Studio sulle attività antiossidanti dei glicosidi feniletanoidi da Cistanche Deserticola

Contatto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li et al (Laboratorio centrale della Changchun Normal University, Changchun, Jilin 130032)

Astratto[Obiettivo] La ricerca mirava a studiare sistematicamente le attività antiossidanti dei glicosidi feniletanoidi daCistanchedesertico. [Metodo] Per misurare l'attività antiossidante dell'estratto di C. deserticola sono stati utilizzati due sistemi modello, il test del radicale libero 2,2-difenil-l-picrylidrazyl (DPPH') e il test della fotochemiluminescenza (PCL), acteoside, isoacteoside ed echinacoside. [Risultato] I risultati hanno mostrato che il contenuto fenolico totale (TPC) in echinacoside, acteoside, isoacteoside e l'80% di estratto di C. deserticola con etanolo erano 753,95, 659,94, 356,14 e 14,73 mg di acido gallico/g di campione. L'estratto di C. deserticola ha mostrato una forte attività antiossidante nell'esperimento PCL, seguita da echinacoside, acteoside e isoacteoside. Tuttavia, l'echinacoside ha mostrato una forte attività antiossidante nell'esperimento DPPH, seguito da acteoside, isoacteoside e l'estratto di C. deserticola.

[ Conclusione ]Questa ricerca potrebbe fornire riferimenti per lo studio della farmacologia e dell'attività biologica dei glicosidi feniletanoidi di C. deserticola.

Parole chiave Cistanche deserticola ; Atteosidi; isoacteoside; echinacoside; Attività antiossidante; DPPH; PCL

Cistanche (Cistanche deserticheYC Ma.) è una pianta dellaCistanchegenere (Oro-banehaeeeae) delCistanchegenere (Cistanche). Il gambo carnoso essiccato di Cistanche con foglie squamose. Un gran numero di studi ha scoperto che i principali ingredienti attivi delle piante di Cistanche sono composti di glicosidi dell'alcol fenetilico. . Il composto del glicoside feniletanolico appartiene a un tipo di composto polifenolico, ampiamente distribuito in molti tipi di piante. Studi di test farmacologici hanno dimostrato che questi composti hanno un'ampia gamma di attività farmacologiche e biologiche, come attività anti-epatotossine, antinfiammatorie, analgesiche e antiossidanti. Tra questi, la cosa più sorprendente è che il composto glicoside fenossietanolo ha un'ottima attività antiossidante. L'autore ha condotto principalmente un'analisi sistematica dell'attività antiossidante dei composti glicosidici dell'alcol fenetilico inCistanche, utilizzando due metodi di valutazione in vitro degli antiossidanti, vale a dire la fotoemilumineseenza (PCL) e il 2,2-difenil-1-pieril-idrossile (DPPH') Sono stati utilizzati due diversi sistemi per misurare l'attività antiossidante dell'80 percentuale di estratto di etanolo diCistanche, ergosteroside, isoergoside, eechinacoside.

1 Materiale e metodi

1.1 Campioni e reagenti

Cistanche (Cistanche deserticola)i materiali medicinali sono stati acquistati dalla farmacia Tongrentang di Pechino.Ergosteroside, isoergoside,echinacoside, Folin. Il reagente Ciocalteu, l'acido gallico, il 2,2-difenil-1-picrylidrazyl (DPPH.), ecc. sono stati acquistati da SigmaChemicalCo. Compagnia (St. Louis, Mo). Il solvente utilizzato per l'analisi PCL è stato fornito da Analytik Jena AG (Berlino, Germania). Gli altri reagenti sono tutti reagenti analitici (prodotti dall'impianto chimico di Pechino). L'acqua è ultrapura (18,2 nPa).

1.2 Estrazione del campione

Pesare accuratamente 2.0005 g diCistanchecampione di polvere, utilizzare 50ml di etanolo all'80% per l'estrazione ad ultrasuoni a temperatura ambiente per 0,5 ore, estrarre due volte, filtrare la soluzione del campione, far evaporare a rotazione a secco (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche desertiche.

