Cellule dendritiche di tipo 1 (DC) nelle malattie renali

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Cellule dendritiche di tipo 1 convenzionali (cDC1) nelle malattie renali umane: correlazioni clinico-patologiche

Titi Chen, Qi Cao et al.

ASTRATTO

Sfondo: Cellule dendritiche di tipo 1(cDC1) è un sottoinsieme di DC convenzionali, la cui funzione più riconosciuta è la presentazione incrociata ai linfociti T CD8 più. Abbiamo condotto questo studio per indagare il numero e la posizione diCellule dendritiche di tipo 1(cDC1s) in vari esseri umanimalattie renalicosì come la loro correlazione con le caratteristiche clinicopatologiche e le cellule T CD8.

Metodi: ne abbiamo analizzati 135renecampioni di biopsie.Malattie renaliinclusi: necrosi tubulare acuta (ATN), nefrite interstiziale acuta (AIN), glomerulonefrite proliferativa (GN)(nefropatia da IgA, nefrite lupica, GN pauci-immune, malattia da anti-GBM), GN non proliferativa (malattia da cambiamento minimo, nefropatia membranosa ), e nefropatia diabetica. La colorazione indiretta con immunofluorescenza è stata utilizzata per quantificare i cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1), CD1ct DC e cellule T CD8 plus.

Risultati:Cellule dendritiche di tipo 1(cDC1s) erano raramente presenti nella normareni. Il loro numero è aumentato significativamente in ATN e GN proliferativo, proporzionalmente molto di più rispetto alle DC CD1ct. cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)sono stati trovati principalmente nell'interstizio, ad eccezione della nefrite da lupus, della GN pauci-immune e della malattia anti-GBM, dove erano prominenti nei glomeruli e nelle regioni peri-glomerulari. Il numero di cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)correlato con la gravità della malattia nell'ATN, il numero di mezzelune nella GN pauci-immune, la fibrosi interstiziale nella nefropatia lgA e la nefrite da lupus, nonché la prognosi nella nefropatia da IgA. Anche il numero di cellule T CD8 più è aumentato in modo significativo in queste condizioni e il cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)il numero era correlato con il numero di cellule T CD8 più nella nefrite lupica e nella GN pauci-immune, con molti di loro strettamente co-localizzati. Conclusioni: cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)numero correlato con varie caratteristiche clinicopatologiche e prognosi che riflettono un possibile ruolo in queste condizioni. La loro associazione con le cellule T CD8 più suggerisce un meccanismo combinato in linea con i risultati nei modelli animali.

INTRODUZIONE

Cellule dendritiche(DC) sono gli orchestratori centrali dell'immunità effettiva. Queste cellule sono eterogenee e possono essere suddivise in sottoinsiemi distinti in base al loro fenotipo e funzione. Le cellule dendritiche possono essere ampiamente classificate in DC plasmacitoidi (Cellule dendritiche)(pDC) e DC convenzionali (Cellule dendritiche)(cDC).cDC è costituito da due sottoinsiemi principali: cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)(CD141* DC (Cellule dendritiche) nell'uomo e CD103t o CD8ot nei roditori) e cDC2(CD1c DC nell'uomo e CD1 lbt DC nei roditori) (1).cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)sono stati scoperti prima nei topi e poi nell'uomo e sono caratterizzati dalla loro capacità superiore di fagocitare le cellule necrotiche attraverso il recettore Clec9A del modello molecolare associato al danno (DAMP) e di presentare in modo incrociato le cellule T CD8 più. Al contrario, i cDC2 sono efficaci attivatori dei linfociti T CD4* ma inferiori all'attivazione dei linfociti T CD8t (2).

