Analisi della composizione della Cistanche tubulosa: separazione e struttura del glicoside feniletanoide e del glicoside neolignan

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I costituenti dell'amo Cistanche Tubulosa (Schrenk). F. II.1) Isolamento e strutture di un nuovo glicoside feniletanoide e di un nuovo glicoside neolignan

Fumio Yoshizawa,* un Takeshi Deyama/ Nobuo Takizawa/ Khan UsmanghaniJ e Mansoor Ahmad6

Central Research Laboratories, Yomeishu Seizo Co., Ltd., a 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Giappone e Dipartimento di Farmacognosia, Facoltà di Farmacia, Università di Karachi? Karachi-32, Pakistan. Ricevuto il 9 novembre 1989

Una nuovaglicoside feniletanoidedenominato tubuloside E (I) e un nuovoglicoside neolignanico, alcol deidrodiconiferilico yO-0-D-glucopiranoside (II), sono stati isolati dalle piante intere diCistanche tubulose (Schrenk) Hook. f. (Orobanchaceae), together with dehydrodiconiferyl alcohol 4-O-^-D-glucopyranoside (III), syringalide A 3'-a-L- rhamnopyranoside (IV), isosyringalide S'-a-L-rhamnopyranoside (V), (+ )-syringaresinol O-^-D-glucopyranoside (VI), ( + )-pinoresinol O-^-D-glucopyranoside (VII), liriodendron (VIII), 6-deoxycatalpol (IX), 8-epiIoganic acid (X), 20-hydroxyecdysone (XI), 8-hydroxygeraniol l-j?-D-glucopyranoside (XII) and syringin (XIII). The structure of tubuloside E (I) was established as 2-(3,4-dihydroxy phenyl)ethyl O-a-L-rhamnopyranosyl-(l ->3)-2-O-acetil-4-Op-cumaroil-^-D-glucopiranoside sulla base di prove chimiche e dati spettrali.

Parole chiave Cistanche tubulose-, Orobancacee;glicoside feniletanoide;iridoide; tubuloside E; glicoside dell'alcool deidrodiconiferilico; siringalide ramnoside;glicoside neolignanico; 13C-NMRMOE

glicoside feniletanoide in cistanche

In un articolo precedente, abbiamo riportato l'isolamento e la determinazione strutturale del nuovoglicosidi feniletanoidi, tubulosides A一D dalle piante intere diCistanche tubulose(Schrenk) Uncino. f. (Orobanchaceae) in Pakistan.

Questo articolo si occupa dell'isolamento e della delucidazione strutturale di un nuovoglicoside feniletanoide, denominato tubuloside E (I), e un nuovoglicoside neolignanico, alcol deidrodiconiferilico ■/-QgD-glucopiranoside (II), nonché l'isolamento di 11 composti noti, alcol deidrodiconiferilico 4-OgD-glucopiranoside (III), siringalide A 3'-al-rhamnopiranoside (IV), isosiringalide 3'-aL-rhamnopiranoside (V), ( più )-siringaresinolo OgD- glucopiranoside (VI), ( più )-pinoresinolo OgD-glucopirano-side (VII), liriodendron (VIII), 6- desossicatalpol (IX) , 8- acido epiloganico (X), 20-idrossiecdisone (XI), 8-idrossigeraniolo 1-gD-glucopiranoside (XII) e siringina (XIII). I composti VI, VIII一X, XII e XIII erano stati precedentemente isolati da Cistanche salsa?'

Il tubuloside E (I) è stato isolato come polvere amorfa, C31H38O15 -3/2H2O, [a】D {5}}.0 grado (MeOH). Lo spettro infrarosso (IR) ha suggerito la presenza di gruppi ossidrile (3430cm-1), estere coniugato (1734 cm-x), un doppio legame (1634 cm-1) e anelli aromatici ( 1608 e 1518 cm-1). Lo spettro di risonanza magnetica nucleare protonica 0H-NMR) di I ha mostrato segnali dovuti a un gruppo metilico di ramnosio 0 1.07 (3H, d, J= 6 Hz)], un gruppo acetossilico {{22} }.98 (3H, s)], protoni benzilici di metilene 0 2.72 (2H, t, J—1 Hz)], un protone glucosioanomerico 0 4.54 (1H, d, J{{ 32}} Hz)], un protone ramnoseanomerico 0 5.00 (1H, br s)], due protoni olefinici [<5 6.34,="" 7.66="" (1h="" each,="" d,="" j="16" hz)]="" and="" aromatic="" protons="" 0="" 6.50—7.46="">

