Nuclei talamici anteriori: un substrato critico per la memoria associata e non spaziale nei ratti, parte 2

2| MATERIALI E METODI

2.1|Animali e condizioni abitative

Ratti maschi Long-Evans (12 mesi; media 630 g) sono stati alloggiati in gruppi di tre o quattro in gabbie Makrolon (48 x 28 x 22 cm) su un ciclo luce-buio invertito di 12-h (luci accese alle 20:00 ).

I test comportamentali sono stati effettuati nella fase oscura del ciclo di luce, cinque sessioni a settimana; le osservazioni hanno confermato che i ratti erano relativamente più attivi durante la fase oscura. I ratti sono stati mantenuti all'85% del peso corporeo durante l'alimentazione libera con acqua ad libitum; il cibo era ad libitum prima e dopo l'intervento chirurgico per il recupero postoperatorio.

La chirurgia è il processo di trattamento delle malattie e di miglioramento della salute fisica. Il processo di recupero dopo l'intervento chirurgico richiede un'attenzione particolare. Oltre al recupero fisico, per sentirsi bene è necessario concentrarsi anche sul recupero della memoria. Esiste una forte connessione tra il recupero postoperatorio e la memoria.

Durante l'operazione, fattori come la risposta del corpo alle avversità e gli effetti dei farmaci anestetici spesso influenzano la funzione di memoria del cervello. Dopo che il corpo si è ripreso, prestare attenzione a mantenere una buona dieta, un esercizio fisico moderato e un sonno adeguato. Durante il periodo di recupero fuori dall'ospedale, è necessario continuare ad evitare attività eccessive e mantenere uno stato confortevole del corpo.

Oltre alle abitudini di vita, anche ragionevoli aggiustamenti psicologici sono utili per ripristinare la salute e la memoria. Rilassati, mantieni una mente pacifica e aiutati ad adattarti al recupero della memoria. Allo stesso tempo, dovresti partecipare attivamente ad attività ricreative e comunicare con parenti e amici per mantenere attivo il cervello e migliorare le tue capacità cognitive e di memoria. Questa attività può essere aumentata gradualmente e può essere svolta sostanzialmente una volta alla settimana.

In breve, il processo di recupero dopo l’intervento chirurgico richiede un’attenzione a tutto tondo. Mantenere buone abitudini di vita e adattamenti psicologici gioca un ruolo molto importante nel promuovere il recupero fisico e il recupero della memoria. Affrontiamola positivamente, con piena fiducia e speranza. Dobbiamo migliorare la memoria, e la Cistanche deserticola può migliorare significativamente la memoria, perché la Cistanche deserticola può anche regolare l'equilibrio dei neurotrasmettitori, come ad esempio aumentare i livelli di acetilcolina e i fattori di crescita. Queste sostanze sono molto importanti per la memoria e l'apprendimento. Inoltre, la carne può anche migliorare il flusso sanguigno e promuovere l’apporto di ossigeno, il che può garantire che il cervello riceva nutrienti ed energia sufficienti, migliorando così la vitalità e la resistenza del cervello.

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Tutte le procedure erano conformi alle linee guida approvate dal Comitato etico per gli animali dell'Università di Canterbury. Quattro gruppi di ratti sono stati stabiliti mediante assegnazione casuale dopo la familiarità pre-operatoria nel labirinto del braccio radiale (RAM) e nella pista. I quattro gruppi erano lesioni ATN bilaterali con o senza traccia tra stimoli di odori e oggetti quando addestrati nel compito di associazione associata e nei corrispondenti due gruppi di lesioni Sham.

Le dimensioni finali del campione erano (1) Sham-No Trace=7 (cioè un gruppo con lesioni Sham senza intervallo tra gli stimoli dell'odore e dell'oggetto utilizzato nel compito associato-accoppiato); (2) Sham-Trace=7 (gruppo Shamlesion a cui è stata data una traccia 10- tra la presentazione dell'odore e gli stimoli dell'oggetto); (3) ATN-Nessuna traccia=8; e (4) ATN-Traccia=9. Un ulteriore ratto con lesione ATN è stato escluso perché non soddisfaceva i criteri della lesione (vedere di seguito).

