Metodo HPTLC a fase inversa altamente sensibile ed ecologicamente sostenibile per la determinazione dell'idrochinone nelle creme sbiancanti commerciali

Contatto:ali.ma@wecistanche.com

Mohammed H. Alqarni 1, Prawez Alam 1, Faiyaz Shakeel 2, Ahmed I. Foudah 1 e Sultan Alshehri 2,*

Astratto: Idrochinone(HDQ) è un agente depigmentante naturale, comunemente usato nelle preparazioni tonificanti della pelle. La sicurezza e l'ecologia dei metodi analitici di quantificazione dell'HDQ non sono state considerate nella letteratura precedente. Pertanto, è stato stabilito un test basato sulla cromatografia su strato sottile ad alte prestazioni (RP-HPTLC) a fase inversa altamente sensibile ed ecologicamente più ecologico per la stima dell'HDQ in quattro diversisbiancamentocreme (CWC). La miscela binaria etanolo-acqua(60:40, v·v−1) è stata utilizzata come sistema solvente verde. La stima dell'HDQ è stata effettuata a 291 nm. L'attuale test basato su RP-HPTLC era lineare nell'intervallo 20–2400 ng banda−1. Il presente metodo analitico era altamente sensibile in base ai dati di rilevamento e quantificazione. Anche gli altri parametri di convalida, come accuratezza, precisione e robustezza, erano adatti per la determinazione dell'HDQ. Le quantità massime di HDQ sono state ottenute in CWC A (1,23% w·w−1) seguito da CWC C (0,81% w·w−1), CWC D (0,43% w·w−1) e CWC B (0,37% w· w-1). Il punteggio analiticoGREEnness (AGREE) per il presente metodo analitico è stato stimato a 0,91, indicando le eccellenti caratteristiche più ecologiche del presente test RP-HPTLC. Questi risultati suggeriscono che il presente metodo analitico è altamente sensibile ed ecologicamente sostenibile per la quantificazione dell'HDQ nelle sue formulazioni commerciali.

Parole chiave:essere d'accordo;idrochinone; RP-HPTLC ecologicamente sostenibile; convalida

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1. Introduzione

Idrochinone(HDQ) è un composto naturale, presente in diverse formulazioni commerciali tonificanti per la pelle per il trattamento del melasma (una malattia causata dall'accumulo eccessivo di melanina nella pelle umana) [1,2]. È un potente agente depigmentante ed è usato come alternativa alla tirosinasi [3]. È uno degli agenti più comunemente usati nel trattamento dell'iperpigmentazione cutanea umana [4,5]. La concentrazione effettiva di HDQ nelle formulazioni tonificanti per la pelle in commercio varia dall'1,5 al 2.0 percento w·w−1[6]. L'elevata concentrazione di HDQ (superiore al 5% w·w−1) provoca irritazione locale e leucoderma alla pelle umana [5,6]. A causa dei suoi controversi effetti collaterali, molti paesi hanno vietato HDQ come asbiancamentoagente in formulazioni topiche [7]. Tuttavia, diverse indagini cliniche hanno suggerito vari effetti protettivi diHDQnella gestione di diversi disturbi cutanei iperpigmentari quali melasma, lentiggini, lentiggini, ecc. [8,9]. Considerando sia i vantaggi che i rischi di HDQ, è necessaria la sua analisi quantitativa in diverse formulazioni commerciali per la tonificazione della pelle.

Per la quantificazione dell'HDQ vengono utilizzati diversi saggi farmaceutici da soli o in combinazione con altrisbiancamentoagenti nelle creme sbiancanti commercializzate (CWC). È stata documentata una varietà di test basati sulla spettrometria ultravioletta (UV) per l'analisi quantitativa dell'HDQ nei prodotti sbiancanti commerciali (CWP) e nelle preparazioni farmaceutiche [10-13]. È stata documentata un'ampia gamma di saggi basati sulla cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) per la determinazione dell'HDQ insieme ai suoi eteri in una varietà di CWC e CWP [14-23]. Sono stati inoltre stabiliti vari metodi voltametrici per la determinazione simultanea dell'HDQ e dei suoi derivati ​​eterei nelle CWP [24–29]. Per ilHDQanalisi insieme ai suoi derivati ​​eterei e altrosbiancamentoagenti nelle CWP. Sono stati riportati anche alcuni nanosensori elettrochimici per l'analisi HDQ [34,35]. Un singolo metodo basato sulla cromatografia su strato sottile (HPTLC) ad alte prestazioni in fase normale è stato anche applicato per l'analisi qualitativa e quantitativa di HDQ in CWC dal nostro gruppo di ricerca [1].

