Studio sull'influenza dell'immunità nei topi

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Due di trenta maschiDBA/2NCrl(D2N)topi utilizzati come ceppo di controllo nell'analisi dei dati di base diDBA/2N-MDXtopi, presentati con risultati anormali suggeriti di infezione. Caso 1: un topo D2N maschio di 4 settimane ha mostrato una lesione della placca bianca nel rene sinistro (nessun sintomo clinico) ed è stato eseguito un esame patologico del rene. L'infiltrazione di cellule infiammatorie, principalmente neutrofili, è stata osservata nei tubuli e nell'interstizio del rene sinistro e lo Staphylococcus aureus (S.aureus) è stato rilevato dal segmento renale sinistro. Pertanto, questa lesione sul rene sinistro è stata diagnosticata come suppurativatubulointerstizialenefrite causata da infezione da S. aureus. Caso 2: Il torcicollo sinistro con perdita di peso è stato rilevato in un topo D2N maschio di 9 settimane. La valutazione istologica ha rivelato un'infiammazione essudativa intorno all'orifizio faringeo delle tube di Eustachio e un'infiammazione purulenta sia delle orecchie medie che dell'orecchio interno sinistro con formazione di ascessi e grappoli come microcolonie gram-positive. S. aureus è stato identificato da colture tampone di entrambi i canali uditivi esterni. Di conseguenza, questo caso di torcicollo è stato causato da S. aureus-suppurative otite media e Internet. S. aureus è ben noto come un patogeno opportunistico con il potenziale di causare frequentemente malattie suppurative agli animali da laboratorio immunocompetenti. Tuttavia, per quanto ne sappiamo, questo caso di infezione da S. aureus presentato con torcicollo in un topo D2N non è segnalato.

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Un isolato di Staphylococcus aureus resistente alla meticillina (MRSA) è emerso in un topo da laboratorio presso il Center for Laboratory Animal Science del National Defense Medical College nel 2018 eMRSA ·isolati sono stati recuperati dai topi anche nelle altre stanze dei topi in seguito. Su questi isolati di MRSA, è stata eseguita la tipizzazione molecolare come la tipizzazione della sequenza multi-locus (MLST), la tipizzazione della proteina A (spa) di Staphylococcus aureus, la tipizzazione SCCmec e la tipizzazione della coagulasi per la determinazione dei loro genotipi. Tutti gli isolati hanno rivelato genotipi identici (ST1, spa t1784, SCCmec tipo IV e coagulasi tipo VII), suggerendo che gli isolati erano cloni identici. Prima dell'emergere di MRSA nel 2018, nessun isolato con tali genotipi non era stato isolato in questa struttura, si presumeva che il clone di MRSA fosse stato portato nella struttura tramite animali umani o da laboratorio. STl1 è il primo MRSA acquisito in comunità recuperato da bambini negli Stati Uniti, tuttavia, ST1 è attualmente recuperato da esseri umani e animali in tutto il mondo. In Giappone, i ceppi ST1 e SCCmec di tipo IV sono stati isolati da esseri umani e gatti, suggerendo che ST1 viene trasmesso tra esseri umani e animali. Un ceppo di MRSA con questi genotipi ma anche con spa tl784 è stato recuperato dall'uomo. Attualmente, la distinzione tra MRSA acquisito in ospedale, MRSA acquisito in comunità e MRSA correlato al bestiame è più ambiguo. Questi risultati suggeriscono che i topi possono agire come serbatoi di MRSA.

Nella recente immunoterapia del cancro, l'attività di molecole come PD-1 è inibita per aumentare l'attività delle cellule immunitarie contro il cancro. Nonostante l'alto effetto terapeutico, ci sono casi in cui la malattia autoimmune si sviluppa nell'immunoterapia del cancro. Qui, abbiamo stabilito un sistema che può degradare PD-1 in modo specifico per il tempo in cellule e topi in coltura utilizzando ilSistema di degron SMASh. La proteina di fusione PD-1-SMASh nelle cellule Jurkat e negli splenociti CD3+ è stata ridotta di 1 giorno dopo la somministrazione di Asunaprevir(ASV) o Grazoprevir(GRV) che sono inibitori della proteasi NS3/4A. La crescita delle cellule di adenocarcinoma MC-38 inoculate in topi PD-1-cherry-SMASh knockin(KI) con ASV è stata repressa rispetto ai topi wild-type (WT) e KI non trattati. Inoltre, i topi WT trapiantati con cellule del midollo osseo KI dopo essere stati irradiati con radiazioni letali potrebbero respingere le cellule MC-38 con GRV. I topi KI sembravano sani e non mostravano segni di malattia autoimmune. Suggeriamo che l'uso del sistema degron negli organismi viventi dovrebbe far progredire non solo vari studi biologici, ma il trattamento delle malattie.

