Il microRNA derivato dall'esosoma del latte-2478 sopprime la melanogenesi attraverso il percorso Akt-GSK3

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In Seon Bae e Sang Hoon Kim

Astratto:Gli esosomi partecipano alla comunicazione intercellulare trasferendo molecole dal donatore alle cellule riceventi. Gli esosomi si trovano in vari fluidi corporei, inclusi sangue, urina, liquido cerebrospinale e latte. Gli esosomi del latte contengono molte molecole di microRNA endogene. I microRNA sono piccoli RNA non codificanti e hanno ruoli importanti nei processi biologici. Le funzioni biologiche specifiche degli esosomi del latte non sono ben comprese. In questo studio, abbiamo studiato gli effetti dimilkesosomisulla produzione di melanina nelle cellule di melanoma e nei melanociti. L'abbiamo trovatogli esosomi del latte sono diminuiticontenuto di melanina, attività della tirosinasi ed espressione di geni correlati alla melanogenesi, cellule di melanoma e melanociti. Il miR-2478 specifico del bovino negli esosomi ha inibito la produzione di melanina. Abbiamo scoperto che Rap1a è un gene bersaglio diretto del miR-2478 nelle cellule di melanoma e nei melanociti. La sovraespressione di MiR-2478diminuiva l'espressione di Rap1a, il che portava a una produzione di melanina sottoregolata e all'espressione di geni correlati alla melanogenesi. L'inibizione dell'espressione di Rap1a è diminuitamelanogenesiattraverso la via del segnale Akt-GSK3. Questi risultati supportano il ruolo di miR-2478 derivato dai milkexosomes come regolatore dimelanogenesiattraverso il targeting diretto di Rap1a. Questi risultati mostrano che gli esosomi del latte potrebbero essere utili ingredienti cosmeceutici per miglioraresbiancamento.

Parole chiave: melanogenesi;esosoma del latte; miR-2478; Rap1a

erba cistancheè un ingrediente che inibisce la melanina

1. Introduzione

Cosmeceutico è una parola composta che combina cosmetici e farmaci e si riferisce a cosmetici con ingredienti funzionali che hanno effetti medici [1]. In passato, la pelle veniva migliorata attraverso procedure dermatologiche, ma recentemente l'interesse per i cosmeceutici è stato accresciuto a causa del desiderio dei consumatori di ottenere questi effetti attraverso i cosmetici. Negli ultimi anni anche l'industria cosmetica ha mostrato un crescente interesse per l'uso di nuovi ingredienti cosmeceutici [ 2]. I cosmetici funzionali includono prodotti che aiutano a sbiancare la pelle prevenendo la deposizione di melanina sulla pelle.

La melanina, un elemento importante che determina il colore della pelle e dei capelli, protegge la pelle dai raggi ultravioletti [3]. Tuttavia, un'eccessiva formazione di melanina provoca un colorito non uniforme della pelle, ad esempio macchie e lentiggini [4]. Il fattore di trascrizione della microftalmia (MITF) è un importante regolatore dello sviluppo dei melanociti. La tirosinasi (TYR) è l'enzima più importante per la sintesi della melanina. Il processo di sintesi della melanina è indotto dall'attivazione del TYR tramite MITF, che è un importante enzima coinvolto nella fase iniziale del processo di sintesi della melanina e utilizza la forma L della tirosina o DOPA come substrato per formare la melanina [5].

I microRNA (miR) sono brevi RNA non codificanti che partecipano a molti processi biologici controllando l'espressione genica post-trascrizionale [6]. Gli studi hanno anche scoperto il controllo della biosintesi della melanina da parte dei microRNA. Ad esempio, è stato riportato che miR-143-5p prende di mira il gene Tak1 e riduce l'espressione di MITF, inibendo così la sintesi della melanina [7]. MiR-125b, un regolatore negativo dimelanogenesi, è stato dimostrato che regola il gene della pigmentazione SH3BP4 [8] e miR-675 negli esosomi secreti dai cheratinociti inibiscemelanogenesiprendendo di mira MITF [9].

