Effetto di abbassamento dell'acido urico e meccanismo di acteoside e echinacoside estratti da cistanche tubulosa
Mar 03, 2025
Astratto:Mira a esplorare gli effetti e i meccanismi di abbassamento dell'acido urico di acteoside (AS) ed echinacoside (ECH) estratti daCistanche Tubulosa.
MetodiIl modello di ratto Hyperuricemia (HUA) è stato stabilito usando il potassio ossonato (1,5 g · kg -1 · d -1) combinato con adenina (100 mg · kg -1 · d -1). I ratti del modello HUA sono stati divisi casualmente in un gruppo di controllo del modello, un gruppo allopurinolo (30 mg · kg -1 · d -1), come bassi e alti (50 mg · kg -1 · d -1) Gruppi dose e echi bassi e alti (50, 100 mg · kg -1 · d -1) gruppi di dose. In precedenza era stato istituito un normale gruppo di controllo. Dopo quattro settimane di somministrazione, l'analizzatore di biochimica del sangue è stato utilizzato per rilevare i livelli di urea, crea, adenosina deaminasi (ADA) e acido urico (UUA) nelle urine. Il test immunosorbente collegato all'enzima è stato utilizzato per rilevare i livelli di xantina ossidasi (XOD) nel siero. Il tessuto renale è stato raccolto e il coefficiente renale è stato pesato e calcolato. La colorazione dell'eosina di ematossilina (HE) è stata utilizzata per osservare i cambiamenti patologici renali. L'immunoistochimica (IHC) e la PCR in tempo reale sono state usate per rilevare i livelli di espressione della proteina e dell'mRNA del trasportatore di urato 1 (URAT1), del trasportatore di glucosio 9 (GLUT9), del trasportatore di anioni organici (OAT1) e del trasportatore di anioni organici (OAT3) nel Tanno renale. Risultati AS ed ECH potrebbero migliorare la funzione renale nei ratti del modello HUA, ridurre i livelli di acido urico, promuovere l'escrezione dell'acido urico, ridurre la regolazione dei livelli sierici di ADA e XOD e sovraregolare l'espressione di proteina e mRNA di URAT1 e GLUT9 nel tessuto renale, sovraccumendo l'espressione della proteina e dell'mRNA dell'OAT1 e
CONCLUSIONI I glicosidi feniletanoidi come e ECH dai cistanche tubulosa possono esercitare effetti di abbassamento dell'acido urico migliorando la funzione renale nei ratti del modello HUA, riducendo i livelli di ADA e XOD e regolando l'espressione di URAT1, Glut9, OAT1 e OAT3.
Parole chiave: Cistanche Tubulosa; acteoside; echinacoside; iperuricemia; ridurre l'acido urico; meccanismo
Estratto di tubulosa cistanche con acteoside al 16%
L'iperuricemia (HUA) è una malattia metabolica causata dal metabolismo delle purine disordinate nel corpo umano, portando a livelli elevati di acido urico nel sangue [1]. Viene in genere diagnosticato quando i livelli di acido urico nel sangue superano 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol·l⁻¹) negli uomini e 6. 0 mg · dl⁻¹ (357. {8}} μmol·l⁻ ¹). Lo sviluppo dell'iperuricemia è principalmente correlato a fattori come diete ad alta purina, consumo cronico di alcol, uso dei farmaci e ipotiroidismo. Non solo aumenta il rischio di malattie cardiovascolari, diabete e ipertensione [3-4], ma ha anche un impatto significativo sulla salute dei pazienti.
Attualmente, i trattamenti clinici per l'iperuricemia includono principalmente farmaci che inibiscono la produzione di acido urico e promuovono l'escrezione dell'acido urico. Tuttavia, questi trattamenti hanno alcune limitazioni per i pazienti con funzionalità epatica o renale compromessa [5-6]. Pertanto, esplorare farmaci efficaci con bassi effetti collaterali è di grande significato per la prevenzione e il trattamento dell'iperuricemia.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, comunemente usato nella medicina tradizionale cinese come erba da tonnellata di reni, è impiegato per trattare condizioni come impotenza, infertilità, carenza di essenza e sangue, debolezza nella parte bassa e ginocchia, debolezza muscolare e costipazione a causa della secchezza intestinale [7]. Gli studi lo hanno dimostratoCistanche TubulosaPossiede neuroprotettive [8], antinfiammatorio [9], che regolano il metabolismo osseo [10] ed effetti che migliorano l'efficacia nella chemioterapia per i pazienti tumorali [11]. Tra i suoi vari componenti attivi, i glicosidi feniletanoidi sono i più abbondanti.
