Determinazione HPLC dell'echinacoside in Cistanche Cistanche

Determinazione HPLC dell'echinacoside in Cistanche Cistanche

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Obbiettivo:HPLC ha determinato la quantità diechinacosideinCistanchemacinato allo stato di azoto liquido e allo stato naturalmente essiccato all'aria, confrontandolo incistanche selvaggeeCistanche coltivate artificialmente.

Metodi:è stato utilizzato il sistema lc{{0}}a HPLC (Shimadzu, Giappone). La colonna era YMC inertsil ods-sp (4,6 mm × 150 mm, 5μm; YMC Co Ltd, Giappone); Fase mobile: acido formico acetonitrile-metanolo-1 per cento (10:15:75); Lunghezza d'onda di rilevamento 334 nm; Portata 0,7 mg · ml-1. Temperatura della colonna 30 gradi C.

Risultati:diverse condizioni di trattamento hanno avuto un effetto molto evidente sul contenuto di echinacoside, con livelli generalmente più elevati di echinacoside nei terreni di Cistanche sotto azoto liquido rispetto a quelli in condizioni naturali essiccate all'aria; Il contenuto di principio attivo di selvaggioCistancheera molto superiore a quella della cultura artificiale.

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Cistanche è una specie in via di estinzione, una pianta parassitaria che abita le radici del Clostridium, Salix rubrum. In Cina, Cistanche è distribuito principalmente nella Mongolia Interna, Ningxia, Gansu e Xinjiang, con un'eccellente reputazione per il "ginseng del deserto", che è di grande valore medicinale. I suoi principali ingredienti medicinali sono i glicosidi feniletanolici, che possono essere suddivisi in echinacoside, cohoside fogliare, Cistanche e altri a seconda dei loro sostituenti. Tra questi, l'echinacoside ha migliorato la funzione sessuale, gli effetti antiossidanti e di scavenging dei radicali liberi, ma ha anche alcuni effetti anti-apoptotici. Dagli anni '80, la tecnologia HPLC, che fornisce un metodo semplice e rapido per la separazione dei glicosidi feniletanolici, è stata ampiamente utilizzata nella separazione dei prodotti naturali. È stato scelto un metodo HPLC per analizzare il contenuto di Cistanche, il principale costituente attivo delle Cistanche selvatiche e coltivate artificialmente, in diversi periodi di crescita, fornendo una base scientifica per lo sviluppo razionale e l'utilizzo delle Cistanche e per l'efficace valutazione della sua qualità.

Strumenti e reagenti

Shimadzu, Giappone lc-20un apparato HPLC, lc-20at tandem pompa a doppio pistone, cto-20un forno a colonna, spda-20un rivelatore UV Vis a doppia lunghezza d'onda; Pulitore ad ultrasuoni Kunshan kq-100; Acetonitrile (cromatograficamente puro, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Metanolo (cromatograficamente puro, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); acido formico (cromatograficamente puro, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); acqua distillata

Controllo: echineoside, contenuto Maggiore o uguale al 98,43 percento (Shanghai Yuanye Bio Technology Co., Ltd.).

Cinque campioni di Cistanche: piantati artificialmente per un anno con i seguenti Cistanche, piantati artificialmente per Cistanche, Cistanche essiccati artificialmente, Cistanche selvatici e piantati artificialmente per più di tre anni con Cistanche.

2 metodi e risultati

2.1 determinazione delle condizioni cromatografiche

Per separare il picco dell'echineoside misurato nel cromatogramma LC da altre sostanze, nonché per controllare la pressione della pompa e la tabella dei tempi entro un intervallo opportuno, è stata effettuata la modifica sperimentale delle condizioni cromatografiche, e dopo esperimenti di ottimizzazione con fase mobile, si è concluso che maggiore è la temperatura, minore è il tempo di ritenzione e minore è la concentrazione, minore è la pressione della pompa e minore è il tempo di ritenzione, ma l'altezza del picco è diminuita, il che era sfavorevole per il misurazione. La fase mobile è stata infine determinata essere acetonitrile-metanolo-1 percentuale di acido formico (10:15:75), la lunghezza d'onda di rilevamento 334 nm, la velocità di flusso 0,7 mL/min e la temperatura della colonna 30 gradi C, in base alle condizioni oggettive della temperatura ambiente e della pressione massima portante della pompa, che ha prodotto abbondanti informazioni con forme di picco nette e una buona separazione dei costituenti.

