I topi knockout della diamina ossidasi non sono ipersensibili all'istamina somministrata per via orale o sottocutanea

Astratto

1. Obiettivo

Valutare il contributo della diammina ossidasi endogena (DAO) nell'inattivazione dell'istamina esogena, trovare un ceppo di topo con una maggiore sensibilità all'istamina e testare l'efficacia della rhDAO in un modello di sfida dell'istamina.

2. Metodi

I topi knockout della diamina ossidasi (KO) sono stati stimolati con istamina somministrata per via orale e sottocutanea in combinazione con il bloccante adrenergico propranololo, con i due inibitori dell'istamina-N-metiltransferasi (HNMT) methoprene e tacrina, con acido folico per simulare il danno renale acuto e trattati con DAO umano ricombinante. La temperatura corporea interna è stata misurata utilizzando un microchip impiantato per via sottocutanea e i livelli plasmatici di istamina sono stati quantificati utilizzando un test di fluorescenza omogeneo risolto nel tempo.

3. Risultati

La temperatura corporea interna e i livelli di istamina plasmatica non erano significativamente differenti tra i topi wild-type (WT) e DAO KO dopo la sfida orale e sottocutanea dell'istamina con e senza danno renale acuto o somministrazione di inibitori HNMT. Il trattamento con DAO umano ricombinante ha ridotto l'area media sotto la curva (AUC) per la perdita di temperatura corporea interna del 63% (p=0.002) e il punteggio clinico dell'88% (p<0.001). The AUC of the histamine concentration was reduced by 81%.

4. Conclusioni

L'inattivazione dell'istamina esogena non è guidata dalla degradazione enzimatica e dalla filtrazione renale. Il trattamento con DAO umano ricombinante ha fortemente ridotto la perdita di temperatura corporea interna indotta dall'istamina e le concentrazioni di istamina e ha impedito lo sviluppo di gravi sintomi clinici.

Parole chiave

Amina ossidasi (contenente rame) · Istamina N-metiltransferasi · Danno renale acuto · Metabolismo · Tacrina · Metoprina · Temperatura corporea

Clicca qui per acquistare il supplemento Cistanche

introduzione

Più del 95 percento di tutta l'istamina nell'uomo è immagazzinata nei mastociti e nei basofili. È probabile che lo stesso valga per molti mammiferi. Negli esseri umani, le densità dei mastociti sono più elevate nel tratto gastrointestinale, nella pelle e nei polmoni [1] e, di conseguenza, questi organi mostrano sintomi indotti dall'istamina nelle malattie con un chiaro coinvolgimento dell'attivazione dei mastociti. Le concentrazioni interstiziali locali di istamina dopo la degranulazione acuta possono raggiungere 10-1000 µMs [2, 3, vedi Risorse online]. Negli esseri umani, analogamente a cani e maiali, le normali concentrazioni plasmatiche di istamina sono inferiori a 1 ng/ml (9 nM) e i sintomi iniziano a svilupparsi a pochi nanogrammi per millilitro [4-7]. L'ipotensione significativa con aumento della frequenza cardiaca può essere misurata a partire da 5 ng/ml e quando i livelli superano i 10 ng/ml lo sviluppo di broncospasmo, aritmie cardiache, grave ipotensione e spasmo coronarico può portare a disfunzioni multisistemiche pericolose per la vita [8, 9]. L'istamina non è solo coinvolta nella vasodilatazione, nell'aumento della permeabilità vascolare, nell'ipossia e nello sviluppo di edema vascolare, ma dimostra anche un coinvolgimento pro-infiammatorio che influenza il sistema immunitario adattativo attraverso il reclutamento, la maturazione e l'attivazione delle cellule effettrici immunitarie. Inoltre, svolge un ruolo nel sistema immunitario innato interagendo con cellule dendritiche, cellule natural killer e granulociti [10, 11].

Le concentrazioni basali di istamina nei topi e nei ratti sono comprese tra 20 e 100 ng/ml se misurate utilizzando metodi affidabili e sono quindi molte volte superiori a quelle riscontrate nell'uomo [6, 7]. Non è chiaro se questi alti livelli di istamina svolgano un ruolo fisiologico. I roditori sono notoriamente resistenti all'istamina con dosi letali del 50% (LD50) in diversi ceppi di topi di 3000-4000 e 400-500 mg/kg dopo somministrazione orale ed endovenosa, rispettivamente [12, 13]. La concentrazione plasmatica massima di istamina dopo una somministrazione in bolo di 400 mg/kg in un topo di 20 g sarebbe di circa 8 mg/ml assumendo un volume plasmatico di 1 ml. Quando l'anafilassi è stata indotta nell'uomo attraverso una sfida controllata da puntura di vespa, concentrazioni di istamina di 140 ng/ml sono state associate a grave ipotensione pericolosa per la vita [14]. Come viene metabolizzata e inattivata l'istamina?

L'istamina mostra un legame medio alle proteine ​​plasmatiche del 13% ed è liberamente filtrata nei reni [15]. La velocità di filtrazione glomerulare (GFR) può teoricamente contribuire per circa il 15-20 percento all'emivita di 3-4 minuti riscontrata nei volontari sani [5, vedi Risorse online]. A una velocità di filtrazione glomerulare normale di 100 ml/min e un volume plasmatico di 3000 ml l'emivita dell'istamina sarebbe di 20 min. Nei topi, un normale GFR di 10 µl/min/g comporterebbe un'emivita dell'istamina di 3 min [16, vedi Risorse online]. Tuttavia, l'istamina mostra un'elevata velocità di estrazione nel rene, superando le velocità basate sul GFR, e questa estrazione è attribuita all'assorbimento e al riassorbimento nelle cellule tubulari prossimali tramite il trasportatore di cationi organici 2 (OCT2), seguito dall'inattivazione enzimatica [17, vedi sotto]. Negli esseri umani, meno dell'1% dell'istamina radioattiva iniettata è stata trovata nelle urine entro le prime 6 ore [18]. Il basso tasso di escrezione di istamina nell'uomo, che si osserva anche nei cani e nei gatti, è stato confermato da altri [19]. Nei tessuti di topi e ratti, oltre il 50% della radioattività iniettata si trova nei reni e meno del 2% sotto forma di istamina 30 minuti dopo la somministrazione endovenosa [20]. I reni erano anche l'organo con la più alta radioattività dopo la somministrazione di alte dosi di istamina nei ratti [21]. Il trasportatore OCT2 è altamente espresso nei reni umani e nei roditori e potrebbe essere responsabile sia dell'estrazione dell'istamina dal compartimento plasmatico sia del riassorbimento dell'istamina nel filtrato primario dell'urina nelle cellule tubulari prossimali [22, vedi sotto].