2.2|Chirurgia

I ratti sono stati anestetizzati con isoflurano (induzione 4%; mantenimento 2,5%) e posti in un apparato stereotassico con barre auricolari atraumatiche (Kopf, Tujunga, CA). La barra incisiva è stata impostata a 7,5 mm sotto la linea interaurale per ridurre al minimo i danni al fornice.

In ciascun emisfero, due infusioni sono state dirette al nucleo anteroventrale (AV; superiore e inferiore) e un'infusione è stata diretta al nucleo anteromediale (AM). Ciascun intervento chirurgico ha utilizzato cinque coordinate antero-posteriori (AP) relative alla distanza Bregma-Lambda di un singolo ratto (tutti i valori in mm). Per le lesioni AV, le coordinate AP erano: 2,20 per B–L 6,9–7,2; 2,25 per B–L da 7,3 a 7,6; 2,30 per B–L Maggiore o uguale a 7,7. Le infusioni AV sono state effettuate a 5,68 e 5,73 sotto la dura e 1,52 lateralmente alla linea mediana.

L'infusione AM è stata effettuata {{0}},1 mm più anteriore della coordinata AV, a 5,76 sotto la dura e 1,16 lateralmente; la prima lesione AM è stata effettuata dopo aver completato tutte le infusioni AV ed è iniziata controlateralmente all'ultima lesione AV. 0.15 M N-metil-d-aspartato (NMDA; Sigma, CastleHill, NSW) in 0.1 M tampone fosfato (pH 7,20) è stato infuso in ciascun sito a 0,04 ul al minuto tramite un 2.5-Siringa ulHamilton (Reno, NV, USA) utilizzando una micropompa per infusione (Stoelting, Wood Dale, IL).

I siti AV per emisfero hanno ricevuto {{0}}.12 e 0.10 ul per i siti dorsale e ventrale, rispettivamente; Per ciascun sito AM sono stati utilizzati 0,06 ul. L'ago della siringa è rimasto in situ per 3 minuti per lato, dopo l'infusione.
Gli interventi chirurgici per lesioni fittizie hanno utilizzato la stessa procedura, ma l'ago è stato abbassato a 1 mm sopra i siti delle lesioni AV e AM superiori senza somministrare alcuna infusione.

2.3|Compiti comportamentali

Un RAM a otto bracci ha confermato il deterioramento della memoria spaziale nei ratti con lesioni ATN dopo l'intervento chirurgico. È stato utilizzato un apparato con pista per addestrare i ratti a tutti i compiti non spaziali, vale a dire, semplice discriminazione di odori e oggetti semplici e compiti di associazione odore-oggetto e odore-traccia-oggetto.

Prima dell'intervento chirurgico, i ratti a dieta limitata sono stati abituati al RAM a otto bracci, descritto di seguito, per recuperare 0,1 g di pezzi di cioccolato (Foodfirst LTD Auckland, Nuova Zelanda) e adattarsi all'apertura e alla chiusura delle porte dei bracci. In una pista di perspex rossa (Figura 1), i ratti sono stati anche modellati per colpire con il naso un cappuccio circolare di plastica bianca di 2- cm che era a 10 cm dal livello del pavimento e al centro una spugna sottile su un inserto di perspex trasparente attaccato a il muro di fondo.

Erano anche modellati per spingere (usando il naso o la zampa) un oggetto incernierato nella parte posteriore della base verso la parte superiore di un pozzetto per il cibo incassato al centro di un blocco di legno di 5 8,5 3 cm. Il cibo conteneva pezzi di cioccolato (e conteneva cibo inaccessibile sotto la rientranza). L'oggetto utilizzato per il pre-allenamento non è stato riutilizzato. Dopo l'intervento chirurgico, i ratti in recupero hanno familiarizzato nuovamente sia con il RAM che con la pista.

