Effetto terapeutico del cistanoside A sul metabolismo osseo dei topi ovariectomizzati

1. Introduzione

L’osteoporosi, un “killer silenzioso” sistemico, è diventata un grave rischio per la salute che affligge oltre 2.000 milioni di persone in tutto il mondo negli ultimi anni. È caratterizzata da una bassa densità di massa ossea (BMD) e da un deterioramento microarchitettonico, che derivano da un eccesso di riassorbimento osseo rispetto alla formazione ossea e, infine, determinano una frattura osteoporotica. Al giorno d’oggi, l’identificazione di agenti in grado di bloccare la differenziazione e il riassorbimento degli osteoclasti è la strategia comune e di successo per lo sviluppo di farmaci terapeutici per l’osteoporosi, e in effetti ci sono molti agenti sintetici, tra cui l'estradiolo valerato e l'alendronato sodico, che potrebbero farloprevenire e curare l’osteoporosi. Tuttavia, i farmaci per queste malattie sono tutt’altro che ideali; alcuni di questi farmaci potrebbero aumentare il rischio di cancro dell’endometrio e della mammella e avere anche una serie di effetti collaterali, come ipercalcemia, ipercalciuria, ecc., che ne limitano le applicazioni cliniche. Pertanto, per più di un millennio, le medicine tradizionali cinesi (MTC), in particolare la MTC commestibile con composti e frazioni bioattivi isolati, sono state ampiamente utilizzate in modo sicuro ed efficace nei paesi asiatici per prevenire e curare varie malattie, inclusa l’osteoporosi.. 

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L’osteoporosi è caratterizzata da un maggiore riassorbimento osseo dovuto ad un aumento dell’osteoclastogenesi e questo processo comporta l’impegno dei monociti ematopoietici nei precursori degli osteoclasti, che si fondono per formare osteoclasti multinucleati che colpiscono i siti ossei sottoposti a rimodellamento [4]. L'attivatore del recettore per il ligando del fattore nucleare κB (RANKL), un fattore chiave secreto dagli osteoblasti, stimola la differenziazione dei monociti in osteoclasti [8,9]. L'interazione di RANKL con il suo recettore RANK si traduce in una cascata di eventi intracellulari, tra cui NF-κB, PI3K/Akt e chinasi calcio/calmodulina-dipendente reclutando il fattore associato al recettore TNF della proteina segnale dell'adattatore (TRAF6). Di conseguenza, diversi geni marcatori correlati agli osteoclasti, tra cui TRAP, catepsina K e DPD, vengono sovraregolati e il processo di riassorbimento osseo viene accelerato.

I glicosidi feniletanoidi sono caratterizzati da porzioni di acido cinnamico e idrossifeniletilico che sono attaccati ad un -glucopiranosio (apiosio, galattosio, ramnosio, xilosio, ecc.) tramite un legame glicosidico, che sono ampiamente distribuiti nelle piante medicinali [10]. Il cistanoside A (Cis A) è un attivoglicoside feniletanoidein Cistanche deserticola YC Ma. Secondo la documentazione della farmacopea cinese, C. deserticola era tradizionalmente usata per trattare la carenza di rene-yin, debolezza muscolare, debolezza lombare, ecc., e i glicosidi feniletanoidi sono i principali costituenti bioattivi di questa erba [11]. Secondo la teoria del "rene" della MTC, il rene potrebbe governare il sistema osseo, il che significa che lo sviluppo e le funzioni delle ossa dipendono dall'essenza del rene, e questa essenza del rene può trasformarsi nel midollo osseo per nutrire le ossa, promuovere la crescita e la riparazione dello scheletro e rafforzarlo [12]. Poiché C. deserticola potrebbe rafforzare il rene, abbiamo supposto che Cis A potesse prevenire e curare l'osteoporosi. Il presente studio è stato quindi progettato per convalidare il potenziale diCis A nella prevenzione dell’osteoporosiutilizzando un modello di topi ovariectomizzati, sono stati determinati i marcatori di formazione e riassorbimento osseo, nonché i potenziali meccanismi correlati per stimare la bioattività antiosteoporotica di questo agente.