Il trasporto rapido di istamina extracellulare dal fluido interstiziale dopo il rilascio dai mastociti o dal plasma ad altri compartimenti lontani dalle cellule endoteliali sarebbe un'altra possibilità per inattivare l'istamina. Ciò potrebbe inibire l'induzione di grave ipotensione e perdita vascolare mediata dalla segnalazione endoteliale dell'ossido nitrico sintasi (NOS) e dal legame ai recettori dell'istamina [23-25]. Tuttavia, non sono disponibili dati sugli animali in vivo che studino i tassi di trasporto dell'istamina dalla circolazione sistemica nelle cellule endoteliali o parenchimali. In diversi studi in vitro, l'istamina viene trasportata in modo bidirezionale utilizzando OCT2 e OCT3 a bassa affinità e ad alta capacità [22, 26, 27]. L'istamina è un eccellente substrato per il trasportatore OCT2 e OCT3 di ratto, mostrando efficienze di trasporto più elevate rispetto alle proteine ​​OCT umane equivalenti [26].

Herba Cistanche

Quando nei topi vengono utilizzate basse concentrazioni di istamina radioattiva, la metilazione tramite istamina-N-metiltransferasi (HNMT) sembra essere la principale via di inattivazione. I topi stimolanti con dosi più elevate di istamina, tuttavia, spostano il metabolismo verso l'acido imidazolo acetico (IMAA) e i coniugati ribosidici, con solo una piccola quantità di derivati ​​metilati rilevati [28-30]. Le concentrazioni sieriche di istamina sierica quintuplicate al basale nei topi knock-out HNMT supportano questi dati [31]. L'acido imidazoleacetico viene generato tramite l'ossidazione dell'istamina da parte della diammina ossidasi (DAO) che rilascia imidazolo acetaldeide, che viene convertita in derivati ​​IMAA e ribosidici, principalmente nel fegato. L'ossidazione dell'istamina tramite DAO sembra svolgere un ruolo maggiore nel catabolismo dell'istamina dopo stimolazione orale nei topi, il che non sorprende considerando che nei topi l'espressione di DAO è elevata solo nel tratto gastrointestinale [30]. Quando negli esseri umani viene eseguita una sfida orale con istamina, la deaminazione ossidativa tramite DAO è la via catabolica dominante con IMAA come principale metabolita urinario [18].

La diammina ossidasi è un'ammina ossidasi contenente rame e uno dei due enzimi in grado di inattivare l'istamina [32]. In tessuti selezionati, principalmente l'intestino tenue e le cellule tubulari prossimali del rene, la DAO è localizzata in strutture granulari intracellulari mal definite ed è legata extracellularmente ai proteoglicani dell'eparan solfato, mentre l'HNMT è presente solo nel citoplasma [33, 34]. L'espressione di HNMT è diffusa in tutto il corpo, con livelli più elevati nel sistema nervoso centrale, nella vescica, nel cuore, nei reni, nel fegato, nei polmoni e nel tessuto adiposo.

Dopo l'inibizione della DAO con l'uso di aminoguanidina, le pecore hanno mostrato ampi sintomi clinici di tossicità dell'istamina dopo la somministrazione orale di istamina rispetto ai controlli senza pretrattamento con aminoguanidina [35]. Un esperimento simile sui suini ha provocato una grave morbilità e mortalità negli animali pretrattati con aminoguanidina e successivamente stimolati con istamina orale [36]. Le concentrazioni plasmatiche mediane di istamina sono aumentate di 20-volte nei suini con inibizione DAO. Il trattamento dei ratti con aminoguanidina seguito da istamina orale ha aumentato l'IMAA urinario e ridotto la concentrazione di istamina di circa cinque volte [37]. Questi dati hanno indicato che la DAO svolge un ruolo cruciale nella degradazione dell'istamina esogena somministrata per via orale.

Nei topi, il trattamento con aminoguanidina ha fortemente aumentato le concentrazioni di istamina nell'intestino dopo una somministrazione endovenosa di istamina [30]. Tuttavia, l'aminoguanidina non è un inibitore DAO specifico, ma blocca anche tutti e tre gli enzimi NOS e sembra bloccare il trasporto di istamina nel sangue nei tessuti [38, 39]. La somministrazione di burimamide, un antagonista del recettore 2 dell'istamina, ha mostrato effetti dannosi con aumento della mortalità in un modello di shock circolatorio nei ratti. Tuttavia, allo stesso tempo, è stato pubblicato che la burimamide è un potente inibitore DAO [40, 41]. Nei cani, la burimamide ha causato un aumento di 17-volte della concentrazione plasmatica media di istamina e una forte riduzione della pressione arteriosa media [42]. Si credeva che l'effetto fosse dovuto alla possibile attivazione dei mastociti.

Allo stesso modo, il ruolo dell'HNMT è stato studiato utilizzando la metilistamina come inibitore dell'HNMT, ma la metilistamina è anche un eccellente substrato per la DAO [43]. L'amodiachina e la chinacrina sono potenti inibitori dell'HNMT [44-46] ma inibiscono anche la DAO con una concentrazione inibitoria del 50 percento (IC50) di circa 500 nM [47, dati non pubblicati]. Pertanto, i dati derivati ​​utilizzando inibitori, che sono spesso utilizzati ad alte concentrazioni, devono essere interpretati con cautela, poiché sono probabili effetti fuori bersaglio noti e sconosciuti e possono distorcere in modo significativo la rilevanza fisiologica degli studi in vivo.

Gli studi metabolici potrebbero fornire qualche indicazione dell'importanza dei due enzimi nella degradazione dell'istamina, ma il catabolismo dell'istamina potrebbe essere disaccoppiato dagli effetti fisiologici o fisiopatologici. Le concentrazioni compartimentali di istamina potrebbero essere critiche e il metabolismo potrebbe essere a valle.

Pertanto, abbiamo deciso di utilizzare il topo DAO knock-out (KO) per studiare il ruolo della DAO nella degradazione dell'istamina esogena. Un secondo obiettivo chiave era sviluppare un modello murino con una maggiore sensibilità all'istamina per consentirci di studiare meglio il ruolo dell'istamina in vari ceppi mutanti genetici e per testare l'efficacia della DAO umana ricombinante in un modello di sfida dell'istamina.

