La pelle svolge un ruolo fondamentale nella modulazione della temperatura corporea, nella percezione del dolore e della pressione

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ASTRATTO

Sfondo:Chicchi Verdi di Caffè Arabica L. Famiglia: Le Rubiaceae sono una ricca fonte di polifenoli che prevengono i danni ossidativi della pelle. In questo studio, i liposomi sono stati formulati come veicolanti di farmaci per migliorare la permeabilità cutanea dei polifenoli per la somministrazione topica. Materiali e metodi: Gli estratti di chicchi di caffè verde sono stati preparati variando i rapporti di metanolo e acqua. L'analisi fitochimica e la valutazione antiossidante in vitro sono state condotte su tutti gli estratti per scegliere l'estratto migliore per ulteriori studi. Il potenziale di citotossicità (test MTT) e l'attività anti-elastasi dell'estratto scelto sono stati valutati su linee cellulari L929 utilizzando un citometro a flusso. I liposomi dell'estratto sono stati preparati con il metodo di idratazione a film sottile e ottimizzati variando il rapporto fosfatidilcolina/colesterolo e aumentando gradualmente la quantità di estratto. La formulazione liposomiale è stata convertita in gel utilizzando carbopol"974P come agente gelificante. La sospensione liposomiale preparata e il gel liposomiale sono stati valutati per vari parametri di formulazione. Risultati: i risultati dell'analisi fitochimica, dei saggi antiossidanti in vitro e della valutazione in vitro su Le linee cellulari L929 hanno concluso che l'estratto metanolico al 25% non era tossico con il più alto contenuto fenolico e mostrava una buona attività antielastasi.L'efficienza di incapsulamento dell'acido clorogenico nella formulazione liposomiale ottimizzata era del 75%.Il gel liposomiale ha mostrato un rilascio prolungato del farmaco fino a 12 hr rispetto a 6-7 hr della formulazione convenzionale. Conclusione: il gel formulato a base liposomiale caricato con estratto di chicco di caffè verde può fungere da potenziale vettore per effetti antietà.

Parole chiave:Chicchi di caffè verde (GCB), Acido clorogenico, Estratto, Liposomi, Antiossidante, Antietà.

INTRODUZIONE

La pelle svolge un ruolo fondamentale nella modulazione della temperatura corporea, nella percezione del dolore e della pressione, e agisce come una barriera cruciale contro l'inquinamento ambientale rendendo l'invecchiamento cutaneo molto evidente.1 L'esposizione a lungo termine della pelle alle radiazioni ultraviolette produce radicali liberi che inducono stress ossidativo sulla pelle. pelle che porta allo sviluppo di fotoinvecchiamento, scottature solari, melanogenesi, immunosoppressione e fotocarcinogenesi.² I radicali liberi sono molecole di ossigeno estremamente reattive che sono impegnate a formare legami incrociati con le molecole di collagene che portano alla perdita di elasticità della pelle.3 L'invecchiamento si manifesta con cedimenti, assottigliamento, secchezza e macchie sulla pelle. Così, con il desiderio di sembrare giovani, i prodotti antietà sono molto richiesti. Gli antiossidanti di origine vegetale hanno acquisito importanza nell'industria cosmetica. Gli antiossidanti aiutano a riparare e prevenire i danni ossidativi causati dai radicali liberi. L'attività antiossidante delle erbe è principalmente dovuta alle proprietà redox dei composti fenolici.4 Pertanto, si scopre che gli antiossidanti sono promettenti nel ritardare i segni dell'invecchiamento come rughe, macchie senili e linee sottili.

I chicchi di caffè verde (Coffea arabica L, Rubiaceae) sono una ricca fonte di polifenoli come l'acido clorogenico e i suoi composti correlati come l'acido caffeico, l'acido cumarico e l'acido ferulico che prevengono il danno ossidativo della pelle. Gli studi hanno rivelato che gli estratti di C. arabica possiedono proprietà antibatteriche,5 antivirali,6 antinfiammatori,7 cicatrizzazione delle ferite cutanee e 'riduzione del danno ossidativo alle macromolecole? e attività soppressiva dell'espressione delle metalloproteinasi.10