All'acetilazione, il composto I ha fornito l'ottaacetato (la), il cui spettro 】H-NMR mostrava cinque gruppi acetossilici alifatici 0 1.87, 1.95, 2.02 (3H ciascuno, s), 2.10x2 (6H, s)] e tre gruppi aromatici acetossilici [<5 2.27,="" 2.28,="" 2.31="" (3h="" each,="" s)].="" as="" shown="" in="" table="" i,="" the="" carbon="" nuclear="" magnetic="" resonance="" (13c-nmr)="" spectrum="" of="" i="" was="" almost="" identical="" with="" that="" of="" 2'-acetylacteoside="" (ib)「)except="" for="" the="" signals="" due="" to="" the="" ^-coumaric="" acid="">

Sulla metanolisi di I con cloruro di acetile in metanolo, metil p-cumarato e 3, 4- alcol diidrossifenetilico sono stati rilevati su cromatografia su strato sottile (TLC) e cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC).

L'idrolisi acida di I con acido solforico al 10 percento ha fornito glucosio e ramnosio in un rapporto da 1 a 1.

From the above results, the structure of tubuloside E (I) was established as 2-(3,4-dihydroxy phenyl)ethy 1 O-a-L- rhamnopyranosyl-( 1 -^3)-2-(?-acetyl-4-O-/>-cumaroil-^- D-glucopiranoside.

Il composto III è stato isolato come polvere amorfa, [a]D — 56,4 gradi (MeOH). L'idrolisi enzimatica di III ha fornito un aglicone (Illb) come polvere amorfa, [0]270 —11300, [a]D —31,6 gradi (MeOH) e glucosio. I composti Illb e III sono stati identificati come alcol deidrodiconiferilico3,4) e il suo 4-O-#-D-glucopiranoside,3,4)rispettivamente, confrontandoli con campioni autentici (spettri TR,】H- e 13C-NMR) .

Il composto II è stato isolato come polvere amorfa, [a]D 一 7,4 gradi (MeOH), il cui spettro IR suggeriva la presenza di un gruppo ossidrile (3430 cm-1) e di un anello aromatico (1614,1522,1502 cm T). Il〔H-NMR di II ha mostrato segnali dovuti a due gruppi metossilici aromatici 0 3.74, 3.80 (3H ciascuno, s)], un protone benzilico 0 5.45 (1H, d, J{{ 16}}Hz)], due protoni transolefinici 0 6.17 (1H, dt, J= 16, 7 Hz), d 6.58 (1H, d, J= 16 Hz)] e cinque protoni aromatici 0 6.7一7.1 (5H, m)]. All'acetilazione, il composto II ha fornito l'esaacetato (Ila), il cui spettro 'H-NMR ha mostrato cinque segnali acetilici alifatici 0 2.01, 2.03, 2.09, 2.06 (3H, 3H, 3H, 6H)]. L'idrolisi enzimatica di II ha fornito l'aglicone (lib) e il glucosio. Il composto lib è stato isolato come polvere amorfa, [a]D più 34,8 gradi (MeOH), i cui spettri IR, iH- e 13C-NMR erano quasi identici a quelli di Illb, ad eccezione dei valori [a]D e del dicroismo circolare (CD ) spettro.

La configurazione assoluta della lib è stata chiarita confrontando il suo spettro CD con quello di Illb e III, la cui stereochimica è stata confermata nei dati pubblicati.4) Lo spettro CD di lib ha mostrato A& più 14100 (270) e più 15200 (283) come massimi positivi, invece, quello di Illb mostrava A& -11300 (270) e -10990 (283) come massimi negativi. Questi fatti suggeriscono che lib e Illb sono enantiomeri l'uno dell'altro. La stereochimica di lib deve essere quella mostrata nella tabella 1.

Pertanto, il composto II è stato stabilito per essere monoglucoside di alcol niferilico deidrodico. La posizione del glucosio

rispettivamente. Gli spostamenti dei carboni corrispondenti nell'andare a II da lib erano -4,4 e più 7,3 ppm, il che indicava che una frazione glucosile in II era legata al gruppo ossidrile all'atomo Cy'.5)

Dai risultati di cui sopra, il composto II è stato stabilito come alcol deidrodiconiferilico y'-O-^-D-glucopiranoside.