DC (Cellule dendritiche)sono stati studiati nell'uomomalattie renalie il loro numero è risultato essere aumentato nella glomerulonefrite (GN) (3, 4). Dopo la scoperta del cDCl, l'accumulo di studi sugli animali ha dimostrato che svolgono un ruolo fondamentale nelmalattie renali, come nella nefropatia da adriamicina e nella GN a mezzaluna, attraverso l'interazione con i linfociti T (5-8). Tuttavia, tali studi mancano nell'uomomalattie renali, con un solo studio che dimostra un aumento del numero di CDC (ConvenzionaleCellule dendritiche)in GN (9). Abbiamo condotto questo studio per fornire un'analisi dei sottoinsiemi chiave di cDC, cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)e cDC2, in un'ampia gamma di esseri umanimalattie renalicomprese le malattie non glomerulari [necrosi tubulare acuta (ATN), nefrite interstiziale acuta (AIN)], GN proliferativa (nefropatia da IgA, nefrite da lupus, GN pauci-immune, malattia da anti-GBM), GN non proliferativa (malattia da cambiamento minimo ( MCD), nefropatia membranosa) e nefropatia diabetica. Abbiamo scoperto che il cDC deve essere significativamente correlato con caratteristiche patologiche tra cui la gravità dell'ATN, la formazione di una mezzaluna nella GN pauci-immune e la fibrosi interstiziale nella GN immuno-mediata. Inoltre, coerentemente con la loro capacità specializzata di attivare i linfociti T CD8 più negli animali modelli, abbiamo anche dimostrato la loro correlazione con le cellule T CD8t in questi campioni. Questi risultati forniscono uno slancio per esplorare nuovi bersagli terapeutici che manipolano queste cellule per il trattamento direnemalattie.

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MATERIALE E METODI

Pazienti e campioni di tessuto

Lo studio è stato condotto in conformità con i principi della Dichiarazione di Helsinki ed è stato approvato dal Comitato etico per la ricerca umana del distretto sanitario locale di Western Sydney. È stato ottenuto il consenso informato del paziente. Abbiamo analizzato 176 diagnostici congelatirenebiopsy samples taken from non-pregnant adult patients(>18 anni) dal 18 giugno 2016 al 30* giugno 2017 presso il Westmead Hospital, Sydney, Australia.Renei tessuti sono stati congelati a scatto in OCTcompound (Tissue-Tek Sakura, USA) e conservati a -80 gradi . Quarantuno(41)campioni presentavano una scarsa qualità del tessuto e sono stati esclusi dallo studio. Al momento del trattamento sono stati raccolti i dati basali dei pazienti, inclusi età, sesso, velocità di filtrazione glomerulare stimata (eGFR) e grado di proteinuria.renebiopsy.eGFR è stato calcolato utilizzando la formula CKD-EPI. La diagnosi è stata fatta da un patologo renale, sulla base della luce, dell'immunofluorescenza (IF) e della microscopia elettronica, nonché della storia clinica.

È stata analizzata una varietà di malattie tra cui malattie non glomerulari (ATN, AIN), GN proliferativa (nefropatia da IgA, nefrite da lupus, GN pauci-immune, malattia anti-GBM), GN non proliferativa (MCD, nefropatia membranosa) e diabetica nefropatia. Per l'ATN, abbiamo incluso solo i casi non settici poiché l'ATN settico ha una fisiopatologia diversa. L'ATN è stata ulteriormente classificata in malattia lieve-moderata (definita come<50%cortical tubules="" showing="" injury)and="" severe="" disease="" (="">=50 percento tubuli corticali che mostrano lesioni). La nefropatia da IgA è stata classificata secondo il punteggio Oxford MEST (ipercellularità mesangiale M, ipercellularità endocapillare E, glomerulosclerosi segmentale S, atrofia tubulare T/fibrosi interstiziale). Abbiamo anche analizzato la correlazione tra cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1) number and prognosis (defined a priori as >20% reduction in eGFR on or before 31t December 2019)in IgA nephropathy by dividing patients into 2 groups according to cDC number with a cut-off point at the upper quartile(>=15). La nefrite da lupus è stata ulteriormente classificata in 2 gruppi in base al livello di fibrosi interstiziale (<25%,>=25 percentuale di coinvolgimento interstiziale corticale). La GN pauci-immune è stata classificata in 2 gruppi in base alla percentuale di glomeruli con mezzelune(<40%,>=40 percento).

