Il glicoside totale della cistanche ha effetti sull'olfatto?

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L'effetto dei glicosidi totali di cistanche sulle cellule di rivestimento olfattivo del ratto e la loro secrezione di fattori neurotrofici

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

La lesione del midollo spinale (SCI) è una lesione grave della centralesistema nervoso, pari al {{0}},2 percento —0,5 percento del trauma totale. Nelle fratture vertebrali, il 16%-40% è complicato da lesioni del midollo spinale, che spesso lasciano una grave disabilità, portando a difficoltà nella vita quotidiana che incidono sulla qualità della vita dei pazienti e causano un grande onere per la famiglia e la società.OlfattivoLe cellule di rivestimento (OEC) sono un tipo speciale di colla nervosa. Le plasmacellule possono migrare nel cervello conolfattivoassoni nervosi e possono secernere molti fattori di crescita come NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptide-Y e S-100. A causa di queste caratteristiche diolfattivocellule avvolgenti, le OEC sono considerate una delle cellule seme promettenti per il trapianto cellulare per riparare la SCI. Attualmente, il trattamento della LM nel campo della medicina riabilitativa si basa principalmente su una riabilitazione completa. Al fine di trovare un metodo più efficace, la seguente ricerca è stata condotta sull'effetto dicistancetotaleglicosidisugli OEC:

Cistanche glicoside totale per cellule di rivestimento olfattivo

1 Materiale e metodi

1.1 Materiali sperimentali

Ratto Wistar (fornito dall'Animal Center of Inner Mongolia University);cistancetotaleglicosidi, terreno DMEM/F12, siero fetale di vitello (FCS), poli-D-lisina, arabinoside (Ara-C), tripsina, soluzione D-Hanks, anti-p75NGFR di coniglio (Santa Cruz), kit ELISA (Promega), incubatrice cellulare (Thermo-HEPA Classe 100), microscopio a contrasto di fase invertito (Olympus CKX41, Giappone), banco da lavoro ultra-pulito (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) La società, SW-CJ-2FD), enzima analizzatore di etichette (Wellscan MKH), citometro a flusso, ecc.

1.2 Metodi di ricerca

1.2.1 Coltura, purificazione e identificazione di OEC: i ratti Wistar sono stati sacrificati per decapitazione e immersi nel vino per 5 minuti. Il cranio anteriore è stato aperto per esporre ilolfattivolampadina. Il dueolfattivoi bulbi sono stati completamente rimossi al microscopio da dissezione. Lavare con la soluzione D-Hanks; taglia ilolfattivobulbo con forbici microchirurgiche, aggiungere 2 ml di 0,25 percento di pancreatina e incubare a 37 gradi per 20 minuti; aggiungere il mezzo di coltura D MEM/F12 contenente il 10 percento di siero di vitello a una provetta da centrifuga da 2 ml La digestione è stata terminata nel mezzo; la pipetta bus ha aspirato il tessuto non completamente digerito a 800 rpm e centrifugato per 5 min, scartato il supernatante; infine utilizzato il mezzo condizionato (20% FCS più 20|i, mol/LForskolin più 20|ig/mlBPE più DMEM /F12) Trasformarlo in una sospensione unicellulare lx 107ml, inoculare in un matraccio di coltura cellulare rivestito di polilisina, posizionare in un incubatore a 37 gradi, 5% di CO2, quindi aggiungere Arac. La purificazione è stata effettuata a 36 ore. Utilizzare l'anticorpo secondario IgG di coniglio anti-p75E e di capra marcato con FITC per l'identificazione delle cellule immunoistochimiche e l'osservazione al microscopio a fluorescenza.

1.2.2 Utilizzare MTT e citometria a flusso per determinare l'effetto diCistanche glicosidi totaliSuolfattivocellule inguainanti: inoculare le colture e purificateolfattivorivestire le cellule in una 96-piastra a pozzetti a 1X106 e aggiungereCistanche glicosidi totali(le concentrazioni di azione sono Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), misurare il valore OD e misurare la citometria a flusso cellulare dopo 24 ore di azione. Imposta gruppo di controllo eCistanche glicosidi totalidiversi gruppi di concentrazione: Gruppo A (gruppo di controllo): il mezzo di coltura contenente siero viene utilizzato come controllo negativo; Gruppo B (Cistanche glicosidi totaligruppo a bassa concentrazione: llig/ml); Gruppo C (Cistanche glicosidi totali a media concentrazione Gruppo: L10jxg/MK); Gruppo D (Cistanche glicosidi totaligruppo ad alta concentrazione: 100|xg/mlo): 15 ratti in ciascun gruppo.