Capsule di cistanche

materiale e metodi

Modelli animali

Gli esperimenti sono stati eseguiti utilizzando topi KO C57BL6/J Aoc1tm1b(EUCOMM)Hmgu (DAO) di 10–18-settimane e compagni di cucciolata wild-type (WT). Embrioni eterozigoti sono stati forniti dall'European Mouse Mutant Archive, Monaco, Germania, e impiantati in topi C57BL6/N pseudogravidi. I topi discendenti eterozigoti C57BL6/J sono stati confermati mediante PCR (vedi Risorse online) e ulteriormente utilizzati per allevare topi DAO KO presso la Divisione di ricerca biomedica, Università medica di Vienna, mediante il protocollo animale GZ 66.009/{ {14}}WF/V/3b/2016. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti secondo il protocollo GZ 66.009/0258- V/3b/2019. I protocolli sperimentali sono stati approvati dal Ministero austriaco dell'Istruzione, della Scienza e della Ricerca. Gli animali sono stati tenuti a un ciclo giorno-notte di 12:12 h a 22 gradi con acqua e cibo ad libitum. Per le misurazioni della temperatura non invasive, un transponder (IPTT-300, BioMedic Data Systems Inc., USA) è stato impiantato per via sottocutanea 2 settimane prima dell'esperimento utilizzando una breve anestesia con isoflurano. Il transponder misura la temperatura tre volte in un secondo e la media di queste misurazioni viene registrata dall'esterno della gabbia utilizzando un lettore. Questo valore medio viene quindi utilizzato per ulteriori calcoli. Questi transponder sottocutanei vengono utilizzati per evitare un'eccessiva manipolazione degli animali e per prevenire lesioni dovute all'inserimento ripetuto di sonde di temperatura rettale [48]. In diverse specie animali, compresi i roditori, è stato dimostrato che la somministrazione di istamina abbassa la temperatura corporea ed è considerata la lettura più avanzata per gli effetti dell'istamina [49, 50]. Durante il periodo di osservazione, i sintomi clinici sono stati valutati da un veterinario esperto in base a un punteggio di ipersensibilità pubblicato [51]. Il punteggio variava da 0 (nessun sintomo) a 1 (sfregamento e grattamento della testa e del naso), 2 (attività ridotta con aumento della frequenza respiratoria e/o attività ridotta, gonfiore intorno alla bocca e agli occhi), 3 (respirazione affannosa, cianosi attorno alla coda e bocca, respiro sibilante) e 4 (nessuna attività dopo sollecitazione o tremore e convulsioni). Un punteggio di 5 indicava la morte. Tutti gli esperimenti di sfida sono stati avviati tra le 9:00 e le 11:00 per evitare variazioni dipendenti dall'ora del giorno [52].

Setup sperimentale generale

Tutte le sostanze sono state applicate in un volume di 5 ml/kg. Il propranololo (P0884, Sigma-Aldrich, Austria) è stato sciolto in soluzione salina e applicato per via intraperitoneale (ip) a una concentrazione di 2 mg/kg 20 minuti prima della sfida con l'istamina per aumentare la sensibilità all'istamina [53]. L'istamina dicloridrato (H7250, Sigma-Aldrich, Austria) è stata sciolta in H2O a doppia distillazione (dd) e ulteriormente diluita in soluzione salina. Tutte le concentrazioni di istamina dichiarate si riferiscono alla base di istamina (111,15 Dalton).

1. Somministrazione orale e sottocutanea di istamina

I topi sono stati tenuti a digiuno per 60 minuti in totale. Dopo 40 minuti di digiuno, è stato somministrato propranololo e 20 minuti dopo è stata applicata istamina a una concentrazione di 30 mg/kg per os (po) mediante sonda gastrica. Per il modello di sfida sottocutanea (sc), i topi hanno ricevuto istamina a una concentrazione di 50 mg/kg senza propranololo o 5 mg/kg con propranololo. Per la determinazione delle concentrazioni plasmatiche di istamina, un sottogruppo di topi è stato anestetizzato in momenti diversi dopo la sfida dell'istamina usando 10 mg/kg di xilazina e 100 mg/kg di ketamina. Il plasma citrato è stato raccolto da topi anestetizzati mediante puntura cardiaca. Sono stati utilizzati da uno a cinque topi per punto temporale e genotipo.

2. Inibizione concomitante dell'istamina-N-metiltransferasi (HNMT).

La metoprina (M338835, Toronto Research Chemicals, Canada) è stata sciolta in acido lattico al 10 percento (L1875, Sigma-Aldrich, Austria), ulteriormente diluita in soluzione salina e somministrata ip a 3 mg/kg 1 ora prima della sfida con 5 mg/kg di istamina. La tacrina (A79922, Sigma-Aldrich, Austria) è stata sciolta in ddH2O, ulteriormente diluita in soluzione salina, e successivamente sono stati applicati 10 mg/kg ip 1 h prima di 25 mg/kg di istamina sc e 2 mg/kg di propranololo. Una concentrazione di 2 mg/kg di tacrina ip è stata utilizzata in combinazione con 30 mg/kg di istamina PO combinata con 2 mg/kg di propranololo.

Cistanche standardizzate

3. Induzione di danno renale acuto (AKI) prima della stimolazione con istamina

Folic acid (F7876, Sigma-Aldrich, Austria) was reconstituted in ddH2O, further diluted in saline, and applied i.p. at a concentration of 100 mg/kg 48 h before challenge with 5 mg/kg s.c. histamine and 2 mg/kg propranolol. The degree of acute kidney injury was estimated using plasma creatinine values. As a cut-off for inclusion, a creatinine value of at least threefold above the mean baseline value was used as described [54]. Baseline plasma creatinine concentrations of 0.11 and 0.17 mg/dl were measured in two mice and therefore an inclusion cut-off of>È stato selezionato 42 mg/dl. Il plasma citrato prelevato tramite puntura cardiaca è stato utilizzato per misurare la creatinina utilizzando un analizzatore Cobas (analizzatore Cobas C311, Roche, Svizzera). Per determinare le concentrazioni plasmatiche di istamina in diversi punti temporali durante la sfida con istamina sc con propranololo nella lesione renale acuta, da due a quattro topi per punto temporale sono stati anestetizzati e il plasma citrato è stato raccolto mediante puntura cardiaca.

4. Salvataggio DAO dopo somministrazione di istamina

La (rh)DAO umana ricombinante con un motivo di legame all'eparina mutato (descritto in Gludovacz et al. [55]) è stata applicata per via endovenosa (iv) a una concentrazione di 4 mg/kg 40 minuti prima dell'applicazione di 2 mg/kg di propranololo e 60 min prima della sfida con 5 mg/kg di istamina sc.

