Effetti della Cistanche sui cambiamenti dell'ATPasi nel fegato Mitocondri della setticemia Ratti

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Wang Zhiqiang Yin Gang

Riassunto: Obiettivo:Per studiare il cambiamento diAttività dell'ATPasi dei mitocondri epatici nella sepsie l'effetto diCistanchesu di esso.Metodi:40 ratti SD sono stati divisi casualmente in gruppo di operazioni fittizie, 12-gruppo di controllo dell'ora, 12-gruppo di somministrazione dell'ora, 16-gruppo di controllo dell'ora e 16-gruppo di somministrazione dell'ora. Ilsepsiil modello è stato replicato mediante legatura e perforazione cecale (C LP) e confrontato. Il tasso di sopravvivenza del gruppo, la pressione arteriosa media (MAP), il fegatomitocondriale ATPasicambiamenti di attività.Risultati:Dopo che i ratti hanno replicato il modello di sepsi, ilATPasiattività del fegatomitocondriè diminuito e il 24-tasso di sopravvivenza ora è diminuito in modo significativo. IlATPasiattività dei mitocondri epatici dopo somministrazione diCistancheera significativamente migliorata rispetto al gruppo di controllo (P<0.05), which="" was="" significantly="" positively="" correlated="" with="" the="" reduction="" of="" rat="" mortality.="">Conclusione:Mitocondriale diminuitoAttività dell'ATPasi nella sepsi, sovraccarico di calcio cellulare ed edema e necrosi sono le cause dirette di morte inratti settici. Cistanche migliora l'attività dell'ATPasiè un meccanismo importante per il trattamento disepsi.

Parole chiave: Cistanche, cistanche sepsi mitocondri enzima ATP

Sepsiè una malattia clinicamente critica. Sebbene gli antibiotici siano stati aggiornati negli ultimi 30 anni, il tasso di mortalità della sepsi non è diminuito in modo significativo ed è ancora alto come il 50 per cento [1]. Il trattamento antibatterico occidentale "eliminando il male" da solo non migliora la prognosi disepsi.Nella patogenesi della MTC, la sepsi appartiene alla "giustizia della carenza e del male", il trattamento deve essere basato sul principio del "rafforzamento del corpo" e dell'"eliminazione del male". La medicina tradizionale cinese ha mostrato un grande potenziale nel trattamento della sepsi.Sepsicomplicata da insufficienza multiorgano è la causa principale dell'alto tasso di mortalità e il danno alla struttura cellulare è la base microscopica patologica dell'insufficienza multiorgano [2]. Cistanche è una medicina tradizionale cinese per tonici, studi farmacologici moderni lo hanno dimostratoCistancheha l'effetto di resistere alla perossidazione degli esteri di membrana e di proteggere la funzione cellulare [3]. La funzione dienergia mitocondrialeil metabolismo è una delle funzioni di base delle cellule e l'attività diATPasiè un indicatore importante per misurare la funzione dienergia mitocondrialemetabolismo. In questo esperimento, abbiamo osservato i cambiamenti diATPasiattività delle cellule epatiche inratti setticie il rapporto tra gli effetti diCistanchesu di esso e sulla mortalità dei ratti e mirava a fornire una base teorica e un'esplorazione efficace per il trattamento clinico di "rafforzamento" disepsi.

Cistanche

1. Materiali e metodi

1.1 Reagenti

Cistancheè stato acquistato dallo Xinjiang (identificato dal professor Tan Defu della Three Gorges University School of Medicine). Sono stati presi 200 g di Cistanche essiccato e decotto due volte in acqua distillata. Il filtrato è stato evaporato e concentrato ad una concentrazione di 1 g/ml. Pentobarbital di sodio (001104), China National Pharmaceutical Group Shanghai ChemicalReagenteAzienda;Reagente ATPasi(20030108), Nanchino Jiancheng Istituto di ricerca sulla bioingegneria.

1.2 Modello animale sperimentale e raggruppamento

40 ratti maschi SD (acquistati dal Centro sperimentale per animali del Tongji Medical College, Università di scienza e tecnologia di Huazhong), sono stati divisi casualmente in 5 gruppi: gruppo operazione simulata (n=8), 12-controllo orario gruppo (n=8), 12-gruppo di amministrazione dell'ora (n=8), 16-gruppo di controllo dell'ora (n=8), 16-ora gruppo di amministrazione (n=8). Al gruppo dell'operazione simulata e al gruppo di controllo è stata somministrata una soluzione fisiologica mediante sonda gastrica e il gruppo di somministrazione è stato sottoposto a sonda gastrica con 1 g/ml di Cistanche, due volte al giorno, per un massimo di 15 giorni. Ilmodello di sepsiè stato replicato mediante legatura e perforazione cecale [4]. Prima dell'operazione, gli animali erano liberi di bere acqua e digiunare per 12 ore.