2. Risultati e discussione

2.1. Risultati

2.1.1. Effetti di Cis A sul test di flessione a tre punti dell'osso

Per analizzare se il trattamento con Cis A rende l'osso più forte, abbiamo sottoposto i femori al test di flessione a tre punti. Come mostrato nella Figura 1, il carico massimo applicato quando l'osso si rompe è stato del 21,5% e superiore del 22,0% negli animali trattati con 20 mg/kg e 80 mg/ kg Cis A, rispettivamente, rispetto agli animali del gruppo ovariectomizzato (OVX) (p < 0.05). Nel frattempo, il trattamento con Cis A ha anche migliorato la rigidità ossea; tutti i topi trattati con Cis A hanno mostrato una rigidità significativamente aumentata con dati rispettivamente di 121.0 ± 12,1 (p < 0,05), 124,1 ± 16,2 (p < 0,05) e 127,7 ± 9,6 (p < 0,01), rispetto a 102,2 ± 10,7 dei topi OVX. I risultati indicano che l’aumento della resistenza ossea nei topi OVX trattati con Cis A era dovuto a una maggiore quantità di osso e a un miglioramento della qualità ossea.

2.1.2. Effetti di Cis A sulla microarchitettura ossea

La microarchitettura tridimensionale dell'osso trabecolare dei topi misurata mediante micro-CT (Figura 2 e Tabella 1) mostra intuitivamente che i topi nel gruppo OVX presentavano una notevole riduzione dell'area trabecolare e del numero trabecolare rispetto al gruppo fittizio, indicando che l'ovariectomia potrebbe indurre una notevole diminuzione della densità di massa ossea (BMD, -46%), del contenuto minerale osseo (BMC, -66%), del contenuto minerale tissutale (TMC, -85%), della frazione volumetrica ossea (BVF, -82%), numero trabecolare (Tb. N, −76%) e un aumento della separazione trabecolare (Tb. Sp, +80%) senza alcuna modifica nella densità minerale tissutale totale (TMD) e nello spessore trabecolare (Tb. Th) dopo il operazione di 12 settimane. Tuttavia, i topi OVX trattati con Cis A hanno prodotto un aumento della BMD dose-dipendente (+43%~57%), BMC (+65%~73%), TMC (+83%~ 90%), BVF (+80%~88%), maggiore riduzione della Tb. Sp (-79%~88%) e Tb ulteriormente potenziato. N (+73%~82%) rispetto al gruppo OVX. La TMD sembrava non essere influenzata dall'ovariectomia ma era significativamente aumentata dal trattamento con estradiolo valerato (EV).

2.1.3. Effetti di Cis A sia sui marcatori di formazione ossea che di riassorbimento

Gli effetti di Cis A sui marcatori di riassorbimento osseo, tra cui TRAP, DPD, indice di formazione ossea catepsina K ALP e proteina Gla ossea (BGP), sono mostrati nella Figura 3. Dopo 12 settimane di intervento di ovariectomia, le attività di TRAP, DPD , e la catepsina K nel gruppo OVX erano significativamente aumentate, in particolare la DPD, che aumentava di quasi il 55,6%; TRAP e catepsina K sono risultati potenziati rispettivamente del 43,5% e del 38,1% rispetto al gruppo fittizio. Cis A, somministrato per via orale per 12 settimane, ha dimostrato un notevole potenziale nel prevenire tutti i marcatori di riassorbimento osseo sopra menzionati, in particolare l'alto dosaggio (80 mg/kg) che mostra un effetto significativo sulla soppressione delle attività del DPD del 45,0%, TRAP del 49,0% e catepsina K del 44,0%, rispettivamente (p < 0,01), rispetto al Gruppo OVX (Figura 3). Sebbene nel gruppo OVX sia stato dimostrato un trend crescente delle attività ALP e BGP, non sono stati osservati cambiamenti statisticamente significativi. Tuttavia, è stato osservato un miglioramento significativo nell'attività dell'ALP nei gruppi trattati con Cis A basso e alto rispetto al gruppo fittizio (p < 0,01).

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2.1.4. Effetti di Cis A sui livelli di espressione proteica di TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG e RANKL

L'analisi Western blot ha rivelato che rispetto al gruppo fittizio, i livelli proteici di TRAF6, NF-κB e RANKL nel gruppo OVX erano significativamente aumentati (p < 0.05), mentre OPG, PI3K e Akt erano significativamente diminuiti (Figura 4). Cis A (20 mg/kg o 80 mg/kg) ha sottoregolato significativamente l'espressione di TRAF6 (p < 0,05), seguita dalla diminuzione dell'espressione di RANKL e dall'aumento dell'OPG, il che significa che il rapporto OPG/RANKL era sovraregolato. Di conseguenza, le cascate di segnalazione di NF-κB sono state sottoregolate e PI3K/Akt sono state sovraregolate dal trattamento con Cis A (p < 0,05).