Per la determinazione delle concentrazioni di istamina e DAO nel plasma, i topi sono stati trattati con 4 mg/kg di DAO o tampone iv 60 min prima della sfida con 5 mg/kg di istamina sc combinata con 2 mg/kg di propranololo. I topi sono stati anestetizzati in momenti diversi. Il plasma citrato è stato raccolto mediante puntura cardiaca da due a tre topi per punto temporale. Il sangue è stato raccolto in citrato di sodio al 3,8% e una parte è stata immediatamente miscelata con diminazene-aceturato (D7770, Sigma-Aldrich, Austria) ottenendo una concentrazione finale di 10 pM per inibire la degradazione dell'istamina da parte di rhDAO.

Analisi dell'espressione genica

I campioni di tessuto sono stati congelati in azoto liquido e l'RNA totale è stato ottenuto utilizzando il kit FavorPrep Tissue Total RNA (FATRK001, Favorgen, Taiwan) dopo l'omogeneizzazione dei tessuti utilizzando tubi di lisi (Lysing Matrix E, MP Biomedicals, Germania) su un Precellys 24 (Bertin Instruments, Francia). La trascrizione inversa è stata eseguita utilizzando il kit di sintesi cDNA OneScript Plus (G236, ABM Good, Canada). Per la PCR quantitativa è stato utilizzato BrightGreen Express 2 × Mastermix (MasterMix-EL, ABM Good, Canada). I primer di estensione dell'esone per DAO, HNMT e istidina decarbossilasi (HDC) sono stati progettati utilizzando il software Primer3 (tabella delle risorse online 1). Il gene housekeeping RPLP0 è stato utilizzato per la normalizzazione [56].

Macchia occidentale

Per l'analisi western blot, i campioni di tessuto congelato sono stati lisati in tampone K-fosfato 20 mM (pH 7,2) utilizzando provette di lisi (provette Lysing Matrix E, MP Biomedicals, Germania) su Precellys 24 (Bertin Instruments, Francia) . La concentrazione proteica totale è stata determinata utilizzando il QuantiPro BCA Assay Kit (QPBCA-1KT, Sigma, Austria). Per l'elettroforesi su gel di poliacrilammide, 40 μg di proteine ​​totali e 40 ng di DAO murino ricombinante (fornito da EG, University of Natural Resources and Life Sciences, Vienna, Austria, utilizzando i metodi descritti in [57]) sono stati separati utilizzando un gel Tris-glicina al 12% ( 4561043, BioRad, USA). Un anticorpo monoclonale ABP1 (sc-515908, Santa Cruz, USA) è stato utilizzato per il rilevamento di DAO a una concentrazione di 0,4 µg/ml e un anticorpo monoclonale GAPDH (2118, Cell Signal Technology, USA) è stato utilizzato come metodo di caricamento controllo a una diluizione di 1:2000. L'anticorpo monoclonale IgG-HRP anti-topo (A2554, Sigma Aldrich, Austria) e l'anticorpo IgG-HRP anti-coniglio (A0545, Sigma Aldrich, Austria) sono stati usati come anticorpi di rilevamento a una diluizione di 1:40.000. Le immagini sono state acquisite utilizzando Clarity Max Western ECL Substrate (1705062, BioRad, USA) su un sistema di imaging ChemiDoc (17001401, Bio-Rad, USA).

Cistanche tubulosa

Misurazione dell'attività DAO

L'attività della diammina ossidasi di diversi omogenati tissutali e l'inibizione da parte di methoprene e tacrina sono state misurate come descritto [58]. I campioni di tessuto congelato sono stati lisati in tampone K-fosfato 20 mM (pH 7,2) utilizzando tubi di lisi su Precellys 24. La concentrazione proteica totale è stata determinata utilizzando il kit QuantiPro BCA Assay e 500 µg di estratti proteici totali di diversi tessuti sono stati incubati per 120 minuti con orto-amminobenzaldeide (oABA) e ddH2O o 200 µM di cadaverina (CAD). La delta-1-piperidina, il prodotto di autociclizzazione del CAD dopo la deaminazione da parte del DAO, si condensa con l'oABA formando un fluoroforo, che può essere misurato a EX440/30 e EM620/40 nm. Per la determinazione dell'inibizione della DAO, la rhDAO è stata preincubata con methoprene e tacrina a diverse concentrazioni per 30 minuti e misurata come descritto sopra.

Per la determinazione dell'attività DAO, gli omogenati tissutali con una concentrazione proteica di 200 µg/ml sono stati miscelati con HRP (concentrazione finale 1,2 µg/ml, P6782, Sigma-Aldrich, Austria) e aminoguanidina (concentrazione finale 10 µM, 396494, Sigma-Aldrich , Austria) o tampone K-fosfato (pH 7,2) è stato aggiunto e incubato per 15 minuti a 37 gradi . È stato aggiunto Ampplex red™ (concentrazione finale 100 µM, A12222, Thermo Scientific, USA) e le reazioni sono state avviate mediante l'aggiunta di 200 µM di concentrazione finale di putrescina (51799, Sigma-Aldrich, Austria). Il tampone fosfato di potassio (pH 7,2) è stato utilizzato come controllo negativo. I campioni sono stati incubati a 37 gradi e misurati ogni 10 minuti per 120 minuti utilizzando EX550 e EM590 nm. Il segnale specifico DAO è stato calcolato sottraendo campioni con aminoguanidina, un inibitore DAO potente e irreversibile, da campioni con tampone K-fosfato.

Per le misurazioni dell'attività DAO plasmatica nei topi che ricevevano Rhoda iv è stato utilizzato un saggio ibrido utilizzando un anticorpo monoclonale dal clone della linea cellulare di ibridoma anti-DAO 8/119 fornito dal Prof. Quaroni (Cornell University, Ithaca, NY) e Amplex red™. Piastre di fluorescenza nere ad alto legame proteico (475.515, Thermo Scientific Nunc, Danimarca) sono state rivestite con 100 µl di 5 µg/ml di anti-DAO 8/119 in tampone carbonato-bicarbonato 50 mM ( C3041, Sigma-Aldrich, Austria), incubato durante la notte a 4 gradi e successivamente bloccato con 120 µl 1% BSA (A4503, Sigma-Aldrich, Austria) per 50 minuti a temperatura ambiente. Dopo aver bloccato 100 µl di campioni di plasma e standard, precedentemente diluiti 1:10 in PBS, sono stati aggiunti e incubati per 1 ora a temperatura ambiente. Successivamente sono stati aggiunti 90 µl di perossidasi di rafano (concentrazione finale 1,2 µg/ml) e Amplex red™ (concentrazione finale 100 µM) in PBS con 0,1 percento di BSA e le reazioni sono state avviate aggiungendo 10 µl di putrescina (concentrazione finale 200 µM) o PBS. La fluorescenza è stata misurata a 37 gradi ogni 5 min per 120 min utilizzando EX550 e EM590 nm. La soluzione di lavaggio era Tween-20 allo 0,1% (P1379, Sigma-Aldrich, Austria) in PBS. Una curva standard di 3-30 ng/ml rhDAO è stata preparata nel plasma di topo. Tutte le misurazioni sono state eseguite in duplicato.