Dopo un'analisi esauriente dei saggi riportati sull'analisi HDQ, è stato osservato che la sicurezza e la sostenibilità ecologica dei metodi farmaceutici in letteratura non sono state valutate o considerate per la valutazione. Inoltre, i saggi basati su HPTLC a fase inversa (RP-HPTLC) ecosostenibili non sono ancora stati utilizzati per la stima diHDQnei suoi CWC. I saggi basati su HPTLC ecologicamente sostenibili/verdi offrono molti vantaggi come semplicità, economia, basso costo operativo, tempi di analisi brevi, analisi parallela di più campioni, chiarezza di rilevamento e riduzione della tossicità ambientale rispetto all'HPLC e ad altri metodi analitici [36–39]. Di conseguenza, per questo studio è stato selezionato un metodo RP-HPTLC per la determinazione dell'HDQ. Diversi approcci vengono utilizzati per la valutazione del profilo di greenness dei saggi farmaceutici [38–43]. Tuttavia, solo l'approccio metrico analitico GREEnness (AGREE) applica tutti i 12 principi della chimica analitica verde (GAC) per la valutazione del verde [42].

L'approccio metrico AGREE è stato applicato per la valutazione del greenness del metodo presentRP-HPTLC [42]. Pertanto, il presente lavoro è stato svolto per sviluppare un metodo RP-HPTLC altamente sensibile ed ecologico/ecologicamente sostenibile per la stima diHDQin quattro diversi CWC. Il profilo di greenness dell'attuale metodo RP-HPTLC è stato ottenuto da ACCORDO: The Analytical Greenness Calculator. Il presente saggio analitico per l'analisi HDQ è stato convalidato secondo le linee guida del Consiglio internazionale per l'armonizzazione (ICH) Q2 (R1) [44].

2. Materiali e metodi

2.1. Materiali

Lo standard di riferimento di HDQ (purezza: 99 percento) è stato acquistato da Fluka Chemica (Darmstadt, Germania). Metanolo di grado HPLC (MeOH) ed etanolo (EtOH) sono stati acquistati da Alfa Aesar (Tewksbury, MA, USA). L'acqua di grado HPLC (H2O) è stata raccolta da un sistema di purificazione dell'acqua Milli-Q (E-Merck, Darmstadt, Germania). Altri solventi e reagenti usati erano di grado analitico. Quattro diversi CWC di HDQ sono stati ottenuti dal mercato farmaceutico di Al-Kharj, in Arabia Saudita, nel mese di giugno 2021. I CWC diHDQè stato conservato in un luogo fresco e buio a 22 ◦C prima dell'inizio degli esperimenti. I CWC sono stati conservati per circa un mese prima dell'inizio degli esperimenti.

2.2. Cromatografia

La quantificazione densitometrica RP-HPTLC dell'HDQ nel suo standard di riferimento e in quattro diversi CWC è stata condotta utilizzando uno strumento HPTLC (CAMAG, Muttenz, Svizzera). L'analisi quantitativa dell'HDQ è stata eseguita su lastre con retro in vetro da 10 × 20 cm2 pre-rivestite con gel di silice RP 60 lastre F254S (E-Merck, Darmstadt, Germania). I campioni sulle lastre TLC sono stati individuati come bande da 6 mm utilizzando un applicatore campionatore automatico 4 (ATS4) (CAMAG, Ginevra, Svizzera). L'applicatore di campioni è stato dotato di una siringa da microlitro CAMAG (Hamilton, Bonaduz, Svizzera). Il tasso di applicazione per l'analisi quantitativa diHDQè stato mantenuto costante a 150 nL s−1. Le lastre sono state sviluppate in una camera di sviluppo automatica 2 (CAMAG, Muttenz, Svizzera) a una distanza di 80 mm. Il sistema di solvente verde per l'analisi HDQ era EtOHH2O (60:40, v·v−1). La camera di sviluppo è stata precedentemente saturata con i vapori della fase mobile per 30 minuti a 22°C. L'HDQ è stato rilevato a 291 nm. Le dimensioni della fessura erano 4 × 0,45 mm2 e la velocità di scansione era di 20 mm s-1. Ogni esperimento è stato condotto in triplicato. Il software utilizzato per il trattamento dei dati è stato WinCATs (v. 1.4.3.6336, CAMAG, Muttenz, Svizzera).