2.2. Discussione

Date le limitazioni delle attuali opzioni terapeutiche per l’osteoporosi, vi è la necessità di alternative agli alimenti o alle piante medicinali commestibili naturali. Nell’ambito del nostro impegno continuo per scoprire agenti antiosteoporotici efficaci dalla MTC, abbiamo trovato una serie di estratti, frazioni e composti che possiedono l’effetto delle proprietà antiosteoporotiche [13,14]. La Cistanche deserticola è un'importante medicina tradizionale cinese, che ha dimostrato di possedere un profilo di sicurezza favorevole [15] e ampie funzioni medicinali per il trattamento dell'insufficienza renale, ecc. [16]. Secondo la teoria della MTC, di solito si trattava di MTC che possedevano l'effetto di rinvigorire i reniusato per trattare l'osteoporosi; i glicosidi feniletanoidi sono i principali costituenti bioattivi di questa erba, il che implica ciòglicosidi feniletanoidicontenuto in C. deserticola può possedere proprietà antiosteoporotiche. È stato dimostrato che l’estratto di C. deserticola potrebbe inibire significativamente la riduzione della densità minerale ossea e prevenire il deterioramento della microarchitettura trabecolare causato da OVX [17]. Nell'esperimento in vitro, ha anche aumentato significativamente l'ALP, la proteina morfogenetica ossea-2 e l'mRNA dell'osteopontina, nonché la mineralizzazione ossea degli osteoblasti in coltura [18]. L'echinacoside, un componente bioattivo principale della C. deserticola ufficialmente registrato nella farmacopea cinese [11], ha mostrato attività antiosteoporotica con un dosaggio elevato di 30~270 mg/kg di peso corporeo/giorno [19], e ulteriori risultati in vitro hanno dimostrato che è potrebbe promuovere la rigenerazione ossea aumentando il rapporto OPG/RANKL nelle cellule MC3T3-E1 Subclone 14 [20]. Cis A era uno dei glicosidi del feniletanolo isolati da C. deserticola e diversi studi hanno rivelato che questo composto possedeva attività antiossidante [21] e proprietà antinfiammatorie [22,23]. Un articolo pubblicato di recente ha scoperto che Cis A ha mostrato attività protettive sia sull’epatotossicità indotta da CCl4 che da alcol nei topi, e ha anche mostrato una proprietà protettiva sul danno indotto dall’etanolo negli epatociti primari di topo in coltura in vitro [24]. Nel nostro presente studio, i risultati hanno mostrato che Cis A possedeva attività antiosteoporotica a basso dosaggio (20~80 mg/kg di peso corporeo/giorno) utilizzando un modello di topi ovariectomizzati, e questa bioattività veniva esercitata sottoregolando il livello di TRAF6, sopprimendo l'espressione di RANKL e NF-κB e la stimolazione di OPG, PI3K e Akt, il che significa che l'effetto terapeutico di Cis A nei topi OVX è avvenuto attraverso il meccanismo di inattivazione di NF-kappaB mediata da TRAF6- e di attivazione di PI3K/Akt.

È noto che l’ovariectomia può causare osteoporosi con un’evidente diminuzione della densità minerale ossea, della resistenza biomeccanica, della qualità dell’osso e della microarchitettura ossea trabecolare, e i cambiamenti di cui sopra sono in parte dovuti alla carenza di estrogeni [25]. Ora, nel presente esperimento in vivo, il nostro studio dimostra che l’osteoporosi indotta dall’ovariectomia ha comportato una riduzione significativa della resistenza biomeccanica e dei parametri strutturali trabecolari, tra cui BMD, BMC, TMC e Tb. N e aumento della Tb. sp; e il trattamento di Cis A ha migliorato significativamente le proprietà meccaniche dell'osso tra cui carico massimo e rigidità, ha migliorato la BMD e ha migliorato la maggior parte dei parametri strutturali della microarchitettura trabecolare ossea rispetto ai topi del gruppo OVX, indicando che Cis A era efficace nel migliorare la qualità dell'osso e microarchitettura trabecolare nei topi OVX.