L'acido clorogenico, il principale composto polifenolico dei chicchi di caffè verde, ha proprietà antiossidanti e depigmentanti e inibisce i danni alla pelle indotti dai raggi UV. I2 Secondo studi scientifici, i chicchi di caffè verde contengono una quantità maggiore di acido clorogenico rispetto ai chicchi di caffè tostati e ad altre piante. "3

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Il rilascio di polifenoli attraverso la pelle è inefficace a causa della sua limitata penetrazione. Pertanto è necessaria la base della formulazione o potenziatori di penetrazione che ne migliorano la penetrazione". Quindi i liposomi sono stati selezionati come vettori di farmaci poiché sono di natura anfifila e le molecole idrofile possono essere facilmente incorporate nei doppi strati concentrici. I liposomi, essendo fisiologicamente simili alla membrana cellulare, non sono - di natura tossica. La presenza di fosfolipidi nei liposomi migliora l'assorbimento topico del farmaco dall'epidermide negli strati inferiori a causa della maggiore adesione del complesso fosfolipidico del farmaco sulla pelle.'5 Lo scopo del presente studio è sviluppare un gel contenente liposomi carichi di estratto di caffè verde in grani da utilizzare come formulazione cosmetica antiossidante per effetti antietà.

MATERIALI E METODI Materiali

I chicchi di caffè verde arabica L sono stati ottenuti dal mercato locale di Mumbai nell'agosto 2019 e sono stati autenticati dal Dr. Harshad M. Pandit. Ex-direttore e professore associato di botanica, Guru Nanak Khalsa College, Mumbai, India. La fosfatidilcolina è stata acquistata da HiMedia Laboratories Pvt Ltd, il 99% del colesterolo è stato acquistato da Loba Chemie Pvt Ltd, 2,2-difenil{5}}picrylidrazyl (DPPH) e acido clorogenico è stato acquistato da Otto Chemie Pvt Ltd, Mumbai . L'acido gallico e l'acido ascorbico sono stati acquistati da SD Fine Chemicals Ltd, Mumbai. Tutte le sostanze chimiche utilizzate in questo studio erano di grado AR. I liposomi sono stati prodotti utilizzando un evaporatore rotante, Rotaeva, Equitron e spettrofotometro UV-visibile, Shimadzu 1800 è stato utilizzato per la valutazione dei liposomi.

Cistanche può antietà

Metodi

Metodologia di estrazione

I chicchi di caffè verde in polvere sono stati sgrassati usando etere di petrolio a 40-60 gradi (1:6 percento p/v) per 3 ore in un apparato soxhlet. La polvere di caffè verde sgrassato è stata estratta con diversi solventi come acqua, 25 percento di metanolo, 50 percento di metanolo, 75 percento di metanolo e 100 percento di metanolo per 2 ore utilizzando un sistema soxhlet. Gli estratti risultanti sono stati concentrati in un piatto di porcellana su un bagno d'acqua elettrico a 80 gradi per rimuovere il solvente. Gli estratti preparati sono stati utilizzati per l'analisi qualitativa e quantitativa.

Contenuto fenolico totale

Il contenuto fenolico totale è stato determinato con il metodo del reagente Folin-Ciocalteu utilizzando la procedura standard. L'acido gallico è stato utilizzato come standard e il contenuto polifenolico totale è stato espresso come mg/g di acido gallico equivalente (GAE) dalla curva di calibrazione dell'acido gallico.16

Sovrapposizione spettrale

Il metodo spettrometrico UV è stato utilizzato per determinare la presenza di acido clorogenico nell'estratto. Per la preparazione di soluzioni standard, Img/ml di acido clorogenico standard è stato sciolto in tampone fosfato ed è stata preparata un'ulteriore diluizione per ottenere 10 ug/ml di soluzione standard. Per la soluzione campione, il 25 percento di 1 mg/ml di estratto metanolico è stato sciolto in tampone fosfato ed è stata preparata un'ulteriore diluizione per ottenere 10 ug/ml di soluzione standard. Uno spettro di sovrapposizione di entrambe le soluzioni è stato ottenuto utilizzando la spettrofotometria UV-Vis.