I composti IV e V sono stati isolati come polvere amorfa (IV, C29H36O14 • 5/2H2O; V, C29H36O14- 1/2H2O). Gli spettri IR hanno suggerito la presenza di gruppi ossidrile (3400 cm7), un doppio legame (1634 cm-1) e anelli aromatici (1606 e 1518 cm-1). Sull'acetilazione, i composti IV e V hanno fornito gli ottaacetati ( IVa, Va), i cui spettri 1H-NMR mostravano rispettivamente cinque segnali alifatici acetossilici e tre aromatici acetossilici. I composti IVa e Va sono stati identificati come siringalide A 3'-aL-rhamnopyranoside ottaacetato e isosyringalide 3'-aL-rhamnopyranoside ottaacetato, rispettivamente per confronto di (以 IR e 】 H-NMR) con campioni autentici.6) L''H- ​​e Lo spettro 13C-NMR di IV e V supportava quelle strutture (vedi Sperimentale). I composti VI-XIII sono stati identificati come (più)-siringa- esinolo O-少-D-glucopiranoside (VI),2c) (più)-pinoresinolo O- jS-D-glucopiranoside (VII),7) liriodendrina (VIII),2Z,) 6-desossicatalpol (IX),2c) 8-acido epiloganico (X),2fl) {{50} }idrossiecdisone (XI),8) 8-idrossigeraniolo 1-0-D-glucopiranoside (XII) e siringina (XIII),2d) rispettivamente, per confronto con campioni autentici

Sperimentale

I punti di fusione sono stati determinati su un apparato per micro punti di fusione Mitamura e non sono corretti. Le rotazioni ottiche sono state misurate con un polarimetro digitale JASCO DIP-140. Gli spettri IR sono stati registrati con uno spettrofotometro IR Hitachi 279-30 e gli spettri ultravioletti (UV) con uno spettrofotometro Hitachi 200-20. Gli spettri CD sono stati registrati con uno spettrofotometro JASCO J-20A CD e gli spettri di massa (MS) con un JEOL JMS-100. "Gli spettri H-NMR e 13C-NMR sono stati registrati con una macchina JEOL FX-90Q (rispettivamente 89,55 e 22,5 MHz).

I cambiamenti chimici sono dati sulla scala d (ppm) con tetrametilsilano (TMS) come standard interno. Le abbreviazioni utilizzate per i dati di risonanza magnetica nucleare (NMR) sono le seguenti; s, canottiera; d, doppietto; t, terzina; q, quartetto; br, ampio. La gascromatografia (GC) è stata eseguita su un apparato Shimadzu GC-4CM con un rivelatore a ionizzazione di fiamma. L'HPLC è stato eseguito su una macchina Hitachi 655A-11. Il gel di silice (Wako gel C-300) è stato utilizzato per la cromatografia su colonna. Per le TLC sono state utilizzate lastre prerivestite con gel di silice 60 F254 (Merck) e il rilevamento è stato effettuato spruzzando il 10 percento di H2SO4 seguito da riscaldamento.

Isolamento

Piante intere dicistanche tubulose(7 kg), raccolti nel dicembre 1986, a Karachi, in Pakistan, sono stati estratti con MeOH ({2}} x 2) a riflusso. L'estratto è stato concentrato a pressione ridotta e il residuo sospeso in acqua. Questa sospensione è stata estratta con EtOAc saturato con acqua. Lo strato di acqua è stato sottoposto a una colonna Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) e lavato con H2O, quindi eluito con MeOH. L'eluato MeOH (140 g) è stato cromatografato su una colonna di poliammide C{7}} (Wako Pure Chemical) usando H2O e poi MeOH per dare due frazioni (frazione 1, H2O eluato; frazione 2, MeOH eluato). La frazione 1 è stata concentrata per dare un residuo. Il residuo è stato cromatografato su una colonna di gel di silice usando ripetutamente CHCl3-MeOH-H2O. Dopo ripetute cromatografie di HPLC (colonna, Develosil ODS-10, 20 x 250 mm; solvente; H2O-CH3CN o H2O-MeOH), sono stati isolati 10 composti [II (45 mg), III (40 mg), VI (35 mg ), VII (43 mg), VIII (12 mg), IX (8 mg), X (10 mg), XI (20 mg), XII (10 mg) e XIII (3,6 mg)]. La frazione 2 è stata trattata allo stesso modo della frazione 1 e ha dato i composti I (150 mg), IV (10 mg) e V (lOmg).