Misurazioni dell'istamina

Il plasma citrato contenente 10 μM di diminazene-aceturato (D7770, Sigma-Aldrich, Austria) è stato utilizzato per misurare le concentrazioni di istamina utilizzando il kit dinamico di fluorescenza omogenea risolta nel tempo (HTRF) dell'istamina (62HTMDPET, Cisbio, Francia). Il kit è stato utilizzato secondo le istruzioni fornite dal produttore. Per la quantificazione è stata utilizzata una curva standard dell'istamina nel plasma raggruppato di topi C57Bl/6J. Tutte le concentrazioni di istamina si riferiscono alla base di istamina e tutte le misurazioni sono state eseguite in duplicato.

analisi statistica

Le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando GraphPad Prism versione 8.4.0. (GraphPad Software Inc. San Diego). La significatività statistica per le differenze nell'attività DAO negli omogenati tissutali è stata calcolata utilizzando un'ANOVA a misure ripetute con correzione Geisser-Greenhouse. L'area sotto le curve (AUC) dalle singole misurazioni della temperatura corporea interna e i punteggi clinici durante un esperimento sono stati confrontati utilizzando t-test a due code e non accoppiati senza la correzione di Welch. Le concentrazioni plasmatiche di istamina tra i gruppi sono state confrontate con un'ANOVA a due vie. Per il confronto delle concentrazioni plasmatiche di istamina dopo sc la sfida tra topi con genotipi diversi, con e senza danno renale acuto e ricevendo DAO o tampone, i dati sono stati raggruppati in intervalli per tenere conto dei valori mancanti nei singoli sottogruppi (genotipi: 5, 1{{ 14}}, 20, 30, 40, 45, 60 min; danno renale acuto: 0, 10–15, 20–30, 40–45 e 60 min; DAO: 0, 10, 30 e 45 min). Per testare le differenze nelle concentrazioni plasmatiche di creatinina nei topi trattati con e senza 100 mg/kg di acido folico è stato utilizzato un t-test non accoppiato a due code. La significatività statistica è stata definita come p<0.05 in all tests.

Estratto di cistanche

Conclusione

I topi DAO KO erano essenzialmente indistinguibili dai topi WT che utilizzavano istamine esogene orali e sottocutanee. Il coinvolgimento di HNMT nell'inattivazione dell'istamina che porta alla riduzione dei sintomi topologici è nella migliore delle ipotesi moderato, ma i risultati dell'inibizione farmacologica potrebbero essere considerati preliminari. I dati che utilizzano l'inibizione di HNMT con metoprene hanno mostrato una tendenza verso il coinvolgimento di DAO endogeno nell'inattivazione dell'istamina. I reni sono coinvolti nella rapida estrazione dell'istamina dalla circolazione, ma i topi knockout 509 Diammina ossidasi sette volte elevati non sono ipersensibili alla somministrazione orale o sottocutanea... 1 3 le concentrazioni di istamina non si sono tradotte in un fenotipo esagerato misurato utilizzando la temperatura centrale perdita come lettura fenotipica. L'uso di DAO ricombinante umano o di topo potrebbe supportare o aiutare a respingere il coinvolgimento dell'istamina in vari modelli animali con sospetta degranulazione dei mastociti accompagnata da rilascio rapido e massiccio di istamina, o con una maggiore induzione dell'enzima istidina decarbossilasi seguita dal rilascio di appena sintetizzato istamina per ore. Potrebbe valere la pena studiare l'allevamento di un vero topo doppio KO con copie inattive sia del gene DAO che del gene HNMT. Singoli topi KO di DAO o HNMT non mostrano fenotipi evidenti. [dati non pubblicati, 31] Allo stesso modo, testare il coinvolgimento dei due principali trasportatori di istamina, OCT2 e OCT3, nelle alterazioni fenotipiche indotte dall'istamina potrebbe permetterci di ottenere una migliore comprensione dei meccanismi alla base dello sviluppo dei sintomi mediati dall'istamina nei roditori e di conseguenza potenzialmente anche nell'uomo. Nonostante i significativi sforzi di ricerca per più di 100 anni dalla sua scoperta, abbiamo ancora molta strada da fare prima di ottenere una vera comprensione del catabolismo dell'istamina.

Riferimenti

1. Boehm T, Ristl R, Joseph S, et al. Disturbi del metabolismo e del lipidoma durante un grave evento di attivazione dei mastociti in un paziente con mastocitosi sistemica indolente. J Allergy Clin Immunol. 2021. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2021.03.043. 2. Packard KA, Khan MM. Effetti dell'istamina su Th1/Th

equilibrio delle 2 citochine. Int Immunofarmaco. 2003;3:909–20. https://doi.org/ 10.1016/S1567-5769(02)00235-7.

3. Hesterberg R, Sattler J, Lorenz W, et al. Contenuto di istamina, attività della diammina ossidasi e attività dell'istamina metiltransferasi nei tessuti umani: realtà o finzione? Azioni degli agenti. 1984;14:325–34. https://doi.org/10.1007/BF01973821.

4. Dyer J, Warren K, Merlin S, et al. Misurazione dell'istamina plasmatica: descrizione di un metodo migliorato e valori normali. J Allergy Clin Immunol. 1982;70:82–7. https://doi.org/10.1016/ 0091-6749(82)90233-0.

5. Pollock I, Murdoch RD, Lessof MH. Istamina plasmatica e tolleranza clinica all'istamina infusa in soggetti normali, atopici e orticarioidi. Azioni degli agenti. 1991; 32: 359–65. https://doi.org/10. 1007/BF01980899.

6. Liu J, Wang L, Hu W, et al. Sviluppo di un metodo UHPLC-MS/MS per la determinazione dell'istamina plasmatica in varie specie di mammiferi. J Chromatogr B. 2014;971:35–42. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2014.08.043.