Gli esosomi sono vescicole delimitate da membrana di dimensioni 30-200 nm e contengono DNA, RNA e peptidi [10]. I componenti interni degli esosomi possono trasmettere in sicurezza informazioni a cellule adiacenti o remote senza essere degradati dagli enzimi nei fluidi biologici, influenzando così il microambiente attorno a varie cellule [11].Esosomi del lattesono vescicole destracellulari derivate dal latte che sono stabili nei processi digestivi umani [12]. Gli esosomi estratti dal latte bovino contengono non solo diverse proteine ​​come caseina e lattoglobulina, ma anche microRNA, che fungono da carico [13-15]. Il latte bovino contiene microRNA immuno-correlati come miR-15b, miR-27b, miR-34a e miR-10. Questi microRNA sono particolarmente abbondanti nel colostro [16].

Alcuni studi hanno dimostrato che i componenti del latte inibisconomelanogenesinei melanociti; per esempio, proteine ​​come -lattoglobulina e κ-caseina nel latte regolano la melanogenesi [17,18]. È stato scoperto che il supernatante del Lactobacillus helveticus NS8-latte fermentato inibisce i danni dei raggi UV e l'iperpigmentazione della pelle [19]. Tuttavia, non esiste ancora alcuna relazione sul fatto che i microRNA nel latte bovino siano coinvolti nella pellesbiancamento, sebbene esistano 79 microRNA inesosomi del latte[13]. Pertanto, in questo studio, abbiamo studiato se gli esosomi del latte contenenti microRNA inibiscono la sintesi di melanina nelle cellule di melanoma e melanociti di topo e umano.

2. Materiali e metodi

2.1. Coltura cellulare

Le cellule di melanoma di topo B16F10 sono state coltivate nel mezzo Eagle modificato di Dulbecco (DMEM, Hyclone, Logan, UT, USA). Cellule di melanoma umano MNT-1 sono state coltivate in Medium Essential Medium (MEM, Hyclone). Tutti i terreni sono stati integrati con il 10% di siero fetale bovino (FBS, Hyclone, USA) e l'1% di una soluzione di penicillina-streptomicina. I melanociti epidermici umani normali (NHEM, PromoCell, Heidelberg, Germania) al passaggio numero 5 o 6 sono stati mantenuti in un mezzo di crescita dei melanociti (PromoCell). Queste cellule sono state incubate a 37 ◦C in una condizione di atmosfera umidificata contenente il 5% di CO2.

2.2. Purificazione degli esosomi

Il latte commerciale (1 ml) è stato centrifugato a 2000× g per 10 min, quindi il supernatante è stato centrifugato a 10,000 × g per 10 min. Il supernatante del latte è stato fatto passare attraverso un filtro da 0,45 µm e quindi un filtro da 0,2 µm. La soluzione risultante (300 µL) è stata miscelata con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) e 300 µL della soluzione di precipitazione dell'esosoma Exoquick (Systems Biosciences, Palo Alto, CA, USA) e incubata per 30 minuti. La miscela è stata centrifugata a 10.000 × g per 30 minuti per ottenere un pellet di esosoma, che è stato successivamente risospeso in PBS. La distribuzione dimensionale degli esosomi è stata determinata su uno Zetasizer Nano ZS 90 (Malvern Instruments, Almelo, Francia). Gli esosomi sono stati conservati a -80 ◦C per un ulteriore utilizzo.