1.3 Determinazione della pressione arteriosa media

La vena giugulare è stata inserita con un ago per il cuoio capelluto, l'eparina è stata utilizzata per l'anticoagulazione, l'arteria carotide comune sinistra è stata incannulata all'arco aortico e il catetere self-made è stato collegato allo strumento biologico multicanale e la mediapressione arteriosa(MAP) è stato registrato. Esperimento dopo che la MAP si è stabilizzata.

1.4 Determinazione dell'attività dell'ATPasi mitocondriale

Prendere 6 g di fegato di ratto e metterlo rapidamente in un mezzo di separazione di 0 gradi [250mmoli di saccarosio, 2mmoli di etossi-etil piperazina 2-acido etilsolfonico, 0,1mmoli di acido etilendiamminotetraacetico, pH7.4], aprirlo e lavare via le impurità, separare la sospensione media (1: 10), omogeneizzare con un omogeneizzatore elettrico al teflon (1200r/min), centrifugare a 2000r/min per 10 minuti, trattenere il surnatante, centrifugare a 10000r /min per 15 minuti, scartare il surnatante, prelevare il precipitato e sospenderlo in 2 ml di mezzo di separazione per ottenere unsospensione mitocondriale. L'intero processo viene eseguito da 0 a 4 gradi . Per la misurazione è stato utilizzato il metodo di determinazione del fosforo [5].Attività dell'ATPasi(il kit è stato acquistato dal Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering).

1.5 Elaborazione statistica

I dati sperimentali sono tutti espressi come media±deviazione standard (X±S) e il software SPSS esegue l'analisi unidirezionale della varianza e dell'analisi di correlazione.

Estratto di Cistanche

2. risultati

2.1 L'effetto di Cistanche sulla pressione arteriosa media e 24-ora di mortalità nel ratto

La pressione sanguigna del gruppo di controllo è diminuita significativamente a 12 ore dopo la legatura e la perforazione del cieco, ed è diventata più evidente a 16 ore. Rispetto al gruppo dell'operazione fittizia, c'era una differenza significativa. La pressione sanguigna delTrattamento delle cistanzeil gruppo è stato migliorato. Il tasso di mortalità del gruppo di controllo era significativamente più alto di quello del gruppo dell'operazione simulata e il tasso di mortalità del gruppo di somministrazione era significativamente inferiore a quello del corrispondente gruppo di controllo.

2.2 L'effetto di Cistanche sull'attività dell'ATPasi mitocondriale

Le attività diATPasi sodio-potassio, ATPasi calcio, ATPasi magnesio e ATPasi calcio-magnesionel gruppo di somministrazione erano significativamente superiori a quelli del corrispondente gruppo di controllo, raggiungendo il livello del gruppo di operazione simulata, che era significativamente correlato positivamente con la riduzione dimortalità dei ratti (r=0.834) ).

Cistanche

3. Discussione

Na più -K più -ATPasi, nota anche come pompa sodio-potassio, svolge un ruolo fisiologico importante nel mantenimento delle attività fisiologiche cellulari, della temperatura corporea e del normale metabolismo e nella regolazione dell'equilibrio degli ioni all'interno e all'esterno della cellula.In sepsi, vi è una grave disfunzione della pompa del sodio nella membrana mitocondriale interna, causandomitocondrialeedema. IlNa più -K più -ATPenzima è danneggiato, lo squilibrio dimitocondrialela concentrazione di ioni aumenta, l'attività enzimatica del metabolismo energetico è inibita, l'apporto energetico cellulare è esaurito e si provoca edema citotossico. Allo stesso tempo, aumenta la permeabilità della membrana, che alla fine porta alla morte cellulare. Nell'esperimento, abbiamo scoperto che il mitocondrialeNa più -K più -ATPasil'attività degli epatociti settici è stata significativamente ridotta (P<0.01), indicating="" that="" the="" liver="" tissue="" is="" seriously="" damaged.="" after="" administration="" of="" cistanche,="" the="">Na più -K più -ATPasiattività dimitocondri del fegatoera significativamente aumentata (P<0.05), and="" the="" mortality="" of="">ratti setticiera significativamente ridotto. I risultati sperimentali suggeriscono che la diminuzione diNa più attività -K più -ATPasiè significativamente correlato positivamente con lo sviluppo disepsi nei ratti. L'inibizione diNa più attività -K più -ATPasi, edema cellulare e morte che portano a insufficienza multiorgano possono essere il rapido sviluppo della sepsi. Uno dei meccanismi importanti. Negli ultimi anni ci sono state molte segnalazioni in meritoNa più -K più -ATPasie molte malattie, che hanno attirato l'attenzione degli operatori clinici e di base. È di grande importanza studiare la legge dei cambiamenti nell'attività diNa più -K più -ATPasie il suo regolamento [6]. Poco si sa circa il meccanismo specifico diNa più -K più -ATPasinello sviluppo e nel risultato disepsi,e sono necessarie ulteriori ricerche.