Come normalerenecontrolli, abbiamo utilizzato 5 cortecce renali normali da campioni di nefrectomia e 2 donatorireninon adatto al trapianto. Per le nefrectomie tumorali, i campioni sono stati prelevati dal polo opposto al tumore e ad almeno 5 cm dal margine del tumore. Questi tessuti avevano un normale aspetto macroscopico. Al microscopio, nessuno di questirenecampioni avevano evidenza di significativa infiammazione o lesione glomerulare o tubulo-interstiziale. Abbiamo usato il tessuto splenico di un donatore adulto normale come controllo positivo per testare gli anticorpi.

Colorazione di immunofluorescenza

Le sezioni seriali del criostato sono state tagliate a 5μm e posizionate su vetrini Superfrost Ultra Plus (Thermo Scientific, USA). Le diapositive sono state archiviate a -80 gradi . Le sezioni di tessuto sono state fissate con il 100% di metanolo a -20 gradi per 10 minuti e quindi asciugate all'aria. La colorazione con immunofluorescenza indiretta è stata eseguita utilizzando il metodo seguente: le sezioni di tessuto sono state lavate in DPBS (Lonza, USA) e bloccate con albumina di siero bovino al 2% (Sigma-Aldrich, USA) per 15 minuti; quindi sono stati colorati con l'anticorpo primario a 4 gradi durante la notte, seguiti da anticorpi secondari per 40 minuti a temperatura ambiente. La tabella 1 è un elenco di anticorpi primari e secondari utilizzati e le loro diluizioni. I nuclei sono stati colorati con DAPI(1:250,{14}}, ThermoFisher, USA) prima che i campioni fossero montati su vetrini coprioggetto con mezzo di montaggio a fluorescenza (Dako, USA). Sono state controllate ed escluse la colorazione non specifica e la reattività crociata tra diversi anticorpi primari e secondari.

TABELLA 1|Anticorpi primari e secondari utilizzati nello studio

I cDCls sono stati identificati mediante colorazione per il marker Clec9A. Nell'uomo, l'espressione di Clec9A è altamente limitata alle cDCls nel sangue e nei tessuti (10, 11). A conferma di ciò nelreni, abbiamo eseguito la doppia colorazione di Clec9A e HLA-DRB1, nonché di Clec9A e CD1lc in condizioni normali e malate selezionate. La maggior parte, se non tutti i Clec9A si sono sovrapposti a HLA-DRB1 (Figura 1 supplementare) e CD1lc (Figura 2 supplementare).

FIGURA 1|Rene normale cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1), cDC2 e CD8 più cellule T.

DC (Cellule dendritiche)erano raramente presenti in condizioni normalirenie i numeri di cDC2 erano circa 7 volte il numero di cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1). (Barra=100 mm).

RISULTATI

Caratteristiche di base del paziente.Le caratteristiche di base dei pazienti nelle coorti di controllo e di malattia sono riassunte nella Tabella 2. Nello studio sono stati inclusi un totale di 135 pazienti. Un'ampia gamma direnemalattiesono state analizzate includendo malattie non glomerulari [ATN (22), AIN (10)], GN proliferativa [nefropatia gA (44), nefrite lupica (12), GN pauci-immune(12), malattia anti-GBM (4)] , GN non proliferativo[MCD(5), nefropatia membranosa(5)]e nefropatia diabetica (21). C'erano più femmine nel gruppo della nefrite da lupus e la loro età tendeva ad essere più giovane rispetto alle altrerenemalattie, che è coerente con la letteratura(12). I pazienti con GN pauci-immune e malattia anti-GBM avevano l'eGFR più basso. Il livello di proteinuria era il più alto in MCD e nefropatia membranosa.

TABELLA 2|Caratteristiche di base.