2.4|Memoria di lavoro spaziale nella RAM

Dopo l'intervento chirurgico, la memoria di lavoro spaziale è stata testata utilizzando la RAM situata al centro di una stanza senza finestre (3,3 m). Il labirinto aveva un perno centrale in legno verniciato di grigio largo 35 cm con otto bracci in alluminio (lunghi 65 cm e larghi 8,6 cm, con bordi alti 4,5 cm), rialzati di 67,5 cm dal pavimento della stanza. Pareti di perspex trasparente (19 cm di lunghezza e 25 cm di altezza) si estendevano lungo un lato di ciascun braccio a partire dal mozzo per impedire ai ratti di saltare tra i bracci.

All'estremità di ciascun braccio è stato posizionato un pozzetto di legno nero (5 x 8,5 x 3 cm), con del cibo inaccessibile sotto. Durante il test, in ciascun pozzetto per alimenti erano presenti 2 0,1 g di pezzi di cioccolato all'inizio di ciascuno. prova. Le porte a ghigliottina in perspex trasparente, che potevano essere sollevate da sotto il mozzo tramite un sistema di carrucole, controllavano l'accesso al mozzo e ai bracci.

Dieci giorni consecutivi di formazione formale nella RAM sono stati utilizzati per testare la memoria di lavoro spaziale. Il ratto è stato posizionato nel mozzo centrale e 10 secondi dopo, tutte e otto le braccia sono state aperte e al ratto è stato permesso di fare una scelta definita come entrambe le zampe posteriori oltre la soglia del braccio. Una volta che il ratto è entrato in un braccio, tutte le porte sono state chiuse ed è stato confinato nel braccio per 15 secondi, indipendentemente dal fatto che avesse fatto la scelta corretta.

Il ratto è stato quindi fatto rientrare nell'hub centrale e trattenuto lì per 10 secondi prima che tutte le porte venissero riaperte per consentire un'altra scelta del braccio. Lo studio si è concluso quando il ratto ha visitato tutti gli otto bracci, sono state effettuate 20 scelte di braccio o sono trascorsi 10 minuti.

2,5|Compiti non spaziali: discriminazione semplice e apprendimento associato-accoppiato

Sia i compiti di discriminazione semplice che quelli associati a coppie hanno utilizzato la stessa pista di perspex rossa (93 26 26 cm) posizionata su un tavolo alto 75- cm (Figura 1). La passerella poteva essere divisa da tre porte rimovibili verticalmente (perspex rosso, 26 x 26 cm) selezionate in base al compito comportamentale specifico. Per quanto riguarda la familiarità, il pan di spagna sottile da 6,5 ​​x 6 x 8 mm con il tappo al centro conteneva una ricompensa in cibo al cioccolato (Figura 1).

La spugna era attaccata a una porta rimovibile nella pista (per i compiti di coppia) o alla parete di fondo della pista (per il semplice compito di discriminazione). Per ogni odore è stata utilizzata una spugna Doorplus diversa, che è stata infusa adiacente al recipiente con 5 ml di olio di girasole mescolato con 20 ul di sostanza Oli Essenziali della Nuova Zelanda.

Gli odori erano limone e chiodi di garofano per i compiti di coppia, e cannella e lime per i compiti di discriminazione semplice, o il contrario nei gruppi controbilanciati. Oggetti leggeri e visivamente distinti (Figura 1) erano attaccati mediante un cardine nella parte posteriore della base alla parte superiore del pozzetto del cibo in modo che un ratto potesse facilmente spingere indietro l'oggetto (naso o zampa) per cercare nel pozzetto la ricompensa del cibo.

Una struttura di legno (1,8 m di altezza dal pavimento e 1,3 m di larghezza), drappeggiata con tende nere, racchiudeva tutti i lati dell'area di prova per ridurre i segnali spaziali durante il test.

Le discriminazioni semplici (solo odore; solo oggetto) e i compiti associati ad coppie utilizzavano una procedura 'vai/non vai'.

La prima prova di ciascuna sessione è iniziata trattenendo il ratto nell'area di partenza per 120 secondi per riacclimatarsi al labirinto; le prove successive hanno utilizzato 20 s in quest'area di partenza. Tutti i ratti hanno ricevuto 12 prove di massa per sessione giornaliera, con sei prove (premiate) e sei no-go (non premiate) in ordine apseudo-randomizzato. Non sono state eseguite più di tre prove “go” o “no-go” consecutive in una sessione.