1.2.3 Determinazione del contenuto di fattore neurotrofico nel surnatante mediante ELISA: inoculare la coltura e purificataolfattivorivestire le cellule in una 6-piastra a pozzetti a 1x106, aggiungereCistanche glicosidi totali(la stessa concentrazione di cui sopra) dopo 24 ore e agire per 24 ore, e raccogliere il supernatante separatamente, Saved at -80 Long. Il contenuto di fattori di crescita nervosa nel fluido è stato determinato con il metodo ELISA.

1.3 Analisi statistica

I dati in questo studio vengono trattati come dati di misurazione e i dati ottenuti sono espressi come media ± deviazione standard e SPSS 11.0 il software statistico viene utilizzato per l'analisi statistica. I dati ottenuti vengono analizzati mediante analisi della varianza e P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Risultati

2.1 L'effetto dicistanceglicosidi totali attiviolfattivocellule avvolgenti

2.1.1 Risultati della determinazione del metodo metil ossazolil tetrazolo (MT): Gruppo A: 0.617±0.149; Gruppo B: 0.589±{9}}.147; Gruppo C: 0.761±0.138; Gruppo D: 0.732±0.234. Confronto traCistanche glicosidi totali group (B) and Control group (A), P>0.05, la differenza non era significativa;Cistanche glicosidi totaliGruppo di concentrazione 10 mg/ml, 100 mg/ml (C, D) rispetto al gruppo di controllo (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Il risultato della determinazione della citometria a flusso è mostrato nella Figura 1. Confrontato con il gruppo di controllo, ilCistanche glicosidi totaliil gruppo era superiore al gruppo di controllo e la percentuale di cellule apoptotiche era inferiore al gruppo di controllo.

2.2 Risultati del test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA).

I risultati del test hanno mostrato che il contenuto di fattore neurotrofico derivato dalla linea cellulare gliale (GDNF): prima della somministrazione: 302,1±16,6 pg/ml, gruppo A: 340,5±13,2 pg/ml; gruppo B: 333,2±23,6 pg/ml; Gruppo C: 355,2±17,6 pg/ml; Gruppo D; 379,2 ± 15,3 pg/ml. Rispetto alla pre-somministrazione, il contenuto di GDNF è stato significativamente aumentato; rispetto al gruppo di controllo (A), il contenuto di GDNF delCistanche glicosidi totaliIl gruppo di concentrazione di 100 mg/ml (D) è stato significativamente aumentato.

3 Discussione

La difficoltà nella rigenerazione degli assoni è uno dei motivi principali per cui è difficile recuperare dopo una lesione del midollo spinale. Gli OEC hanno un ruolo nella rigenerazione degli assoni dei neuroni centrali che altri tipi di cellule sono difficili da sostituire. Negli ultimi anni, la ricerca diolfattivocellule inguainanti è diventato un punto caldo.Olfattivole cellule di rivestimento sono un tipo speciale di cellule gliali che hanno le caratteristiche delle cellule di Schwann e degli astrociti. Provengono dalolfattivomembrana basale e sono ampiamente distribuiti sulla superficie delolfattivomucosa,olfattivonervo, eolfattivolampadina. Ha la capacità di dividersi e rigenerarsi per tutta la vita e può accompagnare ilolfattivoassoni nervosi per migrare nel cervello. Gli assoni delolfattivonervo può passare attraverso la giunzione tra il sistema nervoso periferico e il sistema nervoso centrale ogni 30-60 giorni, ricrescere nelolfattivoguaina e stabilire connessioni sinaptiche4.Olfattivole cellule di rivestimento possono secernere molti fattori di crescita come NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptide-Y e S-100. Gli studi hanno dimostrato che il fattore di crescita nervoso (NGF) può prevenire l'atrofia dei neuroni del nucleo rosso spinale e rafforzare il tratto corticospinale Germoglio e promuovere la rigenerazione della via nervosa del nucleo rosso del midollo spinale; sia il fattore neurotrofico derivato dal cervello (BDNF) che la neurotrofina-3 (NT-3) possono prevenire l'apoptosi delle cellule del midollo spinale del nucleo rosso nei ratti adulti con lesioni assotomizzate e salvare i neuroni morenti e promuovere la rigenerazione assonale P. Inoltre,olfattivole cellule di rivestimento esprimono anche altri fattori sulle loro membrane cellulari, come il fattore di adesione delle cellule nervose (N-CAM), che sono coinvolti nell'adesione cellulare e nella crescita degli assoni. A causa di queste caratteristiche diolfattivocellule avvolgenti, le OEC sono considerate una delle cellule seme promettenti per il trapianto cellulare per riparare la SCI.