1.3 Determinazione del contenuto totale di polifenoli del campione

Il contenuto di fenolo totale del campione è determinato utilizzando il metodo F{{0}}lin-Ciocaheu e il risultato è espresso in milligrammi di acido gallico per grammo di estratto. Prelevare una soluzione campione con una certa concentrazione di 0.2rnI (per far scendere l'assorbanza sulla curva standard), aggiungere 1 ml di reagente Folin-Ciocaheu con una concentrazione di 0.5mol/L e quindi aggiungere 0,8 ml di una soluzione di carbonato di sodio con una concentrazione del 7,5 percento per mescolare bene, posizionare a temperatura ambiente per 0,5 ore, quindi misurare l'assorbanza a 765 nm (spettrofotometro ultravioletto: DU800, Beckman Couher, Inc. USA). Utilizzare la soluzione di acido gallico (l'intervallo di concentrazione di massa è 0.02-0.20 me,/m1) per creare la curva standard e tutti i test vengono ripetuti due volte.

1.4 Analisi in vitro dell'attività antiossidante

1.4.1 Determinazione del metodo PCL.

Il test ha utilizzato l'analizzatore automatico di antiossidanti e radicali liberi Photochem@(Berlino, Germania). Il principio è generare radicali liberi con il metodo fotochimico e utilizzare il metodo della chemiluminescenza per rilevare i radicali liberi. Nell'esperimento, è stato utilizzato un fotosensibilizzante con effetto di eccitazione fotochimica per eccitare le molecole di reazione, in modo che sotto l'azione della lampada ultravioletta, la reazione di ossidazione si verificasse 1000 volte più veloce del normale e i radicali liberi sono stati generati rapidamente." Scegliere il metodo PCL-ACW-Kit Misurare l'attività antiossidante dei componenti idrosolubili dei sottocampioni di psillio. Pipettare 1.{21}}ml di tampone di reazione (compresa la concentrazione di 0,1moL/L di carbonato di sodio, valore del pH di 10,5 e concentrazione di 0,1mmol/LNA, un EDTA, 1,5 ml ACW- diluente (acqua ), concentrazione 1mmol/LLumino1) funge da fotosensibilizzante per eccitare le molecole di reazione, in modo che i radicali liberi si generino rapidamente, e contemporaneamente da sostanza fotochemiluminescente. Sia il campione che lo standard sono 10 "l. Misurando diverse concentrazioni (0,5, 1,0, 2,0 e 3,0 nmol/L) di L. L'equazione della curva standard per l'acido ascorbico è Y=24.640Ox più 2.9311, R²=0.9969. È necessario diluire il campione o la soluzione standard nel test in modo che l'intervallo di tempo di ritardo rientri nell'intervallo lineare della curva standard. Photochem genera la curva standard e verifica automaticamente l'attività antiossidante del campione e l'attività antiossidante del campione è equivalente a L． Calcolato dal numero di nanomoli di acido ascorbico.