La stabilità del calcio e del magnesio intracellulari è la base materiale necessaria per mantenere la risposta al rilascio intracellulare e la trasmissione delle informazioni [7]. Nell'esperimento, la diminuzione diAttività Ca2 più -ATPasinel gruppo di controllo influisce direttamente sull'attività della pompa del calcio e la diminuzione dell'attività della pompa del calcio ne indebolisce il ruolomitocondrialepompa del calcio per espellere Ca2 plus dalla cellula e Ca2 plus sovraccaricomitocondri. Il sovraccarico di calcio nei mitocondri è una causa importante dimitocondrialedisturbo della fosforilazione ossidativa, danno strutturale e necrosi cellulare [8, 9]. Il sovraccarico di Ca2 più riduce il potenziale della membrana mitocondriale e il contenuto di ATP nei tessuti [10] e l'utilizzo dell'energia delle cellule dei tessuti è compromesso. Ca2 plus può attivare la fosfolipasi sui mitocondri, causare danni almembrana mitocondriale, distruggono la normale funzione di sintesi dell'ATP dei mitocondri e ostacolano la produzione di energia mitocondriale [11]. Disturbi dimetabolismo mitocondriale del calciopuò influenzare direttamentefunzione respiratoria mitocondriale, provocandoossigeno mitocondrialedisturbi dell'assorbimento e dell'ossidazione dei protoni nella catena di trasporto degli elettroni [12]. Allo stesso tempo, l'aumento di Ca2 plus può aggravare il danno della perossidazione degli esteri ai mitocondri [13]. Tutto ciò, direttamente o indirettamente, porta al fallimento dell'approvvigionamento energetico cellulare e alla morte di tessuti e organi e accelera lo sviluppo di alterazioni patologiche nella sepsi. Nell'esperimento, abbiamo anche riscontrato che le attività diM g2 più -ATPasi e Ca2 più -M g2 più -ATPasi nei ratti setticierano anche significativamente diminuiti.Mg2 più -ATPasi e Ca2 più -M g2 più -ATPasisono sostanze importanti per mantenere l'equilibrio intracellulare di calcio e magnesio. Widner ha riportato che la diminuzione degli ioni di magnesio intracellulare è il fattore che induce il danno cellulare irreversibile e il rapporto tra Mg 2 più / Ca2 più è un indicatore importante che riflette il danno irreversibile delle cellule [14]. IlMg2 più -ATPasi e Ca2 più -M g2 più -ATPasiattività delCistanche-gruppo somministrato sono stati potenziati, una TPasi è una sulfidrilasi eCistancheha un effetto di perossidazione dell'estere anti-membrana, che può essere dovuto al potenziamento diATPasiattività di Cistanche Basi di Chimica e Basi di Farmacologia [15].

Nella sepsi, mitocondrialedisturbo del metabolismo energetico, diminuitoAttività dell'enzima ATP, l'edema mitocondriale, il sovraccarico di calcio intracellulare e il disturbo dell'equilibrio calcio-magnesio sono le cause dirette della morte cellulare della sepsi e dell'insufficienza multiorgano.Cistancheantagonizza la perossidazione degli esteri di membrana, migliora l'attività dell'ATPasi, mantiene l'omeostasi intracellulare di calcio e magnesio e protegge il normale funzionamento delle funzioni cellulari.Cistancheè un meccanismo importante per ridurre la mortalità diratti settici. Dimostra le buone prospettive diCistanche nel trattamento della sepsi