Tubuloside E (I)

Polvere amorfa, [a]p3 —134.0 grado (c= 1.5, MeOH). Anale. Calc per C31H38O15 -3/2H2O: C, 54,98; H, 6.10. Trovato: C, 55.01; H, 5.98. IR cm-1: 3430,1732, 1634, 1608,1518. ]H・NMR (MeOH-4) 3: 1,07 (3H, d, J=6Hz, CH3 di ramnosio), 1,98 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J{ {37}}Hz, Ar-CH2~), 4,54 (1H, d, J=8Hz, Hl di glucosio), 5.00 (1H, brs, Hl di ramnosio), 6,34 ( 1H, d, J= 16Hz, Ar-CH=CH-), 6,5一6,8 (3H, aromatico H), 6,80 (2H, d, J-9Hz, H{ {65}}; H-5'), 7,46 (2H, re, J=9Hz, H-2; H-6Z), 7,66 (1H, re, J= 16 Hz, Ar—CH=CH—). 13C-NMR: Tabella L

Alcool deidrodiconiferilico y^-O-^-D-GIucopiranoside (II)

Polvere amorfa, [a]^5 —7,4 gradi (c= 1.6, MeOH). IR cm"1: 3430, 1614, 1522, 1502. UV h nm: 227 (sh), 280. H・NMR (DMSO-rf6) J: 3,74, 3,80 (3H ciascuno, s, OCH3), 5,45 (1H, d,丿=6Hz, Ha), 6,17 (1H, dt,丿=16, 7Hz, H-#), 6,58 (1H, re〃= 16Hz; H-az) , 6,7-7,1 (5H, m, aromatico H). 13C-NMR: Tabella I.

Alcool deidrodiconiferilico 4-Oj8-D-glucopiranoside (III)

Polvere amorfa, [a]^5 -56.4.(c= 1.1, MeOH). IR cm-1: 3400, 1604, 1566, 1502. UV 11 nm; 222, 277. XH-NMR (DMSO-(76) 6: 3,76, 3,82 (3H ciascuno, s, OCH3), 5,52 (1H, d, J-7 Hz, Ha), 6,18 (1H, dt, J=16, 7 Hz, H-^), 6,49 (1H, re,<7=16 hz,="" h-"),="" 6.7—7.2="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="">

Siringalide A 3'-(xL-ramnopiranoside (IV)

Polvere amorfa, anale. Calc per C29H36O14 • 5/2H2O: C, 56.11; H, 5.94. Trovato: C, 56,4{{107}}; H, 6.04. IR cm— percentuale 3400, 1606, 1518. 】H・NMR (MeOH-J4) d: 1,15 (3H, d, J-6 Hz, CH3 di ramnosio), 2,90 (2H, t, J{{27 }} Hz, Ar-CH2-), 4,46 (1H, d, J=8Hz, Hl di glucosio), 5,27 (1H, brs, Hl di ramnosio), 6,35 (1H, d, J-16Hz, Ar—CH=CH—), 6,6—7,3 (3H, aromatico H), 7,68 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH {{54 }} CH-). 13C-NMR (CD3OD) 8: 130,6 (Cl), 116,1 (C-2), 130,8 (C-3, 156,6 (C-4), 116,1 (C-6 ), 72,1 (Ca, rham-2, 3), 36,2 (C-8), 127,6 (Cr), 114,6 (C2), 149,6 (C・3'),146,6 (C{{94 }}'),116.4 (C-5'), 123.1 (C-6'),168.2 (C・a'),115.2 (C书),147.0 104.0 (glu-1), 76,0

(glu-2), 81,5(glu-3), 70,3 (glu-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (rham-1), 73,7 (rham-4), 70,5 (rham-5), 18,3 (rham-6).