2.3. Curva di calibrazione HDQ e preparazione dei campioni di controllo qualità

La quantità specificata di HDQ (10 mg) è stata dispensata in 100 mL di sistemi di solventi verdi EtOH-H2O(60:40, v·v−1) per ottenere la soluzione madre con la concentrazione di 100 µg mL−1. I diversi volumi di soluzioni madre sono stati ulteriormente diluiti utilizzando i sistemi EtOH-H2O (60:40, v·v−1) per ottenere concentrazioni di HDQ nell'intervallo di banda 20–2400 ng−1. Le soluzioni ottenute diHDQcontenenti diverse concentrazioni sono state individuate su piastre HPTLC. L'area del picco HPTLC per HDQ è stata ottenuta per ciascuna soluzione HDQ utilizzando il presente saggio farmaceutico. La curva di calibrazione di HDQ è stata generata tracciando le concentrazioni di HDQ rispetto alla sua area HPTLC. Inoltre, tre diversi campioni di controllo qualità (QC), come QC basso (LQC; 20 ng banda-1), QC medio (MQC; 600 ng banda-1) e campioni QC alto (HQC; 2400 ng banda-1) , sono stati ottenuti separatamente al fine di determinare diversi parametri di validazione per il presente saggio farmaceutico.

2.4. Elaborazione del campione per la determinazione dell'HDQ nei CWC

L'HDQ è stato estratto da quattro diversi CWC adottando la procedura riportata in letteratura [1]. Gli importi accuratamente pesati (5.{2}} g) di quattro diversi CWC, inclusi A, B, C e D, sono stati trasferiti separatamente nell'imbuto separatore. Ciascun CWC è stato agitato nell'imbuto separatore con MeOH (3 × 70 mL) per un periodo di 30 minuti a 22 °C. Gli estratti di MeOH da ciascun CWC sono stati combinati ed evaporati separatamente a secchezza a pressione ridotta utilizzando un evaporatore rotante sotto vuoto. I residui ottenuti sono stati ricostituiti con 10 mL di MeOH e conservati in frigorifero fino a ulteriore valutazione. I campioni ottenuti sono stati sottoposti ad analisi HDQ utilizzando il presente metodo analitico a 291 nm.

2.5. Parametri di convalida

Il presente test RP-HPTLC per l'analisi HDQ è stato convalidato per diversi parametri di validazione seguendo le linee guida ICH-Q2 (R1) [44]. IlHDQla linearità è stata valutata tracciando le concentrazioni di HDQ rispetto alla sua area di picco misurata. La linearità HDQ è stata valutata in 11 diversi campioni QC di 20, 40, 60, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 1200 e 2400 ng di banda−1 per il presente dosaggio farmaceutico. I parametri di efficienza del sistema per il presente metodo analitico sono stati valutati in termini di fattore di ritardo (Rf), fattore di asimmetria (As) e numero di piastre teoriche per metro (N m−1). Rf, As e N m-1 sono stati ottenuti a MCQ (600 ng banda-1), come riportato in precedenza in letteratura [45].

L'accuratezza per l'attuale metodo RP-HPTLC è stata determinata come percentuale di recupero. La percentuale di recupero è stata ottenuta a LQC (banda 20 ng −1), MQC (banda 600 ng −1) e HQC (banda 2400 ng −1) per l'attuale metodo analitico.

La precisione per il presente metodo analitico è stata valutata come precisione intra/interday. La precisione intraday è stata determinata dall'analisi di HDQ a LQC, MQC e HQC lo stesso giorno per il presente test analitico. La precisione interday è stata determinata dall'analisi di HDQ a LQC, MQC e HQC in tre giorni diversi per il saggio presentanalitico [44]. Ciascuna precisione è stata misurata sei volte (n=6).