1.4.2 Determinazione del metodo DPPH.

Il radicale difenilpicrilidrazino [DPPH ·] è un radicale stabile centrato sull'azoto con il massimo assorbimento a una lunghezza d'onda di 515 nm. La soluzione di [DPPH ·] metanolo è viola e la sua concentrazione ha una relazione lineare con l'assorbanza." Dopo aver aggiunto antiossidanti alla soluzione di metanolo [DPPH ·], gli antiossidanti possono combinarsi con i radicali liberi [DPPH ·] o sostituirli per produrre [DPPH ·] ] Il numero di radicali liberi diminuisce e il colore della soluzione diventa più chiaro, il che si manifesta con la continua diminuzione dell'assorbanza alla lunghezza d'onda di 515 nm fino a raggiungere la stabilità." Nel test è stato utilizzato etanolo al posto del metanolo. Pesare con precisione [DPPH ·] e configurare la concentrazione su 0. [DPPH ·] soluzione di etanolo di 0.040 76mg/ml, si ottiene la curva standard di [DPPH ·]: Y: 18.032x-0.0016 , R=0.9993. Il metodo per misurare il tasso residuo di radicali liberi si riferisce alla letteratura [16]. Utilizzando l'etanolo come solvente, preparare diverse concentrazioni di campione e soluzione standard, prelevare rispettivamente 0,1 ml di campione o soluzione standard e aggiungere 3,9 ml di [DPPH·] soluzione standard con una concentrazione di massa di 2,5 mg/L (attualmente utilizzata) ), sostituire la soluzione campione con etanolo come bianco. Agitare la soluzione miscelata, utilizzare una cuvetta per misurarne l'assorbanza in tempi diversi a una lunghezza d'onda di 515 nm e convertirla nella concentrazione di massa di [DPPH·] secondo la curva standard per calcolare il tasso residuo di [DPPH·]. In base al tasso residuo di [DPPH ·] e alla corrispondente quantità di campione aggiunta, è possibile tracciare una curva per rimuovere i radicali liberi [DPPH -] dal campione. Secondo la curva di relazione tra la concentrazione di massa di [DPPH ·] e l'assorbanza, l'assorbanza misurata dopo l'aggiunta dello scavenger di radicali liberi può essere convertita nella concentrazione di massa di [DPPH ·] per calcolare il [DPPH ·] dopo il aggiunta dello scavenger di radicali liberi. La formula di calcolo per il tasso residuo è la seguente: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 percento dove [DPPH·] è la concentrazione di massa di DPPH · ad un certo momento del processo di scavenging dei radicali liberi, [DPPH·]:. È la concentrazione di massa originale di DPPH·. In base al numero di antiossidanti aggiunti e al tasso residuo di [DPPH ·], viene creata la curva di relazione tra i due e l'equazione di regressione può essere ottenuta attraverso l'analisi di regressione lineare. Secondo l'equazione di regressione, è possibile calcolare la dose di antiossidante quando il tasso residuo di [DPPH ·] è del 50 percento. Mezza inibizione. Secondo la curva di scavenging dei radicali liberi [DPPH·] di diverse concentrazioni di campioni o standard, calcolare la quantità EC del campione quando la concentrazione di massa originale di [DPPH·] viene ridotta al 50 percento (stato stazionario). Più piccola è la CE, più forte è la capacità di scavenging dei radicali liberi". Testare 3 volte in parallelo.

cistance

2 Risultati e analisi

2.1 Determinazione del contenuto di polifenoli totali del campione Nella determinazione del contenuto di polifenoli totali, il contenuto di polifenoli totali diechinacosideè il più alto, ovvero 753,95 mg di acido gallico/g. Seguiti da glicosidi ergosteroidei, glicosidi isoergosteroidei ed estratti grezzi diCistanche, che erano rispettivamente 468,3, 356,14 e 14,73 mg di acido gallico/g.

2.2 Determinazione dell'attività antiossidante del campione

2.2.1 Risultati della determinazione del metodo PCL-ACW. Nel test antiossidante PCL-ACW, la capacità antiossidante di 1txgCistancheil materiale medicinale è equivalente alla capacità antiossidante di 15,68 nmol di acido L-ascorbico; 1 gechinacosideè equivalente alla capacità antiossidante di 14,03 nmol di acido ascorbico Attività: 1txgergosterosideè equivalente a 11.44nmolL una capacità antiossidante dell'acido ascorbico; L'isomergosteroside 1Ixg è equivalente all'attività antiossidante dell'acido ascorbico 8,24nmol.

2.2.2 Risultati della misurazione del metodo DPPH. Si può vedere dalla tabella 1 che è azzerato. L'ordine della capacità dei radicali liberi èergosteroside, echinacoside, isoergoside e l'estratto grezzo diCistanche, tra cui ergo side eechinacosidehanno sostanzialmente la stessa capacità antiossidante nel test DPPH. Si può vedere da questo. Poiché per misurare i campioni vengono utilizzati diversi sistemi di test antiossidanti in vitro, il meccanismo degli effetti antiossidanti è diverso e i risultati potrebbero essere incoerenti. Anche questo è stato verificato nel test. Pertanto, è necessario selezionare altri sistemi di analisi degli antiossidanti per ulteriori verifiche.

echinacosie

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