Nessuna delle quattro diverse coppie di stimoli odore-oggetto è stata ripetuta in prove consecutive. Gli elementi corretti nei compiti di discriminazione semplice e le coppie di stimoli corretti nei compiti associati-accoppiati erano controbilanciati tra i ratti.

Per la semplice discriminazione degli odori, la risposta è stata definita come una puntura del naso nel cappuccio al centro della spugna profumata; annusare solo la spugna era considerata una risposta vietata. Il cibo era sempre presente nel tappo al centro della spugna per i compiti associati all'odore-oggetto; l'aspetto go/no-go qui si riferisce al fatto che l'oggetto sia stato spinto per rivelare se sotto di esso c'era una ricompensa alimentare, alla fine della passerella.

Per gli oggetti, una risposta è stata definita come qualsiasi spinta con il naso o con una zampa che inclinasse l'oggetto all'indietro. La latenza dal momento in cui l'ultima porta è stata sollevata e quando il ratto ha interagito con l'odore (colpendo il naso nel cappuccio; per la semplice discriminazione degli odori) o con l'oggetto (spinto indietro sul cardine, per la semplice discriminazione degli oggetti e compiti associati-accoppiati) è stata misurato utilizzando un cronometro silenzioso (Dick Smith, Nuova Zelanda).

L'osservatore era seduto all'interno delle tende e adiacente alla pista per azionare le porte e registrare il comportamento. Una prova veniva definita "corretta" se il ratto rispondeva in meno di 8 s nelle prove in corso o non rispondeva prima di 8 s nelle prove senza passaggio.

2.6|Discriminazioni semplici

La metà dei ratti è stata addestrata nel semplice compito di discriminazione degli odori seguito dalla semplice discriminazione degli oggetti e viceversa per l'altra metà. È stata registrata la latenza tra la porta X (Figura 1a) e l'interazione con l'odore o l'oggetto alla fine della pista. I ratti sono stati addestrati al semplice compito di discriminazione degli odori e degli oggetti finché non hanno raggiunto il criterio (80% corretto in 2 giorni consecutivi).

Per il semplice compito di discriminazione degli odori, in ogni prova è stato presentato un singolo odore. Il ratto doveva discriminare quale dei due odori fosse abbinato a una ricompensa alimentare presentata nella spugna all'estremità dello scomparto B (Figura 1a).

Nel compito semplice di discriminazione degli oggetti, in ciascuna prova veniva presentato un singolo oggetto alla fine del compartimento B (non mostrato nella Figura 1). Il ratto doveva imparare quale dei due oggetti era abbinato a una ricompensa alimentare presentata sotto l'oggetto.

2.7|Attività associate accoppiate (traccia e non traccia) Queste attività utilizzavano un nuovo layout di porte rimovibili verticalmente (Figura 1). I ratti hanno imparato quale dei due accoppiamenti odore-oggetto sarebbe stato premiato (ad esempio Odore 1 + Oggetto A e Odore 2 + Oggetto B) e quali accoppiamenti non sarebbero stati premiati (ad esempio Odore 1 + Oggetto B e Odore 2 + Oggetto A).

Indipendentemente dall'accoppiamento, i ratti ricevevano sempre una ricompensa per la presentazione dell'odore quando venivano ammessi nel secondo compartimento della pista. Questo era il compartimento C per la condizione di "nessuna traccia" in cui il compartimento A non veniva utilizzato e il compartimento B era il compartimento di partenza. L'odore era alla fine del compartimento B per la condizione di "traccia", per la quale il compartimento A veniva utilizzato come casella di partenza.

I ratti nella condizione di traccia sono stati sottoposti a un ritardo di 10- s tra la presentazione dell'odore e gli stimoli dell'oggetto, essendo tenuti nel compartimento C, mentre i ratti nella condizione di nessuna traccia sono stati esposti all'oggetto immediatamente dopo la loro interazione con l'odore (dopo mangiando la ricompensa). In entrambe le condizioni di traccia e senza traccia, abbiamo registrato la latenza nell'attraversare il Compartimento D, dal momento in cui la Porta Z è stata sollevata fino a quando il ratto ha interagito con l'oggetto o si è astenuto dall'interagire con esso per 8 secondi.