Acteoside (as) ed echinacoside (ECH), due glicosidi feniletanoidi con alto contenuto inCistanche Tubulosa, mostra una forte attività biologica e detiene un potenziale significativo per lo sviluppo e l'applicazione. Di conseguenza, il nostro gruppo di ricerca ha selezionato AS e ECH per ulteriori studi. Attraverso previsioni di farmacologia di rete e pre-esperimenti nei topi, abbiamo scoperto che estratti di glicoside feniletanoide daCistanche Tubulosapuò avere un certo effetto di abbassamento dell'acido urico. Tuttavia, i percorsi e i meccanismi di questi effetti rimangono poco chiari.
Pertanto, usando i meccanismi della produzione di acido urico e le sue vie di escrezione primaria come focus di ricerca, abbiamo studiato gli effetti di lepoli acidi urghi degli estratti di glicoside feniletanoide come ed ECH. Questo studio mira a chiarire i percorsi e i meccanismi attraverso i quali AS ed ECH esercitano i loro effetti di abbassamento dell'acido urico.
1 materiale
1.1 Animali sperimentali
I ratti Sprague-Dawley (SD) di settanta maschio SPF (SD) di livello SPF, del peso di 150-180 g, sono stati acquistati dal Centro animale sperimentale della Xinjiang Medical University. Numero di licenza di produzione animale: SCXK (Xin) 2023-0001. Questo esperimento è stato approvato dal comitato etico animale dell'Istituto di ricerca sulla medicina Uygur, con il numero di approvazione etica degli animali: IACUC- (ZHUN) -2024-009.
1.2 farmaci e reagenti
Estratti di glicoside feniletanoide (AS ed ECH)daCistanche Tubulosa (purity >Il 98%, verificato dalla cromatografia liquida ad alte prestazioni) sono stati estratti, purificati e preparati dal laboratorio chiave della scienza della formulazione di Uygur, Xinjiang Regione autonoma Uygur Medicine Research Institute. Numeri batch: 20220617 (AS) e 20220526 (ECH).
Compresse di allopurinolo, Numero batch: 62208726, prodotto da Jiangsu Wanbang Biochimical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Potassio ossonatoEadenina, Numeri batch: I2130050 e C2202255, acquistati da Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Crea (creatinina), UA (acido urico), urea e ADA (adenosina deaminasi) kit di dosaggio, Numeri batch: 141123010, 141223004, 141323008 e 043624005, acquistati da Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
Kit di test di attività XOD (xantina ossidasi), Numero batch: Y10001219, acquistato da Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Anticorpi (URAT1, Glut9, OAT1, OAT3), Numeri batch: 3i5723 0, 92f0296/4, 0f33081/2i44618, acquistato da Affinity Biosciences.
IgG anti-coniglio marcato con etichetta HRP, Numero batch: 245440113, acquistato da ZSGB-Bio.
Soluzione di colorazione dell'ematossilina, Numero batch: 24135741h, acquistato da Beijing Lanjieke Technology Co., Ltd.
Kit di reagenti cromogenici DAB, Numero batch: 240010512, acquistato da ZSGB-Bio.
DEPC (dietil pirocarbonato), Numero di catalogo: d 60029-500 ml, acquistato da Amresco (USA).
Marcatore DNA Hiclear DL2000, Numero del catalogo: MF025, acquistato da Beijing Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Reagente Trizol ™, Numero del catalogo: 15596026, acquistato da Thermo Fisher Scientific (USA).
5x Mastermix RT all-in-oneEEvagreen Express 2 × QPCR Mastermix-basso Rox, Numeri di catalogo: G492 e G891, entrambi acquistati da Applied Biological Materials Inc. (ABM).
2 metodi
2.1 Modello stabilimento e raggruppamento
I ratti di settanta maschi Sprague-Dawley (SD) sono stati acclimatati e divisi in due gruppi: un gruppo di controllo normale (1 0 ratti) e un gruppo di controllo del modello (60 ratti). Il normale gruppo di controllo è stato somministrato allo 0,5% CMC-Na tramite gavage. Il gruppo di controllo del modello è stato somministrato ossonato di potassio (1,5 g · kg⁻¹) combinato con adenina (100 mg · kg⁻¹) alla dose di 10 ml · kg⁻¹, una volta al giorno per 14 giorni consecutivi. Il modello è stato considerato stabilito con successo quando i livelli di urea, CREA e SUA sono aumentati significativamente, misurati da un analizzatore biochimico.
I ratti del modello di iperuricemia sono stati ulteriormente divisi nei seguenti gruppi basati su SUA, urea e livelli di CRE: gruppo di controllo del modello, gruppo allopurinolo (3 0 mg · kg⁻¹), a basso dosa Gruppo ECH (100 mg · kg⁻¹), con 10 ratti in ciascun gruppo. Per mantenere l'iperuricemia stabile, tutti i gruppi ad eccezione del normale gruppo di controllo sono stati somministrati ossonati di potassio (500 mg · kg⁻¹) combinati con adenina (100 mg · kg⁻¹) tramite gavage al mattino, seguito dalla somministrazione dei rispettivi farmaci in ciascun gruppo di trattamento nel pomeriggio. Il normale gruppo di controllo ha ricevuto una soluzione CMC-Na 0,5% al mattino e l'acqua potabile nel pomeriggio alla dose di 10 ml · kg⁻¹, una volta al giorno per 14 giorni consecutivi. Successivamente, la somministrazione di agenti di modellazione è stata fermata e i rispettivi farmaci venivano continuamente somministrati quotidianamente per altri 14 giorni.