Isosyringalide S^aL-Rhamnopyranoside (V)

Polvere amorfa, anale. Calc per C29H36O14-1/2H2O: C, 56.31; H, 5.96. Fondare; C, 56.4{{70}}; H, 6.04. IR 唸cm-1: 3420, 1608, 1518. XH-NMR (MeOH-J4) d: 1,09 (3H, d,丿=6Hz, CH3 di ramnosio), 2,80 (2H, t, J-6 Hz, Ar-CH2-), 4,40 (1H, d, J{34}}Hz, Hl di glucosio), 5,23 (1H, br s, Hl di ramnosio), 6,37 (1H, d, J-18Hz, AsCH=C旦'一),6,6—7,2 (3H, aromatico H), 7,71 (1H, d, 丿=18Hz, Ar -CH=CH-y 13C-NMR (CD3OD) S: 131,4 (Cl), 116,3 (C-2), 144,5 (C-3X 146,0 (C-4 ), 117,0 (C-5), 121,2 (C-6), 72,2 (Ca), 36,5 (C/), 127,1 (Cr), 116,8 (C-2}\ 69, 131,2 (C-3\ 5'),161,2 (C-4'),168,2 (CH), 114,7 (C-^), 147,5 (Cy), 104,1 (glu-1), 76,1 (glu-2), 81,5 (glu-3),

70,2 (glu-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (rham-1), 72,1 (rham-2, 3 ), 73,7 (rham-4), 70,6 (rham-5), 18,4 (rham-6).

( più )-Siringaresinolo Oj?-D-Glucopiranoside (VI)

Polvere amorfa, [a]g5 —14.4.(c=0.1, MeOH). Anale. Calc per C28H36O13: C, 57,93; H, 6.25. Trovato: C, 58.01; H, 6.26. IRv^cm-1: 3430, 1600, 1518. 】H・NMR (DMSO"6).: 3,78 (12H, s?OCH3 x 4), 6,60,6,66 (2H ciascuno, s, aromatico H).

( più )-Pinoresinolo O-^-D-Glucopiranoside (VII)

Polvere amorfa, [a]^5 più 38,9 gradi (c=0.6, MeOH). Anale. Calc per C26H32O11 T/2H2O: C, 58,97; H, 6.28. Trovato: 58,94; H, 6.29. IR cm-1: 3425, 1606, 1516. 】H-NMR (C5D5N) W 3,77, 3,80 (3H ciascuno, s, OCH3), 6,9—7,7 (6H, m, aromatico H).

Liriodendro (VIII)

Colorless needles (MeOH), mp 255一257 degree , [a]p5 -9.2 degree (c=L3, pyridine). IR cm-1: 3400, 1598, 1510. XH-NMR (DMSO/6)<5: 3.78="" (12h,="" s,="" och3x4),="" 6.67="" (4h,="" s,="" aromatic="">

6-Deossicatalpolo (IX)

Aghi incolori (MeOH), mp 204—206 gradi, [a]p5 -50.1 grado (c=0.7, MeOH). Anale, Calcd per C15H22O9: C, 52,02; H, 6.40. Trovato: C, 52.12; H, 6.41. IR 唸cm-1: 3400, 1658. 】H・NMR (D2O) 3:

l. 3—1,9 (1H, m, H-6), 2,1—2,7 (3H, m, H-5, H-6, H-9), 3,65 (1H, s-like, H-7), 3,90, 4,35 (2H, sistema AB, J=13Hz, H-10), 4,92 (1H, re, J=7 Hz, aromerico H), 5,10 (1H, dd, J=6, 4Hz, H-4), 5,12 (1H, d, J-10Hz, Hl), 6,38 (1H, dd, 1 Hz, H-3).

{{0}}Aghi incolori dell'acido epiloganico (X) (MeOH), mp 147一149 gradi, [a]p5 — 135.0 gradi (c= 1.0, piridina ). Anale. Calcd per C16H24O10 H2O: C, 48,73; H, 6.65. Trovato: C, 48,60; H, 6.70. IR v;cm-1: 3400, 1680, 1640, 1430. 】H・NMR (C5D5N)<5: 1.18="" (3h,="" d,="" j="7Hz," ch3),="" 2.2—2.5="">

m, H-6), 2,60 (1H, m, H-8), 3,08 (1H, dt, J=3, 8,5 Hz, H-9), 3,58 ( 1H, m, H-5), 5,40 (1H, d, J=7.5Hz, H anomerico), 5,91 (1H, d〃=3Hz, Hl), 7,92 (1H , s, H-3).

