Effetti del trattamento parodontale in pazienti con parodontite e insufficienza renale: uno studio pilota Ⅰ
Jun 25, 2024
Astratto:Parodontite emalattia renale cronicasono entrambimalattie infiammatorie cronichee condividono alcuni fattori di rischio comuni. Questo studio pilota di 3-mese mirava a chiarire se la terapia parodontale non chirurgica è vantaggiosa in condizioni cliniche, biochimiche e microbiologiche in pazienti con parodontite e insufficienza renale.Insufficienza renalepazienti con parodontite da moderata a grave sono stati reclutati da due ospedali. Il gruppo di trattamento ha ricevuto terapia parodontale non chirurgica e il gruppo di controllo ha ricevuto solo istruzioni di igiene orale. Le valutazioni dei risultati sono state condotte 1 e 3 mesi dopo il trattamento. Sono stati utilizzati test non parametrici per analizzare i dati a livello di paziente. Le valutazioni a livello del sito parodontale sono state analizzate mediante il t-test di Student e il t-test per dati appaiati. La significatività statistica è stata fissata al valore p < 0,05. Un totale di 11 soggetti hanno completato lo studio. Non è stata riscontrata alcuna differenza significativa tra i gruppi nella mortalità per tutte le cause,eventi cardiovascolari, eventi di infezione, parametri sistemici e biomarcatori sierici. Rispetto al gruppo di controllo, i parametri clinici parodontali, il livello di interleuchina del fluido crevicolare gengivale-1 (IL-1) e gli agenti patogeni parodontali hanno mostrato un miglioramento significativo nel gruppo di trattamento. Il trattamento parodontale non chirurgico non ha modificato gli esiti sistemici nei pazienti con insufficienza renale, ma ha modificato il microambiente locale.
NUOVE ERBE PERPARODONTITE E MALATTIA RENALE CRONICA
Parole chiave: trattamento parodontale non chirurgico; dialisi renale; insufficienza renale
1. Introduzione
La parodontite è una malattia infiammatoria cronica che causa la perdita dei tessuti parodontali a causa di un’infezione batterica [1]. Gli agenti patogeni parodontali, come Porphyromonas gingi valis (P. gingivalis), Treponema denticola (T. denticola) e Tannerella forsythia (T. forsythia), accumulandosi sulle superfici dei denti possono non solo indurre una reazione infiammatoria locale ma sistemica [2,3]. L’induzione della produzione sistemica di citochine proinfiammatorie provenienti dalla regione parodontale può anche aggravare la gravità delle malattie sistemiche tra cui malattie cardiovascolari (CVD), diabete, malattia renale cronica (CKD), artrite reumatoide, malattia polmonare ostruttiva cronica (BPCO), ecc. [4].
La CKD è caratterizzata da compromissione della funzionalità renale e dalle complicanze correlate [5]. La malattia renale allo stadio terminale (ESRD), la forma più grave di CKD, è definita come pazienti con una velocità di filtrazione glomerulare stimata (eGFR) < 15 ml/min per 1,73 m2 e necessità di dialisi regolare [5,6]. L’elevata prevalenza della malattia renale cronica grava sulle spese finanziarie e sul sistema sanitario a Taiwan e nel mondo [7]. La CKD è associata a un’infiammazione sistemica persistente e cronica che aumenta il rischio di malattie cardiovascolari, soprattutto nei pazienti con diabete [8]. Nel frattempo, la CVD è la causa più comune di mortalità nei pazienti con insufficienza renale cronica.
L'associazione tra parodontite e insufficienza renale cronica è stata segnalata nell'ultimo decennio [9,10]. Entrambe le malattie hanno caratteristiche infiammatorie croniche e condividono alcuni fattori di rischio comuni [10]. Elevate citochine infiammatorie sistemiche, come l'interleuchina-1 (IL-1), l'interleuchina-6 (IL-6), la proteina C-reattiva (CRP) e il fattore di necrosi tumorale. (TNF-), erano attribuibili alla parodontite e sono stati documentati da studi precedenti [11,12]. Potrebbe causare disfunzione endoteliale vascolare e ulteriori eventi cardiovascolari [13,14]. Un recente rapporto di consenso suggerisce che il trattamento parodontale potrebbe ridurre la risposta infiammatoria sistemica e l’incidenza di eventi cardiovascolari [13].