2.2 determinazione delle colonne

YMC-Inertsil ODS-SP (4,6 mm × 150 mm, 5 μ m; YMC Co Ltd, Giappone).

2.3 preparazione della soluzione sperimentale

2.3.1 preparazione di soluzioni standard

Una quantità appropriata di standard di echineoside è stata accuratamente pesata e addizionata con acido formico in fase mobile acetonitrile-metanolo-1 (10:15:75) per ottenere 0.0 6 mg · ml - 1, 0.05 mg · ml {{1{{20}}}}, 0,04 mg · ml - 1 , 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1 e 0,005 mg · ML - 1 soluzioni di echinacoside standard.

2.3.2 preparazione della soluzione di prova

Quantità appropriate di Cistanche fresche piantate artificialmente (meno di un anno), Cistanche fresche artificialmente e Cistanche fresche selvatiche sono state macinate in polvere usando una malta sotto azoto liquido; Inoltre, una quantità adeguata delle 3 Cistanche di cui sopra è stata tagliata in blocchi, essiccata all'aria naturalmente in una ventilazione all'ombra e, dopo l'essiccazione, è stata polverizzata e ridotta in polvere. Cistanche secche artificiali e Cistanche secche selvatiche per tre anni sono state macinate direttamente nella polvere. 0.5 g di polvere di Cistanche preparata sopra sono stati presi e posti in una provetta da centrifuga, sono stati aggiunti 25 ml di fase mobile, pesati e messi a bagno per 30 min, sonicati per 40 min, raffreddati e quindi pesato di nuovo per recuperare il peso mancante con la fase mobile, agitato e centrifugato, e il supernatante è stato prelevato per la filtrazione su membrana del filtro microporoso 0,45 μ M.

2.4 grafici delle curve di regressione per il campione standard di echinacoside

I campioni standard preparati di echineoside sono stati iniettati nell'apparato LC separatamente e la concentrazione del controllo (mg · L{{0}}) è stata utilizzata come ascissa e le aree di picco corrispondenti sono state ordinate per tracciare il curva standard, risultante nell'equazione di regressione: y=66 867 100x{2}}.83, R2=0.98637, che mostrava l'echineoside a 0,1 ~ 1,2 ug all'interno di una buona relazione lineare.

3 Discussioni

L'echinacoside è uno dei principali componenti attivi di Cistanche, che può ben rappresentare la base chimica dell'effetto farmacologico di Cistanche, facendo corrispondere la valutazione della qualità del materiale medicinale e il suo effetto farmacologico, e migliorando la pertinenza della valutazione della qualità di Cistanche.

Le diverse condizioni di trattamento hanno avuto un chiaro effetto sul contenuto di echinacoside, con livelli generalmente più elevati di echinacoside nei terreni di Cistanche sotto azoto liquido rispetto a quelli in condizioni naturali essiccate all'aria. L'essiccazione all'aria comune ha ridotto la quantità di echineoside, che potrebbe essere stata consumata durante l'essiccazione all'aria o convertita. Al fine di prevenire la diminuzione del contenuto di principio attivo e garantire l'efficacia di Cistanche, dovrebbe essere selezionato un trattamento appropriato.

Coerentemente, la maggior parte credeva che l'ambiente di coltivazione artificiale di Cistanche e le abitudini di crescita fossero indistinguibili dalla natura senza differenze di qualità, tendessero a porre solo l'accento sulla resa e non analizzavano la qualità. Il presente studio ha mostrato che la quantità di Cistanche echinacoside coltivato artificialmente era inferiore a quella di Cistanche echinacoside selvatico. Il più alto è stato il {{0}},3360 percento di cistanche selvagge e il più basso è stato lo 0,{3}} percento di cistanche artificiali. Pertanto, deve ancora essere studiato nella tecnologia di coltivazione per migliorare il contenuto di principi attivi.

La qualità delle Cistanche dipende dalla quantità del suo principio attivo, l'echinacoside, che a sua volta ha una forte relazione con la stagione, il tempo e il metodo di raccolta, quindi la raccolta delle Cistanche dovrebbe tenere conto dello stato di accumulo del principio attivo e della fase di crescita e sviluppo. Considera sia la qualità che la resa.

Il metodo menzionato in questo documento è semplice, preciso, riproducibile e accurato per determinare l'echineoside. Utile per la determinazione di Cistanche.