20-Idrossiecdisone (XI)

Solido cristallino, mp 241一242 gradi , [a]p5 più 70.0 gradi (c{5}} LI, MeOH). Anale. Calc per C27H44O7: C, 67,47; H, 9.23. Trovato: C, 67.28; H, 9.18. IR cm-1: 3440, 1646. XH-NMR (C5D5N) 1,06 (3H, s, H-19), 1,20 (3H, s, H-18), 1,36 (6H, s, H-26, H-27)? 1,58 (3H, s, H-21), 6,24 (lH,d, J=2Hz, H-7). 13C-NMR (C5D5N): 38,0 (Cl),

68,2 (C-2, C-3), 32,5 (C・4), 51,5 (C-5), 203,7 (C-6), 121,8 (C-7), 166,3 (C-8), 34,6 (C-9), 38,8 (C-10), 21,3 (C-ll), 31,9 (C {{30}}), 48,2 (C-13), 84,4 (C-14), 32,1 (C-15), 21,6 (C-16 ), 50,2 (C-17), 18,0 (C-18), 24,6 (C-19), 77,0 (C-20), 21,8 (C-21 ), 77,7 (C-22), 27,6 (C-23), 42,7 (C-24), 69,8 (C-25), 30,1 (C-26 , 27).

8-Idrossigeraniolo 1-^-D-GIucopiranoside (XII)

Aghi incolori (MeOH), mp 58—60 gradi, [a]^5 —40,1.(c=L2, MeOH). Anale. Calc per C16H28O71/2H2O: C, 56,29; H, 8.56. Trovato: C, 56.40; H, 8.50. IR cm"1: 3350, 1670, 1446. XH-NMR (C5D5N)<5: 1.72,="" 1.59="" (3h="" each,="" s,="" ch3),="" 2.04="" (4h,="" brm,="" h-4,="" h-5),="" 4.80="" (1h,="" d,="" j="7.5Hz," anomeric="" h),="" 5.56="" (2h,="" brt,="" j="7Hz,">

Siringina (XIII)

Aghi incolori (MeOH), mp 188一189 gradi, [a]^5 — 15,3 gradi (c=0.4, MeOH). Anale. Calc per C17H24O9: C, 55.13; H, 6.53. Trovato: C, 54,83; H, 6.50. IR cm-1: 3400, 1592, 1514. 'H-NMR (DMSO/6)W 3,78 (6H, s, OCH3 x 2), 6,3—6,5 (2H, m, —CH=CH—), 6,72 (2H, s, aromatico H).

L'acetilazione del composto I (50 mg) è stata disciolta in piridina (1 ml) e anidride acetica (1 ml) e lasciata a temperatura ambiente per una notte. La miscela di reazione è stata versata in acqua ghiacciata e quindi estratta con EtOAc. L'estratto di EtOAc è stato concentrato sotto vuoto e il residuo è stato cromatografato su una colonna di gel di silice usando benzene-acetone (5:1) per dare l'ottaacetato (la) (35 mg). IR cm"1: 1760, 1638, 1604, 1508. iH-NMR(CDC13)(5: 1,02 (3H, d, J=6Hz, CH3 di ramnosio), 1,87, 1,95, 2,02 (3H ciascuno, s, OAc), 2,10 (6H, s, OAc x 2), 2,27, 2,28, 2,31 (3H ciascuno, s, Ar-OAc), 2,90 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH{ {43}}), 6,38 (1H, d, J=16Hz, AR~CH=CH-), 6,80—7,15 (3H, m, aromatico H), 7,24 (2H, d, J-9 Hz, H-3\ H・5'), 7,55 (2H, re,丿=9Hz, H-2, H-6), 7,72 (1H, re, J=16Hz, Ar-CH=CH-).

Acetilazione di II e III

I composti II e III (20 mg ciascuno) sono stati acetilati nello stesso modo descritto per il composto I e hanno dato gli esaacetati [Ila (12 mg), Illa (15 mg)]. Ila: IR 唸顋 cm-1: 1754, 1608, 1506. 】H・NMR (CDC13) 5: 2.01, 2.03, 2.09 (3H ciascuno, s, OAc), 2.06 (6H, s, OAc x 2 ), 2,30 (3H, s, OAc), 3,84 (3,95 (3H ciascuno, s, OCH3), 5,54 (1H, d,丿=6Hz, Ha), 6,05 (1H5 dt, J{{38} }, 7Hz, H-^), 6,53 (1H, d, «/= 16Hz, H-a'), 6,8一7,1 (5H, m, aromatico H). Illa: IR v^cm 1: 1760, 1604, 1516. 】H-NMR (CDC13)<5: 2.05="" (9h,="" s,="" oac="" x="" 3),="" 2.08="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.11="" (3h,="" s,="" oac),="" 3.80,="" 3.92="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 5.51="" (1h,="" d,="" j="7Hz," h-a),="" 6.14="" (1h,="" dt,="" j="16," 7hz,="" h-#),="" 6.62="" (1h,="" d,丿="16Hz,">

(5H, m, H aromatico).