Due gruppi di ratti (lesione simulata e lesione ATN) sono stati addestrati sui compiti di associazione accoppiata odore-oggetto (gruppi senza traccia), e due gruppi corrispondenti sono stati addestrati sul compito di associazione accoppiata odore-traccia-oggetto (gruppi di traccia) fino a quando criterio raggiunto (80% di prove corrette in 3 giorni) o un massimo di 50 giorni.

2.8|Test di fidelizzazione post-acquisizione

Il mantenimento del compito di associazione per qualsiasi ratto è stato condotto 5 giorni dopo aver raggiunto il criterio o dopo 50 giorni di addestramento. Questa sessione ha utilizzato 12 prove con premio/non premio in un solo giorno in modo identico a quello utilizzato in precedenza per quel ratto.

2.9|Istologia

2.9.1|Perfusione e raccolta dei tessuti

Nei 3 giorni precedenti il ​​test di ritenzione, i ratti singoli sono stati familiarizzati con una gabbia vuota e pulita per 90 minuti in una stanza buia e silenziosa. Immediatamente dopo l'ultima prova di ritenzione, il ratto è stato posto nella sua gabbia nella familiare stanza buia e silenziosa 90 minuti prima della perfusione.

I ratti sono stati anestetizzati profondamente con sodio pentobarbital (125 mg/kg) e perfusi per via transcardiaca con soluzione salina seguita da paraformaldeide [4% PFA in 0,1 M tampone fosfato (PB)] per fissare il cervello. I cervelli sono stati post-fissati in PFA al 4% seguiti da un minimo di 48 ore in una soluzione a lungo termine (20% di glicerolo in 0.1 M PB). Le sezioni coronali da 40-μm sono state raccolte utilizzando un microtomo congelatore (Thermo Fisher, Regno Unito) e conservate in una soluzione crioprotettore (30% glicerolo, 30% glicole etilenico in PB 0,1 M) a 20 C fino al trattamento per l'immunoistochimica.

Le sezioni coronali sono state raccolte in due serie separate. La prima serie ha catturato sezioni consecutive in cinque criovial per immunoistochimica (cioè una su cinque). Questa serie comprendeva un blocco anteriore di sezioni dalla corteccia prefrontale all'area settale (a circa {{0}}, da 0,7 a 0,6 mm da Bregma) e un blocco posteriore dal talamo mediodorsale (a circa 3,5 mm da Bregma) a quello caudale. corteccia retrospleniale.

La seconda serie ha catturato sezioni consecutive per la verifica delle lesioni. Queste sezioni sono state raccolte in quattro criovial da immediatamente anteriore all'ATN al talamo mediodorsale posteriore (a circa 0, da 0,6 a 3,5 mm da Bregma).

2.9.2|Colorazione Neu-N e verifica delle lesioni ATN

Le sezioni fluttuanti in tutta la regione ATN sono state lavate (3 10 min) in soluzione salina tamponata con fosfato 0.1 M con Triton-X (0,2%; PBSTx) prima dell'incubazione in tampone bloccante la perossidasi endogena per 30 min [1% di perossido di idrogeno (H2O2), 50% di metanolo (CH3OH) in 2%PBSTx].

Le sezioni sono state incubate durante la notte a 4 C in anticorpo primario anti-NeuN (1:5000; monoclonale-MouseCat# MAB377; Millipore, California USA) in PBSTx con siero di capra normale all'1% (NGS; Life Technologies, NZ).

Il tampone anticorpale in eccesso è stato rimosso con PBSTx e seguito dall'incubazione in anticorpo secondario anti-topo di capra biotinilato (1:1000 Cat# BP-9200-50: VectorLaboratories, California USA) durante la notte a 4 C in PBSTx e 1% NGS. Le sezioni sono state collocate in ExtrAvidin (coniugato con perossidasi; 1:1000; Sigma, NSW Australia), PBSTx e NGS all'1% per 2 ore a temperatura ambiente.