Quantificazione dell'acido clorogenico in ciascun estratto Preparazione della soluzione standard

L'acido clorogenico standard è stato sciolto nei solventi come acqua, 25 percento di metanolo, 50 percento di metanolo, 75 percento di metanolo e 100 percento di metanolo. Allo scopo di ridurre l'errore nella procedura di preparazione, è stata preparata la soluzione di acido clorogenico 10 ppm in ciascun solvente di cui sopra, e quindi è stata preparata una diluizione corrispondente che varia da concentrazione 2 a 10 ppm. Il grafico della linearità è stato realizzato registrando l'assorbanza a 324 nm utilizzando uno spettrofotometro UV-Vis.

Preparazione della soluzione campione

Per la preparazione della soluzione del campione, gli estratti sono stati disciolti nei rispettivi solventi ed è stata preparata una soluzione a 10 ppm. L'assorbanza per la soluzione campione è stata registrata a 324 nm utilizzando uno spettrofotometro UV-Vis. L'assorbanza ottenuta è stata estrapolata nel grafico di linearità per trovare la concentrazione di acido clorogenico in ciascun estratto.

Determinazione delle attività antiossidanti

Saggio antiossidante PDF (2,2-difenil -1-picrylidrazyl) L'attività di scavenging radicale degli estratti sui radicali DPPH è stata studiata seguendo il metodo standard." L'acido ascorbico è stato utilizzato come standard. L'esperimento è stato eseguito in triplicato. La percentuale dell'attività di scavenging dei radicali DPPH è stata tracciata rispetto a ciascuna concentrazione di estratto ed è stata determinata la IC. Saggio antiossidante dell'ossido nitrico

L'attività di scavenging dei radicali dell'ossido nitrico è stata studiata mediante l'uso della reazione di Griess Illosvoy.perduta impero cistanchel8 L'acido ascorbico è stato utilizzato come standard. L'esperimento è stato eseguito in triplicato. La percentuale dell'attività di scavenging dei radicali di ossido nitrico è stata tracciata rispetto a ciascuna concentrazione di estratto e l'inibizione percentuale di IC per entrambi gli studi sugli antiossidanti è stata calcolata utilizzando la formula indicata di seguito. L'attività di scavenging è stata espressa come percentuale di inibizione calcolata utilizzando la seguente formula:

Determinazione della vitalità cellulare mediante test MTT Estratto di chicchi di caffè verde, ovvero estratto metanolico al 25%, è stato sottoposto a screening per lo studio di citotossicità contro le linee cellulari L929.200 ul di sospensione cellulare sono stati seminati in una 96-piastra a pozzetti con densità cellulare (20,{5}} cellule per pozzetto), senza l'agente di prova. Le cellule sono state lasciate crescere per circa 24 ore. È stata aggiunta una concentrazione appropriata dell'agente di prova (25% di estratto metanolico), la piastra è stata incubata per 24 ore a 37 gradi in un'atmosfera al 5% di CO, e il mezzo esaurito è stato rimosso. Il reagente MTT è stato aggiunto a una concentrazione finale di (0,5 mg/mL) di volume totale e le piastre sono state incubate per 2-3 ore al buio. 100 ul di DMSO sono stati aggiunti dopo la rimozione del reagente MIT e agitati delicatamente. L'assorbanza è stata misurata a 570 nm e 630 nm utilizzando uno spettrofotometro su un lettore ELISA. Il valore IC.o è stato determinato utilizzando un'equazione di regressione lineare. Formule utilizzate per lo studio:

Determinazione dell'attività Anti Elastasi

Le cellule sono state coltivate alla densità di 3×105 cellule/2 ml e incubate in un'incubatrice a CO per 24 ore a 37 gradi. 1 Per lo studio antielastasi, le cellule trattate con 250uM di epigallocatechina gallato (EGCG) sono state utilizzate come controllo positivo, le cellule trattate con 200ug/ml di Il 25 percento dell'estratto metanolico è stato utilizzato come campione di prova (Tabella 6) e le cellule solo con mezzi di coltura sono state utilizzate come controllo negativo e sono state incubate in 2 ml di mezzo di coltura per 24 ore. Le provette sono state centrifugate per cinque minuti a 300 x g a 25 gradi e le cellule sono state lavate con PBS. 0,5 ml di soluzione BD Cytofix/Cytoperm sono stati aggiunti dopo la rimozione del PBS e le provette sono state mantenute indisturbate per 10 min.0,5% di albumina di siero bovino (BSA) in 'S[PO OU] USEM Olpes sem op on percent I'O pue SEd 20 μL di anticorpo monoclonale coniugato con elastasi neutrofila/ELA2 anti-umano di topo 647- sono stati aggiunti, miscelati e incubati per 30 minuti a temperatura ambiente al buio. Le cellule sono state trattate con sodio azide allo 0,1 percento e 0,5 ml di PBS e analizzate mediante citometria a flusso con l'eccitazione e l'emissione rispettivamente di 650 nm e 668 nm. In questo studio, i composti di prova, vale a dire l'estratto di chicco di caffè verde (25 percento di estratto metanolico) e l'epigallocatechina gallato standard (EGCG) sono stati utilizzati per valutare il loro effetto sull'espressione di ELA-2 (anticorpo coniugato di topo anti-elastasi umana) nella cellula L929 linee.

Preparazione di liposomi caricati con estratto di caffè verde in grani

Il metodo di idratazione a film sottile descritto da Bangham et al.1 è stato utilizzato per formulare i liposomi. La miscela lipidica è stata preparata sciogliendo fosfatidilcolina e colesterolo in cloroformio e metanolo (2:1) nel pallone a fondo tondo (RBF) e sono state aggiunte perle di vetro per la formazione di un film omogeneo. L'RBF è stato collegato a un evaporatore flash rotante (Roteva, equazione) e lasciato ruotare a 80 giri/min in un bagno d'acqua termostatato a 40 gradi. I solventi organici sono stati rimossi mediante lenta applicazione del vuoto portando alla formazione di un film lipidico omogeneo al 100% sulle pareti del pallone. Il film è stato lasciato asciugare per LH per la completa rimozione dei solventi organici. Il film lipidico essiccato è stato idratato con tampone fosfato (pH: 5,4) contenente estratto disciolto (25% di estratto metanolico) e quindi l'RBF è stato ruotato a 150 rpm/min in un bagno d'acqua termostatato mantenuto a 46 gradi che è al di sopra della temperatura di transizione di lipidi. La rotazione è stata continuata per 60 minuti fino ad ottenere la sospensione omogenea. I liposomi prodotti utilizzando questo metodo sono di dimensioni grandi ed eterogenee, quindi il metodo di sonicazione del bagno è stato utilizzato per 30 minuti per ridimensionare i liposomi. La sospensione liposomiale a base di estratto di chicchi di caffè verde è stata lasciata riposare per 2 ore a temperatura ambiente per garantire una completa idratazione. La sospensione liposomiale è stata conservata in una bottiglia di vetro color ambra in frigorifero fino al successivo utilizzo.

Caratterizzazione dei liposomi

I seguenti sono i parametri per i quali sono stati caratterizzati i liposomi preparati

Determinazione dell'efficienza di incapsulamento Lo spettrofotometro UV-Vis è stato utilizzato per stimare l'efficienza di incapsulamento dell'acido clorogenico nei liposomi caricati con estratto di chicco di caffè verde. L'assorbanza dell'acido clorogenico rimanente nel surnatante dopo la centrifugazione è stata misurata a 324 nm utilizzando uno spettrofotometro UV-Vis.frazione flavonoide purificata micronizzata 1000 mg utilizzaQuindi, la concentrazione è stata calcolata dal grafico di calibrazione ottenuto per l'acido clorogenico standard.

La quantità totale di farmaco aggiunta alla microscopia ottica

Una goccia della sospensione liposomiale è stata posta su un vetrino pulito e osservata sotto la potenza di 45X e 100X del microscopio ottico (microscopio Motic). Determinazione della dimensione della vescicola, dell'indice di polidispersibilità (PDI) e del potenziale Zeta

La dimensione della vescicola e l'indice di polidispersibilità sono stati analizzati utilizzando uno strumento dinamico di diffusione della luce con un sistema di ispezione computerizzato (analizzatore della dimensione delle particelle di Malvern). I lotti liposomiali appena preparati sono stati diluiti nel rapporto 1:100 con acqua deionizzata. Tutte le misurazioni sono state eseguite in triplicato a 25±0,5 gradi. La sospensione liposomiale è stata diluita con l'acqua deionizzata e il potenziale zeta è stato determinato utilizzando Malvern Zetasizer.