Oltre alla BMD totale, il test di flessione a tre punti e la misurazione della microarchitettura ossea trabecolare hanno potuto diagnosticare direttamente l'osteoporosi, sono stati utilizzati anche i marcatori di formazione ossea, inclusi ALP e BGP, e l'indice di riassorbimento osseo, inclusi TRAP, DPD e catepsina K. chiarire i relativi meccanismi antiosteoporotici di Cis A. Nel nostro studio, l'attività dell'ALP nei topi del gruppo OVX ha dimostrato una tendenza all'aumento non significativa, che indicava un aumento del tasso di turnover osseo [26,27] nell'osteoporosi postmenopausale; il dosaggio alto (80 mg/kg di peso corporeo/giorno) e basso (20 mg/kg di peso corporeo/giorno) dei trattamenti con Cis A ha mostrato un miglioramento significativo sull'attività dell'ALP rispetto al gruppo fittizio, mentre l'attività del BGP sembrava non essere influenzata da l'ovariectomia in tutti i gruppi trattati; TRAP, DPD e catepsina K erano significativamente aumentati nel gruppo OVX e la somministrazione di Cis A ha notevolmente ridotto tutti e tre i marcatori di riassorbimento osseo. I dati di cui sopra implicavano che Cis A possedesse una potenziale attività antiosteoporotica e questo effetto era esercitato dalla regolazione del metabolismo osseo, inclusa la soppressione del riassorbimento osseo e l’aumento della formazione ossea.

La coordinazione tra osteoblasti e osteoclasti è un fattore critico nel mantenimento dell’integrità scheletrica. Gli osteoclasti, che esprimono TRAP, si attaccano alla superficie dell'osso attraverso la formazione di zone sigillanti legate all'actina, all'interno delle quali vengono rilasciati enzimi proteolitici, come la catepsina K, che portano alla formazione di fosse di riassorbimento. La modulazione dell'osteoclastogenesi da parte delle cellule immature della linea osteoblastica è mediata da RANKL e OPG [28]. L'OPG è un recettore esca che inibisce l'attivazione del RANKL dell'osteoclastogenesi, diminuendo così il riassorbimento osseo. Il RANKL, che fornisce un segnale importante ai progenitori degli osteoclasti, è una molecola legata alla membrana della famiglia dei ligandi del fattore di necrosi tumorale che promuove la formazione di osteoclasti. Si ritiene che il rapporto di espressione OPG/RANKL sia un parametro chiave dell'attività osteoclastogenica e le cascate di segnalazione attivate da RANKL includono le vie NF-κB e PI3K [29]. L’importanza della via di NF-kB per l’osteoclastogenesi è dimostrata dal fatto che la delezione di NF-kB nei topi ha provocato l’assenza di osteoclasti maturi [30]. TRAF6 si è dimostrato un bersaglio promettente per nuovi farmaci antiosteoporotici. Topi carenti di TRAF6-che presentavano un'osteoclastogenesi difettosa e una grave osteopetrosi hanno quindi dimostrato l'importanza di TRAF6 nel metabolismo osseo. Prove emergenti indicano una funzione regolatoria critica per TRAF6 nelle cascate di segnalazione mediate da RANKL/RANK [4,31]. I dati del presente studio hanno indicato che il trattamento con Cis A sui topi OVX ha portato alla downregulation dei livelli di espressione della proteina TRAF6, alla diminuzione di RANKL e all'aumento delle espressioni di OPG, impedendo così l'attivazione di RANKL di NF-κB a valle e attivando le vie del segnale PI3K/Akt, suggerendo che Cis A inibisce la differenziazione degli osteoclasti mediante l'inattivazione di NF-kappaB mediata da TRAF6- e l'attivazione di PI3K/Akt e aumentando il rapporto OPG/RANKL, inibendo successivamente l'osteoclastogenesi e promuovendo la formazione ossea.