Numero e posizione dei controller di dominio (Cellule dendritiche)in Controllo e Malattia.I cDCls erano raramente presenti in condizioni normalireni(Figura 1) e i numeri di cDC2 erano circa 7 volte il numero di cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1).Il numero di cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)è aumentato significativamente in ATN e GN proliferativo (Figura 2A), mentre il loro numero è rimasto invariato rispetto al controllo in AIN, nefropatia membranosa, MCD e nefropatia diabetica (Figura 3 supplementare). Anche il numero di cDC2 è aumentato significativamente in ATN e GN proliferativo (Figura 2B). C'è stata una riduzione del cDC2 (Cellule dendritiche di tipo 2)/cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)rapporto che indica cDCl (Cellule dendritiche di tipo 1)aumentato proporzionalmente più di cDC2 (Figura 2C).

FIGURA 2|Numero di cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)e cDC2, rapporto cDC2/cDC1 e cellule T CD8 più nel controllo e nelle malattie selezionate.

Il valore P viene calcolato per ciascuna malattia rispetto al controllo. Entrambi cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)e cDC2 sono aumentati significativamente in ATN, IgA, lupus nefrite, GN pauci-immune e malattia anti-GBM (A, B)

con cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)è aumentato proporzionalmente più del cDC2 in ATN, nefrite da lupus, GN pauci-immune e malattia da anti-GBM (C).

Le cellule T CD8 più erano aumentate in modo significativo in ATN, IgA, nefrite da lupus, GN pauci-immune e malattia anti-GBM (D).

La maggior parte dei cDCls si trovava nell'interstizio, ad eccezione della nefrite da lupus, della GN pauci-immune e della malattia anti-GBM, dove si trovavano anche nelle regioni peri-glomerulari e intra-glomerulari (Figura 3A). Inoltre, abbiamo anche trovato un significativo numero di cellule T CD8t nelle regioni peri-glomerulari e intra-glomerulari (Figura 3A) e molti di loro sono co-localizzati con cDCls (Figura 3B). D'altra parte, i cDC2 sono stati trovati raramente nelle regioni intra-glomerulari e c'era minima co-localizzazione con cellule T CD8 plus.

FIGURA 3|(A) cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)e cellule T CD8 più nelle regioni intra-glomerulari. (B) co-localizzazione di cDC1 con cellule T CD8 plus. (Barra=100 mm). * P < 0.05,="" **="" p=""><>

Associazione tra cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)Con caratteristiche clinico-patologiche e cellule T CD8 plus Abbiamo analizzato la correlazione tra cDCl (Cellule dendritiche di tipo 1)e caratteristiche clinicopatologiche, nonché cellule T CD8 plus. Si sono verificati 22 casi di ATN (malattia lieve n=12, malattia grave n=10). Una malattia più grave è stata associata a un numero maggiore di cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)(p=0.032), ma non cDC2(Figura 4A).cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)è aumentato proporzionalmente più di cDC2 (rapporto cDC2/cDC1 2,5, p=0.019). Anche il numero di cellule T CD8 più è aumentato significativamente in ATN(p=0.005) (Tabella 3, Figura2D). Il numero di cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)non era correlato al numero di cellule T CD8* nell'ATN.

TABELLA 3|CD8 più numero di cellule T e coefficiente di correlazione tra cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)e il numero di cellule T CD8 più nel controllo e nei reni malati.

Sono stati analizzati quarantaquattro casi di nefropatia da IgA. Utilizzando il punteggio MEST della classificazione di Oxford (ipercellularità mesangiale M, ipercellularità endocapillare, glomerulosclerosi segmentale S, atrofia tubulare T/fibrosi interstiziale), un numero maggiore di cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)era associato a un punteggio T più alto (p=0.008), ma non a punteggi MES (Figura 4B). C'erano 7 casi con mezzelune e il numero di cCD1 non era associato al numero di mezzelune. Il numero direneLe cellule T CD8* erano significativamente più alte nella nefropatia da IgA rispetto al controllo (p<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d).="" there="" was="" no="" correlation="" between=""> (Cellule dendritiche di tipo 1) and CD8+ T cell numbers. Thirty-five(35)patients had follow-up data on or before 31sf December 2019, of whom9experienced>20 per cento di riduzione dell'eGFR. Dividere i pazienti in 2 gruppi secondo cDCl (Cellule dendritiche di tipo 1) number with a cut-off point at the upper quartile(>=15), il cDC1 più alto (Cellule dendritiche di tipo 1)numero di gruppo è stato associato a risultati peggiori (Figura 4E).