Microscopia elettronica a trasmissione (TEM) L'analisi TEM è stata eseguita per la sospensione caricata di farmaco ottimizzata mediante microscopia elettronica a trasmissione (Tecnai T20,200Kev, FEI). Una goccia della sospensione è stata posta sulla griglia con l'ausilio di una micropipetta. La griglia è stata asciugata bene. La griglia essiccata contenente il campione è stata bombardata con elettroni accelerati a 200 VK. Quindi la dimensione della vescicola e la morfologia liposomiale sono state visualizzate da TEM sotto vuoto (Figura 1). Preparazione del gel liposomiale

Il gel liposomiale caricato con estratto di chicchi di caffè verde è stato preparato utilizzando una base di gel carbopol@974P. Accuratamente 0,5 percento di carbopol@974P è stato pesato e mantenuto per l'idratazione in acqua bidistillata contenente conservanti per una notte. I pellet liposomiali ottenuti dopo centrifugazione sono stati dispersi in acqua distillata mediante sonicazione e aggiunti alla soluzione di carbopol idratato sotto agitazione. La gelificazione è stata indotta mediante neutralizzazione mediante trietanolamina (TEA). Il gel è stato valutato per colore, consistenza (uniformità e untuosità), pH, viscosità, contenuto di farmaco, spalmabilità e studio del rilascio del farmaco.

Studio in vitro sul rilascio di farmaci

L'apparato delle cellule di diffusione di Franz con una capacità del compartimento recettoriale di 22 ml e un'area superficiale di 3,91 cm2 è stato utilizzato per stimare la membrana di dialisi a rilascio di farmaci in vitro (cut-off del peso molecolare 12,000-14,{7}}) che è stato pre-idrato mediante ammollo in tampone durante la notte sono stati montati sulle cellule. Come fluido recettore è stato utilizzato il tampone fosfato a pH 5,4 (37 gradi ±{12}},5 gradi). La soluzione del serbatoio è stata agitata a 100 rpm/min utilizzando una sfera magnetica. 0,5 g di gel sono stati posti nel compartimento donatore sulla membrana. Le aliquote sono state raccolte a intervalli di 1,2, 3, 4, 5,6,7,8,12 e 24 ore e analizzate mediante spettrofotometro UV-Vis a 324 nm.20

RISULTATI E DISCUSSIONE Metodologia di estrazione

Le rese percentuali degli estratti di caffè verde arabica L. in grani sono presentate nella Tabella 3. L'aspetto fisico di tutti gli estratti era di colore giallo scuro e marrone scuro. Il 25 percento dell'estratto metanolico ha mostrato la resa percentuale più alta a 26,54±{4}}.13 rispetto a tutti gli altri estratti.

Contenuto fenolico totale

Il metodo Folin-Ciocalteu è stato utilizzato per stimare il contenuto fenolico totale di tutti gli estratti. Il TPC di tutti gli estratti è espresso in termini di equivalente di acido gallico (l'equazione della curva standard: y= 0.0031 più 0.3477,r2=0.9953) menzionato nella Tabella 1. Tra tutti gli estratti il ​​maggior contenuto fenolico è stimato nel 25% dell'estratto metanolico. Sovrapposizione spettrale Quantificazione dell'acido clorogenico in ciascun estratto La quantità di contenuto di acido clorogenico presente in ciascun estratto è indicata nella Tabella 3 e nella Figura 2.oteflavonoideSecondo i risultati, la quantità più alta di acido clorogenico è risultata essere presente nel 25% dell'estratto metanolico.

Sulla base dei risultati ottenuti dal contenuto fenolico totale, dalla quantificazione dell'acido clorogenico e dal test antiossidante, è stato riscontrato che l'estratto metanolico al 25% contiene il contenuto fenolico più elevato, una maggiore quantità di acido clorogenico e la massima attività di scavenging dei radicali rispetto ad altri estratti.