La robustezza è stata valutata introducendo alcune piccole modifiche nei sistemi di solventi verdi per l'attuale metodo RP-HPTLC. Per la valutazione della robustezza, il sistema solvente originale EtOH H2O (60:40, v·v−1) è stato modificato in EtOH-H2O (62:38, v·v−1) ed EtOHH2O (58:42, v·v−1 ) sistemi di solventi e la risposta specifica HPTLC e i valori Rf sono stati registrati e interpretati [44].

La sensibilità per il presente metodo analitico è stata valutata come limiti di rilevamento (LOD) e quantificazione (LOQ) utilizzando un metodo di deviazione standard. Sono stati calcolati il ​​LOD e LOQ dell'HDQ per il presente metodo analitico, come riportato in letteratura [44,45].

La purezza/specificità del picco è stata valutata confrontando i valori Rf e gli spettri UV dell'HDQ nei CWC A, B, C e D con quelli dell'HDQ standard per il presente dosaggio farmaceutico.

2.6. Analisi quantitativa di HDQ nei CWC

I campioni ottenuti di CWC A, B, C e D sono stati individuati su piastre HPTLC e sono state annotate le loro risposte TLC. L'area di punta perHDQnei CWC è stato registrato. I contenuti HDQ nei CWC sono stati calcolati utilizzando la curva di calibrazione di HDQ per il metodo presentanalitico.

2.7. Valutazione del verde

Le caratteristiche di greenness per il presente metodo analitico sono state ottenute utilizzando l'approccio metrico AGREE [42]. I punteggi AGREE (0.0–1.0) del presente metodo analitico sono stati registrati utilizzando ACREE: The Analytical Greenness Calculator (versione0.5, Università di Gdansk of Technology, Danzica, Polonia, 2020).

3. Risultati e discussioni

3.1. Sviluppo del metodo

Sulla base dei metodi analitici della letteratura, è stato riscontrato che manca il metodo RP-HPTLC ecologicamente sostenibile in grado/verde per l'analisi dell'HDQ nei cosmetici commerciali. Pertanto, il presente studio è stato condotto per sviluppare il metodo rapido, altamente sensibile ed ecologicamente sostenibile Metodo RP-HPTLC per l'analisi HDQ in CWC.

Per l'analisi RP-HPTLC di HDQ, diverse proporzioni di EtOH e H2O, inclusi EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (60:40, v·v−1), EtOH-H2O (70:30, v·v−1), EtOH H2O (80:20, v·v−1) e EtOH-H2O (90:10, v·v−1), sono state valutate come le combinazioni di solventi verdi per il sviluppo di una banda affidabile per l'analisi HDQ. Le miscele di solventi sono state sviluppate in condizioni di saturazione della camera. Dai dati registrati è emerso che EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (70:30, v·v−1), EtOH-H2O (80:20, v·v− 1) e miscele di solventi verdi EtOH-H2O (90:10, v·v−1) offrivano uno scarso cromatogramma diHDQcon un valore As inaccettabile (As {{0}}.29). Tuttavia, la combinazione di solvente verde EtOH-H2O (60:40, v·v−1) ha dimostrato di offrire un cromatogramma ben risolto di HDQ atRf=0.83 ± 0,02 con un valore As accettabile (As {{ 12}}.03) (Figura 1). Pertanto, l'EtOH H2O (60:40, v·v−1) è stato ottimizzato come miscele di solventi verdi per l'analisi HDQ nei CWC. Le bande spettrali UV per l'attuale metodo RP-HPTLC sono state registrate densitometricamente e la risposta HPTLC massima è stata trovata a 291 nm per il metodo presentRP-HPTLC. Pertanto, l'intera analisi di HDQ è stata eseguita a 291 nm.

3.2. Parametri di convalida

Il presente test farmaceutico per la quantificazione dell'HDQ è stato convalidato per l'intervallo di linearità, i parametri di efficienza del sistema, l'accuratezza, la precisione, la robustezza, la sensibilità e la purezza/specificità del picco seguendo le raccomandazioni ICH [44]. I risultati dell'analisi di regressione dei minimi quadrati della curva di calibrazione di HDQ per il presente metodo RP-HPTLC sono presentati nella Tabella 1. IlHDQla curva di calibrazione era lineare nell'intervallo 20-2400 ng con un coefficiente di determinazione di 0,9997 per il presente metodo analitico. questi dati hanno suggerito una buona linearità tra la concentrazione di HDQ e la sua risposta.