Per rimuovere l'eccesso di ExtrAvidin e Triton X{{0}}, le sezioni sono state lavate in PBS, PB e poi in tampone Tris (pH 7,4 in H2 distillata0) per preparare le sezioni per la visualizzazione con diaminobenzidina appena preparata ( DAB 0,05%; Sigma,in 0,01% H2O2 in tampone Tris).

La reazione DAB (circa 5 minuti) è stata interrotta utilizzando tampone Tris (lavaggio di 1 10 minuti) e le sezioni sono state poste in PB a 4 C durante la notte prima del montaggio su vetrini gelatinizzati e lasciate asciugare. I vetrini sono stati disidratati con alcol grado (70%–100%) prima di essere purificati con inxilene e montati con DPX (06522; Sigma-Aldrich) e un vetrino coprioggetto.

Il numero di cellule Neu-N-positive nell'ATN è stato utilizzato per determinare l'estensione della lesione. Sono state utilizzate sezioni di entrambi gli emisferi sinistro e destro per ciascuna sezione su quattro di 40-μm in tutta l'ATN e l'area quantificata utilizzando ImageJ (NIH, USA). La colorazione delle cellule NeuN-positive è stata fotografata su 5 obiettivi con un microscopio verticale LeicaDM6 B e una fotocamera DFC7000T (Leica Microsystems, Germania).

I conteggi automatizzati delle cellule sono stati ottenuti tramite ImageJ (software di analisi delle immagini, National Institute of Health, NIH, USA). L'area circostante i neuroni nella regione ATN è stata selezionata manualmente e le immagini sono state convertite in una scala di grigi a {{0}}bit, lo sfondo è stato sottratto (rotolando=40), convertito in maschera e è stata applicata la funzione spartiacque, e sono state contate tutte le cellule neuronali al di sopra della soglia (soglia "MaxEntropy", circolarità 0.5–1.0).

La soglia di rilevamento era la stessa per tutte le sezioni. Nuclei di cellule colorati automaticamente con NeuN sono stati contati in nove ratti finti (cinque nel gruppo Sham-Trace e quattro nel gruppo Sham-No Trace) per esprimere i conteggi di cellule nell'ATN.

I conteggi automatizzati dei nuclei colorati con NeuN delle cellule risparmiate in tutti i ratti con lesione ATN sono stati confrontati rispetto al conteggio medio delle cellule NeuN osservato nei ratti fittizi. Lesioni accettabili sono state definite come raggiungimento del criterio del 50% di perdita di cellule nell'ATN, con un minimo del 25% per emisfero. Ciò è coerente con i criteri relativi alle lesioni ATN negli studi precedenti (Mitchell & Dalrymple-Alford, 2005, 2006; Perryet al., 2018).

2.9.3|Immunoistochimica Zif268

Le sezioni fluttuanti sono state processate in modo simile a quelle per NeuN, ma incubate in anticorpo primario policlonale di coniglio Zif268 (Egr-1; 1:1000 Cat# sc-110; Santa CruzBiotechnology, USA) per 72 ore a 4 C in PBSTx con 1% NGS, seguito da incubazione in anticorpo secondario anticoniglio di capra biotinilato (1:1000: Vector LaboratoriesBA-1000) per una notte in PBSTx e 1% NGS.

Dopo la visualizzazione DAB (18 minuti), la colorazione positiva delle cellule Zif268-in ciascuna regione di interesse è stata fotografata con un obiettivo da 10 con un microscopio ottico (Leica, Germania). I conteggi automatizzati delle cellule sono stati ottenuti tramite ImageJ ( NIH, USA) allo stesso modo delle cellule NeuNpositive, tranne che la circolarità è stata impostata su 0.65–1.0.

I conteggi delle cellule Zif268-positive per tutte le regioni hanno utilizzato lo stesso algoritmo di soglia, quantificando da due a sei sezioni per regione di interesse in ciascun ratto. È stata utilizzata la conta media delle cellule positive Zif268-per mm2 nelle sezioni (di entrambi gli emisferi) all'interno di una regione di interesse.