Acetilazione di IV e V

I composti IV e V sono stati acetilati nello stesso modo descritto per il composto I e hanno dato gli ottaacetati [IVa, Va]. IVa: IR 唸児 cmT: 1754, 1636, 1514. 】H・NMR (CDC,) W 1,03 (3H? d, J=6Hz, CH3 di ramnosio), 1,87, 1,94, 1,99 (3H ciascuno, s, OAc), 2,09 (6H, s, OAcx2), 2,28 (6H, s, OAcx2), 2,30 (3H, s, OAc), 2.86 (2H, t, J=6 .6Hz, Ar■-CH?—), 3,67 (2H, t, J=7.2Hz Ar-CH2~CH2-), 6,35 (1H, d, J=16Hz , AsCH=CU—), 6,87—7,35 (3H, m, Ar—7,09 (4H, q, J=8.6Hz, A2/B2/tipo), 7,65 (1H, re, J =16Hz, Ar CH=CH ). Va: IR cm-1: 1750, 1636, 1608, 1514. ^-NMR (CDC13) 1,03 (3H, d,<7= 6="" hz,="" ch3="" for="" rhamnose),="" 1.87,="" 1.94,="" 2.02="" (3h="" each,="" s,="" oac),="" 2.09="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.28="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.31="" (3h,="" s,="" oac),="" 2.86="" (2h,="" t,="" j="6.6" hz,="" ar-ch2-),="" 3.73="" (2h,="" t,=""><7=6.6 hz,="" ar="" ch2-ch2-),="" 6.34="" (lh,d,="" j="16" hz,="" ar—ch="" —="" ch—),="" 6.78—7.20="" (3h,="" m,="" ar—h),="" 7.31="" (4h,="" q,=""><7=8.5>

A2zB/tipo), 7,71 (1H, d, «/=16Hz, Ar-CH=CH ).

Metanolisi di I

Il composto I (circa 1 mg) è stato portato a riflusso con CH3COC1 metanolico al 5% (2 ml) per 30 min, e quindi il reagente è stato evaporato sotto vuoto. La presenza di metil p-cumarato e alcol 3,4-diidrossifenetilico nel residuo è stata rilevata mediante TLC [CHCl3-MeOH (10:1)] e HPLC [colonna, Develosil ODS -7 (4,6 x 250 mm); solvente, 55 percento MeOH; rivelatore (UV), 220 nm; portata, 1,0 ml/min]. metile p-cumarato; Rf 0,82, ;R (min) 8,8, 3,{26}}alcool diidrossifenetilico;母0,31, tR (min) 3,2.

Idrolisi acida di IA

la soluzione del composto I (2 mg) in H2SO4 all'10 percento (1 ml) è stata riscaldata in un bagno d'acqua bollente per 30 minuti. La soluzione è stata fatta passare attraverso una colonna Amberlite IR-45 e concentrata per dare un residuo, che è stato ridotto con sodio boroidruro (ca. 3 mg) per 1 ora. La miscela di reazione è stata fatta passare attraverso una colonna Amberlite IR-120 e concentrata a secco. L'acido borico è stato rimosso per distillazione con MeOH e il residuo è stato acetilato con anidride acetica (1 goccia) e piridina (1 goccia) a 100 gradi per 1 ora. I reagenti sono stati evaporati sotto vuoto. Glucitolo acetato e ramnitolo acetato sono stati rilevati in un rapporto da 1 a 1 dal composto I mediante GC. Condizione: colonna, 1,5% OV-17, 3 mm x 1,5 m; temp. colonna, 180 gradi; gas di trasporto, N2 (30 ml/min). tR (min): 2,0 (ramnitolo acetato), 5,5 (glucitolo acetato).