2.3. Microscopia crioelettronica

Un'aliquota di 3 µL di sospensione di esosomi fresca è stata adsorbita su una griglia perforata rivestita di carbonio con scarica a bagliore (2/2-3 C C-flat; Protochips, Morrisville, NC, USA), che è stata poi asciugata per 3 s a 4 ◦C e congelato a immersione utilizzando un Vitrobot Mark IV (Thermo FisherScientific, Lafayette, CO, USA). Le griglie sono state conservate in azoto liquido, quindi trasferite in un portacampioni criogenico Gatan 626 (Gatan, Pleasanton, CA, USA). I campioni sono stati ripresi con un ingrandimento nominale di 29,000 × in un microscopio crioelettronico (FEI Tecnai F20 TEM,FEI, Hillsboro, OR, USA), dotato di una pistola a emissione di campo standard (s-FEG) e una telecamera K2Summit (Gatan) ad una tensione di accelerazione di 200 kV.

2.4. Test di vitalità cellulare (test WST)

Le cellule di melanoma (B16F10, MNT-1) e i melanociti umani (NHEM) sono stati seminati a 4 × 103 cellule/pozzetto in 96-piastre a pozzetti e trattati conesosomi del latte(20 e 50 µg/mL) o un mimic di microRNA (oligonucleotidi a doppio filamento di RNA) per ogni esperimento. Nei momenti indicati, la vitalità cellulare è stata misurata utilizzando il kit di analisi della vitalità cellulare avanzata EZ-CyTox (Daeil Lab Service, Seoul, Corea) secondo le istruzioni del produttore. L'assorbanza è stata misurata a 450 nm su uno spettrofotometro per micropiastre Vmax (Molecular Devices, San Jose, CA, USA).

2.5. Misurazione del contenuto di melanina

Sono state trattate cellule di melanoma e melanocitiesosomi del latte(20 e 50 µg/mL) per 48 h. Dopo aver lavato due volte con PBS ghiacciato, le cellule sono state centrifugate a 2500 × g per 10 minuti. I pellet cellulari sono stati risospesi a 90°C per 30 minuti in NaOH 1N contenente il 10% di dimetilsolfossido. Il contenuto totale di melanina è stato misurato con lo spettrofotometro a micropiastre Vmax (dispositivi molecolari) a 405 nm.

2.6. Saggio di attività della tirosinasi

Cellule di melanoma e melanociti sono stati incubati conesosomi del latteper 48 ore. Le cellule sono state lavate due volte con PBS e lisate con PBS contenente l'1% di Triton X-100 e 0.1 mMfenilmetansolfonil fluoruro. Dopo la centrifugazione, il supernatante è stato raccolto e trasferito in una 96-piastra a pozzetti. Dopo l'aggiunta di 0.1 ML-3,4-diidrossifenilalanina, i campioni sono stati incubati a 37 ◦C per 1 ora. L'attività della tirosinasi è stata misurata sulla base dell'assorbanza a 475 nm utilizzando lo spettrofotometro a micropiastre (Molecular Devices).

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2.7. Tessuti della pelle umana

Gli equivalenti epidermici contenenti melanociti (MelanoDerm, MEL-300B) sono stati ottenuti da MatTek (Ashland, MA, USA) e sono stati mantenuti nel mezzo EPI-100-NMM-113-.Esosomi del lattesono stati applicati ai tessuti MelanoDerm nei giorni 1, 3, 7, 9 e 12. PBS è stato utilizzato come controllo negativo. I tessuti sono stati fotografati nei giorni 3, 7, 9, 12 e 14. La pigmentazione è stata misurata confrontando i cambiamenti nel valore L (Adobe PhotoshopCC 2015). Il contenuto di melanina nel tessuto cutaneo umano è stato misurato il giorno 14 mediante un test di solvablemelanina. In breve, i tessuti MelanoDerm sono stati solubilizzati utilizzando Solvable (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) e incubati per una notte a 60 ◦C. I campioni sono stati agitati su vortex e quindi centrifugati a 16.500 × g per 5 minuti. Il supernatante è stato trasferito nei pozzetti di una 96-piastra a pozzetti e letto a 490 nm da uno spettrofotometro.