7. Xu Y, Kang T, Dou D, et al. La valutazione e l'ottimizzazione del modello animale per la reazione anafilattoide indotta da iniezioni. Asiatico Pac J Allergy Immunol. 2015;33:330–8. https://doi.org/10.12932/AP0619.33.4.2015.

8. Maintz L, Novak N. Istamina e intolleranza all'istamina. Sono J Clin Nutr. 2007;85:1185–96. https://doi.org/10.1093/ajcn/85.5. 1185.

9. Ginsburg R, Bristow MR, Kantrowitz N, et al. Provocazione dell'istamina dello spasmo clinico dell'arteria coronaria: implicazioni riguardanti la patogenesi dell'angina pectoris variante. Sono il cuore J. 1981; 102: 819–22. https://doi.org/10.1016/0002-8703(81) 90030-2.

10. O'Mahony L, Akdis M, Akdis CA. Regolazione della risposta immunitaria e dell'infiammazione da parte dell'istamina e dei recettori dell'istamina. J Allergy Clin Immunol. 2011;128:1153–62. https://doi. org/10.1016/j.jaci.2011.06.051.

11. Thurmond RL, Gelfand EW, Dunford PJ. Il ruolo dei recettori dell'istamina H1 e H4 nell'infiammazione allergica: la ricerca di nuovi antistaminici. Nat Rev Drug Discov. 2008;7:41–53. https://doi.org/10.1038/nrd2465.

12. Pericin C, Thomann P. Confronto della tossicità acuta di cliochinolo, istamina e cloroformio in diversi ceppi di topi. In: Chambers PL, Günzel P, editori. Meccanismo di azione tossica su alcuni organi bersaglio. Berlino: Springer; 1979. pag. 371–3.

13. Lamanna C, Ross HE. Rapporto tra dose tossica letale e peso corporeo del topo. Toxicol Appl Pharmacol. 1968;13:307–15. https://doi.org/10.1016/0041-008X(68)90104-X.

14. Van der Linden P, Hack C, Poortman J, et al. La sfida della puntura di insetto in 138 pazienti: relazione tra gravità clinica dell'anafilassi e attivazione dei mastociti. J Allergy Clin Immunol. 1992;90:110–8. https://doi.org/10.1016/S0091-6749(06) 80017-5.

15. Williams WR, Scisto DJ. Spostamento in vitro di mediatori vasoattivi dalle proteine ​​plasmatiche: un possibile meccanismo per reazioni pseudo-allergiche ai farmaci bloccanti neuromuscolari. Fr J Anaesth. 1992;69:508–10. https://doi.org/10.1093/bja/69.5.508.

16. Sasaki Y, Iwama R, Sato T, et al. Stima della velocità di filtrazione glomerulare nei topi coscienti utilizzando un'equazione semplificata. Physiol Rep. 2014;2:e12135. https://doi.org/10.14814/phy2.12135.

17. Helander CG, Lindell SE, Westling H. La rimozione renale dell'istamina marcata con C 14- dal sangue nell'uomo. Scand J Clin Lab Investig. 1965. https://doi.org/10.1080/00365516509083360.

18. Sjaastad O, Sjaastad ÖV. Catabolismo dell'istamina l4C somministrata per via orale nell'uomo. Acta Pharmacol tossico. 1974; 34: 33–45. https://doi.org/10.1111/j.1600-0773.1974.tb02011.x.

19. Schayer RW. Il metabolismo dell'istamina in varie specie. Br J Pharm Chemoth. 1956; 11:472–3. https://doi.org/10.1111/j. 1476-5381.1956.tb00020.x.

20. Snyder SH, Axelord J, Bauer H. Il destino dell'istamina C 14- nei tessuti animali. J Pharmacol Exp Ther. 1964; 144: 373–9.

21. Rosa B, Browne JSL. La distribuzione e il tasso di scomparsa dell'istamina iniettata per via endovenosa nel ratto. Sono J Physiol. 1938;124:412–20. https://doi.org/10.1152/ajplegacy.1938.124.2. 412.

22. Koepsell H, Lips K, Volk C. Trasportatori di cationi organici polispecifici: struttura, funzione, ruoli fisiologici e implicazioni biofarmaceutiche. Ricerca farmaceutica 2007;24:1227–51. https://doi.org/ 10.1007/s11095-007-9254-z.

23. Lantoine F, Iouzalen L, Devynck MA, et al. La produzione di ossido nitrico nelle cellule endoteliali umane stimolate dall'istamina richiede l'afflusso di Ca2 più. Biochimica. 1998;330:695–9. https://doi.org/10.1042/bj3300695.

24. Mikelis CM, Simaan M, Ando K, et al. RhoA e ROCK mediano la perdita vascolare indotta dall'istamina e lo shock anafilattico. Nat Comune. 2015;6:6725. https://doi.org/10.1038/ncomms7725.

25. Ashina K, Tsubosaka Y, Nakamura T, et al. L'istamina induce l'iperpermeabilità vascolare aumentando il flusso sanguigno e la rottura della barriera endoteliale in vivo. PLOS UNO. 2015;10:e0132367. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132367.

26. Schömig E, Lazar A, Gründemann D. Trasportatore extraneuronale di monoamine e trasportatori di cationi organici 1 e 2: una revisione dell'efficienza del trasporto. In: Sitte HH, Freissmuth M, a cura di. Trasportatori di neurotrasmettitori. Berlino: Springer; 2006. pag. 151–80.

27. Ohtsu H. Progressi nella ricerca sui segnali di allergia sui mastociti: il ruolo dell'istamina nelle malattie immunologiche e cardiovascolari e il sistema di trasporto dell'istamina nella cellula. J Pharmacol Sci. 2008;106:347–53. https://doi.org/10.1254/jphs.FM0070294.

28. Karjala SA, Turnquest B, Schayer RW. Metaboliti urinari dell'istamina radioattiva. J Biol Chem. 1956;219:9–12. https://doi. org/10.1016/S0021-9258(18)65762-X.

29. Schayer RW. Catabolismo di quantità fisiologiche di istamina in vivo. Physiol Rev. 1959; 39: 116–26. https://doi.org/10.1152/ physrev.1959.39.1.116.

30. Reilly MA, Schayer RW. Studi in vivo sul catabolismo dell'istamina e la sua inibizione. Br J Pharmacol. 1970;38:478–89. https://doi. org/10.1111/j.1476-5381.1970.tb10590.x.

31. Naganuma F, Nakamura T, Yoshikawa T, et al. L'istamina N-metiltransferasi regola l'aggressività e il ciclo sonno-veglia. Sci Rep. 2017;7:15899. https://doi.org/10.1038/s41598-017-16019-8.