Determinazione della vitalità cellulare mediante test MTT Il test di vitalità è un test che determina la capacità di tessuti, cellule o organi di mantenere o recuperare lo stato di sopravvivenza. Lo studio di citotossicità del composto in esame, l'estratto di chicco di caffè verde contro le linee cellulari L929 nei dati statistici dello studio di citotossicità cellulare condotto dal lettore ELISA ha suggerito che l'estratto di chicco di caffè verde ha mostrato proprietà potenziali di citotossicità moderate con concentrazione inibitoria （IC） a 306,38 ug/ml rispetto allo standard farmaco Camptotecina con 23 ug/ml Tabella 5. L'osservazione suggerisce fortemente che l'estratto di caffè verde in grani non ha un potenziale di citotossicità significativo con una concentrazione che varia da 12.5-200 ug/ml rispettivamente con un periodo di incubazione di 24 ore a 37 gradi (Grafico 1).

Determinazione dell'attività Anti Elastasi

L'enzima elastasi è in grado di scomporre l'elastina, una proteina fibrosa elastica insolubile che insieme al collagene contribuisce alla resistenza meccanica del tessuto connettivo. Diversi studi hanno suggerito che sia l'invecchiamento della pelle che gli effetti antirughe corrispondono in modo significativo a una ridotta attività dell'elastasi. Pertanto sono stati condotti studi antielastasi per confermare l'utilità dell'estratto di caffè verde in grani come agente anti-invecchiamento. In questo studio, il composto di prova, ovvero l'estratto di chicco di caffè verde e Std, EGCG è stato utilizzato per valutare il loro effetto sull'espressione di ELA-2 (anticorpo coniugato di topo anti-elastasi umana) nella linea cellulare L929. Le concentrazioni dei composti utilizzati nell'esperimento erano le seguenti:

L'estratto di fagiolo GC del composto di prova fornito ha soppresso l'espressione ELA-2 nella linea cellulare L929. I valori di intensità di fluorescenza media relativa di ELA-2 sono stati ridotti in modo quasi simile in std, epigallocatechina gallato e estratto di chicco di caffè verde composto da test. (Tabella 7; Figura 3 e Istogramma 1). Quindi, il fagiolo GC può essere considerato un buon agente antielastasi. Preparazione di liposomi caricati con estratto di caffè verde in grani

In questo studio è stato utilizzato il metodo di idratazione a film sottile per formulare i liposomi.puritani vitamina cIl motivo per selezionare questo

il metodo è in quanto è il metodo più semplice per preparare vescicole multilamellari ed è in grado di caricare una massa maggiore di molecole idrofile come l'acido clorogenico rispetto alle vescicole unilamellari. È stato riscontrato che il metodo di idratazione a film sottile fornisce il 75% di efficienza di incapsulamento per l'acido clorogenico presente nell'estratto Tabella 2. Pertanto, questo metodo è stato utilizzato per la preparazione dei liposomi.

Caratterizzazione dei liposomi al microscopio ottico

La vescicola multilamellare è stata chiaramente osservata (Figura 4). Le osservazioni microscopiche sono state utilizzate per valutare la forma e le dimensioni delle vescicole annotate per tutti i lotti preparati.

Determinazione dell'indice di polidispersibilità (PDI), del potenziale Zeta e della dimensione della vescicola

PDI appare fondamentalmente per la distribuzione dimensionale delle vescicole in un dato campione.sistanoIl valore numerico della PDI parte da {{0}}.0 (dimensione delle particelle perfettamente uniforme) a 1,1 (dimensione delle particelle altamente polidisperse). Nel caso di sistemi di trasporto a base lipidica come liposomi e nanoliposomi di dimensioni 0,3 e inferiori sono accettabili in quanto indicano una popolazione omogenea di vescicole fosfolipidiche.21 Il potenziale zeta è una tecnica di caratterizzazione significativa che viene utilizzata per comprendere la stabilità fisica delle particelle. Un valore da -30 mV a più 30 mV è generalmente considerato dotato di forza repulsiva sufficiente per ottenere una migliore stabilità colloidale fisica.