3. Risultati

3.1. Caratterizzazione degli esosomi isolati dal latte

Per studiare le caratteristiche degli esosomi estratti dal latte di vacca, abbiamo prima misurato le dimensioni degli esosomi mediante diffusione dinamica della luce. Di conseguenza, è stato riscontrato che gli esosomi estratti dal latte avevano un diametro di 80-190 nm (Figura 1A). Perlatteesosomapurificazione, la miscela surnatante Exoquick-latte è stata centrifugata per ottenere un pellet di esosoma di latte. L'espressione di CD9, TSG101 e HSP70 come marcatori esosomiali è stata rilevata nei pellet, ma queste proteine ​​non erano presenti nel surnatante (Figura 1A). Inoltre, la morfologia sferica e le dimensioni degli esosomi sono state confermate dalla microscopia crioelettronica (Figura 1). 1B). È stato scoperto che gli esosomi hanno una forma rotonda fino a 200 nm di diametro. Successivamente, abbiamo studiato se gli esosomi estratti dal latte fossero assorbiti dalle cellule. Le cellule B16F10 di topo sono state incubate conesosomi del latteetichettato con colorante fluorescente telipofilo PKH26. Di conseguenza, abbiamo osservato che gli esosomi etichettati erano presenti all'interno delle cellule (Figura S1).

3.2. Attività della tirosinasi e produzione di melanina soppresse dagli esosomi del latte nelle cellule B16F10

Successivamente, abbiamo esaminato l'effetto degli esosomi estratti sulla vitalità cellulare. Come illustrato nella Figura 2A, abbiamo rivelato che non vi era alcuna differenza significativa nella vitalità cellulare, indipendentemente dalla concentrazione dell'esosoma.

Per studiare le possibili cellule della pellesbiancamentoeffetto diesosomi del latte, le cellule sono state trattate con esosomi del latte. Abbiamo scoperto che l'attività della tirosinasi nelle cellule esposte ai milkexosomes a concentrazioni di 20 o 50 µ g/mL è diminuita rispettivamente del 43% e del 59% (Figura 2B). Poiché la riduzione dell'attività dell'enzima tirosinasi può inibire la biosintesi della melanina, il contenuto di melanina è stato misurato dopo il trattamento con esosomi del latte. Abbiamo notato l'inibizione della sintesi della melanina nelle cellule esposte aesosomi del latte(20 o 50 µg/mL) rispettivamente del 45% e del 55% (Figura 2C). Inoltre, l'espressione dell'mRNA di MITF è diminuita all'aumentare della concentrazione di esosomi del latte. Il livello di mRNA di MITF è diminuito del 59 percento nelle cellule trattate con 20 µ g/mL di esosomi e dell'84 percento nelle cellule trattate con 50 µ g/mL di esosomi, rispettivamente (Figura 2D). Anche l'espressione dell'mRNA della tirosinasi (TYR) è diminuita del 49 percento e del 76 percento nelle cellule esposte a queste concentrazioni di esosomi (Figura 2D). Anche i livelli di proteine ​​​​MITF e tirosinasi sono diminuiti con la concentrazione del latteesosomiaumentato (Figura 2E). Questi risultati suggeriscono che gli esosomi del latte inibiscono la melanogenesi nelle cellule B16F10 di topo.