32. McGrath AP, Hilmer KM, Collyer CA, et al. Struttura e inibizione della diammina ossidasi umana. Biochimica. 2009;48:9810–22. https://doi.org/10.1021/bi9014192.

33. Schwelberger HG. Analisi della localizzazione tissutale e subcellulare della diammina ossidasi dei mammiferi mediante microscopia a fluorescenza a scansione laser confocale. Ris. Infamm. 1998;47:60–1. https://doi.org/10.1007/s000110050273.

34. Nishibori M, Tahara A, Sawada K, et al. Localizzazione neuronale e vascolare dell'istamina N-metiltransferasi nel sistema nervoso centrale bovino. Eur J Neurosci. 2000;12:415–24. https://doi.org/ 10.1046/j.1460-9568.2000.00914.x.

35. Sjaastad ÖV. Potenziamento da parte dell'aminoguanidina della sensibilità delle pecore all'istamina somministrata per via orale. Effetto dell'amino-guanidina sull'escrezione urinaria di istamina endogena. Exp Physiol. 1967;52:319–30. https://doi.org/10.1113/expphysiol.1967.sp001 918.

36. Sattler J, Häfner D, Klotter HJ, et al. Le istamine indotte dal cibo come problema epidemiologico: aumento dell'istamina plasmatica e alterazioni emodinamiche dopo somministrazione orale di istamina e blocco della diamina ossidasi (DAO). Azioni degli agenti. 1988;23:361–5. https://doi.org/10.1007/BF02142588.

37. Bowman MA, Simell OG, Peck AB, et al. Farmacocinetica della somministrazione di aminoguanidina ed effetti sulla frequenza del diabete nei topi diabetici non obesi. J Pharmacol Exp Ther. 1996;279:790–4.

38. Matejovic M, Krouzecky A, Martinkova V, et al. Inibizione selettiva inducibile dell'ossido nitrico sintasi durante la batteriemia suina iperdinamica a lungo termine. Shock. 2004;21:458–65. https://doi. org/10.1097/00024382-200405000-00010.

39. Alderton WK, Cooper CE, Knowles RG. Ossido nitrico sintasi: struttura, funzione e inibizione. Biochimica J. 2001; 357: 593–615. https://doi.org/10.1042/bj3570593.

40. Altura BM, Halevy S. Azioni benefiche e dannose degli antagonisti del recettore dell'istamina H {1- e H 2- nello shock circolatorio. PNAS. 1978;75:2941–4. https://doi.org/10.1073/pnas.75.6.2941.

41. Thomas LL, Bochner BS, Lichtenstein LM. Inibizione dell'attività istaminasica derivata dai leucociti polimorfonucleati umani da parte degli antagonisti H-2. Biochimica Pharmacol. 1978;27:2562–5. https:// doi.org/10.1016/0006-2952(78)90327-1.

42. Thermann M, Lorenz W, Schmal A, et al. Influenza degli antagonisti dei recettori H1- e H2- sul sistema circolatorio e sulle concentrazioni di istamina plasmatica endogena nei cani. Azioni degli agenti. 1977;7:97–101. https://doi.org/10.1007/BF01964888.

43. Elmore BO, Bollinger JA, Dooley DM. Rene umano diammina ossidasi: espressione eterologa, purificazione e caratterizzazione. J Biol Inorg Chem. 2002;7:565–79. https://doi.org/10. 1007/s00775-001-0331-1.

44. Duch DS, Bowers SW, Nichol CA. Elevazione dei livelli di istamina cerebrale da parte degli inibitori della diaminopirimidina dell'istamina N-metil transferasi. Biochimica Pharmacol. 1978;27:1507–9. https://doi. org/10.1016/0006-2952(78)90109-0.

45. Horton JR, Sawada K, Nishibori M, et al. Basi strutturali per l'inibizione dell'istamina N-metiltransferasi da parte di diversi farmaci. J Mol Biol. 2005;353:334–44. https://doi.org/10.1016/j.jmb.2005. 08.040.

46. ​​Horton JR, Sawada K, Nishibori M, et al. Due forme polimorfiche di istamina metiltransferasi umana: confronti strutturali, termici e cinetici. Struttura. 2001;9:837–49. https://doi.org/10.1016/S0969-2126(01)00643-8.

47. Duch DS, Bacchi CJ, Edelstein MP, et al. Inibitori del metabolismo dell'istamina in vitro e in vivo: correlazioni con l'attività antitripanosomica. Biochimica Pharmacol. 1984; 33: 1547–53. https://doi.org/10.1016/0006-2952(84)90426-X.

48. Hox V, Desai A, Bandara G, et al. L'estrogeno aumenta la gravità dell'anafilassi nei topi femmina attraverso una maggiore espressione di ossido nitrico sintasi endoteliale e la produzione di ossido nitrico. J Allergy Clin Immunol. 2015;135:729-736.e5. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2014.11.003.

49. Packman EW, Rossi GV, Harrisson JWE. L'effetto dell'istamina e degli antistaminici sulla temperatura corporea. J Pharm Pharmacol. 1953;5:301–10. https://doi.org/10.1111/j.2042-7158.1953.tb139 90.x.

50. Morris SC, Perkins C, Potter C, et al. Ottimizzazione dell'inibizione farmacologica dell'anafilassi IgE-mediata nei topi. J Allergy Clin Immunol. 2021;149:671–84. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2021.06.022.

51. Li XM, Serebrisky D, Lee SY, et al. Un modello murino di anafilassi di arachidi: le risposte delle cellule T e B a un importante allergene di arachidi imitano le risposte umane. J Allergy Clin Immunol. 2000;106:150–8. https://doi.org/10.1067/mai.2000.107395.

52. Hasegawa A, Watanabe M, Osada H, et al. Influenza dei glucocorticoidi sulle variazioni dipendenti dall'ora del giorno nell'anafilassi sistemica mediata dal fattore di attivazione delle IgE, dell'istamina e delle piastrine in diversi ceppi di topo. Biochem Biophys Res Commun. 2018;495:2184–8. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2017.12.099.

53. Fishel CW, Szentivanyi A, Talmage DW. Sensibilizzazione e desensibilizzazione dei topi all'istamina e alla serotonina da parte dei neuroumori. J Immunol. 1962;89:8–18.

54. Stallons LJ, Whitaker RM, Schnellmann RG. Biogenesi mitocondriale soppressa nella lesione renale acuta indotta da acido folico e nella fibrosi precoce. Tossicolo Lett. 2014;224:326–32. https://doi. org/10.1016/j.toxlet.2013.11.014.