Il metodo di idratazione a film sottile fornisce vescicole multilamellari grandi ed eterogenee. L'analisi delle dimensioni dei liposomi prodotti ha rivelato una dimensione media z (d.nm) di 864.2 nm, PDI di 0.375 e potenziale Zeta di -12.4 con una buona efficienza di intrappolamento.

Microscopia elettronica a trasmissione (TEM) L'analisi morfologica di questi liposomi mediante TEM ha mostrato liposomi a forma sferica. Preparazione del gel liposomiale

La dispersione liposomiale è stata semplicemente miscelata con il polimero per dare i gel corrispondenti. La formulazione in gel liposomiale è vantaggiosa poiché la fusione delle vescicole può essere efficacemente evitata o minimizzata poiché il polimero funge da distanziatore tra i liposomi. Pertanto, la dimensione della vescicola non è influenzata perché è un processo di interazione polimero/liposoma controllato. La formulazione in crema a base liposomiale non è stata scelta poiché nei prodotti a base di emulsione sono segnalati problemi di stabilità a causa del metodo in quanto è il metodo più semplice per preparare vescicole multilamellari ed è in grado di caricare una massa maggiore di molecole idrofile come l'acido clorogenico rispetto a vescicole unilamellari. È stato riscontrato che il metodo di idratazione a film sottile fornisce il 75% di efficienza di incapsulamento per l'acido clorogenico presente nell'estratto Tabella 2. Pertanto, questo metodo è stato utilizzato per la preparazione dei liposomi.

Caratterizzazione dei liposomi al microscopio ottico

La vescicola multilamellare è stata chiaramente osservata (Figura 4). Le osservazioni microscopiche sono state utilizzate per valutare la forma e le dimensioni delle vescicole annotate per tutti i lotti preparati.

Determinazione dell'indice di polidispersibilità (PDI), del potenziale Zeta e della dimensione della vescicola

PDI appare fondamentalmente per la distribuzione dimensionale delle vescicole in un dato campione. Il valore numerico della PDI parte da {{0}}.0 (dimensione delle particelle perfettamente uniforme) a 1,1 (dimensione delle particelle altamente polidisperse). Nel caso di sistemi di trasporto a base lipidica come liposomi e nanoliposomi una dimensione di 0,3 e inferiore è accettabile in quanto indica una popolazione omogenea di vescicole fosfolipidiche.21 Il potenziale zeta è una tecnica di caratterizzazione significativa che viene utilizzata per comprendere la stabilità fisica delle particelle. Un valore da -30 mV a più 30 mV è generalmente considerato dotato di forza repulsiva sufficiente per ottenere una migliore stabilità colloidale fisica. 2

Il metodo di idratazione a film sottile fornisce vescicole multilamellari grandi ed eterogenee. L'analisi dimensionale dei liposomi prodotti ha rivelato una dimensione media z (d.nm) di 864.2 nm, PDI di 0.375 e potenziale Zeta di -12.4 con una buona efficienza di intrappolamento.

Microscopia elettronica a trasmissione (TEM) L'analisi morfologica di questi liposomi mediante TEM ha mostrato liposomi a forma sferica.

Preparazione del gel liposomiale

La dispersione liposomiale è stata semplicemente miscelata con il polimero per dare i gel corrispondenti. La formulazione in gel liposomiale è vantaggiosa poiché la fusione delle vescicole può essere efficacemente evitata o minimizzata poiché il polimero funge da distanziatore tra i liposomi. Pertanto, la dimensione della vescicola non è influenzata perché è un processo di interazione polimero/liposoma controllato. La formulazione in crema a base di liposomi non è stata scelta in quanto sono segnalati problemi di stabilità nei prodotti a base di emulsione a causa di

la presenza di tensioattivo e olio in eccesso che possono interagire con le vescicole. Varie proprietà come la viscosità possono essere facilmente controllate variando la concentrazione del polimero o cambiando il tipo di polimero. Pertanto, i gel liposomiali sono stati preparati poiché aggirano il problema della stabilità, forniscono un rilascio controllato, sono facili da preparare e hanno un fascino estetico come cosmetici per la cura della pelle.23 I lipogel preparati erano di colore giallo pallido e opachi. 0.5% p/p di carbopol@974P è risultato avere una buona consistenza e un aspetto liscio privo di qualsiasi aggregazione. Il contenuto di farmaco per il gel liposomiale è risultato essere 94,16±1,3 con una viscosità del gel compresa tra 13.500 cps e 16.500 cps e una spalmabilità di circa 7-8 g.cm/s.