Idrolisi enzimatica del II e III Composto II

(13 mg) o III (40 mg) sono stati idrolizzati con cellulasi (40 mg) in acqua (1 ml) per 2 ore a 37 gradi. La miscela di reazione è stata estratta con EtOAc. L'estratto di EtOAc è stato concentrato sotto vuoto per dare il residuo, che è stato cromatografato su HPLC [colonna, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm); solvente. II: H2O-CH3CN (77,5:22,5); III: H2O-CH3CN (80:20); rivelatore (UV), 205 nm; portata, 6,0 ml/min] per dare lib (3,3 mg), Illb (5,7 mg). lib: [a]^5 più 34,8 gradi (c=0.3, MeOH). CD (c=3.3mg/10ml, MeOH) [0]25 (nm): 1740 (330), 15200 (283), 14100 (270), 0 (247), - 16700 (232 ). IR 唸E; cm"1: 3380, 1606, 1520, 1500. UV nm: 276. MS m/z ( percentuale ): 358 (M più , 53), 340 (M più -H2O, 100), 338 (58), 325 ( 47), 310 (23), 162 (41), 151 (36), 137 (59) XH-NMR (acetone-J6)<5: 3.55="" (1h,="" brt,=""><7=6hz, h-g),="" 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 4.19="" (2h,="" brd,="" j-5hz,="" h-yz),="" 5.56="" (1h,="" d,="" j="6," 5="" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,=""><7=16, 5="" hz,="" h-#),="" 6.56="" (1h,="" brd,="" j="16Hz," hh),="" 6.7—7.1="" (5h,="" m,="" aromatich).="" 13c-nmr:="" tablel.iiib:="" [a]-31.6°="" (c="0.6," meoh).="" cd="" (c="2.28mg/lOml," meoh)="" [0]25="" (nm):="" 2200="" (330),="" 0="" (310),="" -10990="" (283),="" -11300="" (270),="" 0="" (242),="" 5650="" (232).="" 0-nmr="" (acetone-j6)=""><5: 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3="" x="" 2),="" 4.19="" (2h;="" brd,="" j="5Hz," h"'),5.56="" (1h,="" d,丿="6.5" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,丿="16," 5="" hz,="" h・#),="" 6.52="" (1h,="" d,="" j="16" hz,="" h-az),="" 6.7一7.1="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="" i.="" the="" ir="" and="" uv="" spectra="" were="" similar="" with="" that="" of="">

RiconoscimentoSiamo grati al Prof. A. Ueno e al Dr. T. Miyase, Università di Shizuoka, per le misurazioni degli spettri NMR e CD, e per i loro preziosi suggerimenti, e al Dr. M. Kikuchi, Tohoku College of Pharmacy, per aver fornito campioni autentici.

Riferimenti e note

1) H. Kobayashi, H. Oguchi, N. Takizawa, T. Miyase, A. Ueno, K. Usmanghani e M. Ahmad, Chem. Farma. Boll., 35,3309 (1987).

2) a) H. Kobayashi e J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983); b) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase e S. Fukushima, Chem. Pharm, Boll., 33, 1452 (1985); c) Idem, ibid., 33, 3645 (1985); d) H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase e S. Fukushima, Yakugaku Zasshi. 106, 721 (1986).

3) HD Ludemann e H. Nimz, Die Makromolekulare Chemie., 175, 2393 (1974).

4) a) H. Achenbach, J. Grob, XA Dominguez, G. Cano, JV Star, LC Brussolo, G. Munoz, F. Salgado, e L. Lopez, Fitochimica. 26, 1159 (1987); b) AN Binns, RN Chen, HN Wood e DG Lynn, Proc. Natl. Accad. Sci. Gli USA, 84, 980 (1987); c) DG Lynn, RH Chen, KS Manning e HN Wood, ibid., 84, 615 (1987).

5) T. Deyama, T. Ikawa, S. Kitagawa e S. Nishibe, Chem. Farma. Boll., 35, 1803 (1987).

6) M. Kikuchi, Y. Yamauchi e F. Tanabe, Yakugaku Zasshi, 107, 350 (1987).

7) M. Chiba, S. Hisada, S. Nishibe e H. Thieme, Fitochimica, 19, 335 (1980).

8) a) H. Hikino, Y. Hikino, Fortschritted. Chimica. Org. Naturst., 28, 256 (1970); b) RW Miller, J. Clardy, J. Kozlowski, KL Mikolajczak, RD Plattner, RG Powell, CR Smith, D. Weisleder e Q.-T. Zheng, Planta Medica, 1985, 40.