I parametri di efficienza del sistema del presente metodo farmaceutico sono stati studiati all'MQC (600 ng band−1) e i risultati sono inclusi nella Tabella 2. I valori Rf, As e N m−1 per il presente metodo analitico è stato previsto come 0,83 ± 0,02, 1,03 ± 0,03 e 4987 ± 2,87, rispettivamente. Questi risultati hanno indicato che l'attuale metodo analitico era affidabile per l'analisi HDQ nei CWC.

I risultati per l'analisi di accuratezza per il presente metodo analitico sono elencati nella Tabella 3. La percentuale di recupero di HDQ per il presente metodo RP-HPTLC è stata determinata come 101,80 percento, 98,16 percento e 99,38 percento a LQC, MQC e HQC, rispettivamente . Gli alti valori dei recuperi percentuali indicavano l'accuratezza dell'attuale metodo RP-HPTLC per l'analisi HDQ nei CWC.

La precisione è stata determinata come percentuale del coefficiente di variazione ( CV percentuale) e i risultati sono mostrati nella Tabella 4. Le CV percentuali di HDQ per il presente metodo analitico sono state previste come 0.91, 0. 59 e 0,26 percento rispettivamente a LQC, MQC e HQC, per la precisione intraday. I CV percentuali di HDQ per l'attuale metodo RP-HPTLC sono stati previsti come 0,98,{{10}},69 e 0,32% a LQC, MQC e HQC, rispettivamente, per il precisione interday. I bassi valori della percentuale CV indicavano la precisione dell'attuale metodo RP-HPTLC per l'analisi HDQ nei CWC.

I risultati dell'analisi di robustezza per il presente metodo analitico sono mostrati nella Tabella 5. I CV percentuali per l'analisi di robustezza sono stati previsti come 0.59–{3}}.66 percento per il metodo presentanalitico. I valori Rf di HDQ sono stati trovati nell'intervallo 0.82–0.84 per il metodo presentanalitico. I piccoli cambiamenti nei valori Rf di HDQ e CV percentuali inferiori hanno mostrato la robustezza dell'attuale metodo analitico per la quantificazione dell'HDQ nei CWC.

La sensibilità per il presente metodo analitico è stata registrata come "LOD e LOQ" e i loro valori fisici sono mostrati nella Tabella 1. I "LOD e LOQ" per il metodo presentaanalitico sono stati previsti come 6,91 ± 0.23 e 2 0.73 ± 0,68 ng banda-1, rispettivamente, perHDQquantificazione. Questi valori fisici di "LOD e LOQ" per il presente metodo analitico indicavano la sensibilità per l'analisi HDQ nei CWC.

La purezza/specificità del picco per il presente metodo analitico è stata valutata confrontando gli spettri UV sovrapposti dell'HDQ in quattro diversi CWC con quelli dell'HDQ standard. Gli spettri UV sovrapposti di HDQ standard e HDQ in quattro diversi CWC sono mostrati nella Figura 2. La risposta cromatografica più alta per HDQ in HDQ standard e CWC studiati è stata osservata a 291 nm per il presente metodo analitico. Gli spettri UV identici, i valori Rf e la lunghezza d'onda dell'HDQ in HDQ e CWC standard hanno indicato la purezza/specificità del picco per il presente metodo analitico.