Il progesterone (P4) viene secreto dalla placenta per mantenere la gestazione e funziona come regolatore immunitario. Il glucocorticoide è un altroimmuno-regolatoriosteroide per regolare l'infiammazione. In questo studio, le cellule mononucleate del sangue periferico umano (PBMC) sono state trapiantate in topi NOG per indurre la malattia del trapianto contro l'ospite (GVHD) e utilizzate per il confronto tra gli effetti P4 e cortisolo (COR). Le PBMC sono state stimolate in presenza di varie concentrazioni di P4 o COR e le cellule sono state analizzate mediante citometria a flusso (FCM). Aliquote diPBMCsono stati trapiantati in topi NOG e P4 o COR è stato iniettato nei topi due volte a settimana. Dopo 28 giorni, sono state eseguite analisi FCM e immunoistochimiche. Di conseguenza, un'alta concentrazione di P4 ha inibito l'attivazione delle cellule T in vitro, mentre l'inibizione non è continuata dopo la rimozione. La soppressione dell'attivazione delle cellule T era minore nel trattamento con COR rispetto a P4 e l'esaurimento delle cellule T era più prominente. I topi iniettati con P4 trasportavano più splenociti, in particolare le cellule T CD8, rispetto ai topi di controllo. Tuttavia, la minore espressione di CD25, meno infiltrazione di cellule T umane nel polmone e nel fegato e menoGVHDsono stati osservati sintomi. D'altra parte, il numero di splenociti, in particolare le cellule T, nei topi iniettati con COR era significativamente inferiore e le cellule attivate / esauste erano abbondanti. Questi risultati suggeriscono che P4 preferisce mantenere le cellule T rispetto al COR in vitro.

Helicobacter hepaticus e Helicobacter bills sono noti come agenti patogeni che causano epatite e colite nei topi. L'esistenza di diversi casi positivi è ancora confermata ogni anno nelle strutture per animali da esperimento in Giappone. È meglio usare contenuti cecali o feci fresche come campione per il test PCR di H. hepaticus e H. bilis.

Recentemente, i reagenti per il trasporto e lo stoccaggio di DNA e RNA sono stati prodotti da vari produttori. Si prevede che questi reagenti saranno i problemi nel trasporto dei campioni utilizzati per i test PCR saranno cancellati. Pertanto, in questo studio, l'utilità del reagente di conservazione dell'acido nucleico è stata esaminata eseguendo un test PCR di Helicobacter utilizzando il contenuto del cieco conservato utilizzando il reagente di conservazione dell'acido nucleico. Di conseguenza, i campioni conservati per 7 giorni utilizzando la soluzione di conservazione potrebbero essere rilevati Helicobacter allo stesso livello del campione fresco. Da quanto sopra, è stato suggerito che nel test PCR di Helicobacter, anche se il trasporto richiede giorni, è possibile eseguire il test con elevata precisione trasportando il campione immerso nel reagente di stoccaggio dell'acido nucleico mediante volo refrigerato.

In precedenza abbiamo sviluppato ceppi mutanti di E.coli con un'aderenza significativamente migliorata alle superfici solide in vitro modificando i geni che rispondono alla fame di nutrienti. Per valutare l'interazione tra questi ceppi di E. coli potenziati dall'adesione (AEE) e l'ambiente intestinale in vivo, abbiamo valutato la loro capacità di colonizzazione al tratto intestinale inoculando topi.

Prima dell'esperimento di valutazione, abbiamo trasformato gli AEE con un plasmide che esprime la luciferasi per la visualizzazione in vivo. come sono stati inoculati per via orale in topi a digiuno e raccolto le feci ogni pochi giorni. Il numero di liveAEEè stato stimato misurando il CFU dalle feci raccolte.

Di conseguenza, rispetto al ceppo di controllo, gli AEE erano più abbondanti nelle feci per più di una settimana, il che indica una maggiore colonizzazione nel tratto intestinale. Osservando la localizzazione della luminescenza della luciferasi mediante imaging non invasivo utilizzando IVIS, è stato anche scoperto che gli AEE tendevano a colonizzare il cieco e il colon.

[Obiettivo] Attualmente, [Pasteurella]pneumotropicaè stato riclassificato come nuovo genere Rodentibacter. Di questi, R.pneumotropicus e R. Healy sono i principali obiettivi per il monitoraggio microbiologico nei roditori. Abbiamo isolato un certo numero di Rodentibacter sp. che non potevano essere identificati come specie da roditori. In questo studio, esploriamo le caratteristiche di Rodentibacter sp. isolato, concentrandoci sulla virulenza batterica. [Metodi] Rodentibacter sp. che è stato isolato dalla trachea di ratto sono stati utilizzati per lo studio. La bozza di sequenziamento del genoma è stata eseguita sul sequenziatore di nuova generazione e quindi sono stati previsti i geni associati alla virulenza. Negli esperimenti sugli animali, i topi Rag2 sono stati utilizzati per l'infezione da Rodentibacter sp.| Risultati| Con la bozza di sequenziamento del genoma, un gene unico che codifica per la tossina RTX era stato identificato in Rodentibacter sp. La sequenza proteica della tossina RTX era più omologa a quelle prodotte dalle Enterobacteriaceae che dalle Pasteurellaceae. In un esperimento su animali, quasi tutti i topi Rag 2 infetti sono stati confermati polmonite fatale o setticemia. Sebbene l'isolato non possa essere identificato come R. pneumotropicus e R. heylii, questa specie strettamente correlata può essere letale per gli animali immunocompromessi in presenza di fattori di virulenza come la tossina RTX.