55. Gludovacz E, Schuetzenberger K, Resch M, et al. Le mutazioni del motivo legante l'eparina della diammina ossidasi umana consentono lo sviluppo di un biofarmaceutico di prima classe che degrada l'istamina. Evita. 2021;10:e68542. https://doi.org/10.7554/eLife. 68542.

56. Eissa N, Kermarrec L, Hussein H, et al. Adeguatezza dei geni di riferimento per la normalizzazione dell'RNA messaggero nella colite indotta dall'acido 2,4-dinitrobenzene solfonico (DNBS) di topo mediante PCR quantitativa in tempo reale. Sci Rep. 2017;7:42427. https://doi.org/10. 1038/srep42427.

57. Gludovacz E, Maresch D, Bonta M, et al. Caratterizzazione della diammina ossidasi umana ricombinante (rhDAO) prodotta in cellule ovariche di criceto cinese (CHO). J Biotecnol. 2016;227:120–30. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2016.04.002.

58. Boehm T, Karer M, Gludovacz E, et al. Quantificazione semplice, sensibile e specifica dell'attività della diammina ossidasi in matrici complesse utilizzando fluorofori scoperti di recente derivati ​​da substrati naturali. Ris. Infamm. 2020;69:937–50. https://doi.org/10. 1007/s00011-020-01359-5.

59. Matsumura Y, Tan EM, Vaughan JH. Ipersensibilità all'istamina e anafilassi sistemica nei topi con blocco farmacologico beta-adrenergico: protezione da parte dei nucleotidi. J Allergy Clin Immunol. 1976;58:387–94. https://doi.org/10.1016/0091- 6749(76)90119-6.

60. Hunter AJ, Murray TK, Jones JA, et al. La farmacologia colinergica della tetraidroamminoacridina in vivo e in vitro. Br J Pharmacol. 1989;98:79–86. https://doi.org/10.1111/j.1476-5381. 1989.tb16865.x.

61. Rabe M, Schaefer F. Modelli murini non transgenici di malattie renali. Nefrone. 2016;133:53–61. https://doi.org/10.1159/00044 5171.

62. Miyamoto Y, Nakano S, Kaneko M, et al. Valutazione clinica di un nuovo inibitore sintetico della proteasi nella chirurgia a cuore aperto. Effetto sul rilascio plasmatico di serotonina e istamina e conservazione del sangue. ASAIO. 1992;38:M395-8. https://doi.org/10.1097/00002480- 199207000-00063.

63. Oncologia razziale: oncologia di precisione. https://www.raceoncology. com/. Accesso 23 novembre 2021

64. Myers JW, Von Hof DD, Kuhn JG, et al. Reazioni anafilattoidi associate alle infusioni di bisantrene. Nuove droghe investigative. 1983; 1:85–8. https://doi.org/10.1007/BF00180195.

65. Reilly MA, Schayer RW. Ulteriori studi sul catabolismo dell'istamina in vivo. Br J Pharmacol. 1971;43:349–58.

66. Malinski T, Taha Z, Grunfeld S, et al. Diffusione di ossido nitrico nella parete dell'aorta monitorata in situ da microsensori porfirinici. Biochem Biophys Res Commun. 1993; 193: 1076–82. https://doi. org/10.1006/bbrc.1993.1735.

67. Ginsburg M, Wajda I, Waelsch H. Transglutaminasi e incorporazione di istamina in vivo. Biochimica Pharmacol. 1963;12:251–64. https://doi.org/10.1016/0006-2952(63)90148-5.

68. Vowinckel J, Stahlberg S, Paulmann N, et al. L'istaminilazione dei residui di glutammina è una nuova modifica post-traduzionale implicata nella segnalazione della proteina G. FEBS Lett. 2012;586:3819–24. https://doi.org/10.1016/j.febslet.2012.09.027.

69. McNally W, Roth M, Young R, et al. Determinazione autoradiografica quantitativa di tutto il corpo della distribuzione del tessuto di tacrina nei ratti dopo una dose endovenosa o orale. Ricerca farmaceutica 1989;6:924– 32. https://doi.org/10.1023/A:1015933210803.

70. Cumming P, Reiner PB, Vincent SR. Inibizione dell'istamina-N-metiltransferasi del cervello di ratto da parte di 9-amino-1,2,3,4-tetraidroacridina (THA). Biochimica Pharmacol. 1990;40:1345–50. https://doi.org/10. 1016/0006-2952(90)90402-7.

71. Cavallito JC, Nichol CA, Brenckman WD, et al. Inibitori liposolubili della diidrofolato reduttasi. I. Cinetica, distribuzione tissutale ed entità del metabolismo di pirimetamina, metoprene ed etorfina nel ratto, nel cane e nell'uomo. Smaltimento Metab Farmaco. 1978;6:329–37.

72. Nishibori M, Oishi R, Itoh Y, et al. 9-Amino-1, 2, 3, 4-La tetraidroacridina è un potente inibitore dell'istamina N-metiltransferasi. Jpn J Pharmacol. 1991;55:539–46. https://doi.org/10.1254/jjp.55. 539.

73. Hough LB, Khandelwal JK, Green JP. Inibizione del metabolismo cerebrale dell'istamina da parte del metoprene. Biochimica Pharmacol. 1986;35:307–10. https://doi.org/10.1016/0006-2952(86)90530-7.

74. Kaneko H, Koshi S, Hiraoka T, et al. Inibizione del danno da riperfusione post-ischemica del rene da parte della diammina ossidasi. Biochim Biophys Acta. 1998;1407:193–9. https://doi.org/10.1016/S0925- 4439(98)00039-8.

75. Koshi S, Inoue M, Obayashi H, et al. Inibizione del danno da riperfusione post-ischemica dell'intestino tenue da parte della diammina ossidasi. Biochim Biophys Acta. 1991;1075:231–6. https://doi.org/10.1016/ 0304-4165(91)90271-H.

Matthias Karer1 · Marlene Rager‑Resch1 · Teresa Haider2 · Karin Petroczi1 · Elisabeth Gludovacz3 · Nicole Borth3 · Bernd Jilma1 · Thomas Boehm1

1 Dipartimento di Farmacologia Clinica, Medical University Vienna, Waehringer Guertel 18-20, 1090 Vienna, Austria

2 Dipartimento di Neurofisiologia, Center for Brain Research, Medical University Vienna, Vienna, Austria

3 Dipartimento di Biotecnologie, Università di Risorse Naturali e Scienze della Vita, Vienna, Austria