I componenti chimici diCistancheincludono principalmente glicosidi feniletanoidi, iridoidi, componenti volatili, lignani, polisaccaridi e alcaloidi. Lo studio lo ha trovatoCistanchee i suoi componenti chimici hanno effetti neuroprotettivi. Deng et al. ha studiato l'effetto della tubulosa B sull'apoptosi dei neuroni SH-SY5Y indotta dal fattore di necrosi tumorale (TNF). I risultati hanno mostrato che dopo 100 ug/ I neuroni SH-SY5Y dopo 36 ore di trattamento con TNF da parte di L hanno mostrato caratteristiche tipiche dell'apoptosi, mentre il trattamento con tubulina B per 2 ore potrebbe ridurre significativamente l'apoptosi indotta da TNF. Inoltre, gli studi hanno anche dimostrato che i glicosidi feniletanoidi possono inibire l'apoptosi delle cellule dei granuli cerebellari di ratto inibendo la caspasi-3 e la caspasi-8 e contro il nero di topo C57 causato dalla metilfeniltetraidropiridina (MPTP). Il danno dei neuroni dopaminergici di qualità ha un effetto protettivo. Non solo, maCistanchepuò anche alleviare vari danni come l'ischemia-riperfusione del sistema nervoso. L'esperimento della lesione da ischemia cerebrale del topo mostra che l'intervallo di infarto di 24 ore e 48 ore dopo l'ischemia nel gruppo di ischemia cerebrale-riperfusione è in media del 72,98% e del 60,45%. Al contrario, ilcistancegruppi di glicosidi totali a dose grande, media e bassa (250.0mg·kg/giorno; 125,0 mg·kg/giorno; 62,5 mg·kg/giorno) rispettivamente possono produrre il cervello dei topi dopo ischemia cerebrale-riperfusione 24 ore La dimensione dell'infarto è stata ridotta al 25,94 percento, 25,81 percento e 31,13 percento e la dimensione dell'infarto cerebrale è stata ridotta al 22,14 percento, 20,06 percento e 22,27 percento dopo 48 ore. C'era una differenza significativa tra i due, mostrando un significativo effetto inibitorio sull'apoptosi neuronale.

In questo studio, diverse concentrazioni diCistanche glicosidi totalisono stati applicati alle OEC. Il metodo MTT e la misurazione della citometria a flusso hanno confermato che 10mg/ml100mg/mlCistanche glicosidi totalipuò favorire la proliferazione diolfattivocellule avvolgenti. I risultati della citometria a flusso lo hanno dimostratoCistanche glicosidi totalipuò favorire la proliferazione diolfattivocellule inguainanti Promuove principalmente la proliferazione del ciclo G1 diolfattivospermatozoi e riduce significativamente le cellule apoptotiche. Perciò,Cistanche glicosidi totalinon può solo favorire la proliferazione diolfattivorivestire le cellule ma anche aumentare l'attività cellulare e inibire la loro apoptosi. Il test di immunoassorbimento enzimatico lo dimostraCistanche glicosidi totalipuò promuovere significativamente la secrezione di GDNF da parte diolfattivocellule avvolgenti. I risultati di cui sopra forniscono una base sperimentale per l'applicazione clinica diCistanche glicosidi totali.

Riferimenti

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