Nel programma nbrp Basic Technology Development Program (2018-2019), abbiamo sequenziato i genomi dei batteri patogeni opportunistici murini ed eseguitoRNAseqdi protozoi nei topi, al fine di sviluppare saggi PCR per questi organismi. Abbiamo utilizzato questi risultati per analizzare Rodentibacter spp. e protozoi nei ratti in collaborazione con l'Università di Kyoto (NBRP Rat). Qui, riportiamo i risultati del test in campioni di ratto. [Metodi] Le sequenze del gene rRNA 16S di circa 1,5 kbp sono state lette dalla PCR per sei isolati di ratto di Rodentibacter spp., e la bozza della sequenza del genoma di un isolato (# 25) è stata determinata utilizzando Illumina HiSeq 2500. La PCR del contenuto cecale di ratto è stata eseguita sulla base dei risultati RNAseq dei protozoi di topo. [Risultati] Le sequenze del gene rRNA 16S di tutti gli isolati erano identiche e sono state identificate come Rodentibacter Ratti dall'analisi OTU. Il risequenziamento dell'isolato #25 ha anche rivelato che questo ceppo era R. Ratti.PCR per protozoi murini ha dato risultati positivi per l'ameba di ratto. Non sono stati ottenuti risultati positivi per TrichomonasPCRsu esemplari di ratto. [Discussione] Gli isolati di ratto di Rodentibacter spp. esaminati in questo rapporto erano tutti R. Ratti. È importante essere consapevoli della presenza di R. Ratti durante l'esecuzione dei test Rodentibacter nei ratti. Alcuni campioni fecali di ratto sono risultati positivi alla PCR dell'ameba di topo. Questo è il primo passo nello sviluppo della PCR per la rilevazione di protozoi nei ratti.

Gli organismi Rodentibacter 'Pasteurella pneumotropica' sono batteri patogeni opportunistici che causano malattie respiratorie nei topi e nei ratti. In precedenza erano classificati nel genere Pasteurella e diversi ceppi sono stati provvisoriamente proposti come biotipi. Nel 2017, sono stati riorganizzati collettivamente nel genere Rodentibacter. I ceppi MaM e MaR sono stati isolati da topi e ratti, rispettivamente, intorno al 1980. In questo studio, abbiamo determinato le sequenze del genoma di entrambi i ceppi e li abbiamo confrontati con quelli del genere Rodentibacter, materiali e metodiI I ceppi MaM e MaR sono stati ottenuti dall'Istituto Nazionale di Malattie Infettive (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Entrambi i ceppi sono stati coltivati in coltura liquida per estrarre il DNA genomico e le sequenze genomiche sono state determinate utilizzando Illumina Hiseq 2500 e PacBio Sequel. [Risultati] Sulla base della sequenza del gene rRNA 16S, il ceppo MaM è stato identificato come R.pneumotropicus e il ceppo MaR come R. Ratti. Inoltre, è stata determinata la sequenza completa del genoma (2.213.961 bp) del ceppo MaR (il numero di operoni rRNA era 6 e il numero di geni è stato stimato in 2.063). [Discussionel I ceppi MaM e MaR sono stati utilizzati come standard per identificare la «Pasteurella pneumotropica» in Giappone. Da questa analisi, abbiamo determinato la specie di entrambi i ceppi come segue: il ceppo MaM è R.pneumotropicus e il ceppo MaR è R.ratti. Sorprendentemente, questi risultati mostrano che R. Ratti può essere isolato dai ratti in Giappone.

Clostridium pili per me (CP) è suscettibile di infezione in vari animali da laboratorio tra cui ratti e topi e mostra infezioni asintomatiche tranne che negli animali immunocompromessi. È considerata una diagnosi differenziale importante per mantenere le strutture animali ed è ben noto per influenzare i dati sperimentali degli studi sugli animali. La sierodiagnosi (ELISA, IFA) e la PCR sono comunemente usate per la diagnosi di CP perché l'isolamento nel mezzo nutritivo artificiale è difficile per la CP. Tuttavia, l'esistenza dell'anticorpo non specifico che indica la cross-reattività con CP utilizzando la sierodiagnosi è riportata ed è riconosciuta spesso in un caso simile nelle nostre strutture. Inoltre, il metodo PCR ha dei limiti come metodo diagnostico affidabile con monitoraggio periodico, perché la CP non è rilevabile nelle feci dopo l'aumento del titolo anticorpale. Recentemente, abbiamo esaminato un approccio diverso, preservando le feci degli animali ogni mese. Abbiamo adottato il test PCR per CP non influenzato dall'influenza degli anticorpi come diagnostica più affidabile utilizzando le feci continuamente conservate. In questo rapporto, mostriamo un'istanza recente. (anticorpo non specifico) per portare all'ispezione del flusso in via di sviluppo nella nostra azienda.