3.3. Il miR bovino specifico-2478 degli esosomi del latte sopprime la melanogenesi

Per determinare se miR-2478 deriva daesosomi del latteinfluenzare direttamente la melanogenesi, l'inibitore del miR-2478 è stato trasfettato nelle cellule esposte ai milkexosomes (50 µg/mL). In presenza di esosomi del latte, le cellule B16F10 trasfettate con l'inibitore themiR-2478 hanno mostrato un'attività della tirosinasi significativamente più alta rispetto a quella del controllo (Figura 4A). Il contenuto di melanina era anche più alto nelle cellule trattate con inibitori miR-2478 rispetto alle cellule di controllo (Figura 4B). L'espressione dell'mRNA di MITF era –2.{10}}più alta nelle cellule trattate con l'inibitore di miR 2478 rispetto alle cellule di controllo e l'espressione dell'mRNA di TYR era –2-più alta quando il miR-2478 era inibito (Figura 4C ). Anche i livelli di proteine ​​MITF e TYR sono stati recuperati nelle cellule esposteesosomi del lattedopo che queste cellule sono state trasfettate con l'inibitore miR-2478 (Figura 4D). Questi risultati hanno suggerito che il miR-2478 derivato dagli esosomi del latte sopprimeva direttamente la melanogenesi nelle cellule di melanoma del topo.

3.4. Gli esosomi del latte sopprimono la melanogenesi attraverso il percorso Akt-GSK3

Successivamente, abbiamo esaminato comeesosomi del latteregolaremelanogenesiper identificare la via interessata nelle cellule di melanoma. Sebbene non sia noto se Rap1a controlli direttamente la melanogenesi, è stato riportato che Rap1a inibisce le cellule cancerose della fosforilazione di Akt [20]. Sulla base di queste informazioni, abbiamo studiato se Rap1a modula il percorso di Akt da promuovere.

In Akt relativimelanogenesipathway, attivato Akt induce la fosforilazione di Gsk3 a Ser9 e quindi lo inattiva; questo cambiamento inibisce l'attività trascrizionale di MITF e sottoregola la tirosinasi [21,22]. Nel presente studio, abbiamo valutato l'espressione di Akt e GSK3 in cellule trattate con siRNA Rap1a. In queste cellule, l'attivazione della fosforilazione di Akt è aumentata e anche la quantità di pGSK3 è aumentata (Figura 7A). GSK3 è stato inattivato mediante attivazione di Akt in maniera dipendente dalla concentrazione nelle cellule trattate con 20 o 50 µg/mL diesosomi del latte(Figura 7B). I livelli delle proteine ​​Akt e GSK3 nelle cellule trattate con il miR-2478mimic erano coerenti con i risultati di cui sopra (Figura 7C). Successivamente, abbiamo testato se il miR-2478dagli esosomi del latte influenza il percorso Akt-GSK3. In presenza di esosomi del latte, la fosforilazione delle proteine ​​Akt e GSK3 era inferiore nelle cellule trattate con l'inibitore themiR-2478 (Figura 7D). Inoltre, il trattamento con l'inibitore dell'AKT GSK690693 ha aumentato l'espressione dei geni associati amelanogenesinelle cellule trattate con esosomi del latte. (Figura 7E). Questi risultati hanno fatto sì che miR-2478 inesosomi del lattedownregola Rap1a e sopprime la melanogenesi attraverso il percorso Akt-GSK3.

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3.8. Gli esosomi del latte hanno inibito la melanogenesi nelle cellule di melanoma umano, nei melanociti e nel tessuto melanodermico