FIGURA 4|Correlazione tra cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1), cDC2 e CD8 più numero di cellule T e gravità della malattia (AD).

Curva di Kaplan Meier di sopravvivenza alla nefropatia da IgA (E). Il punteggio T 0 si riferisce alla percentuale dell'area che mostra atrofia tubulare/fibrosi interstiziale <=25>

Il punteggio T 1 si riferisce alla percentuale dell'area che mostra atrofia tubulare/fibrosi interstiziale 26 - 50 percento, il punteggio T 2 si riferisce alla percentuale dell'area che mostra atrofia tubulare/fibrosi interstiziale > 50 percento.

La sopravvivenza è stata definita come una riduzione > 20% dell'eGFR entro il 31 dicembre 2019. NS, non significativo.

Ci sono stati 12 casi di nefrite lupica. Come nella nefropatia IgA, un numero di cDCl più elevato era associato a fibrosi più grave (p=0.020) (Figura 4C). Inoltre, anche il numero di cellule T CD8 più è aumentato in modo significativo (P<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d)="" and="" this="" correlated="" with="" the="" number="" of="" cdcl="" cells="" (r="0.614," p="0.034)" (table="" 3).a="" significant="" number="" of=""> (Cellule dendritiche di tipo 1)e le cellule T CD8t sono state trovate nel peri-glomerulare e intra-glomerulare indicando che possono svolgere un ruolo in questa condizione, In secondo luogo, nella malattia immuno-mediata associata alla fibrosi interstiziale (nefropatia da IgA e nefrite da lupus), abbiamo scoperto che cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)il numero era correlato alla gravità della fibrosi, nonché alla prognosi nella nefropatia da IgA, mentre non è stata trovata tale correlazione nella malattia fibrotica non immuno-mediata (nefropatia diabetica). In terzo luogo, c'era una forte correlazione tra il numero di cDCl e la formazione a mezzaluna nel GN pauci-immune e i cDCl erano presenti in gran numero nelle regioni peri-glomerulari e intra-glomerulari indicando il loro possibile ruolo in una formazione a mezzaluna. In quarto luogo, il numero di cDC1 era correlato con il numero di cellule T CD8 più nella nefrite lupica e nella GN pauci-immune, con numerosi cDCl co-localizzati con cellule T CD8 più suggerendo la loro possibile interazione. Ciò è in linea con le nostre scoperte sui modelli animali direnepatologiache mostrano omologhi murini di cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)le cellule attivano preferenzialmente le cellule T CD8t. Presi insieme, questi risultati suggeriscono che cDCl svolge un ruolo importante in una vasta gamma direnemalattietra cui ATN, fibrosi interstiziale nella malattia immuno-mediata e formazione di mezzaluna e che possono potenzialmente agire attraverso l'attivazione dei linfociti T CD8t.

cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)Numero correlato alla gravità della malattia nell'ATN. In ATN non settico, per la prima volta, abbiamo mostrato un numero significativamente maggiore di DC (Cellule dendritiche), in particolare cDCls rispetto a cDC2s. È importante sottolineare che il cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)numero correlato alla gravità della malattia. Inoltre, è stato aumentato anche il numero di cellule T CD8 più. L'ATN è solitamente causata da danno da ischemia-riperfusione (IRI), nefrotossine o sepsi. Tradizionalmente, l'IRI e le tossine causano un'infiammazione sterile e l'immunità innata, dove le DC e le cellule T sono meno importanti, è stata considerata un ruolo dominante. Tuttavia, prove crescenti provenienti da studi sugli animali hanno dimostrato che sia i linfociti cDCl che CD8 plus sono attori importanti. Precedenti studi sull'IRI animale e sulla nefrotossicità del cisplatino hanno rilevato un aumento del numero totale di cellule DC e T (13-17). I nostri studi precedenti hanno mostrato nella nefropatia da adriamicina, il numero di cDCl è aumentato significativamente (5). Nell'IRI, un sottoinsieme di cellule dendritiche attivate dimostra una maggiore capacità dell'antigene cross-presente alle cellule T CD8t(18). Nella nefropatia da adriamicina, abbiamo anche scoperto che le cDCls hanno suscitato una risposta dei linfociti T CD8 più che porta a lesioni (5). La mancanza di una correlazione tra cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)e le cellule T CD8* nell'ATN umano, in contrasto con i risultati nei modelli animali, possono riflettere diversi percorsi non immunologici di lesione nell'ATN umano rispetto all'IRI nei modelli murini in cui i cDCls svolgono un ruolo significativo attraverso i linfociti T CD8*. Inoltre, è stato dimostrato nei roditori che il cDCl viene reclutato nel tessuto da un chemioattrattivo XCLl prodotto dalle cellule natural killer(19). Pertanto, potrebbe valere la pena approfondire questo aspettorenepatologia.

cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)Numero correlato alla fibrosi interstiziale immuno-mediata. Il secondo risultato significativo in questo studio è che il numero di cDCl è correlato con la gravità della fibrosi interstiziale associata a malattia immuno-mediata (nefropatia da IgA e nefrite da lupus), ma non nella malattia fibrotica non immuno-mediata (nefropatia diabetica), lo studio precedente ha mostrato aumento del numero di cDCl e cDC2 nella fibrosi interstiziale(9). Per la prima volta, abbiamo dimostrato che questo è vero solo nella malattia immuno-mediata e nel cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)numero è aumentato proporzionalmente più di cDC2s. Inoltre, abbiamo anche dimostrato cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)numero correlato con la prognosi e anche il numero di cellule T CD8* è aumentato significativamente nella nefropatia da IgA. Ciò è supportato da studi sugli animali che mostrano DC (Cellule dendritiche)contribuiscono direttamente alla fibrosi. Ad esempio, l'amphiregulina derivata da DC ha promosso la fibrosi(20). È anche possibile che i cDCls abbiano contribuito alla fibrosi attraverso i linfociti T CD8 più, noti per contribuire alla fibrosi in altri organi (21-23). Poiché la fibrosi interstiziale è legata alla progressione della cronicarenepatologia, non sorprende che abbiamo trovato il cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)numero per essere un buon marker prognostico nella nefropatia da IgA. Altri studi hanno mostrato che le cellule T CD8t sono correlate con la prognosi della nefropatia da IgA (24), che può essere il risultato di una presentazione incrociata da cDCls. Nella nefrite da lupus, abbiamo dimostrato una correlazione tra cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)numero e fibrosi interstiziale, nonché il numero di cellule T CD8t. Studi precedenti hanno anche mostrato un aumentorenecDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)numero nella nefrite lupica(25), in particolare nella nefrite lupica di classe III e VI, con una corrispondente riduzione del loro numero circolante (26). Abbiamo esteso questi risultati dimostrando che erano anche correlati a cambiamenti cronici. È ben noto che l'infiammazione interstiziale, che comprende cellule T, cellule B, cellule dendritiche e macrofagi, ha un ruolo dominante nella progressione della nefrite lupica (27).cDCls può contribuire alla progressione della nefrite lupica in una varietà di modi. In primo luogo, l'attivazione dell'interferone gioca un ruolo chiave nella patogenesi della nefrite lupica (28-30) e le cDCls sono un importante produttore di IFN-入. (31) In secondo luogo, cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)può contribuire alla progressione della nefrite da lupus attraverso le cellule T CD8t (32-37) e la nostra scoperta di una correlazione tra cDCls e CD8 più T supporta ulteriormente la loro possibile interazione. Il ruolo dei linfociti T CD8 più nella nefrite da lupus è stato precedentemente dimostrato. I linfociti T CD8 plus controllano l'immunità autoreattiva mediante il rilascio di molecole citotossiche. È stato scoperto che i linfociti T CD8 più nella nefrite da lupus hanno una funzione citotossica smorzata, che può innescare l'autoimmunità(38). Inoltre, queste cellule possono anche generare autoantigeni del lupus(39). Ci sono state prove abbondanti che le cellule T CD8 * in entrambirene(32,33) e urina (34-36) sono correlati all'attività della malattia e al danno istologico nella nefrite lupica. Inoltre, è stato dimostrato che l'esaurimento dei linfociti T CD8* predice una prognosi favorevole(37).

cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)Numero correlato con il numero di crescenti in Pauci-Immune GN. Nella GN pauci-immune, abbiamo trovato cDCls aggregati nelle regioni peri-glomerulare e intra-glomerulare e il loro numero correlato con il numero di mezzelune e cellule T CD8 più. Studi precedenti hanno dimostrato che i DC (Cellule dendritiche)sono raramente presenti all'interno del glomerulo (3,4,9) o solo in numero molto piccolo (40). D'altra parte, i linfociti T erano prominenti nelle regioni interstizio, peri-glomerulare e intra-glomerulare ({{6} }). Abbiamo scoperto che sia i cDCls che i linfociti T CD8* sono prominenti nelle regioni peri-glomerulare e intra-glomerulare con molti di loro co-localizzati. Inoltre, il cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)numero correlato con la mezzaluna e il numero di cellule T CD8 più. Tutti questi risultati suggeriscono un ruolo del cDCl nella formazione della mezzaluna attraverso l'interazione con i linfociti T CD8*. Il ruolo patogeno dei linfociti T CD8t nel GN pauci-immunitario e nella formazione della mezzaluna è già stato dimostrato in modelli animali(45,46). Coerentemente con i nostri risultati nell'uomo, nella mezzaluna animale GN, cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)e le cellule T CD8* sono state trovate soprattutto nella regione periglomerulare(47,48). È stato dimostrato che la capsula di Bowman fornisce una nicchia immunologica protetta impedendo l'accesso delle DC e dei linfociti T citotossici CD8 più allo spazio di Bowman e quindi ai podociti(45,47). Tuttavia, quando la capsula di Bowman è stata violata, queste cellule infiammatorie hanno ottenuto l'accesso e hanno distrutto i podociti con conseguente GN(47) rapidamente progressivo.

Una limitazione di questo studio è che la tecnica di colorazione IF consente l'uso solo di un numero limitato di marcatori. Sarebbe utile estendere i nostri risultati utilizzando una tecnologia come la citometria a flusso, che può combinare più marcatori per analizzare ulteriormente il fenotipo di queste DC (Cellule dendritiche)e i loro profili di citochine e chemochine rilevanti. Tuttavia, le informazioni sulla posizione andranno perse. Altre tecniche come l'immunoistochimica multiplex e Nanostring possono anche essere prese in considerazione in studi futuri per esaminare ulteriormente queste cellulerenepatologia. Inoltre, quando si colorano i cDC2 usando CD1c, HLA-DRB1 e CD1lc, potrebbe esserci una piccola percentuale di cellule B che esprimono anche questi marcatori, cosa che non è stata esclusa.

CONCLUSIONI

Anche se cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1)comprende un sottoinsieme minore di controller di dominio (Cellule dendritiche)in condizioni omeostatiche, questo studio dimostra una correlazione significativa tra questa popolazione cellulare e le caratteristiche clinicopatologiche nell'uomorenepatologia. Ciò riflette la loro probabile importanza nei processi patologici come l'ATN, la formazione di mezzaluna nella GN proliferativa e la fibrosi interstiziale nella GN immuno-mediata. Inoltre, la loro co-localizzazione e correlazione con le cellule T CD8t possono fornire una spiegazione del loro meccanismo d'azione, corroborando i dati provenienti da modelli animali. Questi risultati forniscono uno slancio per esplorare nuovi bersagli terapeutici che manipolano queste cellule per il trattamento direnemalattie, come abbiamo fatto negli studi sugli animali(6), e per studiarne l'uso come marker prognostico. Sono necessari ulteriori studi sia sull'uomo che sugli animali per interrogare il ruolo dei cDC1 (Cellule dendritiche di tipo 1), il loro meccanismo d'azione e il modo migliore per indirizzarli terapeuticamente.

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Nota:quanto sopra non è un elenco di riferimento completo