Fino ad ora, sono stati pubblicati studi clinici randomizzati e controllati (RCT) limitati che confrontano i risultati nei pazienti con ESRD dopo trattamento parodontale non chirurgico o senza trattamento parodontale [15,16]. Esiste ancora molta incertezza nella relazione tra l’intervento della parodontite e il rischio di complicanze della malattia renale cronica. Pertanto, in questo studio, abbiamo mirato a indagare gli effetti clinici, biochimici e microbiologici del trattamento parodontale non chirurgico in pazienti con parodontite e ESRD.
2. Materiali e metodi
2.1. Progettazione dello studio
Si tratta di uno studio pilota di 3-mese condotto presso il Taipei Medical University Hospital (TMUH) e l'ospedale Shuang-Ho affiliato alla TMU (TMU-SHH) da settembre 2017 a dicembre 2019. Per l'assegnazione dei partecipanti inclusi, è stata ottenuta la randomizzazione da un elenco generato dal computer. Solo i medici e i membri del personale dello studio erano a conoscenza dell'assegnazione del gruppo, vale a dire gruppo di trattamento o gruppo di controllo. L'approvazione etica è stata ottenuta da TMU-JIRB, Taipei Medical University (N201604007). Lo studio è stato condotto dalla Dichiarazione di Helsinki, seguendo le linee guida CONSORT.
2.2. Partecipanti parodontali
Come studio preliminare, tutti i pazienti in emodialisi che erano ben informati e hanno firmato il loro consenso informato presso il reparto di emodialisi di due ospedali sono stati inviati allo screening odontoiatrico per verificarne l'idoneità. I criteri di inclusione erano i seguenti: mantenimento dell'emodialisi tre volte a settimana per almeno 3 mesi [17]; di età compresa tra 20 e più di 20 anni; almeno 5 denti naturali conservabili; e parodontite generalizzata da moderata a grave secondo i criteri AAP/CDC [18]. I criteri di esclusione erano: infezione attiva sotto trattamento antibiotico nelle ultime 4 settimane per prevenire l'influenza degli antibiotici sulla condizione basale [19]; incapace di ricevere cure odontoiatriche o di completare l'intero corso dello studio. I pazienti con altre malattie sistemiche, come diabete o malattie cardiovascolari, non sono stati esclusi da questo studio. Abbiamo raccolto i dati demografici e le informazioni mediche dai registri elettronici nei due ospedali. Le informazioni mediche includevano pressione sanguigna basale, indice di massa corporea (BMI), data di dialisi, storia medica passata, fumo e risultati di laboratorio.
2.3. Esame parodontale
I partecipanti sono stati sottoposti ad un esame parodontale completo al basale e dopo 3 mesi. Un ulteriore esame parodontale per il gruppo di trattamento è stato eseguito da 4 a 6 settimane dopo il trattamento. Sono stati raccolti i seguenti 5 parametri parodontali: indice di placca, profondità di sondaggio parodontale (PD), profondità di recessione gengivale (REC), perdita di attacco clinico (CAL) e sanguinamento al sondaggio (BOP). Sono stati registrati sei siti di misurazione per dente per indice di placca, PD, REC, CAL e BOP. La sonda parodontale (PQ-W, Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) è stata utilizzata per l'esame parodontale da due parodontisti esperti.
2.4. Intervento parodontale
I soggetti di entrambi i gruppi hanno ricevuto la raccolta dei dati e istruzioni sull'igiene orale al basale e dopo 3 mesi. Prima dell’esame parodontale e degli appuntamenti terapeutici veniva prescritta amoxicillina (2 g) per la profilassi delle infezioni [20]. Nel gruppo di trattamento, i soggetti hanno ricevuto una terapia parodontale standard non chirurgica per la rimozione del biofilm sopragengivale e sottogengivale e del tartaro da parte di parodontologi certificati. La rivalutazione delle condizioni parodontali è stata effettuata da 4 a 6 settimane dopo il trattamento. Nel tentativo di sradicare o ridurre i livelli di batteri eziopatogeni nelle tasche profonde rimanenti, è stata condotta la somministrazione di gel di minociclina sottogengivale (Sun Star, Osaka, Giappone) in siti con profondità della tasca parodontale rimanente maggiore o uguale a 5 mm [21].
