, UV, IR, EI-ms/h -nmrJ3c-nmr dati concordano con il valore di letteratura, il contenuto è determinato con metodo di normalizzazione dell'area HPLC, la purezza è superiore al 95%, la formula strutturale è mostrata nella Figura 1 e nella Tabella 1); Il radicale difenil picril (DPPH •) è stato acquistato da Sigma; altri reagenti Tutti sono puri a livello nazionale.

SpectraMax M5 rivelatore multifunzionale di attività biologica a lunghezza d'onda completa (Anthos Co. Austria), piastra di coltura a 96 pozzetti (Costar), bilancia elettronica AB104-N]Mettler-Toledo Instr. (Shang Hai) Ltd.]

Figura 1 Le formule di struttura di sei glicosidi fenetanolici in Cistanche

Tabella 1 Sostituenti in 6 composti glicosidici fenetanolo in Cistanche

Nota: Ac è acetil, Cf è trans-caffeoyl, Glc * p-D-gluviolanosio e Rha è a-L-rhamnose

2 Preparazione della soluzione di prova

DPPH • Preparare una soluzione madre con una concentrazione di 1. 3 x 10'2mol/L con etanolo, conservarlo in frigorifero, diluire la soluzione madre con etanolo a 1-3 xl0^mol/L immediatamente prima dell'uso; 6 tipi di glicosidi dell'alcol fenetilico La sostanza di riferimento e la vitamina C sono formulate in una soluzione con una concentrazione di 0,05-50,0 ptg/mL con etanolo.

Acteoside

3 metodi e risultati

3. 1 Metodo Aggiungere prima 10 |xL di campione ai pozzetti del campione, aggiungere 10|jlL di etanolo ai pozzetti vuoti, quindi aggiungere 190 jiL di DPPH • con una concentrazione di 1,3 xlO^mol/L e metterli al buio a temperatura ambiente per 30 minuti. Utilizzare il rilevatore di attività biologica multifunzione a lunghezza d'onda completa SpectraMax M5 per misurare l'assorbanza (A) a 517 nm. Ogni assorbanza è stata misurata 3 volte in parallelo e il valore medio è stato preso. Il tasso di clearance è calcolato come segue: tasso di clearance (%) = (Un campione blank-A)/A blank x 100%

3.2 Risultati I risultati della determinazione sono riportati nella tabella 2. Si può vedere dalla Tabella 2 che i sei glicosidi dell'alcol fenetilico a diverse concentrazioni hanno diversi gradi di effetti scavenging sul DPPH e la loro capacità di scavenging dei radicali liberi ha una significativa relazione dose-effetto con la concentrazione. Glicoside su DP PH • La dimensione dell'effetto scavenging aumenta con l'aumento della concentrazione.

Tabella 2 Tasso di clearance di campioni con concentrazioni diverse su DPPH • («=3)

Nota: Il controllo positivo è l'acido ascorbico (vitamina C), il numero del campione è 7

Secondo l'IC5 di ciascun campione. Secondo il valore, la capacità di scavenging di 6 tipi di glicosidi feniletanoidi su DPPH • è in ordine: 2'-acetil verbascoside> verbascoside BN isoforbanico glicoside> echinacoside> cistanche glycoside A. Gli effetti dei sei glicosidi dell'alcol fenetilico alla stessa concentrazione della vitamina C di controllo positivo sono leggermente inferiori a quelli della vitamina C.

verbascoside

4 Discussione

I risultati di questo studio hanno inoltre confermato che i glicosidi dell'alcol fenetilico hanno generalmente attività antiossidante. Analizzando e confrontando le loro strutture chimiche, verbascoside, glicoside iso-verbasin, glicoside 2'-acetil verbasin e anortosite valvolare B sono tutti glicosidi, mentre echinacoside ecistancheA sono trigliceridi, con grande ostacolo sterico. L'aumento dell'effetto di ostacolo sterico rende l'echinacoside e il solanacoside A difficili da avvicinare ai radicali liberi, quindi la loro capacità antiossidante è relativamente debole; la differenza strutturale tra echinacoside e striata: l'echinacoside A è solo L'R5 del primo è un gruppo ossidrile fenolico e il secondo è un gruppo metossidico. Il gruppo ossidrile o-fenolico è considerato un importante gruppo funzionale per l'attività antiossidante. Il gruppo ossidrile difenolo scompare e l'effetto antiossidante è significativamente ridotto. Analizzando la struttura del composto e combinando i risultati della misurazione, si deduce che l'attività antiossidante dei glicosidi fenetilici nella pasta di melanzane è correlata al numero di agliconi e gruppi idrossilici fenolici sul gruppo fenilacrilolico, alla posizione di connessione del gruppo idrossile fenolico, alla dimensione dell'ostacolo sterico del composto, e il glucosio centrale 2 Esiste una certa relazione tra la sostituzione del gruppo acetilico nella posizione, che può anche essere correlata al frammento di struttura chetonica insatura a,/3 sul gruppo stirene acile, ma ha poca relazione con la posizione di sostituzione del gruppo fenilacrilolico.

DPPH • è un radicale libero relativamente stabile centrato su N, con forte assorbimento a 517nm. Dopo aver aggiunto la sostanza in esame, rilevando il cambiamento di assorbanza a 517 nm dopo dpPH • i radicali reagiscono con la soluzione campione, è possibile verificare la capacità del campione di eliminare i radicali liberi e l'anti-ossidazione. Gli esperimenti dimostrano che l'utilizzo di DPPH • per stabilire un modello di danno dei radicali liberi in vitro non richiede attrezzature complicate e reagenti costosi. È semplice e facile da usare, sensibile, affidabile e riproducibile. È un buon metodo per lo screening degli spazzini dei radicali liberi.

La vitamina C è attualmente riconosciuta come un antiossidante altamente attivo e ampiamente utilizzato. Pertanto, questo esperimento ha scelto la vitamina C come controllo positivo per la capacità antiossidante dei glicosidi dell'alcol fenetilico nello scavenging dei radicali liberi.

referenze

[1] Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei. La ricerca sui costituenti chimici di Cistanche Progressi della ricerca[J]. Medicina erboristica cinese, 2003,34(5):473476.

[2] Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Progressi nella ricerca sulle attività farmacologiche delle piante di Cistanche[J]. Chinese Herbal Medicine, 2003, 34(9): Allegato 16-18.

[3] Xu Shenhong, Hang Hu. Un metodo semplice per lo screening degli spazzini dei radicali liberi [J]. Medicina erboristica cinese, 2000, 31(2): 96-97.

[4] Fu Rong, Zhu Jiuwei. Determinazione dell'attività antiossidante di Chuanling, Rhodiola Rosea e Huang Zhi mediante spettrofotometria radicale di pirateria difenile [J]. Giornale dell'Università di Dalian dell'industria leggera, 2004, 23 (2) ): 114-117.