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3. Materiali e metodi

3.1. Materiali vegetali, preparazione e determinazione

Steli di Cistanche deserticolaYC Ma, identificati dal Prof. Xue-yan Fu del Dipartimento di Farmacia, Ningxia Medical University, sono stati raccolti il ​​2015 settembre nella contea di Yongning, provincia di Ningxia, Cina. Un esemplare di buono (#20150901) era conservato nell'erbario del dipartimento di Farmacia. Un totale di 30,0 kg di steli essiccati all'aria di C. deserticola sono stati estratti a riflusso con etanolo al 70% (180 L, 3 × 2 h) 3 volte. I filtrati sono stati combinati e sottoposti ad una colonna di resina macroporosa (AB-8) con un sistema solvente a gradiente graduale di etanolo crescente in acqua (0%, 20% e 60%, ogni 60 L) per dare tre frazioni, quindi Il 60% della frazione è stato ulteriormente purificato mediante Sephadex LH-20 (Pharmacia Biotech Co., Uppsala, Svezia) e cromatografia liquida ad alte prestazioni semi-preparativa (Agilent 1100, Agilent Technologies, Waldbronn, Germania) per ottenere il giallo pallido cistanoside A 4,5 g (Cis A; la resa è stata dello 0,015%). La struttura è stata chiarita principalmente mediante analisi dei dati NMR (Bruker Avance, 400 MHz, Germania) e MS (Agilent 6540, Agilent Technologies), che erano coerenti con i dati riportati [19]. La sua purezza è stata determinata mediante il metodo di normalizzazione dell'area HPLC (Figura 5). Negli esperimenti sugli animali, basati sul nostro esperimento preliminare, il dosaggio di Cis A era di 20–80 mg/kg/giorno.

3.2. Prodotti chimici e solventi

Sono stati utilizzati: kit di estrazione delle proteine ​​totali e kit di quantizzazione delle proteine ​​BCA (Ken Gen Biotech. Co. Ltd, Nanjing, Cina), anticorpi primari di TRAF6, NF-κB, PI3K, Akt, RANKL, OPG, -actina e tubulina ( Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA), anticorpi secondari di IgG anti-coniglio di capra coniugati con perossidasi di rafano (ZSGB-BIO, Pechino, Cina), estradiolo valerato (1 mg, Delpharm Lille SAS, Parigi, Francia), Gla osseo -kit ELISA per reticoli di proteine ​​e deossipiridinolina (Xinyu Biological Engineering Co. Ltd., Shanghai, Cina) e kit ELISA per catepsina K (Biovision, Mountain View, CA, USA). Tutti gli altri prodotti chimici e agenti biochimici utilizzati erano reagenti AR di grado analitico.

3.3. Esperimenti sugli animali

Sessanta topi femmine del ceppo Kunming, di 8 settimane con un peso corporeo di 26,0 ± 1,62 g, sono stati acquistati dalla Ningxia Medical University e 10 topi sono stati tenuti in una gabbia con una dieta standard di laboratorio e acqua del rubinetto in condizioni di aria controllata (24,0 ± 0,5 ◦C, 45%–50% di umidità e cicli di illuminazione chiaro-scuro di 12 ore/12 ore). Dopo essere stati acclimatati per 1 settimana, l'intervento chirurgico è stato eseguito in condizioni asettiche e tutti i topi sono stati anestetizzati con cloralio idrato (100 mg/kg, ip); i topi sottoposti ad esposizione chirurgica senza rimozione delle ovaie erano il gruppo fittizio (n=10); gli altri sono stati sottoposti a ovariectomia bilaterale come i gruppi OVX (n=50). Gli esperimenti sugli animali di cui sopra sono stati condotti secondo la guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e sono stati approvati dal Comitato di Bioetica dell'Università di Medicina di Ningxia.

Dopo un altro periodo di recupero di {{0}} settimane, i 50 topi OVX di cui sopra sono stati divisi in modo casuale ed equamente in 5 gruppi: trattati per via orale con estradiolo valerato (1 mg/kg/giorno) come controllo positivo (EV); con 20, 40 e 80 mg/kg/giorno di Cis A come gruppi a dosaggio basso, moderato e alto, rispettivamente; con il veicolo (0,5% carbossimetilcellulosa()-Na) come gruppo modello (OVX). A tutti i topi è stato somministrato per via orale un volume uguale di 1 ml/100 g di veicolo di peso corporeo, EV o Cis A, che è iniziato la seconda settimana dopo l'operazione ed è durato 12 settimane. Il peso corporeo è stato misurato due volte alla settimana, con la dose aggiustata di conseguenza. Dopo l'ultima somministrazione orale, i campioni di sangue sono stati prelevati dall'arteria femorale dei topi anestetizzati, lasciati coagulare e centrifugati a 3000 x g per 10 minuti per ottenere il siero; i femori e la tibia destri sono stati sezionati. Tutti i campioni sono stati conservati a -80 ◦C per un'ulteriore valutazione della microarchitettura ossea e dei parametri biochimici sierici correlati all'osteoporosi.