3.3. Analisi dei contenuti HDQ nei CWC

L'applicabilità del presente saggio analitico è stata verificata nella stima quantitativa dell'HDQ nei CWC. Il cromatogramma diHDQda CWC è stato identificato confrontando il suo spot TLC a Rf {{0}}.83 ± 0.02 con quelli di HDQ standard per il presente metodo analitico. I cromatogrammi dell'HDQ nei CWC A e B per il presente saggio analitico sono riassunti nella Figura 3. I cromatogrammi HPTLC dell'HDQ nei CWC erano identici a quelli dell'HDQ puro. Alcuni picchi extra sono comparsi anche nei cromatogrammi dei CWC, che potrebbero essere associati a diversi eccipienti presenti nei CWC. Il metodo HPTLC ecologicamente sostenibile era selettivo per l'analisi HDQ a Rf=0.83 senza interferenze dagli altri ingredienti dei CWC. Il valore Rf (0.83) di HDQ nei CWC è risultato identico a quello di HDQ standard ({{20}}.83), indicando che non c'era interazione tra HDQ e Ingredienti CWC. Pertanto, non vi è stata alcuna influenza degli ingredienti della formulazione sulla qualità del cromatogramma HDQ, sul LOD e sull'efficienza del presente metodo HPTLC di analisi HDQ. La presenza di picchi extra nei cromatogrammi dei CWC indicava che l'attuale metodo RP-HPTLC era affidabile per la stima dell'HDQ in presenza di ingredienti della formulazione. Il contenuto di HDQ di CWC è stato determinato dalla curva di calibrazione di HDQ e i risultati sono inclusi nella tabella 6. La tabella 6 riassume anche la quantità etichettata di HDQ e i suoi ingredienti di formulazione. I contenuti dell'HDQ erano più alti in CWC A (1,23% w·w−1) seguito da CWC C (0.81% w·w−1), CWC D (0.43% w·w −1) e CWC B (0,37% w·w−1). Il contenuto registrato di HDQ era molto inferiore alla quantità etichettata (2, 00 percento w·w-1) di HDQ nei CWC studiati. I contenuti HDQ in due diversi CWC (A e B) sono stati registrati rispettivamente come 0,69% w·w−1 e 0,34% w·w−1, utilizzando il metodo HPTLC in fase normale in letteratura [1]. Il contenuto riportato di HDQ era anche molto inferiore alla quantità etichettata (2, 00 percento w·w-1) di HDQ in letteratura [1]. Diversi CWC o CWP sono commercializzati con la pretesa di essere completamente naturali. Tuttavia, è comune trovare alcune sostanze chimiche sintetiche come adulteranti con gli stessi effetti che si trovano in tali CWC o CWP come frode. La quantità di HDQ registrata in questo lavoro e quella registrata in letteratura indicava che i CWC studiati hanno una bassa quantità di HDQ e non corrispondevano alle affermazioni dell'etichetta [1]. Pertanto, si prevede che i CWC studiati contengano alcune sostanze chimiche sintetiche come adulteranti. Nel complesso, il presente saggio analitico può essere utilizzato per l'analisi HDQ in preparazioni cosmetiche e farmaceutiche.

3.4. Valutazione del verde

Diversi metodi sono utilizzati per la valutazione della greenness dei test farmaceutici [38–43]. Tuttavia, solo l'approccio ACCORDO utilizza tutti i 12 principi del GAC per la valutazione del verde [42]. Pertanto, il profilo di verde del presente metodo analitico è stato ottenuto utilizzando il calcolatore AGREE. Il punteggio AGREE previsto che utilizza 12 diversi principi di GAC per il presente test analitico è presentato nella Figura 4. Il punteggio AGREE per diversi principi di GAC è stato registrato come segue:Trattamento del campione: 0.61Posizionamento del dispositivo analitico: 1.{{ 9}}Passaggi per la preparazione del campione: 1.00Grado di automazione: 0.80Derivatizzazione: 1.00Quantità di rifiuti: 1.{{17} }Produttività dell'analisi: 1.00Consumo di energia: 1.00Trattamento del campione: 0,51Fonte del reagente: 1.00Tossicità dei solventi: 1.00 Sicurezza dell'operatore: 1.00

Il punteggio complessivo ACCORDO per il presente metodo analitico è stato registrato come 0.91, indicando l'eccellente metodo analitico verde perHDQquantificazione.

4. Conclusione

Il metodo di densitometria RP-HPTLC è stato sviluppato per l'analisi HDQ in quattro diversi CWC di HDQ. Il presente test RP-HPTLC è stato convalidato per diversi parametri di convalida. Il presente metodo analitico era altamente sensibile, rapido ed ecologicamente sostenibile perHDQanalisi. Il punteggio AGREE per il presente metodo analitico ha suggerito un eccellente test analitico per la quantificazione dell'HDQ. L'attuale RIl metodo P-HPTLC era adatto per l'analisi HDQ in quattro diversi CWC. Questi risultati hanno indicato che il presente saggio analitico può essere applicato per l'analisi HDQ in diverse preparazioni cosmetiche e farmaceutiche.