Profilo di rilascio del farmaco in vitro

Lo strato più esterno della pelle è lo strato corneo ed è composto principalmente da cheratina proteica e lipidi. I lipidi intercellulari svolgono un ruolo fondamentale nel controllo dell'assorbimento percutaneo. I lipidi intercellulari possono interagire con i fosfolipidi presenti nei liposomi e quindi causare rigonfiamento dei lipidi senza alterare la struttura a doppio strato multiplo dello strato corneo. Questi lipidi gonfi fanno accumulare il farmaco e formano un deposito intracutaneo. Sebbene il meccanismo dei liposomi applicati localmente non sia completamente compreso, la composizione lipidica, la carica superficiale e la lamellarità liposomiale svolgono principalmente un ruolo importante nella disposizione del farmaco. Gli studi hanno anche rivelato che la somministrazione topica è influenzata anche dalle dimensioni dei liposomi.24 Il rilascio del farmaco in vitro è stato eseguito utilizzando una membrana per dialisi. Lo studio in vitro sul =rilascio del gel liposomiale ha mostrato un effetto di rilascio prolungato fino a 12 ore rispetto alle 7-8 ore del gel convenzionale Grafico 2.

CONCLUSIONE

Gli estratti di chicchi di caffè Arabica verdi sono stati sottoposti a screening per il contenuto fenolico totale, la quantificazione dell'acido clorogenico e il test antiossidante. Sulla base dei risultati ottenuti da questi studi è stato scelto il 25 per cento di estratto metanolico da incorporare nei liposomi in quanto aveva mostrato il più alto contenuto fenolico, una maggiore quantità di acido clorogenico e una migliore attività antiossidante. Prima di incorporare l'estratto nei liposomi, è stato sottoposto a screening per MTT e test antielastasi. Sulla base del test MT, l'estratto non aveva potenziale di citotossicità cellulare e, come per il test antielastasi, l'estratto aveva attività antielastasi. Pertanto l'estratto può essere utilizzato per formulare liposomi antietà. Le vescicole multilamellari sono state preparate utilizzando il metodo di idratazione a film sottile. I liposomi preparati avevano una buona efficienza di incapsulamento e una migliore stabilità fisica. La sospensione liposomiale a base di estratto è stata formulata in un gel liposomiale. Secondo lo studio in vitro sul rilascio di farmaci, il gel liposomiale ha mostrato un effetto di rilascio prolungato fino a 12 ore rispetto al gel convenzionale. Quindi i liposomi caricati con estratto di chicco di caffè verde possono essere considerati un vettore efficace per la somministrazione topica con potenziale antietà.

RICONOSCIMENTO

Gli autori sono grati a Stellixir Biotechchnology, Bengaluru e Karnataka per il loro aiuto nel completare il test MTT e gli studi sul test anti-elastasi, ringraziamo anche le soluzioni di test Sprint, Mumbai per l'imaging TEM e il Dr.Bhanuben Nanavati College of Pharmacy del nostro college SVKM per fornendo le migliori strutture per condurre questo studio.

CONFLITTO D'INTERESSE

Gli autori dichiarano assenza di conflitto di interesse.

ABBREVIAZIONI:

TPC: contenuto fenolico totale; DPPH:2,2-difenile -1-picrilidrazile; GAE: equivalente di acido gallico; GC: Caffè verde; GCB: chicchi di caffè verde; ELA-2 (anticorpo coniugato di topo anti-elastasi umana): elastasi neutrofila; EGCG: epigallocatechina gallato; PC: fosfatidilcolina; CH: colesterolo; RBF: pallone a fondo tondo; TEM: Microscopia Elettronica a Trasmissione; MTT: 3-(4,5-diemthyltiazol-2-yl)-2,5-difenil tetrazolio bromuro; PDI: Indice di polidispersibilità;IC":Concentrazione inibitoria semimassima.

Questo articolo è estratto da Desai e Mallya.: Sviluppo di Gel liposomiale antietà caricato con estratto di chicchi di caffè verde