2.5. Esame biochimico
Sono stati prelevati campioni di sangue per le analisi ematochimiche. I biomarcatori infiammatori tra cui CRP ad alta sensibilità (hs-CRP), TNF-, IL-1, IL-6 e Pentraxin 3 (PTX3) nel siero e nel fluido crevicolare gengivale (GCF) sono stati misurati al basale e 3-visite al mese [22,23]. I campioni GCF sono stati raccolti utilizzando strisce di Periopaper (HARCO Electronics, Irvine, CA, USA) dalla tasca parodontale più profonda. Secondo il metodo del nostro studio precedente [24], prima del campionamento, l'area del test è stata asciugata all'aria e isolata con una garza. La prima striscia di carta è stata fatta scivolare nella tasca gengivale 1 mm sottogengivale per 5 secondi e scartata immediatamente per evitare la contaminazione della saliva. Una seconda striscia di carta è stata inserita nel sito prescelto per altri 30 secondi. La striscia di carta rimanente è stata immersa in un contenitore di soluzione salina tamponata con fosfato 200-μL e conservata a -80 ◦C. Gli esami ematochimici di routine sono stati analizzati da un laboratorio centrale dell'ospedale. I livelli di citochine sono stati analizzati mediante ELISA utilizzando kit disponibili in commercio (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA).
2.6. Analisi microbiologica
Il biofilm sottogengivale è stato campionato dai 3 siti parodontali più profondi utilizzando una curette parodontale sterile al basale e alle visite di 3-mese per entrambi i gruppi. I campioni di biofilm sottogengivale sono stati quindi sospesi nel tampone TE, vortexati e sonicati. Il DNA è stato estratto da campioni di biofilm sottogengivale. I campioni di biofilm sottogengivale sono stati miscelati con tampone RDD e benzonasi e incubati a 37 ◦C per 30 minuti, seguiti da digestione con Proteinasi K e incubati per 30 minuti a 56 ◦C [25,26]. Sono stati poi omogeneizzati in un tampone di lisi. La purificazione del DNA è stata eseguita utilizzando un kit QIAamp DNA Microbiome Kit (Qiagen), secondo le istruzioni del produttore. Successivamente, l'amplificazione del gene dell'rRNA 16S e la costruzione della libreria sono state eseguite secondo i protocolli forniti da Illumina. Il kit Nextera XT Index è stato utilizzato per aggiungere gli adattatori di sequenziamento Illumina e i codici a barre a doppio indice ai target dell'amplicone. La quantificazione e la qualità delle librerie di sequenziamento sono state controllate utilizzando un analizzatore QSep100 (BiOptic Inc., New Taipei City, Taiwan). Infine, le librerie sono state normalizzate e raggruppate in un rapporto equimolare e sequenziate con una piattaforma Illumina Miseq con chimica V3.
2.7. 16. Analisi della sequenza genica dell'S rRNA
La preelaborazione delle letture grezze include la rimozione di primer universali e basi di bassa qualità utilizzando cutadapt (v1.18) [27]. Quindi, le letture accoppiate sono state elaborate e analizzate con il flusso di lavoro DADA2/phyloseq nell'ambiente R. L'assegnazione tassonomica delle varianti di sequenza dell'amplicone (ASV) dedotte è stata eseguita utilizzando il database di riferimento SILVA (v132) con una confidenza bootstrap minima di 80 [28]. L'allineamento di sequenze multiple degli ASV è stato eseguito con DECIPHER (v2.8.1) e l'albero filogenetico è stato costruito utilizzando RAxML (v8.2.11) [29,30]. La tabella di frequenza, la tassonomia e le informazioni sull'albero filogenetico sono state utilizzate per creare un oggetto phyloseq per le analisi della comunità batterica a valle utilizzando phyloseq (v1.24.2) [31]. Gli indici di diversità sono stati calcolati utilizzando la funzione di ricchezza stimata dal pacchetto phyloseq. Il pacchetto R GUniFrac è stato utilizzato per calcolare le varie versioni delle distanze UniFrac determinando la dissomiglianza comunitaria tra gruppi (-diversità) [32]. L’analisi dell’arricchimento del microbiota è stata condotta utilizzando il metodo dell’analisi discriminante lineare (LDA) Effect Size e visualizzata come cladogramma utilizzando GraPhlAn [33,34].
I nostri esiti primari erano la mortalità per tutte le cause, gli eventi cardiovascolari (CV) e gli eventi di infezione. Gli esiti secondari prespecificati includevano l'emoglobina A1c (HbA1c), la funzione cardiaca e la valutazione dei vasi periferici. Inoltre, sono stati raccolti parametri parodontali, biomarcatori infiammatori sierici/GCF e microbi sottogengivali.