2.2 Raccolta del campione
Dopo la dose finale, i ratti sono stati digiunati durante la notte (l'acqua non era limitata). L'urina di ciascun gruppo è stata raccolta per il test dell'acido urico. Il peso corporeo è stato misurato dopo il digiuno e campioni di sangue sono stati raccolti in anestesia. Il siero è stato separato dalla centrifugazione e conservato per uso futuro. I tessuti renali sono stati raccolti e pesati. Un rene è stato fissato in soluzione paraformaldeide al 4%, mentre l'altro era a scatto in azoto liquido per ulteriori analisi.
2.3 Misurazione dell'acido urico nelle urine di ratto
I campioni di urina di ciascun gruppo sono stati centrifugati (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, raggio di centrifuga 14 cm) e il surnatante è stato raccolto. I campioni di urina sono stati diluiti 1: 9 con soluzione salina e analizzati per il contenuto di acido urico usando un analizzatore biochimico.
2.4 Misurazione di ADA, urea, crea e SUA nel siero di ratto
I campioni di sangue di ciascun gruppo sono stati centrifugati (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, raggio di centrifuga 14 cm) e il siero è stato raccolto. I livelli di ADA, urea, CREA e SUA nel siero sono stati misurati usando un analizzatore biochimico.
2.5 Misurazione di XOD nel siero di ratto
Le variazioni dei livelli di XOD nel siero di ratto sono state misurate utilizzando un test enzimatico secondo le istruzioni del produttore. Sono state registrate l'assorbanza iniziale (A₁) e l'assorbanza finale (A₂) a 290 nm e ΔA (ΔA=a₂ - A₁). ΔA è stato sostituito nella formula:
Xod (nmol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × Sistema di reazione Volume totale ÷ (coefficiente di estinzione molare di acido urico × lunghezza del percorso ottico) × 10⁹] ÷ volume ÷=4262 × ΔA,
per calcolare la quantità di acido urico catalizzato al minuto per millilitro di siero.
2.6 Misurazione del coefficiente renale
I tessuti renali sono stati raccolti, lavati con soluzione salina e l'acqua in eccesso è stata rimossa. Il peso dell'organo è stato misurato accuratamente e il coefficiente renale è stato calcolato come segue:
Coefficiente renale=peso renale (mg) / peso corporeo (g).
2.7 Osservazione istopatologica del tessuto renale mediante colorazione
I tessuti renali fissati in soluzione paraformaldeide al 4% sono stati disidratati con concentrazioni di etanolo graduate, cancellate con xilene, incorporate in paraffina e sezionate in sezioni 4- μm. Le sezioni sono state deparaffinite con xilene, idratate con etanolo graduale, colorate con ematossilina ed eosina (HE) e sigillate con gomma neutra. I cambiamenti morfologici nel tessuto renale sono stati osservati al microscopio ottico e le immagini sono state catturate con ingrandimento 400 ×.
2.8 Rilevazione di espressione di proteina Urat1, Glut9, OAT1 e OAT3 nel tessuto renale da IHC
I tessuti renali fissati in soluzione di paraformaldeide al 4% sono stati disidratati con concentrazioni di etanolo graduate, cancellate con xilene, incorporata in paraffina e sezionata. Sono stati eseguiti il recupero dell'antigene e il blocco del siero di capra. Gli anticorpi primari (URAT1, Glut9, OAT1, OAT3) sono stati aggiunti con diluizione 1: 200 e incubati durante la notte a 4 gradi. Il giorno successivo, le sezioni sono state lavate con PBS, essiccate all'aria e incubate con IgG anti-coniglio di capra marcato con biotina a 37 gradi per 30 minuti. Le sezioni sono state lavate con PBS e incubate con reagente cromogenico DAB per 10 minuti, seguiti da risciacquo PBS, colorazione dell'ematossilina per 3 minuti, differenziazione con soluzione di etanolo acido cloridrico, blu di carbonato di litio, disidratazione con etanolo a gradiente, cancellazione con xilene e tenuta con gomma neutrale.
Per ogni ratto, sono stati selezionati due campi casuali 4 0 0 × delle sezioni renali. La colorazione positiva (giallo-gialla) è stata analizzata e la densità ottica integrata (IOD) di ciascun campo è stata misurata utilizzando Image-Pro Plus 6.0 per l'analisi statistica.