Dato cheesosomi del latteinibitomelanogenesinelle cellule di topo, abbiamo quindi determinato se gli esosomi del latte fossero ugualmente efficaci nelle cellule umane. In primo luogo, è stata esaminata la vitalità delle cellule di melanoma umano MNT-1 e dei melanociti umani NHEM dopo l'incubazione con 20 o 50 ug/mL di esosomi del latte. Come presentato nella Figura 8A, non vi era alcuna differenza di fattibilità. L'attività della tirosinasi è stata inibita rispettivamente del 43% e dell'85% nelle cellule MNT-1 esposte a 20 ug/mL o 50 ug/mL di esosomi del latte (Figura 8B). Anche la NHEM è stata ridotta rispettivamente del 34% e del 66% attraverso il trattamento con 20 ug/mL o 50 ug/mL di esosomi del latte (Figura 8B). Inoltre, il contenuto di melanina è stato misurato nelle cellule MNT-1 e NHEM esposto agli esosomi del latte. Di conseguenza, la sintesi della melanina nelle cellule MNT-1 esposte a 20 ug/mL o 50 ug/mL diesosomi del latteè stato inibito rispettivamente del 37% e del 58% e nelle cellule NHEM, il trattamento con esosoma del latte ha ostacolato la sintesi di melanina rispettivamente del 36% e del 62% (Figura 8C). Inoltre, l'effetto schiarente della pelleesosomi del latteè stato ulteriormente confermato utilizzando tessuti cutanei umani. Dopo il trattamento con esosomi del latte nei tessuti umani, parentesbiancamento gli effetti sono stati osservati nei giorni 3, 9, 12 e 14. Di conseguenza, abbiamo scoperto che il colore della pelle nei tessuti esposti all'esosoma del latte sembrava essere più luminoso di quello dei tessuti di controllo (Figura 8D). Il grado di pigmentazione è stato calcolato come valore L, che è un valore che rappresenta la luminosità. La pigmentazione è progredita più lentamente nei tessuti cutanei trattati con esosoma del latte rispetto ai tessuti cutanei di controllo (Figura 8D). Il gruppo sperimentale trattato conesosomi del latteha mostrato una dimensione delle particelle di melanina più piccola e una bassa quantità di pigmento di melanina rispetto al gruppo di controllo (Figura 8E). Come risultato della misurazione del contenuto di melanina dopo 14 giorni di latte, gli esosomi hanno inibito la sintesi di melanina nei tessuti umani (Figura 8F). Pertanto, abbiamo concluso che i milkexosomes inibisconomelanogenesinelle cellule e nei tessuti umani.

4. Discussione

Studi sulla regolazione degli esosomimelanogenesihanno riportato che gli esosomi derivati ​​dai cheratinociti hanno un effetto sbiancante. I melanociti ei cheratinociti circostanti sono funzionalmente collegati per formare unità di melanina nell'epidermide cutanea [23,24]. I fattori solubili derivati ​​dai cheratinociti regolano la melanogenesi dei melanociti vicini. Exosomessecreted da cheratinociti normali promuovono la melanogenesi sovraregolando l'espressione dimelanogenesiproteine ​​correlate [23–25]. Inoltre, in asbiancamentostudio utilizzando esosomi estratti da cellule, è stato recentemente riportato che gli esosomi estratti da cellule staminali/stromali derivate dal tessuto adiposo umano hanno mostrato un'efficacia schiarente della pelle nelle cellule di melanoma del topo [26]. C'è stato anche un rapporto secondo cui gli esosomi estratti dalle piante hanno un effetto sbiancante. Le vescicole extracellulari estratte dalle foglie e dai gambi delle piante di D. morbifera hanno mostrato effetti anti-melanogenici sulle cellule di melanoma del topo e sulla pelle umana sana [27]. Nel nostro studio, è stato studiato l'effetto sbiancante degli esosomi derivati ​​dal latte.

Rispetto agli esosomi estratti dal plasma sanguigno o dal fluido di coltura, gli esosomi derivati ​​dal latte hanno il vantaggio non solo di avere grandi quantità di esosomi che possono essere estratti per unità di volume, ma anche di un prezzo basso [26,27]. Perchéesosomi del lattehanno una composizione achimica simile a quella delle membrane cellulari, mostrano immunogenicità e citotossicità inferiori e hanno un'elevata biocompatibilità [28,29]. Recentemente, quando gli esosomi del latte sono stati somministrati a topi modello di colite indotta da DSS (destrano solfato di sodio sale), l'espressione delle citochine proinfiammatorie IL-6 e TNF è diminuita rispetto al gruppo di controllo, riducendo così l'infiammazione e migliorando l'enterite necrotizzante [30, 31]. Inoltre, l'ingestione di esosomi del latte in un modello murino di osteoporosi ha migliorato l'artrite aumentando la densità ossea e riducendo le citochine pro-infiammatorie [32,33]. Finora, gli effetti degli esosomi del latte si sono concentrati sui fenomeni immunologici che riducono le citochine proinfiammatorie e sullo sviluppo osseo, come l'attenuazione dell'enterite e il miglioramento dell'osteoporosi. In questo studio, oltre al metodo di assunzioneesosomi del latte, è stato confermato che quando applicato sulla pelle, era efficace sulla pellesbiancamento. Ciò indica che può essere applicato per il trattamento di varie malattie migliorando l'attività fisiologica utilizzando gli esosomi del latte in futuro.