2.10| Analisi dei dati

È stata condotta l'ANOVA utilizzando Statistica (v13; Dell Inc.) per testare le differenze medie tra i quattro gruppi di ratti (Sham-No Trace, Sham-Trace, ATN-No Trace e ATNTrace). Sono stati aggiunti fattori di misure ripetute per giorni (RAM e discriminazione semplice), blocchi di prove (attività associate a coppie) e conteggi Zif268 nelle regioni o sottoregioni di interesse correlate.

L'ANOVA sia per i compiti RAM che per quelli di discriminazione semplice ha confrontato quattro gruppi per confermare che i due gruppi di lesioni Sham e i due gruppi di lesioni ATN erano coerenti tra loro, ma si è notato che non vi era alcuna componente di traccia nei compiti RAM o di discriminazione semplice. Sia per la discriminazione semplice che per i compiti associati in coppia nella pista, è stata utilizzata una trasformazione reciproca dei dati di latenza nelle prove individuali per garantire l'omogeneità della varianza.

In un dato giorno di test, le latenze trasformate hanno generato una latenza media per ciascuna delle sei prove non premiate e per le sei prove premiate. Per i compiti di discriminazione semplice, abbiamo analizzato il punteggio medio della differenza di latenza (la media delle prove premiate meno la media delle prove non premiate) ma non le prove premiate e quelle non premiate separatamente a causa di un errore di archiviazione dei dati.

Tutte e tre le misure di latenza erano disponibili per i compiti di memoria associati a coppie (prove non premiate, prove premiate e differenza di latenza). Per tenere conto di confronti multipli e bilanciare gli errori di Tipo I e di Tipo II, abbiamo utilizzato il livello di significatività di p < 0.02 per le analisi comportamentali poiché c'erano tre misure correlate nel compito associato a coppie (prove non premiate, prove premiate e differenza media di latenza).

Sono state effettuate sei analisi primarie per le regioni di interesse per l'espressione Zif268, quindi la significatività in queste analisi è stata fissata a p < 0.01. I test Posthoc Newman-Keuls (NK) hanno valutato le differenze di gruppo a coppie. L’analisi semplice degli effetti principali è stata utilizzata quando si verificavano interazioni significative che coinvolgevano fattori di misure ripetute.

3| RISULTATI

3.1|Verifica delle lesioni

Tutti i 18 ratti con lesioni ATN tranne uno soddisfacevano il criterio a priori del 50% di danno bilaterale all'ATN e un minimo del 25% per emisfero. Il danno bilaterale mediano è stato del 76% in entrambi i gruppi con lesione ATN (intervallo: ATN-No Trace, 61%–93%; ATN-Trace, 63%–93%; Figura 2). Il ratto escluso presentava una lesione soddisfacente solo in un emisfero (48% totale, 75% sinistro e 20% destro).

La Figura 2d mostra che i conteggi NeuN per i neuroni ATN nei ratti con lesioni ATN (M=3388, SD=2024) erano tutti ben al di sotto dei valori trovati nei ratti con lesioni fittizie (M=15, 339, SD=1065; questo conteggio era simile a quello riportato da Frost et al., 2020). Otto dei 17 ratti con lesioni (quattro nel gruppo Trace e quattro nel gruppo No-Trace) non presentavano danni né al talamo mediodorsale (MD) né alle riunioni/nuclei romboidali (Re/Rh), e c'erano relativamente pochi danni ai queste strutture nei restanti nove ratti con lesioni.

Quando si è verificato il danno MD, era negli aspetti anteriori adiacenti all'ATN. Quindi, il danno MD è stato valutato da circa {{0}},72 a +2,10 mm da Bregma, dove variava dallo 0% al 41% di perdita di cellule nell'intero gruppo (mediana=21%). Quando si è verificato il danno Re/Rh, era anche adiacente alla regione ATN, quindi è stato valutato a circa 1,08-2,04 mm da Bregma, dove variava dallo 0% al 33% (mediana=6%). Si noti che questi valori percentuali di lesione non rappresentano l'intera regione MD e Re/Rh, perché le regioni posteriori di entrambi i nuclei erano intatte in tutti i ratti con lesione ATN.

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