3.4. Prova di flessione a tre punti

La proprietà biomeccanica del femore destro del topo è stata determinata utilizzando una disposizione di flessione a tre punti. La maschera di piegatura è dotata di un supporto a forma di V per fissare le estremità distale e prossimale del femore durante il test. Il femore è stato posizionato orizzontalmente con il lato anteriore rivolto verso l'alto e il carico è stato applicato verso il basso al centro del femore medio. La distanza tra i supporti era di 8 mm. Le ossa sono state caricate a una velocità di spostamento costante di 0,02 mm/s fino al cedimento utilizzando una macchina di test BOSE (3220) (Bose Corporation, Endura TEC Systems Group, Minnetonka, MN, USA). Le curve carico-spostamento sono state ottenute e utilizzate per il calcolo delle proprietà strutturali e del materiale, inclusi carico massimo, carico di picco, modulo elastico, resistenza alla flessione, ecc.

3.5. Analisi della tomografia microcomputerizzata

I femori destri di tutti i topi sono stati ripuliti dai tessuti molli aderenti e la microarchitettura ossea trabecolare della metafisica femorale distale destra sopra è stata determinata mediante uno scanner micro-CT (eXplore Locus SP, GE Healthcare, Londra, ON, Canada) con la risoluzione isotropa impostata su 8 µm in tutte e tre le dimensioni spaziali. La regione di interesse (ROI) è stata selezionata utilizzando le stesse coordinate nella placca di crescita del femore. I parametri morfometrici ossei, tra cui BMD, contenuto minerale osseo (BMC), contenuto minerale tissutale (TMC), densità minerale tissutale (TMD), frazione volumetrica ossea (BVF), separazione trabecolare (Tb. Sp), numero trabecolare (Tb. N ) e lo spessore trabecolare (Tb. Th), sono stati valutati analizzando la ROI utilizzando il software di analisi ossea ABA.

3.6. Analisi dei parametri biochimici

L'attività della fosfatasi alcalina sierica (ALP) è stata misurata su un analizzatore automatico (Ciba-Corning 550 Diagnostics, Corp., Oberlin, OH, USA)); i livelli sierici di DPD, BGP e catepsina K sono stati determinati mediante corrispondenti kit di reagenti e la fosfatasi acida resistente al tartrato (TRAP) è stata analizzata secondo la letteratura correlata [32].

3.7. Analisi Western Blot

I livelli di espressione proteica di TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG e RANKL in diversi gruppi sono stati rilevati mediante analisi Western blot. In breve, la proteina è stata estratta dalla tibia destra dei topi utilizzando un tampone di lisi contenente 0,5 mM di inibitori del fenilmetilsulfonilfluoruro, della proteasi e della fosfatasi. I lisati sono stati centrifugati per 10 minuti a 12,000× g per ottenere i surnatanti per ulteriori analisi. La concentrazione proteica dei lisati è stata misurata utilizzando un test di quantificazione dell'acido bicinconinico. Le proteine ​​(50-100 µg) sono state separate utilizzando SDS-PAGE al 10%, trasferite su una membrana di difluoruro di polivinilidene e incubate con anticorpi primari monoclonali mirati a TRAF6, NF-κB RANKL, PI3K, Akt, OPG e -actina (1:500). La stessa membrana è stata rimossa e riprodotta, con segnali chemiluminescenti rilevati dal software Image Lab. -actina o tubulina servivano da controllo interno.

3.8. Analisi statistica

Tutti i dati ottenuti da esperimenti su animali sono stati analizzati utilizzando un'analisi della varianza unidirezionale con il test di Dennett di SPSS (Versione 22.0, IBM SPSS Statistics, IBM Corp., Armonk, New York, NY, USA ) Software; un valore di p < 0.05 è stato considerato statisticamente significativo e tutti i risultati sono stati presentati come media ± DS.

4. Conclusioni

In sintesi, Cis A,glicosidi feniletanoidi attiviisolato da C. deserticola, ha mostrato una significativa attività antiosteoporotica sui topi OVX e il meccanismo molecolare può essere correlato all'inattivazione di NF-kappaB mediata da TRAF6- e all'attivazione di PI3K/Akt, quindi probabilmente un agente promettente per il trattamento dell'osteoporosi malattia.

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