Anche se questo studio ha suggerito cheesosomi del latteinibiremelanogenesi, è già noto che le proteine ​​del siero di latte come caseina, -lattoglobulina e -lattoalbumina hanno un effetto sbiancante. -lattoglobulina diminuisce l'attività della tirosinasi nei melanociti umani [18], e la k-caseina inibisce la melanogenesi nelle cellule di melanoma B16 del topo [17]. È interessante notare che molti di questi componenti sono presenti anche negli esosomi del latte. Secondo i proteomeresultati degli esosomi del latte, caseina, -lattoglobulina e -lattoalbumina sono distribuite negli esosomi [15,34,35]. Gli esosomi del latte contengono microRNA e proteine. Come risultato di un microarray miRNA che utilizza esosomi del latte di Izumi e colleghi, miR-2478, miR-1777b,miR-1777a, let-7b e miR{{16 }} erano altamente distribuiti negli esosomi del latte [13]. In questo studio, con l'eccezione di miR-2478, tra questi microRNA, miR-1777b, miR-1777a,let-7b e miR-1224 hanno mostrato nessuna differenza nell'attività della tirosinasi rispetto al gruppo di controllo (Figura S2). miR-2478 era più abbondante inesosomi del lattee diminuita attività della tirosinasi. Tuttavia, l'espressione dei geni MITF e TYR correlati allo sbiancamento è diminuita maggiormente nelle cellule trattateesosomi del latteche nelle cellule trattate con il solo miR-2478mimico. Questi risultati indicano che diversi componenti, inclusi i microRNA nei milkexosomes, sono coinvolti nelsbiancamentoazione.

La maggior parte dei microRNA negli esosomi del latte esercitano funzioni biologiche inibendo l'espressione dei geni bersaglio nelle cellule riceventi. In questo studio, miR-2478 ha anche inibito la sintesi di melanina prendendo di mira Rap1a come gene bersaglio. Sebbene non fossero microRNA derivati ​​dal latte, sono già stati segnalati microRNA che controllano l'espressione dei geni correlati allo sbiancamento. Quando il miR umano-27a{5}}p mimic è stato applicato ai melanociti di topo, ha inibito l'espressione di Wnt3a e quindi ha inibito la sintesi di melanina [36], e il miR ectopico-218 ha inibito l'attività di TYR riducendo l'espressione di MITF nei melanociti del melanoma murino [37]. miR-203 promuovemelanogenesiattraverso il percorso CREB1/MITF/Rab27a, prendendo di mira Kif5b nel melanoma [38]. Ci sono 79 microRNA negli esosomi del latte

microRNA dentroesosomi del lattederivato da mucche [13]. Pertanto, sono necessarie ulteriori ricerche sull'attività fisiologica degli esosomi del latte.

5. Conclusioni

I nostri risultati lo suggerisconoesosomi del lattesono candidati per agenti anti-melanogenici che riducono la pigmentazione inibendo l'espressione dei geni correlati alla melanina (Figura 10). Nelle cellule di melanoma e nei melanociti, gli esosomi del latte hanno mostrato l'inibizione del TYR e la riduzione del contenuto di melanina rispetto al controllo negativo. Inoltre, questi effetti sono stati mediati da miR-2478 daesosomi del latte. Pertanto, gli esosomi del latte possono essere utili per lo sviluppo del funzionalesbiancamentocosmetici a bassa citotossicità.

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